ISTA 2024 Cap 9
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9.1 Método de referencia básico todo en las Reglas. Implica comparar el método de baja
para la determinación del temperatura constante con el método de alta temperatura
constante en un análisis comparativo.
contenido de humedad Más información y detalles sobre los procedimientos
usados para introducir nuevas especies se dan en el actual
El método de referencia básico para la introducción de una ISTA Handbook on Moisture Determination.
nueva especie o de nuevos métodos en las Reglas es el
método de estufa a baja temperatura constante, es decir 17
horas a 103 °C. Se deben completar ensayos comparativos 9.2 Determinación del contenido
para validar que la determinación de la humedad para las de humedad con el método de
nuevas especies se puede realizar de forma precisa y re-
producible entre los laboratorios que utilizan 17 horas a estufa a temperatura constante
103 °C.
9.2.1 Objeto
9.1.1 Necesidad del análisis de molido El objeto es determinar el contenido de humedad de las
semillas mediante un método de estufa de uso rutinario.
La necesidad de moler depende de factores tales como
el tamaño de la semilla y la permeabilidad al agua de la
cubierta seminal. Sin embargo, si el tamaño de la semilla 9.2.2 Definición
es demasiado pequeño para cumplir con los requisitos del
molido fino, entonces no es necesario probar el efecto de El contenido de humedad de una muestra es la pérdida de
la molienda. La prueba del efecto de la molienda es obliga- peso cuando se seca de acuerdo con los métodos descriptos
toria antes de que una nueva especie pueda ser introducida en este capítulo. Se expresa como un porcentaje del peso
en estas Reglas. de la muestra original.
Las características de la semilla, tales como la alta
humedad o una cubierta seminal extremadamente dura,
pueden evitar la molienda. En estas circunstancias, está 9.2.3 Principios generales
permitido romper o cortar la semilla en trozos de no más
de 7 mm de ancho. Los métodos prescriptos están diseñados para reducir la
oxidación, la descomposición o la pérdida de otras sustan-
cias volátiles asegurando al mismo tiempo la eliminación
9.1.2 Análisis para la aceptación del de la humedad tanto como sea posible.
método con alta temperatura constante
El análisis para la aceptación del método de alta tempera- 9.2.4 Equipo
tura constante, es decir 1, 2, 3 o 4 horas a 130 °C, no es
obligatorio y solo es necesario cuando se hace una solici- Dependiendo del método utilizado, se requiere del siguien-
tud para la inclusión del método de alta temperatura cons- te equipamiento:
tante. Se trata de comparar el método de referencia con el • un molinillo para moler;
método de alta temperatura constante mediante un análisis • una estufa eléctrica para calentar;
comparativo. • recipientes;
Más información y detalles sobre los procedimientos • un desecador;
usados para introducir nuevas especies se dan en el actual • una balanza;
ISTA Handbook on Moisture Determination. • tamices;
• una herramienta para cortar.
El molinillo debe: El desecador debería estar equipado con una placa perfora-
• estar hecho con un material que no absorba humedad, da para fomentar un rápido enfriamiento de los recipientes
• ser fácil de limpiar y tener tan poco espacio muerto y debería contener un desecante eficaz.
como sea posible,
• permitir que la molienda se haga de manera rápida y
uniforme, sin desarrollo apreciable de calor y, en la 9.2.4.5 Balanza
medida de lo posible, sin contacto con el ambiente
exterior, La balanza debe ser capaz de pesar con una exactitud de al
• ser ajustable a fin de obtener partículas de las dimen- menos ±0,001 g.
siones indicadas en 9.2.5.4.
9.2.4.6 Tamices
9.2.4.2 Estufa con temperatura constante
Se requieren tamices con mallas de alambre de 0,50, 1,00,
La estufa debe ser calentada eléctricamente y capaz de 2,00 y 4,00 mm.
controlarse de tal manera que, durante el funcionamiento
normal, la temperatura del aire y de los estantes en la zona
donde se secan las muestras sea 103 o 130 °C. Cuando 9.2.4.7 Herramienta para cortar
se ajusta inicialmente a una temperatura de 103 o 130 °C,
la estufa debe ser capáz de recuperar esa temperatura en Cuando se requiera de cortes cuando lo indica la Tabla 9A,
menos de 30 minutos después de la inserción simultánea se puede usar cualquier instrumento adecuado para hacer-
del número máximo de muestras que se pueden secar de los como por ejemplo cuchillo, bisturí o tijera de podar.
una vez.
Se debe verificar si la estufa es apta para su propósito
preparando la cantidad máxima de muestras que se debe 9.2.5 Procedimientos
analizar al mismo tiempo. Las muestras se secan (2 h a
130 °C o 17 h a 103 °C) luego se retiran de la estufa y se 9.2.5.1 Instrucciones generales y
dejan enfriar en un desecador antes de pesar y calcular el precauciones
contenido de humedad, las mismas muestras entonces se
vuelven a secar (1 h a 130 °C o 2 h a 103 °C) con los re- Ver las Tablas 9A para las indicaciones referidas a las es-
cipientes en la misma posición que para el primer periodo pecies individuales.
de secado; dejadas enfriar en un disecador y se recalcula el La muestra a enviar al laboratorio (ver 2.5.1.5–2.5.1.6)
contenido de humedad. se puede aceptar para la determinación de humedad solo
Para muestras individuales, la diferencia en el conte- si tiene el tamaño de muestra requerido (2.5.4.5c y Tabla
nido de humedad no debe diferir en más de 0,15 %. Esta 9A), y si está en un envase intacto e impermeable (o si se
verificación debe realizarse utilizando una especie que re- emite un Certificado Internacional Azul de una Muestra de
quiera alta temperatura y un tiempo de secado menor o Semillas, en un envase aparentemente a prueba de hume-
igual a 2 h. La misma especie puede ser usada para 130 °C dad), del que se haya descartado la mayor cantidad posible
o 103 °C. El pesaje debe realizarse de acuerdo con 9.2.5.3. de aire.
La determinación debe iniciarse tan pronto como sea
posible después de la recepción de la muestra. Antes del
9.2.4.3 Envases análisis, la temperatura de la muestra debe equilibrarse con
la del laboratorio mientras que está todavía intacta en el
Los envases deben ser resistentes a la corrosión y no ab- envase a prueba de humedad.
sorber humedad, bajo las condiciones del análisis (por Durante la determinación, la exposición de la muestra
ejemplo, metálicos o de vidrio) con tapas y una superficie al ambiente del laboratorio debe reducirse estrictamente
efectiva que permita que la muestra sea distribuida a fin de al mínimo.
dar una masa por unidad de superficie de no más de 0,3 g/ La muestra a enviar recibida que queda después de la
cm2. determinación de la humedad debe ser almacenada bajo
condiciones controladas en un envase a prueba de hume-
dad durante un período definido por el laboratorio, pero lo
suficientemente extenso como para asegurar la posibilidad
de hacer otro análisis en caso de errores.
Antes de obtener la(s) muestra(s) de trabajo, la muestra Las semillas grandes y las que tienen cubiertas seminales
a enviar al laboratorio se debe mezclar minuciosamente que impiden la pérdida de agua, deben ser molidas antes
mediante uno de los siguientes métodos: del secado a menos que su alto contenido de aceite las
o mezclar la muestra en su recipiente con una cuchara haga difíciles de moler o (particularmente en semillas tales
mientras está en su envase, como Linum con aceite con alto índice de yodo) corran el
o colocar la abertura del envase original contra o dentro riesgo de ganar peso por la oxidación del material molido.
de la abertura de un recipiente similar y verter la semi- Se permite el corte en el caso de que la molienda no sea
lla de ida y vuelta entre los dos envases. posible. Ver 9.2.5.5 para más detalles.
Es obligatorio moler las semillas de una especie en par-
El proceso de mezclado no debe tomar más de un minuto. ticular si se indica eso en la Tabla 9A.
Tomar como mínimo tres sub-muestras con una cu- El molinillo para moler debería ajustarse de modo que
chara en diferentes posiciones y mezclarlas para formar se obtengan partículas de las dimensiones requeridas. Para
la muestra de trabajo del tamaño requerido. Para semillas aquellas especies que necesitan de una molienda fina (Ta-
enteras, la determinación debe ser llevada a cabo por du- bla 9A), al menos el 50 % del material molido debe pasar a
plicado en dos muestras de trabajo tomadas de manera través de un tamiz de alambre con 0,50 mm de malla y no
independiente. más del 10 % debe permanecer en un tamiz de alambre con
En el caso de tener que usar cortes o molienda, se debe 1,00 mm.de malla . Para aquellas especies que requieren
extraer una muestra de trabajo para cortar o moler y se de- de molienda gruesa (Tabla 9A), al menos el 50 % del ma-
ben obtener dos repeticiones del material cortado/molido. terial molido debe pasar a través de un tamiz con 4,00 mm
Para semillas grandes de árboles y semillas de arbustos de malla, y no más del 55 % debe pasar por un tamiz de
que tienen que cortarse (ver Tabla 9A), se puede requerir alambre con 2,00 mm de malla.
un tamaño de muestra de trabajo diferente. Para semillas El tiempo del proceso de molienda no debe exceder los
cortadas, la muestra de trabajo debe ser sufuciente como 2 minutos.
para tomar dos repeticiones de aproximadamente 5 g cada Cuando se usa un molinillo, garantizar que no haya
una, cortando al menos diez semillas intactas (ver 9.2.5.5). contaminación de una muestra a la otra.
La semilla (semilla entera, semilla cortada o material
molido) no debe ser expuesta al aire durante la reducción
de la muestra por más de 30 segundos por repetición. El 9.2.5.5 Corte
peso de la muestra de trabajo (semilla entera) o su repeti-
ción (semilla cortada o molida) depende del diámetro del Las semillas grandes de árboles (peso de mil semillas
recipiente usado: >200 g y si está indicado en la Tabla 9A), las semillas de
Diámetro >5 cm y <8 cm: 4,5 ±0,5 g árboles con cubiertas muy duras como las de las Fabaceae
Diámetro ≥8 cm: 10,0 g ±1,0 g y las semillas con alto contenido de aceite se deberían
cortar en pequeños trozos de menos de 7 mm en lugar de
molerse. El corte debe hacerse sobre una muestra de tra-
9.2.5.3 Pesaje bajo procedente de la muestra a enviar al laboratorio de
al menos diez semillas intactas para conseguir 10 g apro-
El pesaje debe estar de acuerdo con 3.5.1 y debe hacerse en ximadamente (dos repeticiones de aproximadamente 5 g
gramos con, al menos, tres cifras decimales. cada una).
Los recipientes y sus tapas se pesan antes y después La exposición a la atmósfera no debe exceder los 4
del llenado. minutos.
Si no se colocan directamente en la estufa, después del Las sub-muestras se cortan rápidamente, recombinan y
pesaje, los recipientes deben cubrirse con sus tapas para mezclan con una cuchara antes de dividirlas en dos repeti-
evitar una posible contaminación o pérdida de muestra. ciones que se colocarán en recipientes ya pesados.
Los recipientes abiertos y sus tapas se colocan rápida-
mente en una estufa mantenida a la temperatura requerida
para las especies que se están analizando (Tabla 9A). El
período de secado comienza cuando la estufa vuelve a la
temperatura requerida después de la colocación de los re-
cipientes. Al final del periodo prescripto, los recipientes
tienen sus tapas colocadas antes de dejar que se enfríen a
temperatura ambiente dentro de un desecador.
Después de enfriados, los recipientes se pesan con sus
tapas y contenidos ya secos.
El presecado es obligatorio si la especie es una para la cual a. La muestra de trabajo, tomada de acuerdo a 9.2.5.2, se
se considera que la molienda es necesaria y el contenido debe distribuir uniformemente sobre la superficie del
de humedad supera lo indicado en la Tabla 9A. Se colo- recipiente.
can dos sub-muestras en recipientes ya pesados, cada una b. Pesar el recipiente y su tapa antes y después del
pesando 25 ±1 g. Las mismas, en sus envases, se secan a llenado.
continuación a 130 °C por 5 a 10 minutos dependiendo del c. Rápidamente colocar el recipiente, en la parte superior
contenido de humedad hasta reducir el contenido de hu- o al lado de su tapa, en una estufa.
medad por debajo de lo requerido en la Tabla 9A. Luego, d. Para más datos, ver la Tabla 9A en lo que se refiere a
el material parcialmente seco se expone en el laboratorio la molienda, la temperatura y la duración para cada
durante al menos 2 horas. especie.
En el caso de las semillas muy húmedas de Zea mays e. Métodos y sus tolerancias para temperaturas y
(con un contenido de humedad superior a 25 %), las mis- duraciones:
mas se esparcen en una capa de no más de 20 mm y se Baja temperatura 103 °C (±2 °C); 17 h ±1 h
secan a 65–75 °C durante 2–5 horas dependiendo del con- Alta temperatura 130 °C (±3 °C); 1 h ±3 min,
tenido inicial de agua. En el caso de otras especies con 2 h ±6 min o 4 h ±12 min
un contenido de humedad superior a 30 %, las muestras f. El período de secado comienza en el momento en el
deberían secarse durante toda la noche en un lugar cálido. que la estufa vuelve a la temperatura requerida.
Después del presecado, las sub-muestras se vuelven g. Al finalizar el período prescripto, cubrir el recipiente
a pesar en sus recipientes para determinar la pérdida en y colocarlo en un desecador para enfriar a temperatura
peso. Inmediatamente después las dos sub-muestras par- ambiente.
cialmente secas se muelen por separado. Una muestra de h. Después de enfriar, pesar el recipiente con su tapa y
trabajo se extrae de cada sub-muestra. La extracción de la contenido.
muestra de trabajo debe hacerse de acuerdo a 9.2.5.2. La
humedad se determina según lo prescripto en 9.2.5.3.
El presecado no es obligatorio para ninguna de las se-
millas que se cortan (Tabla 9A).
El método de estufa debe usarse como se especifica para las especies en esta Tabla.
dad o menos
9.2.6 Cálculo y expresión de los tado informado es el promedio aritmético de los resultados
resultados de dos muestras de trabajo (ver 9.2.7). Para las especies
de árboles y arbustos (Tabla 9A), se ha encontrado que es
9.2.6.1 Métodos con estufa a temperatura imposible alcanzar una tolerancia de 0,2 % y se prescriben
constante tolerancias de 0,3 a 2,5 %. Las mismas están relacionadas
con el tamaño de la semilla y el contenido de humedad
Se debe calcular el contenido de humedad, como porcen- (Tabla 9B).
taje en peso, con tres cifras decimales para cada repetición Para utilizar la Tabla 9B, en la columna 1 seleccionar
por medio de la siguiente fórmula: la fila pertinente dependiendo del tamaño de la semilla. A
continuación, seleccionar la columna correcta (2, 3 o 4)
Pérdida de peso M2 – M3 dependiendo del contenido de humedad de la muestra.
× 100 = × 100
Peso inicial M2 – M1
Tabla 9B. Niveles de tolerancia para las diferencias entre
Donde las dos determinaciones por duplicado del contenido de
M1 es el peso en gramos (con tres cifras decimales como humedad de las semillas de árboles y arbustos (nivel de
mínimo) del recipiente y su tapa, significación no definido)
M2 es el peso en gramos (con tres cifras decimales como
mínimo) del recipiente, su tapa y su contenido antes Tamaño de la semilla Contenido promedio de humedad
del secado, y <12 % 12–25 % >25 %
M3 es el peso en gramos (con tres cifras decimales como 1 2 3 4
mínimo) del recipiente, su tapa y su contenido después Pequeño: Peso 1000 0,3 % 0,5 % 0,5 %
del secado. sem. <200 g
Grande: Peso 1000 0,4 % 0,8 % 2,5 %
Si se seca previamente el material, el contenido de hume- sem. ≥200 g
dad se calcula a partir de los resultados obtenidos en la
(Fuente: F. T. Bonner (1984). Tolerance limits in measurement of
primera (presecado) y segunda etapa del método. Si S1 es tree seed moisture. Seed Science and Technology, 12, 789–794
la humedad perdida en la primera etapa y S2 es la humedad [Tabla 3].)
perdida en la segunda etapa, cada una calculada como se
indicó anteriormente y expresada como porcentaje, enton- Si los resultados de las determinaciones por duplicado
ces el contenido de humedad original de la muestra calcu- están fuera de tolerancias, repetir el análisis a partir de
lada en porcentaje es: 9.2.5.2. Para los análisis repetidos, informar el resultado
de la segunda prueba si sus repeticiones están dentro de to-
S1 × S2 lerancias. Si las repeticiones de la segunda determinación
(S1 + S2) – también estuvieran fuera de tolerancias, comprobar si el
100
promedio de los dos análisis están en tolerancia (0,2 % o
Tabla 9B). Si es así, informar este promedio. Si las repeti-
9.2.6.2 Tolerancias ciones de ambas pruebas estuvieran fuera de tolerancias y
si los resultados promedios de ambos análisis también lo
La diferencia debe calcularse con tres cifras decimales están entre sí, descartar los resultados, revisar el equipo y
y luego redondearse a una cifra decimal. La diferencia el método usado por el laboratorio y empezar de nuevo.
máxima entre las dos repeticiones no debe superar 0,2 %
después de redondear de tres a una cifra decimal. En caso
contrario, repetir la determinación por duplicado. El resul-
• El armazón de los humedímetros debería ser robusto y por lo menos dos tercios de su capacidad. Si el envase está
construido de modo tal que los principales componen- muy lleno, la muestra no puede ser mezclada convenien-
tes del instrumento sean inaccesibles y estén protegi- temente. Si el envase no está lo suficientemente lleno pue-
dos contra el polvo y la humedad. de haber intercambios higrométricos entre las semillas y
el aire que está presente en el envase y esto causar una
Envases, herméticos. modificación del contenido de humedad de la muestra en
el período anterior al análisis. Los envases deberían estar
Tamices: Adecuados para las especies en cuestión y así sellados y almacenados a 5 ±2 °C. Los envases sellados
eliminar las impurezas de la muestra de control que pu- deberían ser movidos a la sala donde se encuentra el hume-
dieran interferir con la medición. dímetro por lo menos 24 horas antes de su uso para asegu-
rarse de que la temperatura de la semilla se ha equilibrado
Molinillo: Cuando el manual de instrucciones del hume- con la temperatura del equipo.
dímetro electrónico especifica molienda, se debe moler
una sub-muestra de la muestra a enviar. La finura de la 9.3.1.5.3 Muestra de trabajo obtenida de la muestra
molienda debe estar de acuerdo con el manual específi- de calibración
co del humedímetro. Si no se especificara en el manual,
debería estar de acuerdo con 9.2.5.4. Las muestras de trabajo deben extraerse después de haber-
las mezclado minuciosamente, usando uno de los siguien-
Balanza: Apropiada para la medición en cuestión (ver tes métodos:
3.5.1). o mezclar la muestra en su recipiente con una cuchara,
o colocar la abertura del envase original contra la abertu-
Ver 9.2.4 para los equipos que necesita el método de la ra de un recipiente similar y verter la semilla de ida y
estufa de referencia. vuelta entre los dos envases.
9.3.1.5 Procedimientos Cada muestra de trabajo debe ser extraída de tal manera
que la muestra no quede expuesta al ambiente durante más
9.3.1.5.1 Precauciones de 30 segundos.
Cada muestra de trabajo debe ser tomada de tal manera El resultado de un análisis de contenido de humedad debe
que la muestra no quede expuesta al ambiente durante más ser informado, en un certificado, en el espacio correspon-
de 30 segundos. diente y al 0,1 % más cercano.
También debe informarse en “Otras determinaciones”
9.3.2.4.3 Pesaje lo que se indica a continuación:
• Se debe ingresar la siguiente declaración: “Se ha usa-
El pesaje, cuando sea necesario, debe estar hecho de acuer- do un humedímetro”.
do con 3.5.1. • Si en la muestra hubieran habido semillas germinadas,
se debe ingresar la siguiente declaración: “Se han en-
9.3.2.5 Cálculo y expresión de los resultados contrado semillas germinadas en la muestra a enviar
al laboratorio para determinación de humedad”.
El contenido de humedad, como un porcentaje en peso, se • Si en la muestra estaban presentes semillas enmoheci-
debe calcular con una cifra decimal mediante la siguiente das, se debe ingresar la siguiente declaración: “Se han
fórmula (donde M1 y M2 son las lecturas de las repeticiones encontrado semillas enmohecidas en la muestra a en-
1 y 2 del humedímetro): viar al laboratorio para determinación de humedad”.
• En el caso de semillas pildoradas (ver Capítulo 11), se
(M1 + M2) debe ingresar la siguiente declaración: “Las semillas
2 de la muestra a enviar al laboratorio para la determi-
nación de humedad eran pildoradas y el contenido de
humedad informado es el promedio de las semillas y
de los materiales de cobertura”.
• Si la especie que se está analizando no está incluida
en la Tabla 9A pero sí en la Tabla 2C, el resultado
debe informarse de acuerdo con 1.5.2.22. Se debe
ingresar “N/A” para “no aplica” en el espacio del
resultado del análisis de humedad en el Certificado de
ISTA.
Tabla 9D. Límites de tolerancia para las diferencias entre Semillas brozosas
las mediciones de humedad con estufa a temperatura <10,5 1,0
constante y las mediciones con humedímetro 10,5–11,4 1,1
11,5–12,4 1,2
Mediciones con estufa Tolerancia 12,5–13,4 1,3
(promedio; %) 13,5–14,4 1,4
Semillas brozosas 14,5–15,4 1,5
<10,9 0,5 15,5–16,4 1,6
16,5–17,4 1,7
11–12,9 0,6
17,5–18,0 1,8
13–14,9 0,7
15–16,9 0,8 Semillas no brozosas
17,0–18,0 0,9 <10,7 0,8
Semillas no brozosas 10,7–11,8 0,9
11,9–13,1 1,0
<11,3 0,4
13,2–14,3 1,1
11,3–13,7 0,5
14,4–15,6 1,2
13,8–16,2 0,6
15,7–16,8 1,3
16,3–18,0 0,7
16,9–18,0 1,4