Instituto Universitario de la Paz

Escuela de Ciencias. Química

Laboratorio de Biotecnología, Código 460704
Práctica No. [02]. Preparación de medios de cultivo, siembra y
aislamiento de Bacterias.

Geraldine Maoly Gomez Nova, Código 1005240288

Fecha de la elaboración de la práctica: 12-04-2023
Fecha de entrega de informe: 25-04-2023

RESUMEN
En la práctica de laboratorio se prepararon dos medios de cultivos, Agar EMB( Eosina Azul
de Metileno) y Agar Plate Count, posteriormente se realizó la siembra y alistamiento de
microorganismos utilizando la técnica de aislamiento por estría y la técnica de aislamiento
por dilución de decimales. Las muestras cultivadas fueron lixiviados y aguas contaminadas.
Se obtuvo como resultado diferentes bacterias cultivadas en su respectivo medio.

Palabras claves: Medios de cultivos, siembra y aislamiento, microorganismos, técnicas de aislamiento.

1. INTRODUCCIÓN sólidos, semisólidos o líquidos y deben

proporcionarles todas las condiciones
Para el desarrollo de microorganismos es ambientales y nutricionales para el
necesario un medio de cultivo que crecimiento microbiano. La biotecnología y la
proporcione nutrientes, humedad, biología molecular ha sido muy importante
temperatura, pH, consistencia adecuada del para identificar qué microorganismos pueden
medio, presencia o ausencia de gases, luz, etc. cultivarse en el laboratorio, ya que no todos se
En una muestra de laboratorio es difícil pueden cultivar en este debido a las
encontrar un solo tipo de microorganismo, por temperaturas extremas que necesitan para
eso cuando se quiere aislar un mantenerse, como por ejemplo arqueas,
microorganismo es necesario que las hongos, levaduras, eucariotas y bacterias que
condiciones del laboratorio imiten el estado y se mantienen a niveles industriales.
condiciones que necesita el microorganismo
Existe un variedad de tipos de medios de
para multiplicarse, mantenerse o crecer y así
cultivo, entre ellos los medios de
mismo límite el crecimiento de las especies
enriquecimiento, medios definidos, medios
que no se desean estudiar.
complejos, medios selectivos, medio
Los medios de cultivos para aislar diferenciales y medios de enriquecimiento.
microorganismos ambientales pueden ser Para aislar un microorganismo procariota es

1
necesario aislarlo en el medio en qué se 3. METODOLOGÍA
encuentran para obtener un cultivo axénico.

Existen diferentes procedimientos que se PREPARACIÒN DE MEDIOS DE CULTIVO

pueden utilizar para aislar microorganismos,
Se pesó la cantidad de medio de cultivo que
entre los más utilizados se encuentra el
indica la etiqueta del envase para preparar la
aislamiento por estría y las diluciones
cantidad requerida. En un Erlenmeyer se
decimales. El aislamiento por estrías cruzadas
colocó el doble del volumen, seguido se
permite alistar bacterias que dan lugar a
adiciono el agua necesaria y se calentó
colonias separadas y analizar la morfología de
suavemente. Por último se transfirió de 15 a
la colonia, posteriormente se puede transferir
20 mL de cada medio en cajas de Petri
una sola colonia a un nuevo medio y
estérile dejando que solidifique a
desarrollar un cultivo puro bacteriano.
temperatura ambiente.
El aislamiento por diluciones decimales
consiste en diluciones sucesivas, en TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR ESTRÍA
condiciones estériles, de manera que se va
reduciendo el número de microorganismos de Se incineró al rojo vivo el asa bacteriológica,
la suspensión inicial, con el objetivo de contar luego se destapó el tubo que contiene el
el número de bacterias. Se realiza en medio cultivo de microorganismos y se tomó el
líquido y se puede realizar por la técnica de inóculo con el asa estéril, depositando el
vaciado en placa y extensión con la varilla de inóculo sobre la superficie de la placa de agar
vidrio se deslizando el asa con el inóculo sobre el
medio de cultivo haciendo una serie de
2. MATERIALES Y REACTIVOS estrías. Después de finalizar las estrías se
cerró la caja, se etiquetó y colocó en posición
Material Reactivo invertida sobre la mesa.
Erlenmeyers Etanol
TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR DILUCIONES
Agitador Agar Plate count
DECIMALES
Plancha de calentamiento Agar EMB
Vaso de precipitado Para la dilución 10 -1, se transfirió 10 ml de la
Termómetro muestra de agua contaminada al erlenmeyer
que contiene 90 ml de solución salina al
Cajas de Petri
0.85% estéril, dejando homogeneizar. Luego
Autoclave se transfirió 1 ml de la dilución 10-1 a un tubo
Agua destilada que contenga 9 ml de solución salina 0.85 %
Mecheros estéril y así sucesivamente hasta 10-6.
Asas bacteriológicas
Para la dilución 10-1 de muestra de lixiviado,
se transfirió 10 ml de la muestra al
Tubos de ensayo
erlenmeyer que contiene 90 ml de solución
Varillas de vidrio salina al 0.85% estéril, así hasta la dilución
Pipetas 10-7 .
Balanza

2
Extensión con varilla de vidrio Se siguió el procedimiento descrito en la
Con una pipeta estéril de 1 mL se tomó 0.1 metodología de la preparación del medio de
mL de la dilución 10-6 de la muestra a cultivo, se preparó Agar EMB(Eosina Azul de
trabajar y se colocó en el centro de la Metileno). Cabe resaltar que para la
superficie de una caja de petri. Se sumergió realización de esto fue importante tener en
una varilla de vidrio en etanol, dejándola cuenta los aspectos que influyen en la
escurrir y pasándola por la flama del contaminación por microorganismos a los
mechero. Se dejó enfriar la varilla de vidrio medios de cultivo y que pudieran dar como
en un extremo de la superficie de la caja con resultados fuentes de error, es decir, se hizo
Agar y con ella se extendió la alícuota por uso de guantes, se esterilizó la zona con
toda la superficie, por último etiquetar la alcohol antiséptico y se tuvo especial cuidado
caja con fecha, técnica, grupo y dilución. con el lavado de los recipientes.
Repetir el mismo procedimiento con las
demás diluciones. Después de una semana se analizó el cultivo
de lixiviados por estría 10-6, que evidencia un
Técnica de vaciado en placa crecimiento de microorganismos que se
Con una pipeta estéril se tomó 1 ml de la muestran como pequeños puntos negros.
dilución 10 -6 de la muestra y se colocó en el Según la literatura podría ser la bacteria
centro de una caja Petri vacía estéril, en Escherichia coli ya que se observan cómo
condiciones asépticas, adicionando de 15-20 puntos negros azulados y presentan un
ml de agar Plate Count el cual debe estar a crecimiento satisfactorio en Agar EMB.
una temperatura de 45ºC. Por último se
mezcló la caja petri aplicando la técnica de Cultivo de agua residual por estría 10-5
vaciado en placa.

5. RESULTADOS Y ANÁLISIS

Cultivo de lixiviados por estría 10-6

Se observan microorganismos muy similares a

los observados en el cultivo de lixiviados, se
podría ver similar ya que ambas muestras son
extraídas de fuentes contaminadas, dónde de
igual manera se ve como la bacteria
Escherichia coli.
3
Cultivo de lixiviado por diluciones decimales. En la placa se evidencia una colonia
Técnica de vaciado en placa 10-6. bacteriana grande de forma irregular con
bordes ondulados, muestra una coloración
beige. Además de esta colonia se han contado
un total de 19 colonias en tamaños medianos
y pequeños, con coloraciones beige y naranjas
con bordes circulares algunas y otras con
bordes y formas irregulares.

Cultivo de agua contaminada por diluciones

decimales. Técnica de extensión con varilla
de vidrio 10-7.

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En la placa se logran observar 25 colonias 7. CONCLUSIÓN
grandes de coloración beige-naranja, algunas
Al momento de preparar un medio de cultivo
circulares y otras con bordes irregulares.
lo más importante es el correcto método de
Adicional se observa una cantidad
esterilización y cuidado con la manipulación
considerable de colonias pequeñas con forma
de instrumentos, cabe resaltar que es
circular.
importante mantener las temperaturas
6. DISCUSIONES adecuadas a la hora de preparar el caldo
nutritivo, evitando así cualquier alteración o
Al momento de preparar los medios de
complicación en la obtención del medio de
cultivos hubo interferencia únicamente en la
cultivo.
preparación del Agar Plate Count, el cuál se
demoró bastante en hervir, la solución que se Los microorganismos aislados y cultivados por
busco fue cambiar de estufa de calentamiento la técnica de estría no sé encontraron en
y aumentar la temperatura. condiciones de caracterizar, identificar o
obtener un cultivo axénico o puro ya que no
En los cultivos realizados por el método de crecieron de la manera esperada, pudo
estría se cultivaron aguas contaminadas y haberse presentado algún error humano al
lixiviados, se pudieron observar pequeños momento de realizar la siembra o quizás en la
puntos, que según la literatura podría ser la preparación del Agar EMB. Sin embargo en los
bacteria Escherichia coli, sin embargo en este cultivos realizados por técnica de aislamiento
tipo de muestras también puede crecer por diluciones decimales tuvo como resultado
satisfactoriamente en Agar EMB, la bacteria un conteo de bacterias considerable el cuál si
Salmonella typhimurium la cual se encuentra se podría caracterizar o tener en cuenta.
en aguas y alimentos contaminados, esta
8. BIBLIOGRAFÍA
bacteria crece incolora en el Agar EMB, es
decir, para corroborar que se encuentra en el Elena García-Valdés (2010) “PRÁCTICAS DE
cultivo es necesario realizar estudios MICROBIOLOGÍA”
microscopios. https://www.uib.cat/depart/dba/microbiolo
gia/micro2/practicas.pdf
Es importante resaltar la función que tiene el
medio de cultivo en el aislamiento de un PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
microorganismo pues le brinda los nutrientes https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20c
necesarios para que se puedan multiplicar, ultivo.pdf
también influyen los factores de temperatura
EVANGELINA OLIVAS; LUIS ROBERTO
y tiempo de incubación. En los cultivos
ALARCÓN (2017) “ ACADEMIA DE
realizados por dilución se evidenció un gran
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA DPTO.
número de colonias que representa un
CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS ICB, UACJ. “
resultado significativo

5
https://bivir.uacj.mx/Reserva/Documentos/r es rigurosamente constante. Esto puede
va2011297.pdf tener ciertos inconvenientes en condiciones
experimentales, donde la reproducibilidad
Agar (con Eosina y Azul de Metileno)
no podrá ser exacta.
https://www.britanialab.com/back/public/u
pload/productos/upl_6054e713a290e.pdf e) Medios selectivos: Son los medios que
tienen como objetivo o finalidad favorecer el
Técnicas y tipos de sembrado en placa y tubo
crecimiento de cierta población microbiana
https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scienti
específica. En ocasiones es posible añadir
st-site/t-cnicas-y-tipos-de-sembrado
suplementos artificiales a los medios para
producir un enriquecimiento del mismo.
Microbiologia para humanos
https://microbiologiaparahumanos.wordpress f) Medios diferenciales: se utilizan para
.com/medios-de-cultivo/ poner en evidencia características
bioquímicas que ayudan a diferenciar
géneros o especies. La adición de un azúcar
ANEXOS
fermentable o sustrato metabolizable se
1.Características de los medios de cultivo. utilizan para este fin.

a) Medios naturales: Su preparación surge a g) Medios de enriquecimiento: Son aquellos

partir de sustancias naturales de origen que, además de las sustancias nutritivas
animal o vegetal como lo pueden ser normales, incorporan o contienen una serie
extractos de tejidos o infusiones, cuya de factores indispensables para el
composición química es conocida. crecimiento de microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace por adición de
b) Medios sintéticos: Estos medios sangre u otros productos biológicos (sangre,
contienen una composición química definida suero, leche, huevo, etc.)
cualitativa y cuantitativamente. Son usados
principalmente para obtener resultados 2.¿Qué tipos de técnicas de siembra
reproducibles. existen?.

c) Medios definidos: En su composición Siembra en superficie: se vierte sobre una

tienen sustancias químicas conocidas y placa de Petri el medio de cultivo fundido, se
disueltas en agua destilada en proporciones deja solidificar y se coloca sobre la superficie
determinadas, resultando un medio de el inóculo. Con ayuda de una espátula de
composición perfectamente definido. Drigalsky se extiende el inóculo hasta su
absorción total por el medio de cultivo. Este
d) Medios complejos: En la práctica son los tipo de siembra es recomendada para
más utilizados y que mejores resultados microorganismos aerobios estrictos.
proporciona. Su composición no es
exactamente definida, y por consiguiente no
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Siembra volumétrica: Este método de siembra
consiste en sembrar una muestra líquida cuyo
volumen no puede ser predeterminado, en
medio de cultivos sólidos o líquidos.

Siembra masiva: Cuando se desea realizar una

siembra masiva se puede utilizar la espátula
de Drigalski. En este caso la gota de muestra
líquida se esparce con la espátula por toda la
superficie del medio de cultivo sólido
imprimiendo un movimiento en espiral.