Análisis de Fosfato

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
FACULTAD DE INGENIERIA GEOLOGICA, MINERA Y

METALÚRGICA
Análisis Químico Instrumental

ME 312 R1
Determinación del Fosfato
ALUMNO: SILVA GAVIDIA JULIO ENRIQUE
CÓDIGO: 20164542E
DOCENTE: ING. SUAREZ SANCHEZ, MARÍA FLOR
LIMA – PERÚ
2020
ANÁLISIS DE FOSFORO(P)
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE FOSFATO
OBJETIVOS:
 Es determinar el contenido de fosfato soluble en una muestra de agua mediante
espectrofotometría ultravioleta-visible, para ello se aplicará el método de adiciones
estándares para eliminar interferencias con otros compuestos.
 Espectos de absorción: Se van a realizar espectros de absorción de distintas
sustancias para determinar su λmax y comprobar que un cambio en la estructura de la
molécula, por ejemplo, su reducción, supone una modificación en su espectro.
 Ley de Lambert-Beer: Se aplicará la ley de Lambert-Beer y tras hacer una recta de
calibrado para dos sustancias, se calculará gráficamente el valor de los
correspondientes coeficientes de extinción molar.
 Determinaciones colorimétricas específicas de compuestos: Se aplicarán
reacciones específicas para la determinación colorimétrica de sustancias.
INTRODUCCIÓN:
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber

radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda
de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para
la determinación y caracterización de biomoléculas.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.
Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis en plantas y
bacterias. Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina
un salto desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado de mayor energía
(estado excitado), E2. Y sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado.
Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de
moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una
molécula -esto es, su espectro de absorciónconstituye una seña de identidad de la misma. Por
último, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético
fundamental.
En espectroscopía el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación

electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En espectofotometría
de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible
(400-780 nm).
La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una región
de energía muy alta. Provoca daño al ojo humano así como quemadura común. Los
compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas
aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su máxima absorbancia en la
región UV, por lo que ésta es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa
de compuestos orgánicos. Diversos factores -como pH, concentración de sal y el disolvente-
que alteran la carga de las moléculas, provocan desplazamientos de los espectros UV.
La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio
En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a las
longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el
complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la
que absorbe luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente
energía por debajo de 320 nm.
Transmitancia y absorbancia:
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide

perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o
cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el
resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz

transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz
que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida
al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una
relación logarítmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en
consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100%
e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log
1 = 0.
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la

solución del cromóforo y de la concentración de éste.
Ley de Lambert-Beer: Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de
longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución: A = log I/Io = ε·c·l, la ley
de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía con la
concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de moléculas, cambios
del medio, etc.
2. Instrumentación:
1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.

2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada longitud de
onda: filtros, prismas, redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o tubos) que
contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plástico transparente. Para medir
en UV se deben usar las de cuarzo o sílice fundido, porque el vidrio no transmite la
radiación UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales luminosas en señales
eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.
Para determinar el fósforo:
El método propuesto para determinar fosfatos se basa en la formación de un heteropoliácido

con el reactivo vanado-molíbdico (de color amarillo y soluble en agua) cuya absorción de luz se
mide a 420 nm. Para el ortofosfato, la formación de este complejo tiene lugar según la
reacción:
(PO4) 3− + (VO3) − + 11(MoO4) 2− + 22 H+ ↔ P(VMo11O40) 3− + 11 H2O (1)
En esta identificación interfieren concentraciones apreciables de Fe(III), silicato y arseniato,

entre otras especies. Es decir, estas especies absorben luz a la longitud de onda utilizada (420
nm, absorción del P(VMo11O40) 3− ). Para eliminar dicha interferencia se preparará un blanco
(sin fosfato) cuya absorbancia se restará de la del resto de las muestras.
Adicionalmente, es posible que la absorbancia del complejo se vea afectada por efectos de
matriz. La matriz puede potenciar o atenuar la absorbancia de luz por el complejo, lo cual
puede conducir a resultados erróneos. Para minimizar este efecto, aplicaremos el método de
adiciones estándar, que consiste en la adición de cantidades crecientes del analito de interés
(fosfato en nuestro caso) a una cantidad fija de muestra. Éste procedimiento resulta más
efectivo que un calibrado externo (recta de calibrado con disoluciones patrón) cuando la
matriz interfiere en la detección. En esta práctica estudiaremos la importancia de los efectos
de matriz, determinando la concentración de fosfato mediante ambos métodos y comparando
los resultados.
Espectrofotometría: La espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más

utilizadas para la detección específica de moléculas de distinta naturaleza (contaminantes,
biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). El fundamento físico-químico
de la espectrofotometría está relacionado con la capacidad de las moléculas de absorber
energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se inicien ciclos
vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
La Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles
tiene una energía:
Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ (2)
donde h = 6.6 10-34 J⋅s es la constante de Planck, c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia

y λ su longitud de onda. Cuando decimos que una molécula absorbe luz de longitud de onda λ,
esto significa que la molécula absorbe un fotón de esa longitud de onda. En esta práctica
estudiaremos la absorción de luz en el visible-ultravioleta cercano (λ ≈ 325-700 nm). Cuando
una molécula absorbe un fotón en este intervalo espectral, se excita pasando un electrón de
un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energía superior. De esta manera la
molécula almacena la energía del fotón:
A + h⋅ν → A* E(A* ) − E(A) = h⋅ν (3)
Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado excitado (A* ) y el

fundamental de la molécula (A) debe ser exactamente igual a la energía del fotón. Cada
molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su
estructura electrónica y que la distinguen del resto de moléculas. Como consecuencia, el
espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la longitud de onda, constituye
una verdadera seña de identidad de cada molécula. Dos moléculas distintas presentarán
espectros de absorción distintos, como se representa esquemáticamente en la figura 1.
Un espectrofotómetro (figura 2) consta de una fuente de luz “blanca” caracterizada por un

espectro de emisión continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso
350nm-900 nm). Un monocromador actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz de
longitud de onda fija λ e intensidad I0 que penetra en la cubeta de análisis donde se encuentra
la muestra. Un detector sensible a la luz mide la intensidad del haz a la salida If.
La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que atraviesa la cubeta con la muestra
debido a la absorción de las moléculas. El ritmo de absorción depende de la intensidad inicial
de luz y de la concentración de moléculas. De esta manera, cuando un haz de luz de intensidad
I recorre una distancia dL en una muestra con una concentración de moléculas [B], se produce
una atenuación de intensidad dI dada por:
d I = - k [B] I dL (4)
El significado de la constante de proporcionalidad k se discute más abajo. La expresión

anterior se puede integrar de la siguiente forma:
lo cual da lugar a la ley de Lambert-Beer para la absorción de luz en un medio, que relaciona la
intensidad a la salida de la muestra If, con la intensidad inicial I0, la concentración de
moléculas y la distancia recorrida por la luz en la muestra, L:
El espectrofotómetro, en lugar de la intensidad, mide la absorbancia A que se define por:
donde la constante ε es la denominada absortividad molar1 (o también coeficiente de

extinción), que en general depende de la longitud de onda de la luz incidente.
Como se puede observar, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de

moléculas en la muestra. Es decir la representación de absorbancia frente a concentración
sigue una recta de pendiente m = ε⋅L. Esta ley de proporcionalidad se cumple para luz
monocromática (de una longitud de onda dada) y disoluciones diluidas de las moléculas
absorbentes (< 0.01M). Se encontrarán en general desviaciones cuando se realicen
experimentos sobre muestras concentradas de analitos.
3. Materiales:
8 matraces aforados de 25 ml Probeta de 250 ml

1 matraz aforado de 100 ml Pipetas de 5 y 10 ml
Matraces aforados de 100ml y 1000 ml por banco (3-4 parejas)
Reactivos: Heptamolibadto amónico, ortofosfato ácido potásico, Metavanadato amónico.
Preparación de reactivos:
1. Reactivo vanado-molíbdico (única para todos): En unos 400 ml de agua destilada,

disolver 20g de heptamolibdato amónico, Mo7O24(NH4)6⋅4H2O. Preparar una
segunda disolución de 0.5 g de metavanadato amónico, NH4VO3, en 300 ml de agua y
añadir 100 ml de ácido nítrico concentrado (con guantes y gafas de protección, en la
campana extractora). Mezclar ambas disoluciones en un matraz aforado de un litro y
enrasar con agua destilada.
2. Disolución patrón de ortofosfato (PO4) 3− (1 g/l) (única para todos):. Preparar 100 ml
de disolución patrón en matraz aforado disolviendo la cantidad adecuada (calcúlela)
de KH2PO4 en agua destilada.
3. Disolución de trabajo de ortofosfato (0.1 g/l): Cada pareja prepara una disolución de
trabajo pipeteando 10 ml de disolución patrón y enrasando a 100 ml con agua
destilada en matraz aforado.
Calibrado externo: En matraces aforados de 25 ml se pipetean alícuotas de la
disolución de trabajo de forma que la concentración final de fosfato sea de 3, 5, 10, 15
y 20 mg/l. Se agregan 10 ml de la disolución vanado-molibdato amónico a cada una de
ellas y se enrasa con agua destilada. Agitar cada matraz para homogeneizar la
disolución y dejar en reposo 10 minutos para que tenga lugar el desarrollo del color.
Preparación de las muestras problema: Pipetear 5 ml de la disolución problema y
pasarlos a un matraz aforado de 25 ml. Añadir 10 ml de la disolución vanado-
molibdato y enrasar con agua destilada. Repetir este procedimiento otras 2 veces más
para tener 3 muestras problema. Dejar reposar 10 minutos
Medidas de absorbancia:
- Ajustar el espectrofotómetro para medidas de absorbancia a 420 nm
- Introducir el blanco en el aparato y ponerlo a cero.
- Medir finalmente la absorbancia a 420 nm de los patrones y de las 3 muestras.
- Construir la recta de calibrado y determinar la concentración de cada muestra
problema.
- La concentración de fosfatos en la muestra problema original será el resultado
de promediar los resultados de las tres medidas y aplicar el factor de dilución.
El error se obtiene a partir de la dispersión de los datos: ε= ± t⋅(s/√N), donde s
es la desviación cuadrática y N el número de medidas realizadas.
Determinación de fosfato por el método de adiciones estándar.
Con el fin de minimizar efectos de matriz se aplica el método de adiciones estándar.

Para ello se pasan 4 alícuotas del mismo volumen de muestra problema en matraces
de 25 mL. A 3 de esos matraces se les añade cantidades crecientes de la disolución de
trabajo. A continuación se agregarán 10 ml de la disolución de vanado-molibdato y se
enrasará con agua destilada. Dejar reposar 10 minutos.
Calcular las alícuotas de la muestra problema y las adiciones de forma que la

concentración estimada de fosfato no exceda de 20 mg/l.
Medidas de absorbancias:
Poner a cero el espectrofotómetro con el mismo blanco del apartado anterior y medir la
absorbancia a 420 nm de cada muestra.
Construir la recta de adiciones estándar y determinar la concentración de fosfatos. Aplicar el

factor de dilución correspondiente.
Para el cálculo de errores en este apartado, pedir el resultado obtenido a 2 parejas del mismo
turno de prácticas y realizar los cálculos de la desviación estándar.
4. Presentación de resultados
1. Incluir todas las medidas de absorbancia y concentraciones de las disoluciones patrón de

fosfato correspondientes en tablas.
2. Representar en gráficas independientes los datos experimentales de los dos calibrados

realizados (patrón externo y adiciones estándar), así como cada una de las rectas por mínimos
cuadrados (se recomienda el uso de Excel)
3. Para cada uno de los métodos utilizados (calibrado y adiciones estándar), expresar la
concentración de fosfato resultante de la muestra problema junto con los errores absoluto y
relativo de la determinación. Comparar ambos métodos y discutir los resultados.
Bibliografía
Daniel C. Harris, Análisis Químico Cuantitativo 2ª ed., Ed. Reverte. Capítulos 4, 5 y 19

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Análisis Químico Instrumental

Determinación del Fosfato

ALUMNO: SILVA GAVIDIA JULIO ENRIQUE

DOCENTE: ING. SUAREZ SANCHEZ, MARÍA FLOR

El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber

En espectroscopía el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación

La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide

La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz

La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la

1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.

El método propuesto para determinar fosfatos se basa en la formación de un heteropoliácido

(PO4) 3− + (VO3) − + 11(MoO4) 2− + 22 H+ ↔ P(VMo11O40) 3− + 11 H2O (1)

En esta identificación interfieren concentraciones apreciables de Fe(III), silicato y arseniato,

Espectrofotometría: La espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más

Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ (2)

donde h = 6.6 10-34 J⋅s es la constante de Planck, c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia

A + h⋅ν → A* E(A* ) − E(A) = h⋅ν (3)

Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado excitado (A* ) y el

Un espectrofotómetro (figura 2) consta de una fuente de luz “blanca” caracterizada por un

El significado de la constante de proporcionalidad k se discute más abajo. La expresión

El espectrofotómetro, en lugar de la intensidad, mide la absorbancia A que se define por:

donde la constante ε es la denominada absortividad molar1 (o también coeficiente de

Como se puede observar, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de

8 matraces aforados de 25 ml Probeta de 250 ml

Matraces aforados de 100ml y 1000 ml por banco (3-4 parejas)

Reactivos: Heptamolibadto amónico, ortofosfato ácido potásico, Metavanadato amónico.

1. Reactivo vanado-molíbdico (única para todos): En unos 400 ml de agua destilada,

Determinación de fosfato por el método de adiciones estándar.

Con el fin de minimizar efectos de matriz se aplica el método de adiciones estándar.

Calcular las alícuotas de la muestra problema y las adiciones de forma que la

Construir la recta de adiciones estándar y determinar la concentración de fosfatos. Aplicar el

1. Incluir todas las medidas de absorbancia y concentraciones de las disoluciones patrón de

2. Representar en gráficas independientes los datos experimentales de los dos calibrados

Daniel C. Harris, Análisis Químico Cuantitativo 2ª ed., Ed. Reverte. Capítulos 4, 5 y 19

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