Guía Laboratorio Hemograma Manual 2023-2

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA Y BIOQUIMICA
GUIA LABORATORIO HEMOGRAMA MANUAL
Normas para el ingreso al laboratorio
Leer la guía del laboratorio, siempre habrá quiz antes de empezar. Portar
elementos de protección personal (bata limpia manga larga, guantes). Cabello
recogido tanto para hombres como mujeres, prohibido usar gorra, llevar faldas o
cualquier tipo de ropa corta. No está permito comer, tomar agua ni fumar dentro
del laboratorio. Las maletas deben ubicarse en los casilleros del laboratorio. No
realice procedimientos que no le hayan sido autorizados por el profesor a cargo.
Material contaminado con fluidos corporales al igual que los guantes, deben ser
depositados en la caneca roja. Las agujas, palillos, lancetas y objetos
cortopunzantes deben ser depositados en el guardián.
Velocidad de sedimentación globular VSG o eritrosedimentación ESD
Objetivo: Determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los

glóbulos rojos para formar pilas de monedas. Sirve como complemento diagnóstico
en muchas patologías de tipo inflamatorio.
Fundamento
La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método de

referencia internacional. La sangre anticoagulada con EDTA se coloca en una pipeta
de vidrio vertical y se deja en reposo durante 1 hora. Los eritrocitos tienden caer al
fondo de la columna y las proteínas plasmáticas (fibrinógeno, gammaglobilinas
entre otras) hacen resistencia a la caída. El valor de la VSG corresponde al punto
donde las células se separan del plasma. En los individuos sanos, la VSG ocurre
lentamente y en procesos patológicos ocurre rápidamente. En algunos casos es
proporcional a la gravedad de la enfermedad.
¿Consulte como estará la VSG en un paciente con anemia?

Materiales
• Sangre anticoagulada con EDTA (¿Consulte que es EDTA y cuál es su

mecanismo de acción?
• Pipeta de Westergreen (Tubo recto de 300mm de longitud y 2.5mm de
diámetro, está graduada de 0 mm a 200 m.
• Gradilla para sedimentación
• Reloj o timer
Factores que intervienen en la VSG
En general la sedimentación se ve afectada por las propiedades de los eritrocitos;

tamaño, forma, aglutinación. Propiedades del plasma; cantidad y tipo de proteínas
presentes en el, viscosidad sanguínea. Además, por factores técnicos como calibre
del tubo, temperatura del ambiente y calidad del anticoagulante.
Metodología
• Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo

• Utilizando el pipeteador, aspirar la sangre y llenar la pipeta hasta la marca 0
mm.
• Colocar inmediatamente en la gradilla de sedimentación y fijar la pipeta
evitando que la sangre se derrame.
• Poner a correr el cronómetro y leer pasada 1 hora.
Importancia clínica
La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento de

múltiples enfermedades, es importante en la detección de entidades ocultas,
especialmente de origen neoplásico, en el seguimiento de enfermedades como la
fiebre reumática, tuberculosis e infarto de miocardio. Por corresponder a un
reactante de fase aguda, se convierte en un marcador inespecífico no asociado a
ninguna enfermedad en concreto, se estima que la VSG se eleva en mas de cien
patologías indicando solamente un proceso inflamatorio. Cifras mayores a 100mm/h
se han asociado con enfermedades malignas como Ca colón, linfomas, Ca de mama
entre otros.
Medición del hematocrito
Objetivo
Expresar en porcentaje el número de células rojas empaquetadas en un volumen

de sangre total.
Método
El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en relación

a un volumen total de sangre. Se obtiene por centrifugación (micrométodo o
microhematocrito) o por métodos electrónicos. En el micrométodo, se usa la fuerza
de una centrífuga para empaquetar los glóbulos rojo y, separarlos del plasma y
luego medir el volumen que ocupan.
Materiales
Sangre anticoagulada con EDTA

Capilares
Plastilina
Centrifuga
Tabla de lectura de microhematocritos
Metodología
• Mezclar cuidadosamente la sangre anticoagulada por 30 segundos para

obtener una buena homogenización.
• Llene el capilar con sangre, aproximadamente ¾ partes y limpie la parte
externa con un algodón.
• Selle la parte inferior del capilar con plastilina
• Lleve a centrifugación durante 3 minutos a 3.000 rpm
• Después de centrifugar, retire el capilar y proceda a la lectura en la tabla
correspondiente.
•
En el capilar observará las células rojas empaquetadas, seguida de una capa o línea
blanca que corresponde a glóbulos blancos y plaquetas (alcanza una línea de 1 mm
aproximadamente en condiciones normales) y el sobrenadante color amarillo claro
que corresponde al plasma.
El volumen de glóbulos rojos, correspondiente al hematocrito, se lee desde cero,

parte inferior donde comienza la línea roja (justo encima de la plastilina) hasta donde
termina, justo donde comienza la línea de blancos. Ni la línea de blancos ni tampoco
la plastilina deben ser incluidas en la lectura.
Medición de la hemoglobina
Objetivo
Cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.
Metodología
Método cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina la suma de

todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito (oxihemoglobina,
carboxihemoglobina, metahemoglobina entre otras) lisando los glóbulos rojos para
obtener un compuesto estable conocido como cianometahemoglobina, al cual,
podemos medirle la absorbancia mediante un espectrofotómetro.
Fundamento
La mezcla de reactivo de Drabkin con la sangre, transforma la hemoglobina en

cianometahemoglobina, la intensidad del color de esta reacción se mide en un
espectrofotómetro a 550 nm.
Pasos de la reacción
Hemoglobina + ferrocianuro potásico = metahemoglobina
Metahemoglobina + cianuro potásico = cianometahemoglobina
Materiales
Sangre anticoagulada con EDTA

5 ml reactivo de Drabkin
Micropipetas y puntas
Espectrofotómetro
Cubetas para espectrofotómetro
El reactivo de Drabkin es tóxico, contiene cianuro. Evite el contacto con ojos,

piel y mucosas.
Instrucciones del procedimiento
• Con la ayuda de la micropipeta, tome exactamente 20 ul de sangre

anticoagulada.
• Retire el exceso de sangre de la parte externa de la punta de la pipeta con
un algodón
• Deposite la muestra en el reactivo de Drabkin, pipetee varias veces a fin de
lavar la punta de la pipeta por dentro y depositar todo el volumen completo.
• Tape el tubo y mezcle. Deje reaccionar la muestra al menos 5 minutos
máximo 1 hora.
• Deposite la muestra en la cubeta y lea la absorbancia.
La concentración de hemoglobina en g/dL se calcula con la ayuda de un estándar

de hemoglobina, el cual será hallado con la ayuda del docente.
Constantes corpusculares o índices de Wintrobe
Son el resultado matemático de la relación entre la hemoglobina, hematocrito y el

recuento de glóbulos rojos por mm3. El volumen corpuscular medio (VCM), la
hemoglobina corpuscular media (HCM) y la concentración de hemoglobina
corpuscular media (CHCM) constituyen los pilares fundamentales para la
clasificación morfológica de las anemias.
Volumen corpuscular medio (VCM)
Se refiera al tamaño de los eritrocitos, se expresa en femtolitros (fL) y se obtiene al

relacionar el volumen de las células rojas empaquetadas (HTO) y el recuento de
glóbulos rojos:
𝐻𝑇𝑂 (%)
𝑉𝐶𝑀 = 𝑥 10
𝑅𝑡𝑜 𝐺𝑅 /𝑚𝑖𝑙𝑙ó𝑛
Valor de referencia: 80-100fL
Hemoglobina corpuscular media (HCM)
Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito, expresada en

pg como unidad de peso. Relaciona la concentración de hemoglobina y el recuento
eritrocitario por mm3 a través de la siguiente formula
𝐻𝑒𝑚𝑜𝑔𝑙𝑜𝑏𝑖𝑛𝑎
𝐻𝐶𝑀 = 𝑥 10
𝑅𝑡𝑜 𝐺𝑅 /𝑚𝑖𝑙𝑙ó𝑛
Valor de referencia: 28-32pg
Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM)

Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos (HTO). Nos
da una visión global de los niveles de hemoglobina y se expresa en porcentaje (%).
Se obtiene de la siguiente formula:
𝐻𝑒𝑚𝑜𝑔𝑙𝑜𝑏𝑖𝑛𝑎
𝐶𝐻𝐶𝑀 = 𝑥 100
𝐻𝑒𝑚𝑎𝑡𝑜𝑐𝑟𝑖𝑡𝑜
Valor de referencia: 32-36%
Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfologico de las

anemias, de acuerdo al diámetro de los globulos rojos y su contenido de
hemoglobina. Es importante interpretar estos promedios de acuerdo a la evaluación
morfológica de los globulos rojos, la cual se realiza por microscopia en el extendido
de sangre periférica.
Clasificación de la anemia
VCM HCM CHCM
Normocítica normocrómica 80-100 fL 28-32pg 32-36%

Macrocítica normocrómica >105 fL 32pg 32-36%
Microcítica hipocrómica <75fL <27pg < 32%

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Velocidad de sedimentación globular VSG o eritrosedimentación ESD

Objetivo: Determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los

La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método de

¿Consulte como estará la VSG en un paciente con anemia?

• Sangre anticoagulada con EDTA (¿Consulte que es EDTA y cuál es su

Factores que intervienen en la VSG

En general la sedimentación se ve afectada por las propiedades de los eritrocitos;

• Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo

La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento de

Expresar en porcentaje el número de células rojas empaquetadas en un volumen

El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en relación

Sangre anticoagulada con EDTA

• Mezclar cuidadosamente la sangre anticoagulada por 30 segundos para

El volumen de glóbulos rojos, correspondiente al hematocrito, se lee desde cero,

Cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.

Método cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina la suma de

La mezcla de reactivo de Drabkin con la sangre, transforma la hemoglobina en

Sangre anticoagulada con EDTA

El reactivo de Drabkin es tóxico, contiene cianuro. Evite el contacto con ojos,

Instrucciones del procedimiento

• Con la ayuda de la micropipeta, tome exactamente 20 ul de sangre

La concentración de hemoglobina en g/dL se calcula con la ayuda de un estándar

Constantes corpusculares o índices de Wintrobe

Son el resultado matemático de la relación entre la hemoglobina, hematocrito y el

Volumen corpuscular medio (VCM)

Se refiera al tamaño de los eritrocitos, se expresa en femtolitros (fL) y se obtiene al

Valor de referencia: 80-100fL

Hemoglobina corpuscular media (HCM)

Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito, expresada en

Valor de referencia: 28-32pg

Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM)

Valor de referencia: 32-36%

Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfologico de las

VCM HCM CHCM

Normocítica normocrómica 80-100 fL 28-32pg 32-36%

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