LABORATORIO

PROCEDIMIENTO

PAGINAS DEL 001 AL

CLNICO

OPERATIVO

002

MICRODIAGNOSTIC 2

ESTANDAR,
EXTRACCION

PARA
DE

MUESTRAS
SANGUINEAS
Materiales: Barrera primaria de bioseguridad, gradilla, liga, jeringa, alcohol,
torundas de algodn, venditas, tubos de ensayo con o sin anticoagulante segn
sea el caso.
A) PUNCION VENOSA EN ADULTOS
a) Durante la toma de muestra deben guardarse las ms estrictas normas de
higiene.
b) El material descartable se abre en el momento de utilizarlos, una vez
abiertos y manipulados no podr guardarse aun cuando se lo considere
nuevo.
c) Una vez realizada la toma de muestra, descartar inmediatamente los
materiales usados en recipientes para ese fin.
d) Los recipientes que contienen algodn y los de desecho deben estar
perfectamente cerrados todo el tiempo y se abrirn solamente al momento
de usar.
e) Al momento de hacer la extraccin colocarse los guantes desechables para
todo el procedimiento.
f) Antes de iniciar la toma de muestra, tener todo el material preparado pero
sin abrirlos, y los tubos debidamente identificados.
g) Localizar, elegir, visualizar y palpar la vena. Colocar liga para comprimir el
musculo y resaltar la vena, palpar de nuevo la vena, pedir al paciente que
abra y cierre el puo para facilitar la extraccin.
h) limpiar el rea circundante con algodn empapado en alcohol. Dejar secar
perfectamente.

i) Romper el sello de garanta de la jeringa, verificar el buen funcionamiento

del embolo y aguja,
j) Realizar la venopuncion con el bisel hacia arriba, dejando fluir la sangre en
la jeringa, aspirando suavemente con el mbolo. La escala de la jeringa
debe estar visible (hacia arriba).
k) Indicar al paciente abrir la mano, retirar el torniquete y luego la aguja,
presionando el lugar de la puncin con un trozo de algodn seco.
LA AGUJA SE DESCARTAR EN EL CONTENEDOR
l) Inmediatamente se descargar la muestra en los tubos o frascos
identificados, que contienen los anticoagulantes correspondientes, para
hematologa o para tiempos de coagulacin; resbalado por las paredes
evitando hemolisis y espumas en la muestra; tapar el tubo y mezclar
suavemente para homogenizar la mezcla.
m) En los tubos para qumica, que no contienen anticoagulantes sino un gel
separador, no se deben agitar las muestras.
n) En el sitio de la puncin se coloca una venda, despus de controlar que no
haya ms sangrado.
o) La persona que hace la extraccin deber quitarse los guantes al finalizar la
toma de muestra y desecharlos inmediatamente. NO REUTILIZARLOS.
p) Si hay algn dato que haya interferido con el procedimiento, aclararlo en el
registro de muestras.

B) PUNCION VENOSA EN NIOS

a) En nios mayores de 6 meses, se recomienda hacer la extraccin del
brazo como en adultos, pedir la ayuda de un adulto para sujetar al
paciente
b) En el caso de nios menores de 6 meses, extraer la muestra del taln
con una lanceta descartable. Antes de la extraccin conviene calentar el
taln frotndolo entre las manos para favorecer la irrigacin de la zona.
c) Tambin se puede extraer de la vena de la mano, utilizando la liga para
resaltar la vena, al tener ya la vena lista se punza con la aguja sin la
jeringa , presionando unas veces si es necesario para que fluya la sangre
en el tubo.
d) Desinfectar con un trozo de algodn embebido en alcohol, dejar evaporar
y punzar con la lanceta, en la zona del taln indicada en el dibujo adjunto.
e) Limpiar la primera gota y dejar gotear la sangre en el tubo con
anticoagulante.
f) Secar la zona con un trozo de algodn seco y una vez que no haya
sangrado, colocar una vendita.

LABORATORIO

PROCEDIMIENTOS ESTANDAR PAGINAS

CLNICO

PARA

MICRODIAGNOSTIC

COMPLETA

AUTOMATIZADO

DEL

HEMATOLOGIA AL
CON

EQUIPO

METODOLOGIA: Mtodo cuantitativo, automatizado para la determinacin

de los componentes de la sangre.
PRINCIPIO:
Estudiar y determinar la cantidad de los elementos formes de la sangre,
presentes en la muestra del paciente observando

la forma y las

caractersticas de cada uno de ellos.

MATERIALES
Equipo automatizado para hematologa, barrera primaria de bioseguridad,
jeringas, tubos con anticoagulante EDTA, liga, alcohol, torundas de algodn,
venditas, cubetitas de plstico y papel, absorbente y gradilla
REACTIVOS PARA EL APARATO:
HC- LYSE CF, HC DILUYENT, para el recuento automtico.
HC CLEANER, para la limpieza de los conductos del aparato
Encender el aparato previo a la obtencin de la muestra, para que alcance la
temperatura optima, preparar al paciente, rotular tubos y realizar la
extraccin (ver POE para la extraccin), depositar la muestra en el tubo,
hasta la marca indicada, resbalado por las paredes y mezclar en forma de 8
(16-18veces).
Preparar el aparato, ingresar los datos, verificar los datos y presionar la
tecla (ENTER) para el
PROCEDIMIENTO
Mezclar la muestra del tubo, colocarlo en el aspirador y presionar tecla
(DILUYENT); mientras el equipo prepara la dilucin, limpiar con papel
absorbente el aspirador de arriba hacia abajo y colocar la cubeta para recibir
de regreso, la muestra ya diluida, en el mismo aspirador.
Mezclar la dilucin, colocarla en el aspirador de la tecla (SAMPLE) y
presionar para aspirar la mezcla. Esperar que el aparato realice el recuento y
presionar tecla para la impresin de los resultados;

Con la cubeta que

contiene solucin CLEAR, lavar el aspirador (diluyent), secar con papel

absorbente y colocar la misma cubeta en el aspirador (sample).
Anotar y reportar los resultados en el cuaderno de reportes.

Entregar resultados al paciente firmados y sellados.

VALORES DE REFERENCIA DE HEMATOLOGA
WBC

----------- 5.00-10.0 mil/mm

LYMPH ----------- 25.0-5.50 %

MID

------------0.1-6.0 %

GRAN ---------- -50.0-70.0%

HGB

-----------12.0-16.0 mg/dl

RBC

------------ 3.5-5.5 millones/mm

HCT

-----------37.0-50.0 %

MCV

-----------82.0-95.0 fl

MCH

-----------27.0-32.0 pg

MCHC -----------32.0-36.0 mg/dl

PLT
V/S

----------150.0-450.0
---------- H= 3-5 y M= 4-7mm/1hora

LABORATORIO CLNICO POE PARA HEMATOLOGIA

MICRODIAGNOSTIC 2

COMPLETA (MANUAL)

METODOLOGIA: Determinar la cantidad, la forma y las caractersticas de

los componentes sanguneos.
PRUEBAS QUE SE REALIZAN: En su orden: Hematocrito, Hemoglobina,
Formula diferencial (tincin de Wright), Recuento de glbulos blancos, de
Glbulos rojos, de Eosinofilos, de Plaquetas y de Reticulositos. Y velocidad
de sedimentacin.
-Material y Equipo
Barrera primaria de bioseguridad, Microcentrifuga, Microscopio, Camara de
Neubauer, Laminas porta objetos, capilares Tabla de plastilina, Tabla para
medicin del hematocrito, Reactivos y soluciones correspondientes para
cada prueba, calculadora, cronometro, Pipetas de Thoma para glbulos
blancos y para glbulos rojos, Pipetas automticas, Pipetas pasteur, Tubos
de ensayo, Gradilla y tubos de Westergreen y papel absorbente.
HEMATOCRITO
GENERALIDADES
Es el porcentaje del volumen total sanguneo ocupado por glbulos rojos y la
porcin de los elementos formes de la sangre y el plasma,
PRINCIPIO
Un volumen conocido de sangre completa se centrifuga a una velocidad
constante durante un periodo determinado de tiempo, los glbulos rojos as
sedimentados ocupan una parte del volumen total. Mide la fraccin que
comprende a los glbulos rojos masa respecto al volumen total de la
muestra de sangre
MATERIALES Y REACTIVO
Micro centrifuga

Tubos capilares con anticoagulante o sin anticoagulante

Plastilina, Regla milimetrada
Dispositivos para lectura del micro hematocrito.
Sangre completa heparinizada o por puncin capilar
INTERFERENTES
Homogeneizacin de la muestra, Centrifugacin incorrecta Y Sellado
inadecuado del capilar.
PROCEDIMIENTO
Obtener sangre por puncin venosa. (Ver POES de extraccin sangunea.)
Mezclar la sangre obtenida por puncin venosa.
Introducir un extremo del capilar en la sangre y dejar que se llene hasta 1 cm
del extremo superior.
Retirar el capilar lleno, limpiar el exterior y sellar el otro extremo usando
plastilina.
Colocar los capilares en las ranuras radiales de la micro centrfuga con el
extremo sellado hacia afuera. Colocar la tapa de seguridad de la micro
centrifuga.
Centrifugar durante 5 minutos a 10,000 rpm o 10 minutos a 5,000 rpm.
Realizar lectura en la tabla, anotar y reportar resultado en el cuaderno de
reporte.
CALCULOS
Existen aparatos que dan resultado final en %.
Cuando se carece de este, la lectura se puede realizar usando una regla
milimetrada, haciendo el clculo siguiente.
Largo celulas empacadas
X 100=
Columnatotal
Valores Normales:
Hombres: 42 50 %
Mujeres: 40 48 %
CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA

Con el porcentaje del Hematocrito obtenido, dividido dentro de 3, se determina la

concentracin de hemoglobina.
El resultado en mg/dl, se anota donde corresponde.
FORMULA DIFERENCIAL
GENERALIDADES
Es la extensin de sangre realizada sobre un portaobjetos y a partir de la cual se
observaran al microscopio, las caractersticas de las clulas sanguneas. Aporta
informacin valiosa sobre leucemias, deficiencias de hierro, etc.
PRINCIPIO
Un frotis de sangre preparado de forma adecuada es esencial para asegurar la
evaluacin correcta de la morfologa celular. Tambin es usado para dar
informacin valiosa acerca de una leucemia.
MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa, Colorante de Wright, Aceite de inmersin y Portaobjetos
Microscopio
Capilares.
INTERFERENTES
Frotis excesivamente gruesos
Tiempo prolongado, dando lugar a sobre tincin
Lavado insuficiente
Empleo de solucin diluyente o el colorante demasiado alcalino.
PROCEDIMIENTO
Realizar un buen extendido de sangre.
Colocar una gota de sangre, en el cubreobjetos.
Colocar un segundo portaobjetos delante de la gota de sangre, formando un ngulo
de 45, desplazarlo suavemente, hacia atrs hasta que alcance la gota de sangre,
presionar ligeramente y jalar hacia la derecha, de manera que fluya la sangre a lo
largo del borde
Extienda ahora hacia la izquierda rpidamente, sin detenerse, ni despegarlo, sin
presionarlo, conservando el ngulo, de manera que la gota de sangre quede como
una capa fina sobre el primer portaobjetos.
Dejar secar.

COLORANTE WRIGHT
Cubrir el frote con colorante Wright durante 1 minuto.
Agregar buffer de fosfatos pH 6.8 o agua destilada hasta que aparezca una
escarcha metlica.
Dejar 2 a 4 minutos.
Lavar con agua, dejar secar.
Colocar una gota de aceite de inmersin al frote.
Observar en el microscopio con objetivo 100X.
Anotas resultados.
CALCULOS
Recorrer el frote en cualquiera de las formas siguiente.
Recorrer los frotes en forma horizontal.
Recuento en colmena: se empieza en un borde a contar las clulas hasta 1/3 del
ancho del frote, luego regresar sobre una lnea paralela.
Valores Normales.
Polimorfonucleares neutrfilos

40 60 %

Neutrfilos en cayado

13%

Eosinofilos

01%

Linfocitos

20 45 %

Monocitos

38%

Es importante observar si son clulas maduras o no, si existe granulacin toxica o

cualquier desviacin.
RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS
GENERALIDADES
Los recuentos leucocitarios determinan la concentracin de leucocitos en la sangre.
Un recuento elevado de leucocitos

produce en infeccin, alergia, enfermedad

sistmica, inflamacin, dao tisular, y la leucemia. Un bajo conteo de leucocitos

puede ocurrir en algunas infecciones virales, inmunodeficiencia y fallo de mdula
sea.
PRINCIPIO

El recuento de leucocitos es uno de los procedimientos importantes. La condicin

previa de todos los mtodos de recuento es la dilucin y preparacin de la muestra
de sangre. El acido actico al 10% hemoliza los eritrocitos, se recuenta el tipo de
clula deseado en un volumen definido y se calcula el nmero de clulas en un
micro litro de sangre.

MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa, Diluyente de glbulos blancos, Pipetas de Thoma para glbulos
blancos, Cmara de Neubauer, Cubreobjetos y Microscopio.
INTERFERENCIAS
Formacin de burbujas en la pipeta.
Mezcla inadecuada.
PROCEDIMIENTO
Colocar la muestra en el agitador o mezclarla con movimientos en forma de 8.
Con la pipeta de Thoma para glbulos blancos, limpia y seca, aspirar sangre hasta
la marca de 0.5, limpiar la punta de la pipeta con una torunda seca.
Introducir la pipeta en una alcuota del diluyente; aspirar diluyendo exactamente y
sin que se formen burbujas hasta la marca 11.
Con los dedos tapar los extremos de la pipeta y agitarla manualmente por 2
minutos.
Tomar la cmara de neubauer y colocarle el cubreobjetos.
Tomar la pipeta y descartar las primeras tres gotas, la cuarta gota colocarla
directamente en la cmara de nuebauer, dejar que por capilaridad corra la gota de
muestra.
Dejar en reposo la cmara de neubauer por 3 minutos.
Colocar la cmara en el microscopio y con objetivo 10X enfocar la cmara.
Contar los leucocitos en los 16 cuadros de cada extremo (4 cuadros grandes).
Clculos:

Leucocitos contados X 20 X 10
=
4
Leucocitos contados X 50=

leucocitos
sangre
mm 3 de

Valores normales:
Hombres: 5000 10000 X mm
Mujeres : 5000 10000 X mm
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS
GENERALIDADES
El recuento de glbulos rojos es el nmero total de glbulos rojos que hay por
milmetro cbico de sangre. Los glbulos rojos son las clulas sanguneas que
contienen en su interior la hemoglobina. Son los principales portadores de oxgeno
a las clulas y tejidos del cuerpo. Tienen una forma bicncava para adaptarse a
una mayor superficie de intercambio de oxgeno por dixido de carbono en los
tejidos.
PRINCIPIO
La determinacin-del volumen de los glbulos rojos empacados, en la sangre total
se investiga con el objeto de determinar el ndice volumtrico. Este ndice sirve
para determinar el grado de anemia en lugar del recuento globular rojo. Da
resultados ms definidos que el simple recuento, sobre la condicin de la sangre,
debido al hecho de, que los cambios en tamao de los eritrocitos as como su
nmero pueden ser determinados.
MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa, Diluyente de glbulos rojos, Pipetas de Thoma para glbulos
rojos, Cmara de Neubauer, Cubreobjetos y Microscopio
INTERFERENCIAS
Presencia de burbujas en la pipeta de Thoma.
Mezcla inadecuada

PROCEDIMIENTO
Tomar una pipeta de Thoma para glbulos rojos limpia y seca, aspirar sangre hasta
la marca de 0.5 y con el diluyente de rojos llevar a la marca 101.
Con los dedos tapar los extremos de la pipeta y agitar manualmente

por 2

minutos.
Tomar la cmara de neubauer y colocarle el cubreobjetos.
Tomar la pipeta y descartar las primeras tres gotas, la cuarta gota

colocarla

directamente en la cmara.
Dejar que por capilaridad se llene la cmara, en el rea cuadriculada. No mover la
cmara.
Dejar la cmara en reposo por 3 minutos.
Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el
objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cmara solo en 5
cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total).
CALCULOS
Los resultados se obtienen por la siguiente formula.
Eritrocitos contados X dilucion X 4000
=
no . cuadrados contados(5)

Eritrocitos contados X 10,000=Eritrocitos /mm

Valores Normales:
Hombres: 4.5 6.2 millones * mm
Mujeres: 4.0 5.5 millones * mm
RECUENTO DE EOSINOFILOS
GENERALIDADES
Los eosinfilos son, al igual que los neutrfilos, granulocitos derivados de la medula
sea y constituyen del 2-5% de los leucocitos sanguneos en personas sanas. Este
granulocito reside predominantemente a nivel tisular y es reclutado en sitios de
reacciones especficas inmunes, incluyendo enfermedades alrgicas.

PRINCIPIO
Este examen mide la cantidad de eosinfilos en su sangre. Se usa para
Evaluar y manejar condiciones alrgicas, enfermedades de sangre y enfermedades
infecciosas (incluyendo enfermedad del colgeno eosinoflico diseminado y asma),
as como algunas infestaciones por parsitos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa con EDTA
Pipetas

de

thoma

para

blancos,Cmara

de

neubauer.

Diluyente

de

eosinofilos,Porta objetos y colorante de contraste wright

INTERFERENTES
Mezcla de muestra incorrecta.
PROCEDIMIENTO 1:
Realizar un frote, teirlo y hacer el recuento diferencial.
Para ver el % de eosinofilos se hacer la relacin de globulos blancos contados x
eosinofilos encontrados= % de eosinofilos

PROCEDIMIENTO 2
Usar dos pipetas de Thoma para blancos y con ambas realizar todo el proceso para
cada muestra
Llenar con sangre completa hasta la marca 1, limpiar la pipeta.
Aspirar el diluyente hasta la marca 11.
Agitar las pipetas durante 2 minutos.
Con la primera pipeta, descartar las primeras 3 gotas y llenar un lado de la cmara
de neubauer, con la siguiente pipeta llenar el otro lado de la cmara, de la misma
forma que la anterior.
En el fondo de una caja de petri colocar un trozo de papel filtro hmedo, colocar la
cmara dentro de la caja y cubrir, durante 15 minutos.
Luego de 15 minutos, usando el objetivo

seco dbil (10x) enfocar, contar los

eosinfilos con objetivo 40X en los nueve cuadros grandes de cada lado.

Los eosinfilos tienen un color morado mientras que el resto de leucocitos son de
color amarillo plido.
Clculos:
E 1+ E 2
X 10=Eosinofilos mm3
1.8
Valores Normales:
150-300 Eosinofilos/mm de sangre.

RECUENTO DE PLAQUETAS
GENERALIDADES
Las plaquetas son las clulas ms pequeas de la sangre. Las plaquetas tienen
forma de disco y no contienen hemoglobina. Son esenciales para la coagulacin de
la sangre.
PRINCIPIO
El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste
de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede observar en un
microscopio convencional
MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa, Diluyente para plaquetas,Pipetas de Thoma para Glbulos
Blancos,Cmara de Neubauer y Microscopio
INTERFERENTES
Mezcla inadecuada de la muestra.
Tener la muestra en la pipeta por mucho tiempo.
Aspiracin de burbujas en la pipeta.
PROCEDIMIENTO

Con la pipeta de Thoma para blancos, aspirar diluyente de plaquetas hasta la

marca de 0.5, luego aspirar sangre hasta la marca de 1.0 y finalmente llevar hasta
la marca 11 con el diluyente.
Mezclar suavemente durante 20-30 minutos. Preparar la cmara de Meucare.
Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cmara de Neubauer.
En el fondo de una caja de petri colocar un trozo de algodn hmedo y dejar la
cmara de neubauer en reposo por 15 minutos.
Observar en el microscopio enfocando con objetivo 10X y contar con objetivo 40x
las plaquetas, encontradas en los 5 cuadros donde se cuentan los glbulos rojos.
Clculos
Plaquetas contadas X 1000=plaquetas /mm de sangre
Valores Normales.
200,000 400,000 plaquetas X mm

RECUENTO DE RETICULOCITO
GENERALIDADES
Eritrocito inmaduro caracterizado por la presencia de una especie de malla formada
por filamentos y partculas en la antigua localizacin del ncleo.
PRINCIPIO
Los reticulocitos solo pueden ser reconocidos mediante el uso del colorante supra
vitales que tienen cido ribonucleico, el cual aparece como una malla o retculo de
color azul.
MATERIALES Y REACTIVOS
Sangre completa colorante de contraste (Wright),Solucin azul de crecil refrigerado,
Portaobjetos, Tubo de ensayo y pipetas pasteur
INTERFERENCIAS

Reactivo vencido, Frote mal hecho, Tincin prolongada de tiempo.

PROCEDIMIENTO
1. Mtodo Hmedo.
Colocar 6 gotas de sangre con EDTA en el tubo de ensayo, ms 3 gotas de azul de
crecil, mezclar la solucin e incubarlo a 37C durante 30 minutos.
Colocar una gota de la solucin sobre el portaobjetos limpio, para preparar un frote
y teir con colorante de contraste. (Wright).
Observar el frote en el microscopio y usando el objetivo 100X con aceite de
inmersin,
Contar en varios campos (10 mnimo) como reticulocitos todas las clulas con
granulacin o retculo de color azul, hasta llegar a 1000 celulas(eritrocitos).
Sumar la cantidad de reticulositos, observados y calcular el porcentaje con la
formula.
2. Mtodo seco.
Tomar un cubreobjetos y en el centro colocar una gota pequea de sangre.
Colocar el cubreobjetos sobre un frote teido. La gota debe estar uniformemente
distribuida.
Dejar en reposo durante 15 minutos, observar.
Contar 100 reticulocitos, anotar el nmero de campos necesarios para obtener los
100 reticulocitos, mnimo 10 campos.
O contar el nmero de reticulocitos encontrados al contar 1000 eritrocitos, en
campos consecutivos.
CALCULOS
% de reticulocitos =

total de reticulositos x 100

1000

Valores Normales.
Adultos: 0.5 1.5 % 90,000 X mm de sangre completa.
Nios: 0.5 4 %
Infantes: 2 6 %
PROCEDIMIENTO PARA VELOCIDAD DE SEDIMENTACION

GENERALIDADES
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en
el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su
gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as como
en los procesos inactivos o estrictamente locales
PRINCIPIO
En una muestra no coagulable, los glbulos sedimentan debido a su mayor
densidad (1.10g/ml) frente a la del plasma, descendiendo lentamente hasta el
fondo del recipiente.
Materiales y Reactivos: Sangre completa, Tubos de sedimentacin de Westergren y
Gradilla para tubos de Westergren.
INTERFERENTES
si se deja la muestra por ms tiempo, altera los resultados.
El defecto de calibracin de la pipeta y la no verticalidad de esta.
PROCEDIMIENTO
Llenar la pipeta de westergren hasta la marca de 0, limpiar la punta de la pipeta.
Colocar la pipeta en forma vertical en la gradilla, que posee una cama de caucho
en la parte inferior y en la superior un clip para asegurar la pipeta.
Colocar la gradilla en una superficie plana donde no haya vibraciones.
Dejar en reposo por 1 hora.
Al cabo de una hora leer resultados.
CALCULOS:

Velocidad de Sedimentacion=mm/1 hora

Valores Normales.
Hombres: 3-5 mm/1 hora
Mujeres: 4-7 mm/1 hora.

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA COOMS DIRECTO

METODOLOGIA:
mtodo para determinar eritrocitos defectuosos al hacer contacto con el Reactivo.
PRINCIPIO:
El contacto de los eritrocitos defectuosos con la inmunoglobina humana, produce
aglutinacin.
REACTIVOS: Coombs anti-HC
MATERIALES: Centrifuga, sangre con anticoagulante, 2 tubos de ensayo
rotulados, solucin isotnica, pipetas pasteur y cronometro
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Mezclar la muestra y con una pipeta pasteur depositar 3 gotas de muestra en un
tubo de ensayo
Ms 3ml de la solucin isotnica, no agitar el tubo y centrifugar durante 3 minutos
a 3 mil rpm. Decantar el sobrenadante sin romper el botn del sedimento.
Repetir 2 veces el procedimiento. Se agrega 10 gotas de solucin isotnica al tubo
que contiene el botn de eritrocitos y se mezcla suavemente; En el otro tubo,
Agregar 3 gotas de la solucin de eritrocitos, ms 3 gotas de reactivo Coombs antiHG, mezclar suavemente e incubar por 30 minutos a 37C.
Centrifugar por 5minutos a 5 mil rpm.
Mezclar suavemente, observar si hay aglutinacin, la prueba ser positiva, si no se
observa aglutinacin, ser negativa.
El resultado positivo se reporta con cruces, dependiendo del grado de aglutinacion
Anotar y reportar donde corresponde y entregar resultado firmado y sallado.
VALOR NORMAL: Negativo.
SIGNIFICADO CLINICO: Hemolisis en el paciente, si el resultado es positivo.
FROTIS DE SANGRE PERIFRICA
PRINCIPIO

Para el estudio cualitativo y cuantitativo de clulas y plaquetas.

Se debe considerar lo siguiente:

Calidad del frotis

Debe abarcar 80% de la lmina con cabeza, cuerpo y cola. Extensiones

gruesas dificultan la visualizacin e identificacin celular, mientras que las
delgadas originan una distribucin anormal de los elementos.

Eritrocitos

Se estudia su tamao, forma, color y si existen inclusiones o elementos

extraos.

Plaquetas

Estudiar tanto cualitativa como cuantitativamente, debiendo observarse de 3

a 10 plaquetas aproximadamente por 100 glbulos rojos o varias plaquetas y
grupos ocasionales por campo. Visto con objetivo de inmersin, no debe
existir menos de una plaqueta por campo.

MATERIALES: Un capilar, lanceta, algodn y lminas portaobjetos.

PROCEDIMIENTO:
Tomar la muestra en la yema del dedo, limpiar el rea, sujetar bien el dedo y
realizar la puncin
Llenar el capilar, limpiar con algodn seco y presionar el rea de la puncinz
Colocar una pequea gota de sangre en el portaobjetos y realizar el frote
Secar el frote sin teir y se entrega a donde corresponde.
GRUPO SANGUINEO Y RH
METODOLOGIA:
Tipificacin del grupo sanguneo y RH, por el sistema ABO, en placas
PRINCIPIO:
Mtodo de aglutinacin de eritrocitos con antgeno especifico, que produce una
reaccin con el reactivo.
SIGNIFICADO CLINICO:
Para prevenir accidentes de incompatibilidad en transfusiones sanguneas

REACTIVOS:
Anti-A Reagent, reactivo monoclonal para determinacin de antgeno A
Anti-B Reagent, reactivo monoclonal para determinacin de antgeno B
Anti-D Duoclone para determinar antgenos D
MATERIALES:
Muestra con anticoagulante, laminas porta objetos, pipetas pasteur, palillos de
madera, 3 reactivos y tubos de ensayo, si fuese necesario.
PROCEDIMIENTO:
Rotular las lminas con las letras A, B y D
Agitar suavemente la muestra y con la pipeta tomar un poco de muestra y trabajar
3 gotas
Colocar 1 gota pequea en cada extremo de una lmina y 1 gota en el centro de
otra lamina
Colocar 1gota de suero Anti-A, Anti-B y Anti D, en la gota de muestra que
corresponde a la misma letra.
Mezclar cada gota muestra con diferente palillo y agitar en forma circular las
lminas durante 3 minutos
Observar aglutinacin en cada gota de muestra
Anotar y reportar resultados firmados y sellados
ESQUEMA DE LA TIPIFICACION
GRUPO A RH POSITIVO

GRUPO B RH

POSITIVO
REACTIV

AGLUTINACIO

INTERPRET

REACTIV

AGLUTINACIO

INTERPRET

Anti-A
Anti-B
Anti-D

Positiva
Negativa
Positiva

Grupo A
----------Grupo RH

Anti-A
Anti-B
Anti-D

Negativa
Positiva
Positiva

--------------Grupo B
Grupo RH

GRUPO AB RH POSITIVO

GRUPO O RH

POSITIVO
REACTIV

AGLUTINACIO

INTERPRET

REACTIV

AGLUTINACIO

INTERPRET

Anti-A
Anti-B
Anti-D

Positiva
Positiva
Positiva

Grupo A
Grupo B
RH

Anti-A
Anti-B
Anti-D

Negativa
Negativa
Positiva

----------------------Grupo O

IMPORTANTE:
Si no aglutina en muestra Anti-D para determinar el RH, habr que realizar lavado
de clulas con solucin salina, centrifugando a 3mil rpm por 1 minuto, entre cada
lavado.
Agregar 10 gotas de solucin salina al botn de clulas lavadas y mezclar
suavemente
Colocar 3 gotas de clulas lavadas, en un tubo de ensayo, ms 3 gotas de
Reactivo Anti-D
Incubar por espacio de 15 minutos a 37C. Observar visual y microscpicamente, si
se aglutina la muestra, se reporta como Dbilmente Positivo o en caso contrario se
reporta Negativo.

LABORATORIO

TIEMPOS

CLNICO

COAGULACION

DE PAGINAS DEL

MICRODIAGNOSTIC 2
HEMOSTAT THROMBOPLASTIN-SI
TIEMPO DE PROTROMBINA
METODOLOGIA
Determinacin automatizada del tiempo de Protrombina en un solo tiempo. Anlisis
de las vas extrnsecas y comunes de la coagulacin
PRINCIPIO
El PT de una etapa mide el tiempo de coagulacin del plasma, despus de
adicionar una fuente de factor tisular (tromboplastina) y calcio; generando la

activacin del factor Xa, la formacin de trombina y la formacin de un coagulo de

fibrina insoluble.
REACTIVOS
RGT y BUF
CONTENIDOS

GRT: Reactivo deTromboplastina, liofilizado

Extracto de cerebro de conejo
Azida de sodio
BUF: Sales, CaCl2 y Azida de sodio

>10%
<0.01%
0.01%

PREPARACION DE LOS REACTIVOS:

Reconstituir un frasco de RGT en un frasco de BUF, agitar suavemente y dejar
reposar durante 30 minutos a TA.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS
Almacenados a 28C, sin abrir, los frascos son estables hasta la fecha de
caducidad
Despues de la mezcla de RGT y BUF, es estable 12 das a 28C o 24 horas a
22C, almacenar a 28C si no se van a utilizar. No congelar
MATERIALES
Muestra de plasma con citrato, pipetas pasteur, 2 cubetitas plsticas, 1 magnetito,
pipetas automticas, solucion salina,puntas y papel absorbente
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Rotular 2 cubetitas, tubo 1, tubo 2 que es el de la muestra y 1 ependorf para el
plasma
Centrifugar la muestra por 10 minutos a 5mil rpm y separar el suero

Con solucin salina, papel absorbente lavar y secar el magnetito

Depositar 210ul de Reactivo para TP en cubeta 1 e incubar por 5 minutos a 37C
Colocar el magnetito en la cubeta 2, mas 100ul de plasma e incubar por 2 minutos
despus de la incubacin de la cubeta 1
Colocar la cubeta 2 en el coagulometro y tomar 200ul de reactivo de la cubeta 1
cuidando que no forme burbujas
Agregar los 200ul de reactivo en la cubeta 2 presionando la tecla READ al mismo
tiempo, no despus.
Realizar atentamente la lectura del tiempo en segundos, el porcentaje de actividad
y el INR
Anotar y reportar el resultado
Buscar el porcentaje de actividad y el INR de acuerdo al resultado
Entregar resultados firmados y sellados.
VALORES NORMALES
Tiempo de protrombina-------10 a 14 segundos
Porcentaje de actividad------70 a 110 %
INR

------

SENSIBILIDAD: Es un reactivo de alta sensibilidad, de 0.9

LINEALIDAD: El tiempo de protrombina puede protrombina, puede prolongarse o
disminuir debido a algunas sustancias qumicas o frmacos
SIGNIFICADO CLINICO:
El TP es un medio para monitorear pacientes en terapia anticoagulante oral, debido
a que reducen la actividad de los factores de coagulacin que dependen de la
vitamina K.
Un tiempo elevado de protrombina, indica desordenes adquiridos o congnitos; que
afectan los factores de coagulacin I, II,V, VII y X.

DETERMINACION DEL TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA:

HEMOSTAT aPTT-EL

METODOLOGIA:
Determinacin manual y automatizada de Tiempo Parcial de Tromboplastina
activada, utilizando cido elagi co como activador
PRINCIPIO
El TPT activada se realiza aadiendo un reactivo aPTT que contiene un activador
de plasma y fosfolpidos a la muestra; los fosfolpidos sirven como substituto de
plaquetas. La mezcla se incuba para la activacin, despus se recalcifica con
cloruro de calcio y se contabiliza el tiempo de la formacin d
el coagulo
REACTIVOS Y SUS CONTENIDOS
RGT1 Y RGT2
RGT1: Reactivo aPTT-EL
Cefalina de cerebro de conejo
Acido elagico, buffers y azida de sodio
RGT2: CaCl2

< 1.0%
<0.01%
0.2 mol/l

Sales y estabilizantes
ESTABILIDAD DE REACTIVOS Y MUESTRAS
Almacenamiento entre 28C. No congelar
Una vez abierto, el frasco es estable hasta 14 das almacenados debidamente
Mezclar con cuidado antes de usar.

Las muestras mantenidas entre 22 a 24C deben ser analizadas dentro de las 24
horas siguientes
Para periodos ms largos

se deben congelar una sola vez a 20C o a 70C

durante 6 meses. Descongelar a 37C rpidamente, agitando suavemente y

realizar inmediatamente la prueba.
MATERIALES: Plasma citratada, 1 magnetito, 3 cubetitas plsticas, pipetas
automticas, solucin salina, puntas y papel absorbente.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

Preparar el aparato de la manera que se realiza el TP
Rotular las cubetas #1(reactivo), #2 y #3 (muestra) y 1 ependorf
Centrifugar por 10 minutos a 5 mil rpm la muestra y separar el plasma
En la cubeta #1 depositar 110ul de reactivo para TPT y
Colocar el magnetito lavado y secado en la cubeta #3, agregandole 100ul de
muestra
Incubar por 5 minutos a 37. Luego se toma 100ul de reactivo de la cubeta 1 y
Se depositan en la cubeta #3, se descarta la cubeta #1
Depositar 110ul de reactivo 2 a la cubeta #2 e incubar por 5 minutos mas, las
cubetas #2 y #3
Colocar cubeta #3 en el coagulometro, tomar 100ul de la cubeta #2, cuidando que
no haya burbuja
Se le agrega a la cubeta #3 presionando al mismo tiempo, la tecla READ
Realizar la lectura, anotar y reportar resultados

Entregar resultados firmados y sellados.

VALOR NORMAL: De 23 a 36 segundos
SIGNIFICADO CLINICO:
Prueba til para detectar las deficiencias de los factores de coagulacin (Xll, Xl, X,
lX, Vlll, V, ll y l).
Se usa para controlar la terapia de la heparina.
SENSIBILIDAD: Prueba simple sensible a las deficiencias de todos los factores de
coagulacin en el plasma, excepto el factor lV.
TECNICA DE LA GOTA GRUESA
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Tomar la muestra en la mano no dominante.
Dedo pulgar o ndice, masajear un poco para aumentar la circulacin capilar.
Tcnico, se debe colocar dando la espalda al paciente, y sujetarle la mano, con la
finalidad de que el paciente no vea cuando se haga la puncin, y tomar fuerte la
mano para evitar la
retraccin de esta en el momento del procedimiento.
Realizar la puncin con una lanceta, presionar un poco para que se forme una gota
gruesa.
Dejar caer la gota en un portaobjetos.
Extender la gota con un palillo de madera
Fijar la muestra flamendola.
Dejar secar la muestra.
Despus de secada la muestra, teir con wrhigt, gram, giemsa.
PARASITOS EN SANGRE Y PIEL
Plasmodium vivax, malarie y falciparum
Toxoplasma gondii, Tripanosoma cruzi y Leishmania.

TIEMPO DE SANGRA:
Mtodo de exploracin in vitro por el Mtodo de Duke

Con una lanceta hacer una pequea incisin en el lbulo de la oreja. La sangre
fluye por esta incisin y se mide el tiempo que transcurre hasta que se detiene el
sangrado.
SIGNIFICADO CLINICO
Este

procedimiento

se

realiza

Para

diagnosticar

ciertos

padecimientos

hemorrgicos, antes de realizar operaciones quirrgicas y antes de efectuar una

puncin en el hgado o el bazo.
MATERIALES
Una lanceta estril, ter o alcohol, Filtro de papel (o papel secante), cronmetro o
reloj con segundero.
PROCEDIMIENTO
1. Limpiar con suavidad el lbulo de la oreja con algodn empapada en ter. No
frote. Djese secar
2. Realizar la incisin en el lbulo de la oreja con cierta profundidad, al mismo
tiempo cronometrar. La sangre deber fluir libremente sin que se necesite exprimir
el lbulo de la oreja.
3. Despus de 30 segundos. Recoger la primera gota de sangre en una esquina del
papel secante, sin hacer contacto con la piel.
4. Esperar otros 30 segundos y recoger la segunda gota de sangre con el papel
secante, un poco ms adelante de la primera.
5. Cuando las gotas de sangre dejen de fluir, detener el cronmetro (anotar tiempo
transcurrido segn el reloj, o contar las gotas recogidas en el papel y multiplicarlo
por 30 segundos).
Resultados Comunicar el tiempo de sangrado redondendolo al medio minuto ms
cercano.
Observaciones
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensin de sangre teida para
observar si las plaquetas son escasas.
Interpretacin del resultado
El valor de referencia del tiempo de sangra segn este mtodo es de 1 a 4
segundo

TIEMPO DE COAGULACION
METODOLOGIA: Determinar el tiempo en que se coagula la muestra de sangre del
paciente
MATERIALES: Muestra de 3 cc de sangre completa, sin anticoagulante, 3 Tubos de
ensayo enumerados (1.2 y 3) y cronometro.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Inmediatamente despus de la extraccin, Colocar 1 cc de muestra y se marca el
cronometro en 10 minutos
Observar atentamente y el tiempo en que se coagula la muestra de cada tubo y
anotar
Realizar una suma de los 3 Tiempos y dividirlos dentro de tres, este promedio es el
Resultado
Se aproximan los segundos a minutos.
VALOR NORMAL: 5 a 10 minutos

LABORARATORIO

POES

CLINICO

MICROBIOLOGIA

PARA PAGINAS DEL

QUETZALTENANGO

INTRODUCCION
El examen directo de frotes bacterianos generalmente no basta para identificar una
especie de bacterias, la identificacin precisa solo se puede lograr por medio de
cultivos.

El examen microscpico directo de frotes teidos constituye una manera eficiente

de estudiar la presencia de bacterias en medios biolgicos que normalmente son
estriles, como los lquidos cefalorraqudeo y pleural, y en muestras de otros
orgenes.
Este procedimiento puede aportar informacin sumamente til para el diagnstico,
el tratamiento inmediato y el dominio de una enfermedad.
TINCIN DE GRAM
Es un procedimiento de tincin muy comn utilizado en el laboratorio para
diferenciar a las bacterias basndose en las propiedades fisiolgicas de su pared
celular.
Materiales:
Cristal violeta, Solucin de yodo, decolorante (alcohol acetona)
Safranina, agua, portaobjeto, asa de nicromo(argolla), solucin salina, soporte para
la tincin y microscopio
Procedimiento:
Despus de preparar un frote delgado de la bacteria a identificar, fijar al calor.
Colocar el frote en el soporte para la tincin y cubrir el rea con el cristal violeta.
Dejar durante un minuto.
Cuando haya pasado este tiempo lavar con agua por 5 segundos.
Colocar el frote en el soporte para la tincin y cubrir con la solucin de yodo. Dejar
durante un minuto.
Cuando haya pasado este tiempo lavar con agua por 5 segundos.
Cuidado! este es el paso ms importante de este procedimiento. Decolorar el frote
con alcohol acetona agregando 3 gotas de forma uniforme.
Lavar con agua por 5 segundos.
Cubrir el frote con safranina y permitir que el frote se tia durante un minuto.
Cuando haya pasado este tiempo lavar con agua por 5 segundos y observar en el
microscopio con el objetivo de inmersin.
Nota:
Gracias a la tincin de Gram las bacterias se pueden identificar en dos grupos:
En las Gram positivas, que se tien de morado obscuro y las Gram negativas, que
se tien de color rosa.
Se deben buscar:
Bacterias: teidas de violeta oscuro o Gram positivas, como estafilococos,
estreptococos, micrococos, neumococos, enterococos, bacilos de la difteria y
bacilos del ntrax.

Bacterias:

teidas

de

color

rosa

Gram

negativas,

como

gonococos,

meningococos, bacilos coliformes, shigelas, salmonelas o vibriones del clera.

Esta tincin se le realiza a todas las muestras que van a ser cultivadas.

MATERIALES PARA BACTERIOLOGIA

Azas de nicromo con punta o de argolla calibradas, mechero, hisopos, caldo T
soya, gradilla, incubadora bacteriolgica, microscopio y agares, discos de
antibiticos, regla milimetrada y jarra de vidrio con candela.
Nota todo el trabajo en microbiologa se debe realizar a mechero encendido
CULTIVO DE OROFARINGE
El cultivo de garganta se utiliza para demostrar presencia de Streptococcus
pyogenes, patgeno principal de la faringe y causante de serias complicaciones en
el paciente.
Muestra:
Hisopado de las amgdalas en medio de transporte
Materiales:
Agar sangre de carnero, asa de nicromo en argolla y Jarra con candela.
Procedimiento del cultivo
Despus de tomar la muestra debidamente,
Primero dispersar el inoculo inicial, en un extremo del Agar, tomando el hisopo del
medio (caldo T.soya) con una pinza estril (flameada). Seguidamente
Realizar el rayado con aza calibrada, flameada tocando el inoculo inicial y hacer
una pirmide.
Luego hacer una cortada en el agar ms o menos de 1 cm de largo introduciendo el
asa hasta el fondo del agar y hacer la cortada desde la orilla de la caja, hacia el
centro.
las cortadas ayudan a visualizar mejor beta hemolisis y disminuye la carga
bacteriana
Incubar en una jarra con candela de 18 a 24 horas a 37
Interpretacin:
Si hay bastante crecimiento de colonias pequeas o de regular tamao, beta
hemolticas con halo transparente ser positivo para Streptococcus pyogenes
(patgeno ms importante en orofaringe).

Si no hay colonias sospechosas de S. pyogenes, buscar cualquier colonia que

predomine mas del 70% en la caja e identificarlo, reportarlo y realizar sensibilidad
conjuntamente.
Si es positivo se reporta: se aislaron mas de 100,000 UFC/ml con el nombre de la
bacteria identificada (S. pyogenes)
Reportar la sensibilidad en 3 grupos de acuerdo a la formacin de halo en los
antibiticos: Sensibles, Intermedios y sensibles.
Si no ocurre ninguno crecimiento patgeno, se reporta: del cultivo se aisl
microbiota mixta normal de orofaringe.
Los sntomas frecuentes asociados a la faringitis causada por S. pyogenes, son:
dolor de garganta, ganglios linfticos del cuello agrandado, dolor de cabeza,
nuseas, vmitos y dolor abdominal.
El cultivo de garganta debe tomarse siempre antes de iniciar el tratamiento con
antibitico.
UROCULTIVO
El cultivo de orina se utiliza para demostrar la presencia de un nmero significativo
de bacterias que puedan estar provocando una infeccin a traves del tracto
urinario, la orina dentro del cuerpo es estril, por lo que es necesario una adecuada
toma de muestra para evitar errores en la interpretacin o contaminacin de la
prueba.
Muestra: La primera orina de la maana.
Materiales:
Agar MacConkey o agar Clead, asa argolla calibrada de 0.001 ml.

PROCEDIMIENTO:
Agitar la orina e introducir un asa calibrada de 0.001 ml; aproximadamente
Un centmetro por debajo de la superficie de la orina.
Descargar el asa en agar MacConkey o Clead, haciendo el rayado en forma de
petate o en zig zag.
Incubar de 18 a 24 horas a 37C. Si se siembra en agar sangre se incubara en
jarra con candela
Interpretacin
Si las lneas del reyado se llenan de muchas colonias, ser positivo para
Escherichia coli o Klebsiella oxitoca, se identifican por el tamao y forma

Para reportar se debe multiplicar el nmero de colonias, que crecieron en la caja y

multiplicarlas por 1000.
Si en la caja crecieron 55 colonias de Escherichia coli, se REPORTA: del cultivo se
aislaron 55,000 UFC/mL de Escherichia coli.
Si el numero en la caja es mayor de 100 entonces se REPORTA: del cultivo se
aislaron ms de 100,000 UFC/mL de Escherichia coli. Si no hubiera crecimiento
bacteriano en los agares se reporta el cultivo como negativo o se aisl micro biota
mixta normal se observan pocas colonias.
COPROCULTIVO
El objetivo de realizar coprocultivo es el demostrar la presencia de un entero
patgenos que este causando alguna patologa.
Muestra
Heces fecales.
Materiales:
Asa de argolla, hisopo, agar MacConkey, agar Salmonella Shigella (SS).
Procedimiento:
Inocular una porcin anormal de heces (con moco, sangre o pus), directamente en
el extremo de las cajas de agar SS, y MacConkey
El inoculo se realiza con un asa en anillo o con un hisopo. Inocular solamente
medio centmetro de un extremo de las cajas de Petri.
Flamear el asa y diseminar el inoculo y realizar el rayado en forma de zigzag
Incubar a 37C durante 18 a 24 horas.
Despus de incubar las cajas, observar cuidadosamente si hay crecimiento de
colonias
Nota: Los principales entero patgenos que se buscan el coprocultivo son las
cuatro especies de Shigella, especies patgenas de Salmonella y escherichia coli,
entre otras
CULTIVO DE SECRECIN VAGINAL
Muestra:
Secrecin de cuello de tero y de la vagina.
Materiales:
Asa de nicromo, Agar MacConkey, Agar Chocolate y jarra con candela.
PROCEDIMIENTO

Hacer el rayado de las cajas dispersando el inculo inicial con un asa en argolla
estril y fra.
Luego halar cuatro lneas tocando el inculo inicial, luego hacer otras cuatro lneas
tocando las cuatro anteriores y por ultimo halar una lnea tocando las anteriores y
hacer una pirmide.
Incubar a 37C de 18 a 24 horas, el agar Chocolate en jarra con candela y el
MacConkey en aerofilia.
Luego de la incubacin se debe buscar en el agar Chocolate colonias pequeas
redondas convexas como gotas de roco las cuales son sospechosas de ser
Neisseria gonorrhoeae.
Hacer una Tincin de Gram a las colonias sospechosas, se deben observar
diplococos Gram Negativo, como granos de caf.
Si en el Gram se observaron distintos tipos de bacterias y en el cultivo se aislaron
distintos tipos de colonias que no son de Neisseria gonorrhoeae o Candida sp se
debe reportar del cultivo se aisl micro biota mixta.
Si crece un cultivo puro de bacilos Gram Positivo que sean lactobacilos, y en el
gran se observaron abundantes bacilos Gram positivo se debe reportar del cultivo
se aisl micro biota normal vaginal.
Nota:
Si crece un cultivo puro o casi puro de cualquier bacteria, identificar, hacer
antibiograma y reportarla.
CULTIVO DE SECRECIONES VARIAS
Muestra: Secrecin de lesiones cutneas, purulentas o serosas.
Materiales: Asa de argollolla, agar MacConkey, agar Sangre, agar Chocolate
Procedimiento:
Rayar las cajas dispersando el inoculo inicial con asa en argolla flameada y fra,
luego hacer cuatro lneas que toquen el inoculo inicial y luego otras cuatro que
toquen las anteriores y por ultimo una pirmide.
Poner el agar Chocolate en jarra con candela y colocar los tres medios a 37C, de
18 a 24 horas.
Si hay crecimiento en agar MacConkey, identificar la bacteria, si es necesario
sembrar en una batera para su identificacin.
Si solo hay crecimiento en el agar Chocolate realizarle una catalasa y una
coagulasa, para confirmar resultados
Reportar cualquier tipo de crecimiento que se obtenga, identificando las bacterias y
hacer el antibiograma.
Microorganismos mayormente implicados:

Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae,

Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa
Nota: La administracin de antibiticos pocos das antes de hacer el cultivo es un
interferente para el diagnstico de este
CULTIVO DE SECRECIN DE OJOS
Muestra empleada: Supuracin del ojo.
Materiales: Asa de nicromo argolla, agar MacConkey, agar Chocolate
Procedimiento
Rayar las cajas dispersando el inoculo inicial con asa en argolla flameada y fra,
luego hacer cuatro lneas que toquen el inoculo inicial y luego otras cuatro que
toquen las anteriores y por ultimo una pirmide Poner el agar Chocolate en jarra
con candela y colocar los dos medios a 37C, de 18 a 24 horas.
Si hay crecimiento en agar MacConkey, identificar la bacteria;
Si solo hay crecimiento en el agar Chocolate, ser micro biota mixta normal
Reportar cualquier tipo de crecimiento que se obtenga, identificando las bacterias y
hacer el antibiograma.

LESIONES MICTICAS SUPERFICIALES (KOH)

Son afecciones fngicas en las capas ms externas de la piel, pelo y uas.
Generalmente no hay inflamacin. Los Dermatofitos son un grupo de hongos que
invaden la piel provocando picazn y enrojecimiento; en las uas causan cambio
de color, apariencia porosa y engrosamiento y al infectar en cabello producen su
cada.
Muestra: Escamas colectadas segn sea el caso.
Procedimiento:
Colocar en un portaobjetos escamas colectadas
Luego colocar una gota de azul de lactefanol.
Colocarle un cubreobjetos.
Observar al microscopio en objetivo de 40x.
Si se observa micelio o levaduras reportar positivo para Dermatofito.
De lo contrario reportar negativo para Dermatofito o levaduras.

PRUEBA DE SENSIBILIDAD (ANTIBIOGRAMA)

Tcnica de Bauer Kirby:
Es por difusin en disco.
Muestra: Colonias aisladas.
Materiales:
Agar Muller Hilton, Solucin salina o caldo para medio, Estndar de McFarland,
Discos de antibiticos, Hisopos estrileriles y Pinza
Procedimiento:
Con el asa flameada y fra, tome de 1 a 2 colonias aisladas y de igual morfologa
del cultivo original.
Inocular en un tubo con 4 ml de solucin salina.
Ajustar la turbidez del caldo a la turbidez del estndar McFarland.
Mojar un hisopo estril con la solucin salina o caldo inoculada y exprimir el exceso
en las paredes del tubo.
Estriar una caja de Muller Hinton en 3 direcciones opuestas en toda la superficie.
Dejar secar la caja de 3 a 5 minutos pero no ms de 15 minutos.
Con las pinzas estriles colocar los discos de antibitico sobre el medio ya
inoculado.
Los discos deben tener suficiente separacin entre s, aproximadamente 2 cm entre
cada uno. Invertir las cajas e incubar por 18 o 18 horas a 37C.
Medir los halos de inhibicin completa en milmetros
El tamao del halo depende de la difusin del antibitico y de la susceptibilidad del
microorganismo hacia este. En el tiempo indicado realizar la interpretacin de la
prueba, de mayor a menor halo de inhibicin, anotando la reaccin del
microorganismo ante cada uno de los discos de los antibiticos
Se reportan como Sensibles, Intermedios y resistentes, con el nombre de los
antibiticos que estn en cada parmetro.
Anotar y reportar resultados. Entregar resultados firmados y sellados.