GPT/ALT U.V.

METODO CINETICO OPTIMIZADO. TECNICA IFCC.

Para la determinación “in vitro” de la Transaminasa GPT/ALT en suero o plasma.

Principio
GPT
Ac. α-Cetoglutárico + L-Alanina > Ac. L-Glutámico + Ac. Pirúvico
LDH
+ +
Ac. Pirúvico + NADH + H > Ac. L-Láctico + NAD+

Reactivos
Kit 20 x 3 ml. (Ref. 99 84 37). Contiene: El método que aquí se describe es el propuesto por la
A. 20 viales de Sustrato liofilizado. (Ref. 99 57 46). Federación Internacional de Química Clínica (IFCC), en su
B. 1 x 60 ml. Disolución tampón. (Ref. 99 00 76). técnica modificada sin incubación con Fosfato de Piridoxal y que
Kit 12 x 16 ml. (Ref. 99 36 15). Contiene: utiliza Tampón Tris-HCl a pH 7,8 y no tiene en cuenta la
A. 12 viales de Sustrato liofilizado. (Ref. 99 09 77). corrección del blanco.
B. 2 x 100 ml. Disolución tampón. (Ref. 99 60 19).
Kit 10 x 50 ml. (Ref. 99 32 33). Contiene:
A. 10 viales de Sustrato liofilizado. (Ref. 99 49 20). Precaución
B. 1 x 500 ml Disolución tampón. (Ref. 99 42 99).
Contiene azida sódica ( 0,09 % ) como conservante.
Reactivo de trabajo Manipular con precaución. La eliminación de residuos debe
Reconstruir un vial de Sustrato liofilizado con el volumen de hacerse según la normativa legal vigente.
disolución tampón indicado en la etiqueta. Agitar suavemente
hasta disolución total.
Las concentraciones en la disolución reactiva son: Prestaciones. Características de funcionamiento.
Tampón Tris-HCl pH 7,8 100 mM
L-Alanina 500 mM Linealidad: Hasta ∆E / min. de 0,160 (a 340, 334 nm) ó de
Ac. α-Cetoglutárico 15 mM 0,080 (a 365 nm). Para valores superiores se aconseja diluir la
NADH 0,18 mM muestra 1/10 con salina (NaCl 0,9%) y repetir el ensayo.
NaHCO3 10 mM Multiplicar el resultado por 10.
LDH ≥ 1428 U/L Las características de funcionamiento del producto dependen
Estabilizantes y conservantes tanto del reactivo como del sistema de lectura manual o
automático empleados. Los siguientes datos se han obtenido de
Conservación y estabilidad forma manual:
Los componentes del kit almacenados en refrigerador a
2-8ºC, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la Coeficiente de Variación en la serie: 1,69.%.
etiqueta. Una vez reconstruído el reactivo, es estable 4 Coeficiente de Variación entre series: 2,29 %.
semanas a 2-8º C y 1 semana a Tª ambiente (<25 º C). Exactitud: 98,3 de porcentaje de recuperación.

Muestra Como anticoagulante se aconseja utilizar EDTA. La hemólisis

Suero o plasma con heparina o EDTA como anticoagulante. interfiere en el ensayo. Las muestras muy activas pueden dar
Utilizar muestras exentas de hemólisis. lugar a una reacción muy rápida con extinciones iniciales bajas,
Los sueros mantenidos en refrigerador a 2-8º C, pierden al ser consumido el NADH en el primer minuto de reacción. En
aproximadamente el 10% de actividad a los 3 días. este caso se deberá repetir el ensayo con la muestra diluída
1/10 con salina (NaCl 0,9%), y multiplicar el resultado por 10.

Control de calidad
Técnica Macro Semimicro
ml µl Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann Anormal
R. de trabajo 1,0 500 (Ref. 99 46 85).
Incubar 2 - 3 min. a la temperatura
elegida (25, 30 ó 37º C).
Muestra 0,1 50
Autoanalizadores
Mezclar y poner en marcha el cronómetro.
Transferir a la cubeta de lectura y leer las
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles
absorbancias después de 1, 2, 3 y 4 min.
bajo demanda.
Lectura
Longitud de onda: 334 nm; 340 nm; o 365 nm.
Blanco : Agua
Bibliografía
Cubeta: termostatizada, 1 cm de paso de luz.
Bergmeyer, H.U., Scheibe, P. and Wahlefeld, A.W. (1978) Clin.
Cálculos
Chem. 24, 58-73.
Determinar la ∆E/min. obtenida en cada lectura Isherwood, D. (1979) Med. Lab. Sci., 36, 211-235.
yhallar el valor medio. Las U/L se obtienen a International Federation of Clinical Chemistry; IFCC Methods for
partir de: the measurament of catalytic concentrations of Enzymes,
Macro/Semimicro
(1980). Clin. Chim. Acta, 105, 145F - 172F.
334 nm (∆E/min.)x1780=U/L
340 nm (∆E/min.)x1745=U/L
365 nm (∆E/min.)x3235=U/L

Valores Normales
Temperatura Hombres Mujeres
25 ºC ≤24 U/L ≤19 U/L
30 ºC ≤35 U/L ≤28 U/L
37 ºC ≤47 U/L ≤39 U/L

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

A 7 Km 1081 – Apartado 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 14. 39 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Julio 2004
GPT / ALT U.V.
OPTIMIZED KINETIC METHOD. IFCC TECHNIQUE.
For the “in vitro” determination of Transaminase GPT/ALT in serum or plasma.

Principle
GPT
α-Ketoglutaric acid + L-Alanine > L-Glutamic acid + Pyruvic acid
LDH
Pyruvic acid + NADH+ + H+ > L-Lactic acid + NAD+

Reagents
Kit 20 x 3 ml. (Ref. 99 84 37). Contents: The previously described method is the one proposed by the
A. 20 vials of Freeze-dried substrate. (Ref. 99 57 46). International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) in its
B. 1 x 60 ml. Buffer solution. (Ref. 99 00 76). modified version without Pyridoxal Phosphate pre-incubation,
Kit 12 x 16 ml. (Ref. 99 36 15). Contents: using pH 7.8 Tris-HCl buffer and not taking into account the
A. 12 vials of Freeze-dried substrate. (Ref. 99 09 77). correction of the blank value.
B. 2 x 100 ml. Buffer solution. (Ref. 99 60 19).
Kit 10 x 50 ml. (Ref. 99 32 33). Contents:
A. 10 vials of Freeze-dried substrate. (Ref. 99 49 20). Caution
B. 1 x 500 ml Buffer solution. (Ref. 99 42 99).
Contains sodium azide (0.09 %) as preservative. Handle with
Working reagent care. The disposal of the residues has to be made according
Rehydrate one vial of Freeze-dried substrate with the volume of to legal local regulations.
buffer solution stated on the label. Mix gently until completely
dissolved.
The concentrations in the reagent solution are: Performance Characteristics

Tris-HCl buffer pH 7.8 100 mM Linearity: Up to ∆E/min. values of 0.160 (at 340 and 334 nm) or
L-Alanine 500 mM up to 0.080 when reading at 365 nm. For higher values it is
α-Ketoglutaric acid 15 mM recommended to dilute the sample 1/10 with normal saline
NADH 0.18 mM (NaCl 0.9%) and assay it once again. Multiply the final result by
NaHCO3 10 mM 10.
LDH ≥ 1428 U/L The analytical performance characteristics of the product
Stabilizers and preservatives depend both of the reagent and the reading system used,
manual or automatic. The following data have been obtained
Storage and stability manually.
The components of the kit, stored at 2-8ºC, will remain stable
until the expiration date stated on the label. The rehydrated Intraseries Variation Coefficient: 1.69 %.
reagent is stable 4 weeks at 2-8ºC and 1 week at room temp. Interseries Variation Coefficient: 2.29 %.
(<25 ºC). Recovery: 98.3 %.

Sample Hemolyzed samples will give false results. When assaying high
Serum or plasma with EDTA or heparin. Samples free from activity samples, a very low initial absorbance can be found
hemolysis should be used. Sera kept in the refrigerator at which is mainly due to the rapid conversion of the NADH at the
2-8º C loses 10% of its activity after 3 days. early stage of the reaction. In such a case, dilute the sample with
saline 1/10 (NaCl 0.9%) and assay it once again. Multiply the
final result by 10.

Procedure Macro Semimicro

Quality control
ml µl
Working reagent 1.0 500
Seriscann Normal (Normal Control Serum) (Ref.99 41 48) and
Incubate 2-3 min.at the desired
Seriscann Anormal (Abnormal Control Serum)
assay temperature (25, 30 or 37º C).
(Ref.99 46 85).
Sample 0.1 50
Mix and start the stopwatch.Transfer
to the measuring cuvette. Read the
Autoanalyzers
absorbance after 1,2,3 and 4 min.
Reading
Technical bulletins for different analyzers, are available upon
Wavelength : 334 nm; 340 nm; 365 nm.
request.
Blank : Water.
Cuvette: Thermostatized 1 cm light-path.
References
Calculations
Determine the ∆E/min. for every reading and find Bergmeyer, H.U., Scheibe, P. and Wahlefeld, A.W. (1978) Clin.
the mean value. Chem. 24, 58-73.
Macro/Semi-micro Isherwood, D. (1979) Med. Lab. Sci., 36, 211-235.
334 nm (∆E/min.) x 1780 = U/L International Federation of Clinical Chemistry; IFCC Methods for
340 nm (∆E/min.) x 1745 = U/L the measurament of catalytic concentrations of Enzymes,(1980).
365 nm (∆E/min.) x 3235 = U/L Clin. Chim. Acta, 105, 145F - 172F.

Normal values
Assay temperature Men Women
25 ºC ≤24 U/L ≤19 U/L
30 ºC ≤35 U/L ≤28 U/L
37 ºC ≤47 U/L ≤39 U/L

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revision: July 2004