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    Las enzimas de restricción son proteínas que cortan ADN en secuencias específicas, lo que permite a los ingenieros genéticos extraer genes de un organismo e insertarlos en otro para crear organismos genéticamente modificados. La actividad de las enzimas de restricción se ve afectada por factores como la pureza del ADN, contaminantes, pH, temperatura y metilación del ADN, y es más eficiente cuando se siguen las condiciones óptimas recomendadas por el proveedor, como el tiempo de incubación, aunque un

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    Las enzimas de restricción son proteínas que cortan ADN en secuencias específicas, lo que permite a los ingenieros genéticos extraer genes de un organismo e insertarlos en otro para crear organismos genéticamente modificados. La actividad de las enzimas de restricción se ve afectada por factores como la pureza del ADN, contaminantes, pH, temperatura y metilación del ADN, y es más eficiente cuando se siguen las condiciones óptimas recomendadas por el proveedor, como el tiempo de incubación, aunque un

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    Las enzimas de restricción son proteínas que cortan ADN en secuencias específicas, lo que permite a los ingenieros genéticos extraer genes de un organismo e insertarlos en otro para crear organismos genéticamente modificados. La actividad de las enzimas de restricción se ve afectada por factores como la pureza del ADN, contaminantes, pH, temperatura y metilación del ADN, y es más eficiente cuando se siguen las condiciones óptimas recomendadas por el proveedor, como el tiempo de incubación, aunque un

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    ACTIVIDAD

    1. ¿Qué es una enzima de restricción y cuál es la importancia de su uso en biología


    molecular?
     Las enzimas de restricción son enzimas que cortan ADN. Cada enzima reconoce
    una o un número pequeño de secuencias blanco y corta el ADN en o cerca de esas
    secuencias.
    Muchas enzimas de restricción hacen cortes escalonados que producen extremos
    sobresalientes de ADN de cadena sencilla. Sin embargo, algunos producen
    extremos romos.
     La importancia de las enzimas de restricción se debe a que estas son las "tijeras
    moleculares" de los ingenieros genéticos.
    La clave de la transgénesis, la obtención de un organismo genéticamente
    modificado, está en extraer genes de interés de un organismo e introducirlos en
    otro, de modo de obtener un producto con características mejoradas. Pero ¿cómo
    se hace para "cortar" ADN de un organismo e insertarlo en otro? Los genetistas
    necesitaban herramientas para hacerlo, y así descubrieron las enzimas de
    restricción, las “tijeras moleculares” que cortan el ADN. De esta forma, es posible
    extraerlo del genoma de un organismo. Las enzimas son proteínas que cumplen
    una función esencial en el metabolismo celular: son catalizadores biológicos
    (aceleradores de reacciones químicas) que hacen posible que las reacciones se
    lleven a cabo en un tiempo adaptado a las necesidades vitales del organismo.
    Entre sus características fundamentales se encuentra la de ser específicas, es decir
    que cada tipo de enzima actúa sobre un sustrato particular o una secuencia
    particular de una molécula, y no sobre otra. Esta especificidad enzimática resulta
    fundamental en la actividad de las enzimas de restricción que cortan secuencias
    particulares y determinadas del ADN.
    Las enzimas de restricción son una herramienta primordial para la ejecución de
    diversos ensayos útiles en investigación clínica, desde la determinación de
    polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (restriction fragment
    length polymorphism, RFLP), así como en la construcción de vectores con ADN
    recombinante y clonación de secuencias de ADN provenientes de humano, virus,
    bacterias y demás microorganismos de interés para la generación de
    conocimiento o para su aplicación en el área de la medicina.

    2. ¿Qué factores afectan la actividad de las enzimas de restricción?


    Entre los factores que más afectan la actividad de las enzimas de restricción se
    encuentran:
    • La pureza biológica del ADN. Contaminación de la muestra con otros ADN impide
    el buen funcionamiento de las enzimas.
    • Los contaminantes como detergentes y estabilizadores (docedil sulfato de sodio –
    SDS–, ácido etilendiaminotetraacético–EDTA–), ya que concentraciones elevadas
    de sales y detergentes inhiben la actividad enzimática.
    • Modificaciones en el pH y temperatura de incubación. Variaciones leves en estos
    parámetros inhiben enormemente la actividad de las enzimas.
    • El grado de metilación del ADN, ya que algunas enzimas son inhibidas por
    metilación en ciertas secuencias.

    3. ¿Cómo se define una unidad (U) de enzima de restricción?


    Una unidad de enzima se define como la cantidad de enzima requerida para producir la
    digestión completa de un microgramo de ADN sustrato en 60 minutos a la temperatura
    óptima de acción de la enzima.
    4. ¿Cómo se logra la mayor eficiencia en la actividad de las enzimas de restricción?
    Las hojas de instrucciones o insertos que facilita el proveedor incluyen las características y
    descripción de las condiciones óptimas de actividad de las enzimas de restricción
    disponibles comercialmente. Dichas condiciones están ajustadas para el volumen de
    reacción requerido, de acuerdo a la tecnología que se requiere aplicar. Se debe tener en
    cuenta la temperatura óptima de acción, presentación comercial de la enzima (unidades
    de enzima por microlitro), tiempo de incubación, así como los posibles requerimientos de
    aditivos, como albúmina, ATP, etcétera
    5. ¿Aumenta la eficiencia de la actividad de restricción si se rebasa el tiempo recomendado
    de incubación?
    El tiempo de incubación de la reacción puede ser incrementado si la enzima utilizada está
    cerca de su fecha de caducidad y su actividad está mermando. Sin embargo, el tiempo no
    debe incrementarse demasiado, pues aunque el ADN es una molécula resistente, se corre
    el riesgo de su degradación.

    Bibliografía

     https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-
    tutorial/a/restriction-enzymes-dna-ligase
     http://porquebiotecnologia.com.ar/index.php?action=cuaderno&opt=5&tipo=1&note=34
     http://www.academia.edu/15310442/Factores_que_afectan_la_actividad_de_las_enzimas
     http://2012.igem.org/wiki/images/7/78/Enz.pdf
     Salazar, A. Sandoval y J. Armendáriz, Editorial: MC Graw-Hill, BIOLOGÍA MOLECULAR
    Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud.

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