TEMA:

BASES BIOQUIMICAS DE LA HEMOSTASIA

Y SU EXPLORACION

I
BIOQUIMICA DE LAS PLAQUETA

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 HEMOSTASIA: CONCEPTO Y FASES
CONCEPTO:
• Proceso complejo que permite:
• Prevenir de forma contínua la pérdida espontánea de sangre
• Detener la hemorragia causada por daños al Sistema Vascular
FENOMENOS IMPLICADOS:
• Hemostasia primaria:
• Fase de vasoconstricción parietal: liberación de factores tisulares de coagulación
• Fase endotelial-trombocitaria: activación de plaquetas
Resultado: Formación de un tapón inestable de plaquetas (3-5 min)
• Coagulación:
• Fase de formación de trombina: cascada de activación proteolítica de enzimas y factores
• Fase de formación de fibrina: producción de una red insoluble de proteína
Resultado: estabilización y fijación del coágulo (5-10 min)
• Fibrinolisis:
• Cicatrización del tejido vascular lesionado
• Destrucción enzimática de la red de fibrina
Resultado: Restablecimiento de la situación hemostática normal (48-72 horas)
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 HEMOSTASIA
LESION VASCULAR
HEMOSTASIA PRIMARIA
(Cese provisional del sangrado)

3-5 minutos

• Vasoconstricción COAGULACION
• Adhesión y agregación de plaquetas (Cese definitivo del sangrado)
• Formación del tapón plaquetario

5-10 minutos

• Polimerización de fibrina
• Formación del coágulo
FIBRINOLISIS

48-72 horas

ULADECH Dr. Diomedes Camones M. • Disolución del coágulo 3

• Función hemostática normal
SECUENCIA DE FENOMENOS EN LA HEMOSTASIA PRIMARIA

1. Punción o lesión vascular

2. Vasoconstricción mediada por serotonina
3. Adhesión de plaquetas a la matriz subendotelial expuesta
4. Activación plaquetaria
5. Agregación reversible de plaquetas
6. Liberación de factores plaquetarios
7. Inicio de la síntesis de factores de coagulación: TROMBINA
8. Agregación irreversible de plaquetas dependiente de trombina

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 BASES BIOQUIMICAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS PLAQUETAS

• ESTRUCTURA Y FUNCION DE LAS PLAQUETAS
• CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS
• GLICOPROTEINAS DE LA SUPERFICIE DE LAS PLAQUETAS
• RECEPTORES NO GLICOPROTEICOS DE LA SUPERFICIE DE LAS PLAQUETAS
• TRANSDUCCION DE SEÑALES EN LA ACTIVACION DE LAS PLAQUETAS
• PATOLOGIA DE LA FUNCION PLAQUETARIA
• TECNICAS DE ESTUDIO BIOQUIMICO Y FUNCIONAL DE LAS PLAQUETAS

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BASES BIOQUIMICAS DE LA COAGULACION SANGUINEA

• COAGULACION: CONCEPTO Y FASES

• MECANISMO BIOQUIMICO DE LA COAGULACION

• MECANISMOS BIOQUIMICOS DE REGULACION DE LA COAGULACION

• PATOLOGIA MOLECULAR DE LA COAGULACION

• BASES BIOQUIMICAS DE LA TERAPEUTICA DE LA COAGULACION

• TECNICAS BIOQUIMICAS DE ESTUDIO DE LA COAGULACION

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 BASES BIOQUIMICAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

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 ESTRUCTURA Y FUNCION DE LAS PLAQUETAS

1. RELACION ESTRUCTURA-FUNCION:
• MEMBRANA PLAQUETARIA: INTERACCION CON EL EXTERIOR (RECEPTORES)
• Interacciones con ligandos en la lámina basal del endotelio lesionado
• Transducción de señales de ligandos circulantes
• Interacción con otras células de la sangre
• CITOESQUELETO: CAMBIO DE FORMA Y SECRECION
• Contracción celular
• Secreción del contenido de gránulos específicos
• GRANULOS ESPECIFICOS: ALMACEN DE PRODUCTOS ACTIVOS
• Moléculas pro-hemostáticas
• Moléculas pro-cicatrizantes
• Moléculas activadoras de plaquetas
• SISTEMAS DE MEMBRANA: AMPLIFICACION DE SUPERFICIE
• Interacción con componentes de mecanismos de activación
• Retención de sustancias
• ESTRUCTURAS INESPECIFICAS: FUNCIONES METABOLICAS DE MANTENIMIENTO
• Mitocondrias: metabolismo energético
• Vesículas de endocitosis y exocitosis:
ULADECH intercambio
Dr. Diomedes de nutrientes
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• Lisosomas y peroxisomas: degradación de sustratos
 ESTRUCTURA Y FUNCION DE LAS PLAQUETAS

2. ANATOMIA PLAQUETARIA:
• Discos biconvexos
• 3-4 µm de diámetro mayor por 0.5-1 µm de diámetro menor
• Aspecto liso con aberturas de canales intraplaquetarios

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CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

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 CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

1. MEMBRANA PLASMATICA:
• Glicocálix:
• Receptores glicoproteicos: gpIb/IX; gpIIb/IIIa
• Receptores de activación
• Bicapa fosfolipídica de la membrana:
• Abundante ácido araquidónico (eicosanoides y mensajeros secundarios)
• Distribución asimétrica de fosfolípidos (cargas negativas en coagulación)
• Area submembranosa:
• Dominios transmembranales de proteínas integrales de membrana
• Terminaciones del citoesqueleto (cambio de forma y secreción de gránulos)
• Dominios citoplásmicos de receptores de superficie (transducción de señales)

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 CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

2. CITOPLASMA:
• Citoesqueleto de membrana:
• Filamentos submembranosos: actina y miosina
• Citoesqueleto de citoplasma:
• Microtúbulos (uno sólo)
• Microfilamentos: actina y miosina
• Otros componentes:
• Gránulos de glucógeno
• Gotas lipídicas
• Nucleótidos
• Calcio

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 CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

3. GRANULOS ESPECIFICOS:
• Gránulos alfa:
• Proteínas específicas plaquetarias:
• P-selectina, β-tromboglobulina
• Factor plaquetario 4 (FP4)
• Proteínas comunes con el plasma:
• Fibrinógeno, albúmina, fibronectina
• Gránulos densos:
• Serotonina, pirofosfato, ADP, Ca2+, cationes

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 CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

4. SISTEMAS DE MEMBRANA:
• Sistema canalicular abierto:
• Estructura única con 15-20 aberturas
• Aumenta la superficie total de contacto
• Permite el intrercambio de sustancias en profundidad
• Sistema tubular denso:
• Canales delgados internos con un contenido amorfo
• Principal depósito de Ca2+
• Enzimas oxidativos
• Enzimas del metabolismo de prostaglandinas
• Sistema tubular mixto:
• Implicado en los movimientos de Ca2+ en la activación plaquetaria
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 CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LAS PLAQUETAS

5. ESTRUCTURAS INESPECIFICAS:
• Lisosomas:
• Lisosomas primarios
• Lisosomas secundarios
• Microperoxisomas
• Mitocondrias

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 GLICOPROTEINAS DE LA MEMBRANA PLAQUETARIA

1. FUNCIONES GENERALES:

• Mediadores de los procesos de adhesión y agregación

• Receptores para ligandos extracelulares

• Participación en reconocimiento y fagocitosis

• Unión de proteínas del complemento

• Identidad antigénica

• Mediación de procesos de transporte de membrana

• Función como enzimas o como antiproteasas

• Estabilización de la membrana

• Contribución a la carga de superficie

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 GLICOPROTEINAS DE LA MEMBRANA PLAQUETARIA

2. CLASIFICACION:
• INTEGRINAS:
• Complejos heterodiméricos α/β (α/β1, α/β2, α/β3)
• Intervienen en interacciones célula-lámina basal o célula-célula
• Sus ligandos contienen un motivo común: RGD (arg-gly-asp)
• Pueden tener ligandos únicos o múltiples
• Entre las más importantes: gpIIb/IIIa; gpIa/IIa; gpIc/Iia
• GLICOPROTEINAS RICAS EN LEUCINA:
• Presentan una secuencia de 24 aminoácidos rica en Leu
• Entre ellas se encuentran gpIb/IX y gpV
• Selectinas:
• Implicadas en la interacción plaqueta-leucocito
• Requieren calcio
• La más importante es la P-selectina o gmp140

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 GLICOPROTEINAS DE LA MEMBRANA PLAQUETARIA

3. FUNCIONES ESPECIFICAS DE GLICOPROTEINAS:

• gp Ib:
• Forma complejos en la membrana plaquetaria con gpIX y citoesqueleto
• Receptor de contacto con la lámina basal endotelial: factor Von Willebrand
• Posible receptor de la trombina
• Es deficiente en los pacientes con Síndrome de Bernard-Soulier
• gpIa:
• Receptor de colágeno y fibronectina
• Complejo gpIIb/IIIa:
• Su formación es dependiente de Ca 2+
• Receptor de fibrinógeno, factor Vcon Willebrand, fibronectina
• Implicado en la unión plaqueta-plaqueta en la agregación
• Diana de anticuerpos antiplaquetarios (AbscixiMab o Tirofibán)
• Es deficiente en pacientes con Tromboastenia de Glanzmann
• gp IV:
• Posible receptor de colágeno y trombospondina
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 RECEPTORES NO GLICOPROTEICOS DE
LA MEMBRANA PLAQUETARIA
1. CLASIFICACION FUNCIONAL:
• Receptores activadores:
• ADP, Adrenalina, Colágeno, Serotonina, Trombina, Tromboxano A2
• Receptores inhibidores:
• Prostaglandinas I2 y E1, Prostaglandina D2, Adenosina
• Receptores de fármacos
2. PAPEL DE LOS LIGANDOS DE RECEPTORES:
• ADP:
• Su unión induce la expresión de gpIIb/IIIa
• Induce la agregación a través de fibrinógeno
• Inhibe la adenil ciclasa
• Adrenalina (receptores adrenérgicos):
• Induce agregación sin cambio de forma
• Potencia la acción de otros agonistas
• Tromboxano A2:
• Induce la movilización de Ca2+ intracelular
• Potencia la acción de otros agonistas
• Prostaglandinas:
• Inducen la activación de adenil ciclasa
• El AMPc aumentado inhibe
ULADECH la activación
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M. plaquetas 19
 RECEPTORES NO GLICOPROTEICOS DE
LA MEMBRANA PLAQUETARIA

Trombina Fibrinogeno
✄ Thrombin
receptor
gpIIb/IIIa

Adenyl

β γ
cyclase
Integrin
α γ Activation
- β FAK
ATP
AMPc
α PYK2
PLCβ PI3Kγ

DG IP3
PKC “Src”?
Ca2+ Grb2 “Src”?
Sos Syk
Grb2
(Tyr kinase) Sos
Vav
Rho Ras
Grb2
PYK2 Sos Rac

“Src”? Ras Raf

PI3Kγ
Syk MEK

Trombina
Vav Sos
Grb2
ERK1
Rac ERK2

Adhesión y Agregación ???

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 RECEPTORES NO GLICOPROTEICOS DE
LA MEMBRANA PLAQUETARIA

Tienopiridinas
ADP P2Y1 P2TAC
Ca2+

Adenil
P2X1 ciclasa

? Gq
Gi

PLC

ADP Cambio de forma

Agregación
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 HEMOSTASIA: INTERACCIONES MOLECULARES
ENDOTELIO VASCULAR LESIONADO

COLAGENO
vWF
FACTOR TISULAR
PLAQUETA
PS
PS
COMPLEJO FT- VIIa COMPLEJO Xa-Va-Protrombina

Ca2+ Ca2+

Ca2+
FACTOR XIa FACTOR IX FACTOR X

Ca2+
COMPLEJO VIIIa-IXa
TROMBINA
PDGF PS

FACTOR VIII

PAF FIBRINOGENO FIBRINA

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la adhesión a la lámina basal

• Anomalías de la agregación primaria

• Anomalías de la transducción de señales

• Anomalías de la agregación secundaria

• Anomalías de la superficie procoagulante

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la adhesión a la lámina basal:

• Síndrome de Bernard-Soulier: complejo gp Ib/IX/V

• Enfermedad de Von Willebrand de tipo plaquetario: gp Ib
• Defecto de adhesión de plaquetas al colágeno: gp Ia/230

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la agregación primaria:

• Trombastenia de Glanzmann: gp IIb/IIIa

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la transducción de señales:

• Defectos “Aspirin-like”:
• Activación de proteínas G
• Ciclooxigenasa
• Tromboxano sintetasa
• Prostaglandina H1 sintetasa
• Activación de Fosfolipasa C
• Liberación de ácido araquidónico
• Metabolismo de fosfoinositol
ULADECH • Liberación
Dr. de calcio
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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la agregación secundaria:

• Defectos en el almacenamiento en gránulos:
• Sindrome de Hermansky-Pudlak: gránulos densos
• Síndrome de Chediak-Higashi: gránulos densos
• Síndrome de Plaquetas Quebec: gránulos a
• Síndrome de Plaquetas Grises: mixta
• Defectos en la secreción de gránulos:
• Síndrome de Wiskott-Aldrich: proteína WASP

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Anomalías de la superficie procoagulante:

• Síndrome de Scott: scramblasa

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ANOMALIAS CONGENITAS DE LA FUNCION PLAQUETARIA

• Trombopatías secundarias a:

• Uremia

• Mielodisplasias

• Sindromes mieloproliferativos

• Disproteinemias

• Leucemias

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