Fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa ocurre en la

mitocondria y es la culminación del metabolismo
productor de energía en organismo aeróbicos.

La membrana externa de la mitocondria es

permeable a moléculas pequeñas (PM < 5000
g/mol).

La membrana interna es impermeable a la

mayoría de las moléculas pequeñas e iones y
contiene los complejos de la cadenas
transportadora de electrones y la ATP sintetasa.

La matriz mitocondrial posee el complejo

piruvato deshidrogenasa y las enzimas del ciclo
del ácido cítrico.
 2e-
FADH2

FAD

En la mitocondria se acoplan las reacciones de descarboxilación

del piruvato y Ciclo del Acido Cítrico con la Fosforilación
Oxidativa, lo cual permite la generación de ATP en la célula.
Cadena transportadora de electrones (CTE)

Complejo I → NADH deshidrogenasa

Complejo II → Succinato deshidrogenasa
Complejo III → Citocromo c reductasa
Complejo IV → Citocromo c oxidasa
 CTE

a) Los electrones son transportados a lo largo de la membrana, de un

complejo de proteínas transportador ("carrier") a otro. El oxígeno es el
aceptor terminal de electrones para dar finalmente agua

b) Los protones son translocados a través de la membrana, estos significa que

son pasados desde el interior o matriz hacia el espacio intermembranoso.
Esto implica un gradiente de protones.
Al romper la mitocondria y separar su membrana interna es
posible determinar los complejos proteicos que están
involucrados en el transporte de electrones y la fosforilación
oxidativa.

Estos complejos transportadores de electrones son:

• Complejo NADH deshidrogenasa ( Complejo I).
• Succinato Dehidrogenasa ( Complejo II)
• Ubiquinona/citocromo C reductasa ( complejo III)
• Citocromo C Oxidasa

Transportadores NO complejos:
• Ubiquinona
• Citocromo C

Complejo sintetizador de ATP

• ATP Sintasa
 Proteínas Hierro-Azufre

El hierro está presente en asociación con átomos de azufre inorgánico, con

los átomos de azufre de cisteínas o ambos.

Cada átomo de hierro puede recibir un electrón y el potencial de reducción

que tienen depende del tipo de centro hierro-azufre y de su interacción con
el resto de la proteína.
 Citocromos

Son proteínas conjugadas con grupos hemo y

existen 3 tipos en mitocondrias, a, b y c. Los
cofactores hemo a y b están estrecha, pero no
covalentemente unidos, mientras que el c está
covalentemente unido mediante un residuo de
cisteina.
 La función de los grupos prostéticos es fundamental,
ya que estas moléculas son las que facilitan el paso de
los electrones a través de la cadena trasportadora de
electrones.

• tipo UBIQUINONA, la cual posee un grupo

benzoquinona que le permite reducirse y luego
reoxidarse. (Ubiquinol/Ubiquinona)

• tipo CITOCROMO, las cuales son proteínas que

poseen un grupo Hemo , cuyo catión hierro sufre
oxidación y reducción, lo que permite el transporte
de los electrones.

• proteínas con DOMINIOS HIERRO-AZUFRE, en

donde cisteínas coordinan átomos de hierro, lo que
permite el paso de electrones dentro de las
proteínas.

• proteínas que contienen dominios con COBRE

https://www.youtube.com/watch?v=VALSIDZN-pY

https://www.youtube.com/watch?v=kXpzp4RDGJI
 Complejo I: NADH deshidrogenasa
Enzima de gran tamaño, en forma de L,
compuesta de 42 subunidades, entre las
que se encuentran flavoproteínas FMN y al
menos 6 centros Fe-S.

Cataliza 2 reacciones simultáneas.

1) La transferencia exergónica de un ión
hidruro desde el NADH hacia la
ubiquinona y un protón desde la
matriz.

2) La transferencia endergónica de 4
protones desde la matriz al espacio
intermembrana.

Reacción vectorial, catalizan la reacción desde un espacio específico (N) hacia otro (P).
Este complejo posee una
serie de dominios Fe-S,
que le permiten movilizar
los electrones dentro de
la proteína como un
túnel, hacia la
ubiquinona, la cual se
reduce y sale del
complejo, movilizándose
por el interior de la
membrana mitocondrial.
Complejo II: succinato deshidrogenasa

La succinato deshidrogenasa es la única enzima del

ciclo del ácido cítrico unida a membrana. Contiene
5 grupos prostéticos de 2 tipos distintos y 4
subunidades diferentes.

La transferencia de electrones va desde el sitio de

unión al sustrato, hacia el FAD, para luego pasar
por varios centros Fe-S hasta llegar a la ubiquinona.

La función del grupo heme, parece ser la de evitar

la pérdida de electrones que podrían generar
especies reactivas de oxígeno (ROS).
Complejo I: NADH a Ubiquinona

Complejo II: Succinato a Ubiquinona No trasfiere protones al espacio

intermembrana, pero en su reacción de
deshidrogenacion, transfiere los
electrones directamente a la
ubiquinona de la membrana.
Coenzima Q
Ubiquinona o coenzima Q

Es una bezoquinona liposoluble que contiene

una larga cadena isoprenoide.

Puede aceptar un electrón para adoptar su

forma de radical semiquinona (QH) o dos
electrones para formar semiquinol (QH2).

Debido a su hidrofobicidad y pequeño

tamaño, puede fluir libremente dentro de la
bicapa lipídica de la membrana mitocondrial
interna
 Complejo III: Ubiquinona citocromo c óxido-reductasa
Citrocromo c reductasa

Este complejo lleva los electrones desde

el ubiquinol (QH2) hasta el citocromo c,
junto con el transporte vectorial de
electrones, desde la matriz mitocondrial
hacia el espacio intermembrana.

El citocromo c, es una proteína soluble del espacio intermembrana. Después de que su

único grupo hemo acepta un electrón desde el complejo III, se mueve hacia el complejo IV,
para donar el electrón.
.

El proceso de trasferencia de electrones ocurre en dos fases, las cuales transfieren dos
protones cada una para formar la gradiente electroquimica
Complejo IV: citocromo c oxidasa

Este complejo enzimático posee

2 grupos Cu unidos a cys, CuA y
CuB. Además, contiene 2 grupos
heme, a y a3.

El flujo de electrones va desde el

citocromo c hacia el centro CuA,
de ahí al heme a, luego al heme
a3-CuB y de ahí al O2.
Sumario del flujo de electrones y protones
en la cadena transportadora
 Flujo de electrones

En las reacciones catalizadas en las mitocondrias, los electrones se mueven desde el NADH,
succinato u otro donor primario de electrones, hacia flavoproteínas, ubiquinona, proteínas
hierro-azufre, citocromos y, finalmente, al O2.

Una forma de deducir el flujo de electrones es mirar los potenciales de reducción estándar,
en donde los electrones deberían fluir desde transportadores con menor potencial de
reducción hacia aquellos con mayor E’°.
Como la membrana interna mitocondrial es
impermeable al NADH, el transporte de los electrones
del NADH producido en el citosol, se efectúa a través
de sistemas de “ LANZADERAS”.
Lanzadera malato-aspartato (
hígado, riñon y corazón )

Resultado
 Lanzadera glicerol 3-Fosfato
( músculo esquelético y cerebro )

En la oxidación de ácidos grasos ( matriz mitocondrial) también se transfieren

electrones a la ubiquinona directamente mediante FADH2.
 Fosforilación Oxidativa

Es la síntesis de ATP acoplada al transporte

electrónico mitocondrial.

La síntesis de ATP es catalizada por el complejo

enzimatico ATP sintasa, ubicada en la membrana
mitocondrial interna.
 Fuerza protón motriz
Gradiente electroquimico

La fuerza protón motriz generada en la cadena respiratoria tiene 2 componentes:

1) La energía potencial química debido a la diferencia en la concentración de H+
2) La energía potencial eléctrica que resulta de la separación de carga
Al pasar los electrones a través de la CTE , se transportan protones desde la
matriz y se liberan en el espacio intermembrana, con ello se crea un D
potencial eléctrico y un D pH a través de la membrana interna ( gradiente
electroquímico).El gradiente electroquímico de protones se llama fuerza
protomotriz.

Los protones del espacio intermembrana pasan a través de la membrana

interna y vuelven a la matriz a favor del gradiente de concentración
únicamente a través de canales especiales ( unidad Fo de la ATP sintasa ).

Al producirse este flujo termodinámicamente favorable se produce la

síntesis de ATP ( catálisis rotatoria ). Mecanismo de cambio de unión.
 Modelo Quimiosmótico

La energía electroquímica inherente a la diferencia en la concentración de H+ y en la

separación de cargas a través de la membrana mitocondrial interna (la fuerza protón
motriz) dirige la síntesis de ATP mientras los protones fluyen hacia la matriz a través de
un poro asociado a la ATP sintetasa.
 ATP sintasa
Esta enzima cataliza la reacción de formación de ATP a partir de ADP y Pi acompañada
del flujo de protones desde el lado P hacia el lado N de la membrana mitocondrial
interna.

La ATP sintasa, también llamado complejo V, posee 2 componentes, el F1, un

componente periférico y Fo (o por sensible a oligomicina), que es integral a la
membrana.
El complejo F1 posee 9 subunidades de 5
diferentes tipos, α3β3γδε, y cada una de las 3
subunidades β tiene un sitio catalítico para la
síntesis de ATP.

El complejo Fo conforma el poro por el cual

pasan los protones y está conformado por 3
subunidades en proporción ab2c10-12.
En la membrana mitocondrial hay una serie de trasportadores transmembrana que se
encargan de entregar los sustratos para la síntesis del ATP( ADP y Pi).
Modelo de catálisis rotacional
Este modelo propone que los 3 sitios de
síntesis de ATP se turnan para catalizar al
reacción de síntesis de ATP.

Una unidad β comienza en la

conformación β-ADP, en la cual une ADP y
Pi. Luego cambia de conformación
asumiendo aquella que estabiliza
estrechamente el ATP, β-ATP. Finalmente,
la conformación cambia a una forma vacía,
liberando el ATP recién sintetizado.

Estos cambios conformaciones se realizan

con el pasaje de protones por el poro de la
subunidad Fo, causando la rotación de las
subunidades c y la subunidad γ que está
unida, con la consiguiente rotación de las
subunidades β entre as 3 posibles
conformaciones.
Ciclo tres pasos, cada 3 H un ATP
 Rendimiento:

-Flujo de electrones desde NADH a O2

Proceso exergónico DGº=-52.600 cal.

-Síntesis de ATP
Proceso endergónico DGº=+7.300 cal.
Sumario del flujo de electrones y protones
en la cadena transportadora
¿Cómo se Cte
calcula el Faraday
rendimiento?
DGº = -n F DEº
E libre sist.

Nº Eº aceptor-Eº dador
electrones
Transporte de electrones desde NADH al O2:
DGº= -2 x 23062 x (0.82- (-0.32))=- 52.700
cal/mol
Síntesis ATP : DGº= + 7300 cal/mol
¿Cuál es el rendimiento , entonces?
 Control de la fosforilación oxidativa.

El control de la fosforilación oxidativa permite

producir sólo la cantidad de ATP que se requiere de
inmediato.

En situación normal el transporte electrónico y la

síntesis de ATP están acopladas. Esto depende de
la integridad de la membrana mitocondrial.

Las mitocondrias sólo pueden oxidar el NADH y el

FADH2 cuando hay concentración suficiente de ADP y
Pi.
 Control de la fosforilación oxidativa.

• Control respiratorio : el consumo de oxígeno

aumenta considerablemente si aumenta el ADP.
ATP sintasa se activa cuando concentraciones
ADP y Pi son elevadas.

• Control por carga energética). La Cadena

Respiratoria no transporta electrones a menos que se
sintetice simultáneamente ATP.
 Impedimentos para sintetizar ATP

• Inhibidores de la Cadena Respiratoria.

• Inhibidores de la Fosforilación Oxidativa.

• Desacoplantes de la Fosforilación Oxidativa .

 Inhibidores de la Cadena Respiratoria
Inhiben el transporte de electrones en la cadena de la respiración.
Se clasifican en tres grupos principales según el sitio de la cadena respiratoria
donde actúan:

1) Sobre la NADH-deshidrogenasa, bloqueando la transferencia de electrones

entre la flavina y la ubiquinona. (Inhibidores del sitio I)
a) Barbitúricos, como el amobarbital
b) Rotenona (insecticida)

2) Actúa bloqueando la transferencia de electrones entre el citocromo b y el

citocromo c1. (inhibidores de sitio III)
a) Antimicina

3) Actúan sobre el Hemo a3 de la citocromo-oxidasa impidiendo su

interacción con el oxígeno (inhibidores de sitio IV)
a) Cianuro
b) Monóxido de carbono
c) H2S
 Inhibidores del transporte electrónico

•Inhibidores específicos :Bloquean el transporte de electrones

a lo largo de la cadena respiratoria ( Inhiben el consumo de O2
y secundariamente se inhibe la síntesis de ATP a partir de ADP
+ Pi).

•Cuando está inhibido el transporte de electrones, no hay

consumo de oxígeno

• Los transportadores se acumulan en su forma reducida antes

del lugar de acción del inhibidor y en su forma oxidada hacia el
lado del oxígeno en el lugar de la inhibición.
 Flujo de electrones
Otra forma de verificar el flujo de electrones, es el uso de inhibidores. En la presencia de
un dador de electrones y de O2, cada inhibidor causará un patrón característico de
transportadores reducidos y oxidados. Aquellos anteriores al bloqueo estarán reducidos y
aquellos posteriores al bloqueo permanecerán oxidados.
Inhibidores de la cadena transportadora
electrónico y sitios específicos de acción.

Los transportadores se acumulan en

su forma reducida antes del lugar de
acción del inhibidor y en su forma
oxidada hacia el lado del oxígeno.
 INHIBIDORES

Antimicina A •Cianuro
Rotenona
•CO
Amital
•Azida de
sodio
 Inhibidores de la Fosforilación Oxidativa
• Actúan en el complejo enzimático (ATPasa) que
cataliza la síntesis de ATP.

• Bloquean el paso en el cual el ADP se une al fosfato

impidiendo que la energía del potencial
electroquímico llegue al sistema fosforilante.

Oligomicina ( bloquea Fo)

Atractilósido (inhibe el transportador que
introduce ADP a la mitocondria)
 Desacoplantes de la Fosforilación Oxidativa

• Son ácidos débiles solubles en lípidos.

• Impiden la síntesis de ATP a partir de ADP + Pi pero NO el

transporte de electrones al O2, aumentando el consumo de O2. Ej.
2,4 dinitrofenol, termogeninas y proteínas desacoplantes (UCP)

• Disipan la fuerza protonmotriz en forma de calor.

• Impiden la síntesis de ATP, pero permiten que continúe el transporte

electrónico a lo largo de la cadena respiratoria hasta el O2.
• 2,4-dinitrofenol (DNP)
Desacoplantes químicos de la fosforilación oxidativa

Compuestos como el DNP y el FCCP

pueden atravesar la membrana
liberando protones en la matriz
mitocondrial, eliminando la gradiente
de protones.
Otros desacopladores son:

• Dinitrocresol
• Pentaclorofenol
• CCCP (m-clorocarbonilcianuro fenilhidrazona)
En Bioquímica de Voet y Voet
Termogenina (UCP): Desacoplante
Natural
A medida que el individuo envejece, la cantidad de
grasa parda disminuye
 Cuando el antibiótico valinomicina se añade a mitocondrias activas,
suceden varias cosas: la producción de ATP disminuye, aumenta la tasa
del consumo de O2, se libera calor, y aumenta el gradiente de pH a
través de la membrana mitocondrial interna. Según lo anterior, ¿la
valinomicina actúa como un desacoplador o como un inhibidor de la
fosforilación oxidativa?

La Valinomicina es un ionóforo, deja pasar iones a traves de la membrana. Los

ionóforos desacoplan la transferencia de electrones de la fosforilación oxidativa
disipando la contribución eléctrica a la gradiente electroquímica.