Poe 004

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

PRUEBAS BIOQUIMICAS DE IDENTIFICACION BACTERIANA BASADOS EN LA UTILIZACIÓN
DE CARBOHIDRATOS
Laboratorio 3 de Microbiología (SL11LA27) FCB -DAMyP-SL11LA27-PT-

Versión: 2.0
004- pág. 1-5 004-V2- 2024-UNAP
Iniciado por: Blga. María Elena Bendayán Acosta, Dra.
Aprobado por: Blgo. Freddy O. Espinoza Campos, Dr.
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO (POE)
CODIGO: FCB-DAMyP-SL11LA27-PT-004-V2- 2024-UNAP
NOMBRE DE LA ASIGNATURA Microbiología General

PLAN DE CÓDIGO DE LA
POE-T DURACIÓN
ESTUDIOS ASIGNATURA
004 2015 FIA 10027 2 horas
Versión Nro. Fecha de Revisión Descripción Modificación
Aprobado por: Blgo. Freddy O.
REVISIÓN Versión 2.0 8-abril-2024
Espinoza Campos, Dr.
HISTÓRICA
1 ANTECEDENTES
Este (POE) describe como llevar a cabo el procedimiento, sobre pruebas bioquímicas de
identificación bacteriana basados en la utilización de carbohidratos, aplicando las normas de
bioseguridad en el trabajo de laboratorio; como el correcto lavado de las manos, así como el
uso de materiales de protección personal: guantes, mascarillas gorro y bata.
2 COMPETENCIAS
➢ Interpreta adecuadamente las pruebas bioquímicas de identificación
bacteriana relacionadas con la utilización de carbohidratos.
3 AMBITO DE APLICACION
➢ Este POE es aplicable al laboratorio SL11LA27
4 RESPONSABILIDADES
Es responsabilidad del docente de la asignatura asegurarse que el estudiante tenga
conocimiento sobre las normas de bioseguridad y hacer cumplir las buenas prácticas de
laboratorio.
El estudiante es responsable de aplicar las buenas prácticas y las normas de bioseguridad
durante el trabajo en el laboratorio.
DE CARBOHIDRATOS

Versión: 2.0
004- pág. 1-5 004-V2- 2024-UNAP
5 FUNDAMENTO TEÓRICO
Las numerosas y variadas reacciones bioquímicas que constituyen el metabolismo
sintético y energético de los microorganismos se realizan y controlan por medio de las
enzimas.
El metabolismo de carbohidratos incluye los procesos que permiten a los
microorganismos utilizar numerosos azúcares y polisacáridos para obtener energía y
para la síntesis de componentes celulares.
En el caso de los microorganismos, la mayoría de los carbohidratos de que disponen se

encuentran en forma de polímeros, conocidos como polisacáridos (Almidón, gelatina),
los cuales para ser metabolizados por los microorganismos estos deben ser capaces de
producir ciertas enzimas extracelulares que degradarán estos polisacáridos en
sustancias más simples y que pueden ser asimilados por ellos. Por ejemplo en el caso
del Polisacárido almidón la enzima que lo degrada es la amilasa que es una enzima
extracelular, es decir, que el microorganismo lo secreta a través de la pared celular
para que degrade la sustancia compleja almidón y lo convierta en unidades que puedan
penetrar a la célula con facilidad.
Una identificación bacteriana se puede realizar tras el estudio de las características

tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación
bioquímica se fundamenta en las características metabólicas específicas de cada
microorganismo, en la detección de la actividad de ciertas enzimas, etc.
Al igual que la mayoría de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el
ambiente que les rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando
al medio sustancias de desechos, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo
bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende
del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. Por ello, la
caracterización de dichas enzimas es una herramienta útil para la identificación y
clasificación de las bacterias
6 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a. Materiales Reactivos Equipos Material de apoyo
➢ Asa ➢ Solución de ➢ Estufa- ➢ Cepas
Lugol.
bacteriológica en incubadora bacterianas
argolla y en ➢ Reactivo de a 37°C.
Barrit.
punta
DE CARBOHIDRATOS

Versión: 2.0
004- pág. 1-5 004-V2- 2024-UNAP
➢ Tubos con agar

TSI.
➢ Placas con
agar
almidón.
➢ Tubos con
caldo
glucosado
➢ Mechero de
alcohol.
➢ Marcador de
vidrio.
➢ Encendedor
b. Desarrollo del procedimiento
➢ Acción sobre la glucosa, la lactosa y sacarosa.
• Sembrar en medio sólido de TSI por picadura en la parte inferior del medio y
por estría en la parte superficial o plano inclinado de medio con cada uno de los
microorganismos proporcionados:
Proteus vulgaris
Escherichia coli
• Incubar todos los tubos a 37 ºC x 24 horas.
• Después del período de incubación, comparar cada uno de los tubos incubados
con los tubos de control.
➢ Hidrólisis del almidón.
• Con la ayuda de un lápiz marcador dividir en dos partes por fuera de la base de
la placa de petri y sembrar por estría en una parte, Bacillus cereus y en la otra
Escherichia coli.
• Luego llevar a incubar las placas de petri a 37 ºC x 24 horas.
• Al día siguiente inundar la superficie del cultivo con solución de lugol.

DE CARBOHIDRATOS

Versión: 2.0
004- pág. 1-5 004-V2- 2024-UNAP
➢ Producción del Acetil Metil Carbinol (V.P.) y prueba de Acidez (R.M.)
• Inocular las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae en tubos que

contengan caldo glucosado con fosfato dipotásico.
• Llevar a incubar a 37 ºC x 2 a 7 días.
• Transcurrido el período de incubación, hacer la lectura de la siguiente manera:
Para leer V.P. agregar 0.6 ml. de la solución alcohólica de alfa naftol al 5% ó 6%
l por ml. de cultivo y 0.2 a 0.5 ml. de KOH al 40%. Luego se agita el tubo.
• Para leer Rojo de Metilo (R.M.) agregar 2 ó 3 gotas de Rojo de Metilo al 1%.
c. Cálculos y Resultados
➢ Acción sobre la glucosa, la lactosa y sacarosa.
Anotar los resultados en la forma siguiente: K = alcalino; A = ácido; AG = ácido y gas;
O = carbohidratos no fermentados.
➢ Hidrólisis del almidón.
El yodo que contiene el lugol en presencia de almidón forma un complejo de color
azulado; en ausencia del almidón el color azul no se produce. En ausencia de almidón,
la prueba será hidrólisis positiva.
➢ Producción del Acetil Metil Carbinol (V.P.)
El desarrollo de una coloración rosada o roja generalmente a los 5 minutos, nos indica
que la prueba de acetil metil carbinol es positiva.
➢ y prueba de Acidez (R.M.)
La reacción positiva muestra un color rojo. La reacción negativa muestra un color
amarillo.
d Limitación del procedimiento

NO APLICA
7 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
NO APLICA
8 ANEXOS
FLUJOGRAMA
NO APLICA
9 MECANISMOS DE EVALUAIÓN
Cuestionario 5 %
DE CARBOHIDRATOS

Versión: 2.0
004- pág. 1-5 004-V2- 2024-UNAP
10 MEDIDAS DE SEGURIDAD
Se aplica todo lo contemplado en el POE 001-V1-2018-UNAP de medidas de bioseguridad de

los laboratorios de la FCB.
11 DISPOSICIÓN DE DESECHOS BIOLOGICOS Y QUIMICOS
Se aplica todo lo contemplado en el POE 002-V1-2018-UNAP de manejo de residuos biológicos

y químicos en los laboratorios de la FCB.
12 REFERENCIAS
1. BOTERO, O. J.M.; TORO, C.D.C.; CASTAÑO, Z. J. 2011. Manual Práctico de

Microbiología General. 1era. Edic. Edit. Universidad de Calda. Colombia.
2. WORLD HEALTH ORGANIZATION.2008. Good Laboratory Practice
. (GLP).Trainer Manual. 2da. Edic. Edit. WHO

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En el caso de los microorganismos, la mayoría de los carbohidratos de que disponen se

Una identificación bacteriana se puede realizar tras el estudio de las características

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➢ Tubos con agar

➢ Acción sobre la glucosa, la lactosa y sacarosa.

• Incubar todos los tubos a 37 ºC x 24 horas.

➢ Hidrólisis del almidón.

• Luego llevar a incubar las placas de petri a 37 ºC x 24 horas.

• Al día siguiente inundar la superficie del cultivo con solución de lugol.

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➢ Producción del Acetil Metil Carbinol (V.P.) y prueba de Acidez (R.M.)

• Inocular las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae en tubos que

d Limitación del procedimiento

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