ORGENTEC Diagnostika GmbH METODOLOGÍA

Carl-Zeiss-Straße 49-51 El kit de ensayo Alegria ® dispone de microtiras de 8 pocillos con código de barras, llamadas tiras de ensayo
55129 Mainz - Germany Alegria®. Cada tira está diseñada para determinar una única muestra de paciente. La tira de ensayo Alegria®posee
un juego completo de reactivos, que incluye conjugado de enzimas, sustrato de enzimas, tampón de muestra y un
control específico de ensayo. Además cada tira tiene dos pocillos revestidos de antígenos que sirven de pocillos
Phone: +49 (0) 61 31 / 92 58-0
de reacción para un control y una muestra de paciente.
Fax: +49 (0) 61 31 / 92 58-58
La determinación se basa en una reacción inmunológica indirecta ligada a enzimas con los pasos siguientes: los
Internet: www.orgentec.com anticuerpos presentes en muestras positivas se ligan al antígeno revestido en la superficie de los dos pocillos de
reacción formando un complejo antígeno-anticuerpo. Tras la incubación, un primer paso de lavado elimina las
moléculas no ligadas y las moléculas ligadas no específicas. El conjugado de enzima añadido a continuación se
Instrucciones de uso
liga al complejo anticuerpo-antígeno inmovilizado. Tras la incubación, un segundo paso de lavado elimina el
2014-06
conjugado de enzimas no ligado. La adición de la solución de sustrato de enzimas tiene como resultado la
hidrólisis y el desarrollo del color durante la incubación. La intensidad del color azul guarda relación con la
concentración del complejo anticuerpo-antígeno y puede medirse fotométricamente a 650 nm.
La tira de ensayo Alegria® se basa en la tecnología SMC® patentada (Calibración memorizada Sensotronic): la
información sobre el ensayo, el análisis y la evaluación y la fecha de caducidad específica del lote se encuentran
ORG 216 AMA-M2 en el código de barras impreso en cada tira de ensayo Alegria ®.
La tira de ensayo Alegria® se puede utilizar con el instrumento de diagnóstico Alegria® - un analizador de acceso
aleatorio automatizado. Mediante la tecnología SMC®, los datos codificados en el código de barras se transmiten
DESCRIPCIÓN BREVE de la tira de ensayo Alegria ® al instrumento y el ensayo se procesa y evalúa automáticamente. El instrumento lee
AMA-M2 es un sistema de prueba basado en el sistema ELISA para la medición cuantitiva de los anticuerpos tipo la fecha de caducidad y rechaza un posterior procesado si la tira de ensayo Alegria ® está caducada.
IgG frente a mitochondrial M2 subtype antigen (AMA-M2) en muestras de suero humano o plasma. Este producto
se ha concebido exclusivamente para su uso profesional en el diagnóstico in vitro. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
• Todos los reactivos de este juego son para su uso profesional para el diagnóstico in vitro.
• Se han analizado todos los componentes que contienen suero humano y el resultado ha sido negativo para los
métodos autorizados de HBsAg, VHC, VIH1 o VIH2. Sin embargo, las pruebas no pueden garantizar la ausencia
SÍMBOLOS UTILIZADOS
de HBsAg, VHC, VIH1 o VIH2, por lo que todos los reactivos basados en suero humano en este juego se deben
V Producto sanitario para diagnóstico in vitro manejar como si fuesen contagiosos.
• Se le ha realizado la prueba de EEB a la albúmina de suero bovino (ASB) usada en los componentes y el
M Fabricante resultado ha sido negativo.
• Evite el contacto con el sustrato TMB (3,3´, 5,5´- tetrametilbencidina).
h Número de catálogo • Los fluidos del sistema contienen ácidos, cuya clasificación es de no peligrosa. Evite el contacto con la piel.
• Los tampones de control, de muestra y de lavado contienen 0.09% de ácido de sodio como conservante. Esta
X24 Válido para
concentración está clasificada como no peligrosa.
g Código de lote • Conjugado enzimático, control y tampón de muestra contienen ProClin 300 al 0.05% como conservante. Esta
concentración está clasificada como no peligrosa.
H Fecha de caducidad Durante el tratamiento de todos los reactivos, de los controles y de las muestras de suero cumpla con la regulación
8: vigente en materia de seguridad en el laboratorio y con las buenas prácticas de laboratorio:
r
2: Limitación de temperatura Medidas de primeros auxilios: en caso de contacto con la piel, lave cuidadosamente la zona con agua y jabón.
Quítese la ropa y el calzado contaminado y lávelos antes de volverlos a utilizar. Si la piel entra en contacto con los
i Consúltense las instrucciones de uso
fluidos del sistema, lave la zona cuidadosamente con agua. En caso de contacto con los ojos, aclare con cuidado
w Manténgase fuera de la luz del sol el ojo abierto con agua corriente durante al menos 10 minutos. En el caso de que sea necesario, consulte a un
médico.
• Precauciones personales, equipo de protección y procedimientos de urgencia: Siga las regulaciones en materia
de seguridad en el laboratorio. Evite el contacto con la piel y los ojos. No ingiera el producto. No pipetee nunca
Tira de prueba Alegria ® con la boca. No coma, beba, fume ni se aplique maquillaje en las zonas en las que se trabaja con las muestras o
Solución de lavado con los reactivos del juego. En el caso de derrame, absorba el producto con un material inerte y elimine el
El fluido del sistema producto derramado como corresponda.
• Controles de exposición/ protección personal: utilice guantes de protección de caucho de nitrilo o de látex natural.
Listo para el uso
Use gafas de protección. No se conocen reacciones peligrosas si se usa conforme a su fin.
• Condiciones que se deben evitar: la solución de sustrato es sensible a la luz, por lo que las tiras Alegria® se
deben almacenar en un lugar oscuro.
• Siga la normativa nacional o regional para eliminar los desechos del laboratorio.
Siga las directrices en materia de realización de controles de calidad en laboratorios médicos mediante controles
de ensayo y/ o mezcla de sueros.

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CONTENIDO DEL KIT NOTAS TECNICAS
X24 ORG 216-24 Válido para 24 determinaciones • El juego de ensayo no se debe utilizar después de la fecha de vencimiento.
X12 ORG 216-12 Válido para 12 determinaciones • El papel de ensayo y las muestras deben disponerse con temperatura de ambiente aprox. 30 minutos antes de
Tira de prueba Alegria®: que consta de 12 módulos de 8 pocillos cada uno. iniciar el ensayo.
Pocillos 1 y 2: vacíos y sin revestimiento (pocillos para solución de muestras) • Pipetear la muestra en el fondo de la cavidad. Para prevenir una arrastre, debe pipetearse la muestra siempre
Pocillos 3 y 4: revestidos con el antígeno respectivo (pocillos de reacción) con una punta limpia de pipeta.
Pocillo 5: Control; amarillo; contiene anticuerpos específicos de prueba, PBS, ASB,
detergente; conservante ácido de sodio 0.09% y ProClin 300 0.05%. PREPARACIÓN DE REACTIVOS
Pocillo 6: Enzima conjugada; rojo claro; contiene anticuerpos contra la IgG
humanas, etiquetado HRP; PBS, ASB, detergente, conservante ProClin El contenido de cada botella del concentrado de solución de lavado (20 ml) debe diluirse mediante adición de agua
300 0.05%. destilada para obtener un volumen final de 1000 ml (1 litro). La solución de lavado se vierte a continuación en un
Pocillo 7: Tampón de muestra: amarillo, contiene PBS, ASB, detergente; contenedor previsto. Si sólo se va a realizar una serie de Alegria en un día, recomendamos transferir solamente
conservante ácido de sodio 0.09% y ProClin 300 0.05%. 500 ml de tampón de lavado diluido.
Pocillo 8: TMB solución de substrato: 3,3’, 5,5’-tetrametilbencidina.
Pocillos de reacción: recubiertas con antígeno purificado mitochondrial M2 (PDC-E2,
Antes de la utilización diluya el contenido de cada botellita de concentrado de fluido del sistema (1000x) con agua
BCOADC-E2, OGDC-E2).
destilada hasta alcanzar un volumen total de 2500 ml. El fluido del sistema será conducido seguidamente al
Código de producto de código de barras: AMA-M2
contenedor previsto para ello.
1x 20 ml Solución de lavado; contiene Tris, detergente, conservante ácido de sodio 0,09%;
50x concentrado
1x 2.5 ml El fluido del sistema; contiene ácido; 1000x concentrado Coja el número necesario de tiras reactivas Alegria® de la bolsa con pinza y espere hasta que alcancen la
temperatura ambiente (20-28ºC). No retire la lámina que cubre los pocillos vacíos hasta que esté preparado para
i 1 Alegria® Instrucciones de uso: Alegria ® Mini-DVD
empezar el ensayo.
i 1 Certificado de control de calidad
PROCEDIMIENTO
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Las tiras reactivas Alegria ® con tecnología SMC ® se usan con el equipo de diagnóstico Alegria ®.
• Almacene el juego de prueba a 2-8ºC en un lugar oscuro.
En el Manual de Usuario del equipo encontrará más información sobre su uso.
• No exponga los reactivos al calor, al sol o a una luz intensa durante su almacenamiento o uso.
(1) De las láminas que cubren las cavidades 1 - 4 sólo deben ser retiradas la que cubren las tiras de
• Almacene las tiras reactivas Alegria ® selladas en la bolsa con pinza suministrada con un secante.
prueba requeridas
• El tiempo de conservación de los juegos de prueba sin abrir es de 15 meses desde la fecha de fabricación. Los
No retire las láminas caracterizadas con un código de barras que cubren las cavidades 5 - 8.
reactivos sin abrir se mantienen estables hasta la fecha de caducidad del juego. Consulte las etiquetas de cada
(2) Pipetear 10 µl de muestra de paciente no diluida en el fondo de la cavidad 1.
lote individual.
(3) Introduzca la tira en el SysTray.
• Los tampones de lavado diluidos y los fluidos del sistema se mantienen estables durante al menos 30 días si se
(4) Coloque los Systrays cargados en la posición correcta en el equipo Alegria ® y comience la serie. Los siguientes
almacenan a 2-8ºC. Recomendamos que se use en el mismo día una vez que se haya transferido al recipiente
pasos se realizarán de manera automática. La serie de prueba habrá terminado cuando el equipo comience a
del reactivo.
imprimir los resultados.
EQUIPOS REQUERIDOS DE LABORATORIO
• Mezclador Vortex
• Micropipetas con jeringas de un solo uso para 10 µl
• Agua destilada o desionizada
• Probeta graduada para 1000 ml, 2500 ml

RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACION

• Las muestras de sangre se deben obtener en base a las directivas y regulaciones de vigencia actual.
• Dejar coagular la sangre y obtener el suero mediante centrifugación.
• Se debe prevenir la utilización de sueros hemolíticos, lipémicos e ictéricos.
• Las muestras de suero y plasma pueden conservarse durante un período máximo de 5 días con refrigeración y CALIBRADO
temperaturas entre 2 a 8 °C. En caso de requerir una conservación más larga, se deben alicuotar las muestras y El sistema de ensayo está calibrado frente a la preparación de referencia internacional WHO 67/183 para los
congelarse con una temperatura de -20 °C. anticuerpos AMA-M2 como 100 IU/ml.
• Se ha de prevenir la repetida congelación y descongelación! Esto puede provocar una pérdida variable de
actividad de los autoanticuerpos o anticuerpos.
• No se recomienda la utilización de sueros desactivados frente al calor. CÁLCULO DE RESULTADOS
Mediante la tecnología SMC® (Sensotronic Memorized Calibration), todos los datos de la prueba se transfieren al
sistema a través de un código de barras individual en la tira reactiva Alegria ®.
La evaluación e interpretación de los resultados se realiza completamente automático.

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Los CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO Resultados del estudio
Study population n n pos %
Rango de medición
Primary biliary cirrhosis (PBC) 143 139 97.2
El intervalo de cálculo de este ensayo Alegria ® es 0 - 200 U/ml
Rheumatoid Arthritis 60 1 1.7
Valores previstos Normal human sera 267 17 6.4
En un estudio habitual del intervalo con muestras de suero de donantes de sangre sanos se han establecido los
Diagnóstico clínico
siguientes intervalos con el ensayo Alegria ®: valor límite 10 IU/ml
positiva negativa
Interpretación de los resultados ORG 216 positiva 139 18
negativa < 10 IU/ml AMA-M2 negativa 4 309
positiva ≥ 10 IU/ml .. 143 327 470
Sensibilidad 97.2 %
Linealidad Especificidad 94.5 %
Se diluyeron en serie muestras de pacientes con niveles altos de anticuerpos en un tampón de muestra para Eficiencia diagnóstica 95.3 %
demostrar el intervalo dinámico del ensayo en el límite superior/ inferior de linealidad. Se calculó la actividad para
cada dilución mediante la tecnología SMC ®. LÍMITE DEL PROCEDIMIENTO
Este ensayo es una ayuda diagnóstica. El diagnóstico clínico definitivo no debe basarse en los resultados de una
prueba, sino que debe ser realizada por el médico después de todo, los hallazgos clínicos y de laboratorio han sido
Muestra Dilución Observado Esperado O/E evaluados respecto a la imagen completa clínica del paciente. También todas las decisiones de tratamiento deben
.. .. [IU/ml] [IU/ml] [%] tenerse en cuenta individualmente.
WHO 1:100 102.5 100.0 103 Los rangos de referencia anteriores, deberían considerarse únicamente como guía. Se recomienda que cada
. 1:200 57.4 50.0 115 laboratorio establezca sus propios rangos normales y patológicos de anticuerpos en muestras de pacientes.
. 1:400 25.7 25.0 103
. 1:800 12.6 12.5 101 BIBLIOGRAFÍA
. 1:1600 6.7 6.3 107 1. Berg, P.A. and Klein, R. Diagnose der primär-biliären Zirrhose. IVD Nachrichten 1990; 1/1: 6 -7.
. 1:3200 3.7 3.1 118 2. Berg, P.A. and Klein, R. Heterogeneity of anti-mitochondrial antibodies. Sem. Liver Dis. 1989; 9: 103 - 116.
1 1:100 49.2 49.2 100 3. Berg, P.A. and Klein, R. Immunology of primary biliary cirrhosis. Ballière's Clin.Gastroenterol. 1987; 1: 675 - 706.
. 1:200 21.4 24.6 87 4. Baum, H. and Palmer, C. The PBC specific antigen. Mol. Aspects Med. 1985; 8: 201 - 234.
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. 1:800 6.4 6.2 104 primary biliary cirrhosis. PNAS, USA 1988; 85: 8654 - 8658.

Límite de detección
Sensibilidad funcional 1 IU/ml

Reproductibilidad
Precisión intranalítica: se calculó el coeficiente de variación (CV) de cada una de las tres (3) muestras a partir de
los resultados de 24 análisis en una única serie. En la tabla siguiente se muestran los resultados para la precisión
intranalítica.
Precisión entre ensayos: se calculó el coeficiente de variación (CV) de cada una de las tres muestras a partir de
los resultados de seis (6) análisis en cinco (5) series diferentes. Los resultados para las precisiones de serie en
serie se muestran en la siguiente tabla.
.
Intra-Ensayo Inter-Ensayo
Muestra Medio . Muestra Medio .
. IU/ml % CV . IU/ml % CV
1 19.6 4.6 1 20.2 6.5
2 41.5 6.4 2 44.6 9.6
3 118.0 6.1 3 122.8 6.9

Interferencias
No se ha observado ninguna interferencia con sueros hemolíticos (hasta 1000 mgr./dL), lipémicos (hasta 3gr./dL
triglicéridos) o ictéricos (hasta 40 mgr./dL) Ni se han observado efectos de interferencia con anticoagulantes
(EDTA, heparina, citrato).

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