FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

PRACTICA N° 9
TEMA: UROCULTIVO: COLORACION GRAM, PRUEBAS
BIOQUIMICAS, ANTIBIOGRAMA

CURSO: INTERPRETACION DE ANALISIS CLINICO

DOCENTE: Q.F. PINEDA PEREZ, MARIO

TURNO: MAÑANA

CICLO: VIII

INTEGRANTES:

2019-II

INTRODUCCION
El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infección
sintomática del tracto urinario o infección asintomática (bacteriuria
asintomática) en pacientes con riesgo de infección.
Está basada en la presencia de un número significativo de bacterias
(generalmente >100.000 bacterias/ml.) La piuria, junto con la
bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de
infección del tracto urinario, ya que prácticamente está presente en
todas las infecciones urinarias. Una excepción es la bacteriuria
asintomática en la que la piuria puede estar ausente.
La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de
una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente
sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas
y, más aún, en el hecho de que en numerosas especies existen
grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico
entre unas y otras cepas.
El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso
Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más
adecuado para el tratamiento de una enfermedad.
1. MARCO TEÓRICO:
El urocultivo (cultivo de orina), o urocultivo como también se
denomina, es una prueba (análisis) de laboratorio, que tiene
como finalidad detectar la presencia de microorganismos
infecciosos, fundamentalmente bacterias y hongos, en la orina
de las personas.
La orina es un líquido transparente y amarillento cuyas
funciones son la eliminación de residuos tóxicos del organismo
y la regulación y control de mecanismos básicos orgánicos,
que, en condiciones normales es aséptico, es decir, que no
contiene microorganismos infecciosos. Sin embargo, en
situaciones no normales la orina puede contener bacterias (lo
que se conoce como bacteriuria) que, si están presentes en un
número o concentración suficientemente elevados, pueden
causar una infección urinaria, o mejor, una infección del tracto
urinario. Dependiendo de la parte de este tracto que esté
afectada por la infección, ésta recibirá diferentes
denominaciones: cistitis, uretritis, protatitis, orquiepididimitis,
pielonefritis o absceso renal.
Las infecciones del tracto urinario se pueden producir tanto en
la comunidad como en personas hospitalizadas, en las que
habitualmente revisten una mayor gravedad, y son más
frecuentes en las mujeres que en los hombres.
En determinadas situaciones (por ejemplo, pacientes
hospitalizados que llevan colocada una sonda vesical
permanente) o en determinados pacientes (por ejemplo, niños
 muy pequeños en los que no se ha podido utilizar el método de
la micción espontánea para la recogida de una muestra de
orina válida para cultivo) se utilizan métodos de recogida como
el sondaje vesical o la punción suprapúbica. En ambos casos
la técnica la realiza personal sanitario (médicos o enfermeras)
experto.

La muestra así obtenida se envía al laboratorio donde la orina

se coloca en unos recipientes cilíndricos que contienen
sustancias que favorecen la proliferación de los
microorganismos infecciosos que pueda haber en la orina de la
muestra. Estos recipientes así preparados se conocen como
medios de cultivo y son analizados por los expertos en
Microbiología para observar si se produce proliferación de
microorganismos, habitualmente bacterias, que confirme la
existencia de una infección.
Agentes etiológicos a investigar rutinariamente
 Escherichia coli
 Klebsiella spp.
 Enterobacter spp.
 Serratia spp.
 Enterococus spp.
 Proteus spp.
 Pseudomonas spp.
 Acinetobacter spp.
 Candida spp.
 Staphylococus spp.
 Estreptococo grupo B (imprescindible en embarazadas)
El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para
determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una
bacteria a un grupo de antibióticos. Las técnicas de antibiograma
son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la
actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos
responsables de las infecciones.
Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con
capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los
microorganismos y que sea susceptible de utilización como
tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintéticos o
semisintéticos (modificación química de un compuesto natural). La
historia moderna de los antibióticos comienza con el descubrimiento
de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de
matar a otros microorganismos. La utilización de antibióticos supuso
un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que
padecías procesos infecciosos, aunque desgraciadamente también
supuso un aumento en los niveles de resistencia antibiótica.

El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:

La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un
tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si
el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos
que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no
incluirlo como terapia.
En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la
instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la
confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la
enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento
antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El
antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el
tratamiento.
Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la
epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de
resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas
correctoras.
Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el
perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la identificación
bacteriana.
Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el número
sigue creciendo porque el desarrollo de más mecanismos de
resistencia por parte de los microorganismos se traduce en un
esfuerzo mayor por fabricar más y mejores antibióticos. No es
necesario contrastar la eficacia de todos los antibióticos para cada
aislamiento bacteriano. Los criterios que se siguen para seleccionar
que antimicrobianos se ensayan respondes a factores de diversa
índole:
 Factores microbiológicos: Tipo de agente infeccioso y
mecanismos de resistencia descritos previamente en su
especie.
 Factores farmacológicos: Tipo de antimicrobiano y
parámetros de absorción, distribución y eliminación.
 Factores del paciente: Tipo de infección. Factores de riesgo
y estado general de salud. Situación inmunológica e
hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia
antibiótica mas habituales para cada especie.

2. OBJETIVOS:
 Realizar y analizar las diferentes técnicas de identificación bacteriana.
 Con las pruebas bioquímicas reconoceremos bacterias que se encuentra
en la muestra de orina.
 Realizar adecuadamente el frotis de bacterias sobre el porta objetos
para llevar a cabo la tinción con los colorantes que componen la tinción
de Gram, e identificar si se tratan de bacterias Gram positivas o Gram
negativas al momento de observarla en el microscopio.
 Con las pruebas de antibiograma podremos identificar, medir la
sensibilidad de una cepa bacteriana.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

 Centrifugadora

 DISCO DE
 SENCIBILIDAD

 Microscopio

Liquido de dilución:

Cristal violeta, lugol,

alcohol acetona, safranina.

 Tubos de ensayo

4. PROCEDIMIENTO

 COLORACION GRAM
 1. De la muestra de orina 2. Con el mechero se 3. Con la flama del
obtenida se lleva a la esteriliza el portaobjeto y mechero y la pinza
centrifuga por 5 minutos y con el gotero agregamos exponer al porta objeto
dejamos sedimentar. 2 gotas al portaobjeto con la muestra hasta que
seque las gotas que
agremamos.

4. Agregamos unas gotas 5. Agregamos unas gotas

6. Agregamos unas gotas de
de cristal violeta y de Lugol esperamos 60
esperamos 60 segundos segundos y luego Alcohol acetona esperamos 60
,luego lavamos con agua enjugamos con agua segundos y luego enjuagamos con
destilada destilada agua destilada
 7. Agregamos unas gotas de
Safranina esperamos 60 segundos
y luego enjuamos con agua
destilada y dejar secar y llevar al
microscopio.

RESULTADOS: Lo que
observamos en el microscopio
fue células escamosas.

 PRUEBAS BIOLOGICAS

1. De nuestra muestra de 2. Nuestros medios bioquímicos son

sedimento urinario sembramos LIA-TSI-C.S-UREA-SIN ROJO y lo
ponemos a encubar por 31º por 24
horas
 Resultados:

Después de que paso la hora establecida de incubación observamos que no

hubo cambio de color en las muestras de tubo de ensayo, es decir no hay
presencia de bacteria, es decir la prueba nos salió negativa para bacteria.

 CULTIVOS EN PLACA

1. Con el sedimento urinario 2. Colocar los discos de antibióticos

sembramos en nuestro OPTACHIN Y BACITRACINA
AGAR SANGRE Y MAC incubar a 31º x 24 horas.
KONKEY .

Siembra por agotamiento .

RESULTADOS:

Al igual que las muestras biológicas, pero esta vez nuestro cultivo nos da un
resultado negativo para crecimiento bacteriano.

5. CUESTIONARIO:
1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la
identificación de microorganismos Gram negativos?
Cultivo puro:
Se denomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un
tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a
partir de colonias aisladas, de manera que todos los
individuos del mismo tengan la misma composición
genética. Los cultivos puros son esenciales para poder
estudiar las características de los microorganismos y para
poder identificarlos con seguridad.
Medios selectivos: contienen uno o más agentes que
inhiben todos los microorganismos excepto los que son
buscados. En otras palabras, estos medios seleccionan el
crecimiento de ciertas bacterias e inhiben el de otras. Los
agentes inhibidores utilizados para este propósito son
colorantes, sales biliares, alcoholes, ácidos y antibióticos.
Un ejemplo es el agar con alcohol feniletílico, que inhibe el
desarrollo de bacilos Gram negativos aerobios y
anaerobios facultativos, y permite el crecimiento de cocos
Gram positivos.
Agar Hektoen entérico: El uso principal del agar entérico
de Hektoen es discriminar entre Shigella y Salmonella. Si
bien muchas otras especies pueden crecer en las placas,
no se discrimina entre ellas. El agar entérico de Hektoen
usa una prueba metabólica para dividir a las colonias en
tres grupos: Salmonella, Shigella, y todas las demás que
puedan crecer en la placa. Al usar este medio se asume
que no se está interesado en otros patógenos entéricos
como Klebsiella o Escherichia. Las placas contienen varios
glúcidos (lactosa, sacarosa, y salicina, ninguno de los
cuales puede ser utilizado por Shigella ni Salmonella.
También contiene peptona,que puede ser utilizada como
fuente de carbono. Como la mayoría de las bacterias
pueden usar los glúcidos, lo hacen de manera preferencial
antes que la peptona. Esto acidifica el medio, virando el
indicador de pH a amarillo o rojo. El metabolismo de la
peptona por parte de Shigella y Salmonella alcaliniza el
medio, virando el indicador de pH a azul.
Agar MacConkey: es un medio de cultivo selectivo y
diferencial para bacterias diseñado para aislar
selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos
(encontrados normalmente en el tracto intestinal) y
diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la
lactosa.1 El cristal violeta y las sales biliares inhiben el
crecimiento de organismos Gram positivos, lo que permite
la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativos.
Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de fermentar
lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato
lactosa y el indicador de pH rojo neutro.
 2. ¿Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo.

PROCEDIMIENTO PARA LLEGAR

AL UROCULTIVO

TIPO DE MUESTRA EXAMEN DIRECTO CULTIVO

Tipo de recoleccion
Siembra en los
siguientes medios
Chorro MACROSCOPICO de
medio,puncion cultivo:MacConke
suprapubica,sonda y, Cled,
MICROSCOPICA Sangre,EMB
 Olor

Color
Sedimento en placa
Aspecto en fresco Incubar a 37°C
por 18 a 24 horas
Densidad

Ph

Placa con coloración

GRAM

3. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?

La muestra debe ser tomada por el personal de enfermería e
inoculada de inmediato en las botellas de hemocultivo. La obtención
de la
muestra de sangre se hace mediante punción periférica venosa o
arterial, o a través de un catéter arterial, venoso o central.
Las botellas con el medio de transporte y cultivo deben permanecer a
temperatura ambiente, y tras la toma de la muestra deben ser
enviadas al laboratorio en el menor tiempo posible sin refrigerar.
Tener presente que hay botellas para niños y para adultos y que en
cada una de ellas debe inocularse el volumen de sangre
recomendado según las mismas.
Método de Obtención de las Muestras:
En las muestras obtenidas por punción periférica (venosa o arterial)
debe tenerse en cuenta que el hemocultivo sea la primera muestra
obtenida en caso de que se requieran otros test. Las muestras
 obtenidas a través de catéter deben ser contrastadas con muestras
tomadas a través de vena periférica, pues su objetivo es la
confirmación de sepsis asociada a catéter y tomar muestra única a
través del catéter puede llevar a errores en la interpretación del
hemocultivo. El momento ideal para tomar la muestra es durante el
pico febril, que generalmente es precedido de escalofríos. Sin
embargo, ante la dificultad de hacerlo así en la práctica, puede
tomarse en cualquier momento del día tras el pico febril.
Lo ideal es tomar 2 o más muestras para hemocultivo en 24 horas,
separadas por intervalos de 20 a 30 minutos o, si el paciente requiere
inicio inmediato de antimicrobianos, tomar al tiempo dos o más
hemocultivos de diferentes sitios de punción.
En caso de sospecha de sepsis asociada a catéter, se recomienda
tomar paralelamente una botella de hemocultivo a través del catéter y
otras dos por punción periférica.

4. ¿Qué importancia tiene el antibiograma?

La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un
tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si
el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos
que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo
como terapia.
 En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la
instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la
confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la enfermedad
infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de
conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene
que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.
Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la
epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de
resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas
correctoras. Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica
porque el perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la
identificación bacteriana.

5. ¿Qué importancia tienen los

medios de enriquecimiento en un coprocultivo?
Cuando el paciente presenta algún síntoma de problemas
gastrointestinales, el médico puede solicitar la realización del examen
para realizar un diagnóstico certero.

Algunos de los síntomas para solicitar el examen son:

 Evacuaciones líquidas (diarreas) por más de 3 o 4 días.

 Heces con moco o sangre
 Episodios eméticos constantes (vómitos)
 Estado febril
 Gases estomacales en mayor cantidad que la normal
 Dolores y calambres estomacales
La determinación de la bacteria u organismo contaminante, permitirá
al médico indicar el tratamiento adecuado.
 En algunas ocasiones puede deberse a una condición viral. En ese
caso, no amerita la indicación de antibióticos. Estos no surtirían
efecto en el tratamiento, pudiendo causar una resistencia patógena
con el tiempo.
Entre los patógenos bacterianos entéricos causantes de
enfermedades gastrointestinales comunes, se encuentran:

 Shigella
 Salmonella
 Escherichia coli
 Yersenia
 Campylobacter

Cuestionario 2:
1. ¿En que consiste la Técnica de Graham ?
Es posible realizar el diagnóstico de Enterobius vermicularis, el cual
es causante de la enterobiasis u oxiuriasis, se basa en la obtención e
identificación de los huevos de este nematodo, que son depositados
por las hembras grávidas alrededor de la región perianal.
2. ¿Cuáles son las condiciones para la toma de muestra de heces para
un paciente que se sospecha parasitosis?
Este método consiste en tomar una muestra de raspado perianal,
utilizando una cinta adhesiva transparente, que utiliza como soporte
un portaobjetos. Indicaciones: Tipo de muestra: Muestra perianal con
cinta adhesiva. No requiere ayuno. Es recomendable que el paciente
se presente al laboratorio por la mañana, sin bañarse, sin haber
defecado y sin cambio de ropa interior.

3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una

tricuriasis?
a tricuriasis es una verminosis causada por el parásito Trichuris
trichiura, un nematodo de aproximadamente 4 cm de largo, que
habita el intestino grueso de los individuos infectados.
Un individuo si contamina con Trichuris trichiura cuando
accidentalmente ingiere huevos de parásitos contenidos en
alimentos, agua o suelo.

La tricuriasis es una parasitosis muy común en los países

subdesarrollados, donde las condiciones de saneamiento básico son
precarias. La tricuriasis es una enfermedad de transmisión fecal-oral.
Un individuo si contaminado con el Trichuris trichiura cuando,
accidentalmente, ingiere los huevos del parásito contenidos en
alimentos, agua o suelo.
El ciclo de vida del Trichuris trichiura puede resumirse del siguiente
modo: un individuo infectado libera miles de huevos del parásito a
cada evacuación. Si las heces entran en contacto con el suelo, los
huevos encuentran un lugar propicio para madurar.
Después de aproximadamente 2 o 3 semanas, los huevos deberán
contener un embrión del gusano capaz de infectar a quien
consumirlo. La ingestión de huevos que recientemente fueron
eliminados en las heces no es capaz de infectar a otras personas, ya
 que el embrión en su interior necesita de un tiempo de 2 semanas
para madurar en el suelo con el fin de completar su ciclo de vida.

4. ¿Cuál es el fundamento del Método del jarabe fenolado?

El jarabe fenolado va a ser que al mezclar con nuestra muestra
biológica como las heces podamos encontrar algún tipo de bacteria
segmentada en nuestro organismo.

CONCLUSIONES:
 En esta práctica aprendimos las diferencias entre una bacteria Gram
positiva y una Gram negativa ya que con ayuda de la tinción se pueden
observar ciertos factores que son muy distintivos.
 Las pruebas bioquímicas generalmente determina la actividad de una
vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de
cultivo y que la bacteria al crecer se transforma.
 A partir de las pruebas realizadas en el laboratorio identificaremos
bacterias, podemos conocer que bacterias tenemos en nuestra muestra
problema.
 El antibiograma es una prueba que se realiza para determinar la
sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibiótico o grupo de
antibiótico esto nos permite definir para cada antibiótico si la bacteria es
sensible (antibiótico eficaz), intermedio (antibiótico eficaz en ciertas
condiciones) o resistente (antibiótico ineficaz).

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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