Informe de Microbiologia - Coloracion Gram Completo 2012

UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS E INGENIERIAS MICROBIOLOGIA
“AÑO CENTENARIO DE MACHU PICCHU PARA EL MUNDO”
UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS E

INGENIERIA
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AMBIENTAL
INFORME : COLORACION GRAM
ASIGNATURA : MICROBIOLOGIA
DOCENTE : CORDERO AZABACHE JORGE
ESTUDIANTE : CHAVEZ GAMARRA CARLOS
SEMESTRE: VII
HUANCAYO – PERÚ
2012
PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

INTRODUCCION
La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se

utiliza para distinguir entre varios tipos de células bacterianas. Una
tinción diferencial típicamente consiste de tres pasos principales:
primero un colorante primario, el cual se utiliza para teñir a todas
las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual
remueve el colorante solo de ciertos tipos de células y finalmente un
colorante de contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas
pero no tiene efecto sobre las células que aún retienen el colorante
primario.
La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884,

es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología,
que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram
positivas y Gram negativas. La reacción de la tinción de Gram se basa
en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes
celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen
muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen
moléculas de ácido teicoico. El ácido teicoico reacciona con el cristal
violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un complejo de
las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de
remover. Como la pared celular de las células Gram positivas retiene
estos compuestos, es más difícil decolorar una célula Gram positiva
que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal
violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva.
Esta mezcla de alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de
lipopolosacárido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo
cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de estas
células.
Cuando otro colorante, usualmente safranina, se añade, las células

Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram
negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del
procedimiento de tinción, las células Gram positivas serán del color
del cristal violeta, o colorante primario, y las células Gram negativas
serán del color de la safranina que es el colorante de contraste.
FUENTE DE APOYO
http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcarionte
s/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20Gram.pdf

OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL
 Reconocer los microorganismos a través de la técnica de tinción
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Diferenciar a los microorganismos por su capacidad tintorial.

 Relacionar la diferencia en composición de pared celular de
acuerdo a la coloración de GRAM.
 Evidenciar las diferentes estructuras microbianas mediante
coloraciones específicas

MARCO TEORICO
La técnica de coloración de Gram es de gran utilidad en Bacteriología,

ya que permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos:
Gram Positivas y Gram Negativas, dependiendo de la morfología
de la pared celular. Esta clasificación es de gran importancia
clínica, ya que permite una identificación preliminar de bacterias,
pudiendo implementar una terapia sin la necesidad de esperar a la
completa identificación de la bacteria involucrada. Este último
procedimiento en ocasiones lleva varios días. El método fue

descubierto por Christian Gram (Danés), en 1884, quien observó que
en cortes histológicos que contenían bacterias coloreadas con violeta
de genciana y tratadas con solución acuosa de yodo, este colorante
podría ser
removido del corte histológico con el empleo de alcohol, pero

no de las bacterias.
Posteriormente descubrió que no todas las bacterias retenían al

violeta de genciana sino que algunas eran decoloradas por
acción del alcohol. A las primeras las clasificó como positivas y a
las segundas como negativas. Estas que quedan incoloras son teñidas
luego mediante el empleo de un colorante de contraste como la
safranina, para hacer posible su observación. Los fundamentos de la
técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de
ambos tipos de bacterias.
La pared celular de las bacterias Gram-positivas comprende una

gruesa capa de peptidoglicano (también conocido como
mureína).unida a la membrana celular. La pared celular se une a la
membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las bacterias Gram

negativas es delgada,y se encuentra unida a una segunda membrana
plasmática exterior (de composición distinta a la interna) Estas
bacterias no poseen acidos teitoicos, aunque si contiene una

lipoproteína de mureina que enlaza esta delgada capa de

peptidoglicano con la membrana celular exterior.
Esta ultima posee un complejo exclusivo llamado lipopolisacaridos

(LPS),que contiene Lípido A, o endotoxina. La membrana de las
Gram-negativas también se diferencia de las Gram-positivas por
poseer proteínas llamadas porinas que permiten el paso de nutrientes
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente

debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el
peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la
pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha
mayor proporción que las Gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se

debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en
solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona.
La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como
para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó
previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la
coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las

Grampositivas, al poseer una pared celular más resistente y

con mayor proporción de peptidoglicanos, resisten la acción del
solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros
cerrándolos, lo que impide que puede escaparse el complejo cristal
violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul violácea.
TINCIONES
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de

la afinidad de los mismos por determinadas sustancias colorantes. La
observación puede realizarse sobre microorganismos vivos
(coloraciones vitales) o muertos.
(tinciones) Las coloraciones vitales deben conservar la célula sin

disminución notable de su vitalidad y especialmente sin producir
alteraciones de sus estructuras. Para esto se utilizan soluciones muy
diluidas de ciertos colorantes.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el

interior de las células (viables, es decir vivas) y las tiñen. Ejemplos:
azul de metileno, cristal violeta, safranina.
Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de

modo que no tiñen las células (viables, es decir vivas), sino el
entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen.

Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las

células tienen una composición química diferente a la de su entorno,
de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un
colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o
no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células

tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan
de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los
microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de

tinción. Estas tinciones utilizan más de un colorante. En este

grupo encontramos la tinción de Gram
Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras

celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen
selectivamente con ciertos colorantes.

INSTRUMENTAL DE LABORATORIO
PRÁCTICA NUMERO UNO
COLORACION GRAM SIMPLE
Para observar las bacterias teñidas es necesario, en primer lugar, hacer un frotis
de las bacterias y fijarlo.
Para hacer un frotis, cuando se parte de un cultivo de bacterias en medio líquido,

se toma una o varias cargas directamente con el asa y se extienden sobre el
portaobjetos. Si se parte de un cultivo en medio sólido, debe depositarse
previamente una gota de agua sobre el portaobjetos. A continuación, se toma con
el asa una pequeña parte de la colonia y se dispersa en la gota de agua,
realizándose la extensión como en el caso anterior.
La fijación tiene por objeto provocar modificaciones en la composición físico-

química de la bacteria (coagulación de las proteínas, etc.) de forma que ésta
conserve definitivamente una estructura similar a la que tenía en vivo, sin
deformarse como consecuencia de los tratamientos a que se verá sometida
durante la tinción. Por otra parte la fijación impide el arrastre de los
microorganismos al quedar estos adheridos al portaobjetos y hace que la pared
celular sea más permeable a los colorantes.
Para la fijación pueden utilizarse agentes químicos (formol, metanol) o el calor.

Nosotros emplearemos el calor, y para ello el frotis, una vez seco, se pasa dos o
tres veces sobre la llama, con la preparación hacia arriba, para no quemarla. Hay
que procurar que el calor nunca sea excesivo, pues se alterarían las estructuras de
la bacteria: en ningún momento el portaobjetos, colocado sobre el dorso de la
mano, debe quemar.

MATERIALES
 Portaobjetos.
 Asa de siembra.
 Tubos con cultivos de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas.
 Cubetas de tinción o similar.
 Colorantes para las tinciones: Cristal violeta, Lugol, Alcohol-Acetona (1:1) y Safranina.
EQUIPOS
 Mechero Bunsen.
REACTIVO
 azul de metileno o la safranina
PROCEDIMIENTOS
RESULTADOS
En esta técnica aprenderemos a observar la morfología y tamaño de las bacterias, así como los
tipos de agrupaciones que forman. Si estas son gran positivas o gran negativas diferenciando el
color las Gram negativas son de color Rojo o rosado, mientras que las gran positivas tienen un
color morado o azulado

PRÁCTICA TINCION GRAM
La TINCIÓN DE GRAM es la tinción diferencial más utilizada en Bacteriología pues permite

separar las bacterias en dos grandes grupos, las Gram-positivas y las Gram-negativas. La tinción
de Gram requiere cuatro soluciones:
MATERIALES
 Cultivo que se encuentra en las placas petri con muestras.

 Batería Gram: Cristal violeta, Fucsina Basica, Lugol, Alcohol acetona.
 Laminas limpias, asas de siembra, lápiz graso, gradillas.
 Microscopio aceite de cedro. Papel lente. Solución desinfectante
EQUIPOS
 Mechero Bunsen.
REACTIVO
 Primer colorante
 Solución mordiente
 Agente decolorante
 Colorante de contraste
PROCEDIMIENTOS

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UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS E INGENIERIAS
RESULTADOS
Observación de las tinciones de bacterias al microscopio.

MICROBIOLOGIA
 Las bacterias Gram-positivas presentarán una coloración violeta mientras que las Gram-
negativas la presentarán roja o rosa.
 La identificación de las bacterias Gram-positivas puede ser problemática, solamente
cuando las bacterias Gram-positivas se encuentran en crecimiento exponencial (cultivos
jóvenes) la reacción es clara; en fase estacionaria (cultivos viejos) las bacterias Gram-
positivas pueden parecer Gram-negativas.

PRÁCTICA COLORACION DE ACIDO RESISTENTES
Se basa en que ciertos microorganismos no son desteñidos por una mezcla

de ácido y alcohol si han sido previamente teñidos con fucsina fenicada. Se
dice que son microorganismos ácido-alcohol resistente. Una vez realizada la
decoloración con esta mezcla se utiliza un colorante de contraste (el Azul de
metileno) para poder observar las células sensibles a la decoloración por
ácido-alcohol. Son microorganismos ácido-alcohol resistentes las
micobacterias, por la específica composición de su pared celular, y algunos
actinomicetos, como Nocardia. Algunos microorganismos patógenos son
ácido-alcohol resistentes: Mycobacterimum tuberculosis (tuberculosis), M.
leprae (lepra).
MATERIALES
 Esputo de enfermos tuberculosos.

 Batería de coloración: Fucsina fenicada de Zienl, Azul de mitileno al 0,3%, alcohol acido
nítrico al 33%, acido clorhídrico al 3%.
 Laminas limpias, asas de siembra, lápiz graso, gradillas.
 Microscopio, aceite de cedro, papel lente.
EQUIPOS
 Mechero Bunsen.
REACTIVO
PROCEDIMIENTOS

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RESULTADOS
PRÁCTICA DE COLORACION DE ESPORAS – METODO DE WIRTZ

MICROBIOLOGIA
Los microorganismos ACIDO RESISTENTES se observan como bacilos delgados y un poco

alargados, teñidos uniformemente de rojo o con granulacionesrojo intenso sobre el fondo rosado
del bacilo. La flora acompañante (no acido resistente) aparecerá teñida de azul: cocos,
diplococos, o cocobacilos, macrófagos y otros elementos blancos.
Los microorganismos que las forman deben encontrarse en condiciones adversas. Se

evidencian en la etapa de vida latente. Caracterizan a los géneros Bacillus y Clostrídium y su
localización y forma ayudan en cierto modo a la identificación presuntiva específica.
Por la naturaleza y grosor de la membrana y bajo contenido en agua, las esporas son muy
difíciles de teñir; se hace actuar el tinte en caliente en idéntico procedimiento al efectuado
para ÁCIDO-RESISTENTES. La coloración de contraste para el cuerpo bacteriano se consigue
con Safranina.
Si el cultivo es joven no hay esporas y los- microorganismos se teñirán uniformemente. Es

necesario que éste permanezca por 3-4 días a temperatura ambiente, después de una
incubación óptima de 24 horas o sembrar el cultivo en un medio específico de esporulación. De
esta manera el material resulta ideal para ensayos de cualquiera de las técnicas específicas de
tinción

MATERIALES
 Cultivo de 5 días de Bacillus subtilis (en caldo corriente).

 Batería de coloración: Verde de malaquita al 5%, Safranina o Fucsina Básica al 0.5%, agua
destilada o corriente.
 Gradilla, lápiz graso, asa de siembra.
EQUIPOS
 Mechero Bunsen.
REACTIVO
PROCEDIMIENTOS

RESULTADOS.-Esporas verdes y el resto del cuerpo bacteriano rojo. Posición de la espora central o
subcentral, sin deformación del bacilo.
RESULTADOS:
El cristal violeta penetra en todas las células bacterianas tanto Gram

positivas como Gram negativas a través de la pared bacteriana. El lugol es
un compuesto formado por yodo y actúa de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula
bacteriana. entra en las células y forma un complejo insoluble en solución
acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol acetona que se agrega, sirve para realizar la

decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo cristal violeta. Los
organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram
negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una
coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas,
mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse. Sirve para hacer una tinción de
contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término
del protocolo, las Gram positivas se verán azul violáceas y las Gram
negativas, se verán rosas.
os fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes

celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas.

CONCLUSION
Hemos podido reconocer a través del método de tinción Gram, en este caso
seidentifico bacterias y sus formas y los lactobasilos del yogurt, en nuestro
caso se juntaron las bacterias de streptococcus y los lactobasilos estando
unidos en elportaobjetos y diferenciándose por los colores rosa y los
lactobasilos eran granpositivas y de color rosa y los streptococcus eran vien
la observación delmicroscopio se pudo apreciar su formas bien definidas y
diferenciadas. Gram +violetas y cerradas y las Gram - incoloras y abiertas.
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la
cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se
encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que
está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como
mureína) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas
es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática
exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas.
Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior
por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido
y lipopolisacárido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a
estas direrencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya
que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las
Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram
negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a
que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes
orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener
el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto
este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por
el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente
y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción
del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros

cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal

violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.
ANEXOS
CUESTIONARIO

1. Investigue cuales son las estructuras celulares o moléculas

responsables de la tinción simple realizada. De ejemplos de
otros colorantes que se podrían utilizarse.
 Se emplea para distinguir entre tipos diferentes de células o

para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes
celulares, centros de actividad respiratoria, etc.
 Uno de los colorantes puede ser el colorante nigrosina, cristal

violeta o fucsina
2. ¿Cuáles son las principales precauciones de manejo del

microscopio y porque se debe de utilizar el aceite de
inmersión al hacer el estudio microscopio de bacterias?
 La principal es que se debe de saber las medidas de la

visualización en el revolver y saber que si se trabaja con
microorganismos se debe visualizar con 100X, otro es de que
no se debe de tocar el lente del microscopio ya que son muy
delicados.
 Se utiliza el aceite de inmersión para la refracción de la luz del
microscopio ósea para una mejor visualización.
3. ¿Cuáles son las ventajas o ilimitaciones de la tinción simple?
 La ventaja en la tinción simple es que utiliza un solo colorante

con el que se tiñe rápidamente el microorganismo, utilizándose
fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. Los
colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de
tinción son los siguientes: azul de metileno
4. ¿Cuáles son las fuentes de error más frecuentes en la

preparación del frotis?
 Uno de ellos es el quemado de el porta objetos haciendo que

en el microscopio se mire millones de ralladuras y así haciendo
fallida la tinción
 Otro es no fijar bien la muestra con el secado o con el
flameado siendo fallido cuando se elimina el colorante con
agua destilada o con el alcohol acetona
 El otro y mas común es hacerle el frotis en pequeñas
cantidades y al llevarlo al microscopio no se puede visualizar
bien por que es muy poco

5. ¿Explica en forma completa la teoría que explica la tinción

Gram. Investigue otros dos ejemplos de tinción diferencial?
 Mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen

alguna afinidad específica por los materiales celulares. Muchos
colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como
los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de
colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y
la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas
negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes
celulares cargados positivamente, tales como muchas
proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y
el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias
liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los
materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para
revelar la localización de las gotículas o depósítos de grasa.
6. ¿Cuáles son las fuentes de error más frecuentes en la tinción

Gram?
 Utilizar colorantes no certificados para bacteriología.

 Concentración inadecuada de colorantes certificados
 Material muy concentrado (extendido demasiados gruesos).
 Metodología incorrecta. A los fines de evitar errores, es
conveniente utilizar colorantes certificados para bacteriología y
seguir atentamente la técnica de la coloración.
7. ¿Cuál es la base bioquímica de la coloracion Gram?
 Las células generalmente son tratadas para coagular el

protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación. Para
bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque
también puede fijarse con sustancias químicas como
formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de la fijación, si se
añade el colorante, no se producen ulteriores cambios
estructurales en el protoplasma. La fijación se realiza
habitualmente en células que han sido fijadas sobre un
portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y
siguiendo inmediatamente el proceso de tinción. La fijación
produce habitualmente el encogimiento de las células; la

tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan

mayores que lo que son realmente, de manera que las
medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no
pueden realizarse con mucha precisión.
8. Si cambiara el orden de empleo de los colorantes primarios y

de contraste cree que la tinción seguiría permitiendo
distinguir entre bacterias grampositivas y gram negativas.
 Es negativo ya que la cuagulacion del el protoplasma se

modificaría totalmente y en el microscopio se miraría puntos
negros o el color que se intento fijar
9. Existe alguna relación entre el tipo de morfología y la tinción

de gram.
 La tinción diferencial es empleado en microbiología para la

visualización de bacterias, Se utiliza tanto para poder referirse
a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se
visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que
se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
10. Consulte una técnica alterna para diferenciar Bacterias

Gram positivas y Gram negativas y su fundamento.
N NOMBRE CONCEPTO
º
01 COLORACION GRAM Sobre la base de su reacción a la tinción de

Gram, las bacterias pueden dividirse en dos
grupos, grampositivas y gramnegativas.
02 TINSION ACIDO – sirve principalmente para clasificar

ALCOHOL micobacterias y actinomicetos, que tienen un
RESISTENCIA alto contenido en lípidos y en ácidos
micólicos
03 TINSION DE Se utiliza para teñir las estructuras de

ESPORAS resistencia llamadas endosporas bacterianas.
04 TINSION NEGATIVA Es el reverso del procedimiento de tinción

usual: las células se dejan sin teñir pero se
colorea un cambio el medio que las rodea

11. Qué tipo de morfología y de agrupación ha podido

observar en las muestras de los cultivos de Eschericha,
Saccharomyces, Bacillus y Stafilococus.
N NOMBRE AGRUPACION MORFOLOGIA

º
01 Eschericha Coli Bacteria estreptobacilos
02 Saccharomyces Hongo Coco bacilos
03 Bacillus Bacteria estreptobacilos
04 Stafilococus Bacteria estreptococos
12. Indique que etapas debe de seguir para preparar una

extensión de las siguientes muestras: yogurt, saliva, una
colonia bacteriana, re suspendida en agua, sedimento de un
rio.
N NOMBRE EXTENSION
º
01 YOGURT Muestra directa al porta objetos
02 SALIVA Muesta directa al porta objetos
03 COLONIA BACTERIANA Mesclado con agua destilada si
la muestra es muy solida
04 COLONIA SUSPENDIDA Captación de la colonia mas
especial y amplia para la
extensión sobre el porta objetos
05 SEDIMENTO DE RIO Mesclado con agua destilada si
la muestra es muy solida
13. ¿Cuál es la finalidad tiene fijar las muestras cuando se

realiza un frotis bacteriano.
 De coagular el protoplasma antes de teñirlas
14. Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple

respecto del examen en fresco.
 Las preparaciones en fresco se utilizan para observar

microorganismos vivos.
 El inconveniente de la observación en fresco es que no permite
aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con
un microscopio óptico
15. Con los resultados de una tinción simple se puede saber

si la muestra teñida es un cultivo puro.

 Si esta técnica es necesaria para el estudio de cultivos puros,

en los cuales se pueden separar diferentes microorganismos
16. Como se apreciarían tanto la célula vegetativa como la

endospora si únicamente las visualizamos tras una tinción de
gram.
 Por la naturaleza y grosor de la membrana y bajo contenido en

agua, las esporas son muy difíciles de teñir.
 La coloración de los microorganismos se teñirán
uniformemente y manchas oscuras
17. A que puede deberse que no vea endosporas en todas

las células de una preparación de bacterias formadoras de
endosporas.
 A que el cultivo pueda ser joven y no hay esporas y los

microorganismos se teñirán uniformemente. Es necesario que
éste permanezca por 3-4 días a temperatura ambiente,
después de una incubación óptima de 24 horas o sembrar el
cultivo en un medio específico de esporulación. De esta
manera el material resulta ideal para ensayos de cualquiera de
las técnicas específicas de tinción

BIBLIOGRAFÍA
BROCK, “Biología de los microorganismos” 12ED Editorial Prentice Hall 2003
CAMPBELL N, “Biología”, Séptima edición. Editorial Panamericana.

Madrid,España,2007.http://pagina.jccm.es/museociencias/material%20cnr
%20web/manual%20de%20microscopia.pdf
http://chopo.pntic.mec.es/~gdiaz3/apuntes/UT131.pdf
http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGEL
ES_Manual_de_practicas_de.pdf
http://es.scribd.com/doc/6273639/bacteriologia-clinica-procesamiento-de-muestras

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INFORME : COLORACION GRAM

DOCENTE : CORDERO AZABACHE JORGE

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PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se

La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884,

Cuando otro colorante, usualmente safranina, se añade, las células

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

 Reconocer los microorganismos a través de la técnica de tinción

 Diferenciar a los microorganismos por su capacidad tintorial.

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

La técnica de coloración de Gram es de gran utilidad en Bacteriología,

procedimiento en ocasiones lleva varios días. El método fue

removido del corte histológico con el empleo de alcohol, pero

Posteriormente descubrió que no todas las bacterias retenían al

La pared celular de las bacterias Gram-positivas comprende una

Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las bacterias Gram

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

lipoproteína de mureina que enlaza esta delgada capa de

Esta ultima posee un complejo exclusivo llamado lipopolisacaridos

Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se

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Grampositivas, al poseer una pared celular más resistente y

Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de

(tinciones) Las coloraciones vitales deben conservar la célula sin

Los colorantes pueden ser de distintos tipos:

Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el

Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de

Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen.

Las tinciones pueden ser:

Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las

Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células

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tinción. Estas tinciones utilizan más de un colorante. En este

Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras

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PRÁCTICA NUMERO UNO

COLORACION GRAM SIMPLE

Para hacer un frotis, cuando se parte de un cultivo de bacterias en medio líquido,

La fijación tiene por objeto provocar modificaciones en la composición físico-

Para la fijación pueden utilizarse agentes químicos (formol, metanol) o el calor.

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 azul de metileno o la safranina

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PRÁCTICA TINCION GRAM

La TINCIÓN DE GRAM es la tinción diferencial más utilizada en Bacteriología pues permite

 Cultivo que se encuentra en las placas petri con muestras.

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

Observación de las tinciones de bacterias al microscopio.

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME

PRÁCTICA COLORACION DE ACIDO RESISTENTES

Se basa en que ciertos microorganismos no son desteñidos por una mezcla

 Esputo de enfermos tuberculosos.

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA Nº3 INFORME