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    Western Blot

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    Catalina boscan
    Western blot es una técnica analítica ampliamente utilizada para detectar proteínas. Involucra la separación de proteínas mediante electroforesis en un gel, su transferencia a una membrana, y la detección de una proteína específica usando anticuerpos. Tiene varias aplicaciones como estimar el tamaño de proteínas, confirmar modificaciones post-traduccionales, y comparar niveles de proteínas entre muestras.

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    Western Blot

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    Catalina boscan
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    Western blot es una técnica analítica ampliamente utilizada para detectar proteínas. Involucra la separación de proteínas mediante electroforesis en un gel, su transferencia a una membrana, y la detección de una proteína específica usando anticuerpos. Tiene varias aplicaciones como estimar el tamaño de proteínas, confirmar modificaciones post-traduccionales, y comparar niveles de proteínas entre muestras.

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    Western Blot (1)

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    Western blot es una técnica analítica ampliamente utilizada para detectar proteínas. Involucra la separación de proteínas mediante electroforesis en un gel, su transferencia a una membrana, y la detección de una proteína específica usando anticuerpos. Tiene varias aplicaciones como estimar el tamaño de proteínas, confirmar modificaciones post-traduccionales, y comparar niveles de proteínas entre muestras.

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    Western Blot

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    Catalina boscan
    Western blot es una técnica analítica ampliamente utilizada para detectar proteínas. Involucra la separación de proteínas mediante electroforesis en un gel, su transferencia a una membrana, y la detección de una proteína específica usando anticuerpos. Tiene varias aplicaciones como estimar el tamaño de proteínas, confirmar modificaciones post-traduccionales, y comparar niveles de proteínas entre muestras.

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    WESTERN

    BLOT
    Carlos Cabello
    Betsy Guerrero
    Angie Paba
    Ana Maria Lara
    QUE ES? Western Blot es una técnica
    analítica, ampliamente utilizada,
    para el estudio de proteínas.

    Permite la detección de una sola


    proteína dentro de una muestra
    biológica

    La especificidad de Western Blot


    se logra mediante la utilización de
    un anticuerpo que reconoce y se
    une a un epítopo único de la
    proteína de interés
    ¿PARA QUÉ SE USA ?

    Se estimar el Confirmar la Comparar


    tamaño de una presencia de cuantitativamente
    proteína modificaciones los niveles de
    post- proteína entre
    traduccionales muestras
    permite la transferencia de
    proteinas desde un gel
    donde han sido separada por
    tamaño o carga mediante
    electroforesis a una
    membrana manteniendo
    configuracion espacial
    Gel con proteínas cargadas y
    separadas previamente
    Camara de transferencia
    semiseca para Western blot
    Papeles whatman No1 o 2 del
    tamaño del gel. NOTA: 6 papeles

    Materiales whatman por cada gel.


    Recipientes del tamaño del gel.
    ahí se colocará el buffer de
    corrida, el metanol y se pondran a
    incubar con los anticuerpos. Se
    puede usar tubos de 50 mL
    Membrana de PVDF o
    nitrocelulosa Bisturi o tijera
    Fuente de poder
    Gel con proteínas cargadas y
    separadas previamente
    Camara de transferencia semiseca
    para Western blot
    Papeles whatman No1 o 2 del
    tamaño del gel. NOTA: 6 papeles

    Reactivos
    whatman por cada gel.
    Recipientes del tamaño del gel. ahí
    se colocará el buffer de corrida, el
    metanol y se pondran a incubar
    con los anticuerpos. Se puede usar
    tubos de 50 mL
    Membrana de PVDF o nitrocelulosa
    Bisturi o tijera
    Fuente de poder
    PROCEDIMIENTO
    a. Preparación de la muestra.
    b. Electroforesis en gel de Acrilamida.
    c. Transferencia electroforética a una
    membrana.
    d. Hibridación del Anticuerpo.
    e. Detección de las Bandas.
    PREPARACIÓN PROCESOS QUÍMICOS Y
    MECÁNICOS

    DE LA Depende de tipo, localización y


    condiciones.

    MUESTRA ESTRUCTURA QUÍMICA DE


    LOS DETERGENTES
    Permite romper las membranas
    celulares y solubilizar las proteínas.

    LA ELECCIÓN DE LA
    SUSTANCIA DETERGENTE
    Depende en parte de la localización.
    ELECTROFORESIS
    ¿QUÉ ES? ¿PARA QUÉ SE USA ?
    Técnica utilizada de forma generalizada en - Medicina forense
    la que, fundamentalmente, se aplica - Investigación de proteínas
    corriente eléctrica a moléculas biológicas, ya - Investigación de mutaciones genéticas
    sean ADN, proteínas o ARN, y se separan en
    función de si son más grandes o más
    pequeñas.
    TRANSFERENCIA A UNA
    MEMBRANA

    La membrana es un soporte sólido que une e inmoviliza las


    proteínas, permitiendo así que la hibridación de un
    anticuerpo las pueda detectar.
    Los sistemas semisecos son más rápidos y requeiren menor
    cantidad de volumen de Tampón que los sistemas húmedos,
    sin embargo no son apropiados para transferencia de
    proteínas de gran tamaño (>70 kDa) y pueden causar, según
    el sistema de detección, un mayor ruido de fondo.
    HIBRIDACIÓN DEL ANTICUERPO.
    En general, los anticuerpos reconocen
    una secuencia de aminoácidos pequeña
    (epítopo) que queda expuesta al eliminar
    la estructura tridimensional de la
    proteína en condiciones
    desnaturalizantes y reductoras.
    DETECCIÓN.
    La detección de la proteína se puede
    hacer mediante métodos directos o
    indirectos, cada uno con sus ventajas e
    inconvenientes.

    METODOS

    1. Quimioluminiscencia.
    2. Fluorescencia.
    3. Colorimetría.
    SOLUCIÓN DE PROBLEMAS
    VENTAJAS DESVENTAJAS
    Costo elevado
    Alta sensibilidad
    0.1 nanogramos Variabilidad accional
    proteina en bandas segun
    ensayo, tipo de
    muestra, condiciones
    Diagnostico eficaz
    de tecnica que hacen
    temprano subjetivas las
    interpretaciones
    Multiples
    muestras y tipos Problema en
    de estudio proteinas de facil
    degradacion
    ACTIVIDAD
    1. ¿Para que es utilizada la tecnica wester
    blot?
    2. Describa brevemente los pasos de la
    tecnica
    3. ¿Cual es son las ventajas de la tecnica?
    4. ¿Que es electroforesis?
    5. Mencione metodos de deteccion de
    proteinas.
    6. ¿De que depende la elecion de sustancia
    detergente?

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