Manual de

Técnicas de
Inmunohematología
QC Ana Laura Gorostieta Herrera " QBP Ma. Luisa Tavira Mendoza
QFB Leonor Portillo López " QFB Rocío Castillo Triguer
VAZ&E2

tON
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

1. Técnicas para ladeterminación

de grupos sanguíneos AB0 y Rh
Determinación de grupo sanguíneo técnica en tubo 1
Interpretación de grupos sanguíneos técnica en tubo. 2
Determinación de grupo sanguíneo
en tarjetaDGGel ABO/Rh (2D) 3

ndic
Interpretación de grupos sanguíneos
en tarjeta DGGel ABO/Rh (2D) 4
Determinación de grupo sanguíneo neonatal
en tarjeta DGGel Newborn.5
Determinación de grupo sanguíneo
en tarjeta DGGel Confirm 6
Gráfica de tarjetas DGGel7
Determinación de lectinas anti-Aly anti-H 8
Determinación del antígeno D débil en tubo 9
Determinación del antígeno D débil en Tarjeta DGGel Coombs 10
Determinación de fenotipo Rh en tarjeta DGGel Rh pheno 11
2. Técnicas para la determinación
de pruebas de compatibilidad sanguínea
12 Pruebas de compatibilidad sanguínea en tubo
13 Pruebas de compatibilidad sanguínea en tubo técnica salina
14 Pruebas de compatibilidad sanguínea
en tubo técnica albúmina
15 Pruebas de compatibilidad sanguínea
en tubo técnica LISS (LO-\ON)
16 Pruebas de compatibilidad sanguínea
en tarjeta DGGel Coombs

"NOTA:Revisar y apegarse a las instrucciones de los insertos de los reactivos utilizados en su laboratorio.
CONTENIDO

3. Técnicas para determinación de

rastreoe identificación de anticuerpos irregulares
Rastreo de anticuerpos irregulares en tubo técnica salina l/
Rastreo de anticuerpos irregulares en tubo técnica albúmina l8
Rastreo de anticuerpos irregulares
en tubo técnica LISS (LO-ION) 19
Rastreo de anticuerpos irregulares en tarjeta DGGel Coombs20
ldentificación de anticuerpos irregulares
en tubo técnica salina 21
ldentificación de anticuerpos irregulares
en tubo técnica albúmina22
Identificación de anticuerpos irregulares
en tubo técnica LISS (LO-ION)23
ldentificación de anticuerpos irregulares
en tarjeta DGGel Coombs24
4. Técnicas para determinación de Antiglobulina directa
25 Prueba de antiglobulina directa técnica en tubo
26 Titulación de la pruebade antiglobulina directa en tubo
27 Prueba de antiglobulina directa en Tarjeta DGGel Coombs
28Prueba de antiglobulina directa en Tarjeta DGGel DCSCan
5. Técnicas de elución y adsorción
ELU-KIT II. Elución ácida para estudio de anticuerpos 29
EGA-KIT. Elución ácida para estudio de antígenos 30
Elución de anticuerpos por calor y con cloroformo 31
Aloadsorción 32
Autoadsorción 33

"NOTA;Revisar y apegarse a las instrucciones de los insertos de los reactivos utilizados en su laboratorio.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

6. Técnicas para el control

de calidad en inmunohematología
Avidez 34
Especificidad 35

indice
Titulación 36
Título y Potencia 37
Evaluación fisica en tarjetas de DGGel 38
Especificidad en tarjetas DGGel Coombs 39
Especificidad en tarjetas DGGel ABORh (2D)
Especificidad en tarjetas DGGel Newborn 40
Especificidad en tarjetas DGGel Confirm
Especificidad en tarjetas DGGel Rh Pheno 41
Controlde calidad de eritrocitos de panel y semipanel
7. Lavado de material de vidrio y su controlde calidad
42 Lavado de material de vidrio
43 Control de calidad de material de vidrio
44 Control de calidad de material de vidrio. Falsos negativos
45 Control de calidad de material de vidrio. Falsos positivos

"NOTA: Revisar y apegarse a las instrucciones de los insertos de los reactivos utilizados en su laboratorio.
Manual de Técnicas de lnmunohematología LICON

Determinación de Grupo Sanguíneo

Técnica en Tubo
Grupo directo Rh
Grupo Inverso

EAnti-BEAnt-A6 A,A. R
Eritrocitos h-H
Ontro
2-4% SSI DeI120

2 3 4 5 6 7 8 10
Anti-A Anti-B Anti-AB AT Anti-D Control Cel A1 Cel A2 Cel B Cel O

Suero

GAgregar 1gotadel antisuero correspondiente (Tubos 1al 5)

Agregar una gota de control (Tubo 6)
"Agregar 1gota de eritrocitos del 2-4% (Tubo 1al 6)
Agregar 1gota de eritrocitos conocidos (Tubo 7al 10)
"Agregar 2 gotas de suero (Tubo 7 al 10)
Mezclar y centrifugar todos los tubos 15 seg a 3400 rpm
cLeer los tubos uno auno
Registrar el resultado por grados de aglutinación

1.
1. Técnicas para la Determinacion de Grupos Sanguíneos ABO y Rh

Interpretación de
Grupos Sanguíneos Técnica Tubo
GRUPO DIRECTO Rh GRUPO INVERSO INTERPRETACIÓN
ANTISUEROS CÉLULAS GRUPO
Anti-A Anti-B Anti-AB AT Anti-D Control A1 A2

A POSITIVO

A NEGATIVO

B POSITIVO

B NEGATIVO

AB POSITIVO

AB NEGATIVO

OPOSITIVO

O NEGATIVO

2.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Determinación de Grupo Sanguíneo

Tarjeta DGGelABO/Rh (2D)
Grupo Directo Grupo Inverso
10 ul de eritrocitos 50 ul de eritrocitos A1yB
al 5% en DG Gel Sol + 50 ul de suero o plasma

Eritrocitos al 5%
500ul de DG Gel Sol
|A, B
25 ul de eritrocitos
A B AB D D Ctl. NAL Nrs

J021546 Diagnostic Grifols, S.A.

Centrifugar
9 min 990 rpm

0900

2. Hamóisis
Hemols
Leer el resultaado
Hemose

Interpretar el resultado

3.
1. Técnicas parala Determinacion deGrupos Sanguíneos ABOyRh

Interpretación de Grupo Sanguíneo

Tarjeta DGGel ABO/Rh (2D)

AB C AB D D Ct Na N A AB D D Ctl. Na Ns A B AB D D N N

Dinacdic Brtois, SA Diagnostic Gritols, SA S71546 Diagnostic Gritols, S.A Diagpestie Gritas, SA

O Positivo ONegativo APositivo A Negativo

O+ A+ A

A AB DDP C. A AB D N A B AB D D Na N A AB DD cu. N N

Dlagnostic Grtols, $A Dlaynostic Gritols, SA: Diagnostic Gritals, SA

B PositiVo BNegativo AB Positivo AB Negativo

B+ B AB+ AB
4.
 Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Determinación de Grupo Sanguíneo

Neonatal Tarjeta DGGel Newborn
Coombs Directo
Grupo Directo

Eritrocitos al 1%
500 ul de DG Gel Sol

5 ul de eritrocitos
previamente lavados B AB D DCtl, IgG AHG
ABO3 RHI RHI
ABO1- ABO2

3028408
Diagnostic Grifols, SA.
Centrifugar
9 min 990 rpm
50ul de eritrocitos
al 1% en todos los pocillos

0900

1. Hemoliss DP Leer el resultado

Hemolysis
Herndlze

Interpretar el resultado

5.
1. Técnicas para la Determinación de Grupos Sanguíneos ABO y Rh

Determinación de Grupo Sanguíneo

Tarjeta DGGelConfirm
10 ulde eritrocitos al 5%

Eritrocitos al 5%
500 ul de DG Gel Sol

25 ulde eritrocitos

A B D Ctl. D Ctl.

Diagnostic Grifols, S.A.

3021746 Centrifugar
9 min 990 rpm

0900

Hemolis1s
Leer el resultado
Hemohsr
Humotse

Interpretar el resultado

6.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Gráficas Tarjetas DGGel

SUSPENSIÓN SUSPENSIÓN SUERO Y/O TIEMPO DE
TARJETA DETERMINACIÓN PLASMA CENTRIFUGACIÓN
DE ERITROCITOS DE ERITROCITOS (l)

GRUPO HEMÁTICO
50% ul 9 min
5% 10% pl
GRUPO SÉRICO

DG Gel ABO Rh (2D)

5% 10% pl 9 min
GRUPO HEMÁTICO

DG Gel Confirm

GRUPO HEMÁTICO

1% 50% ul 9 min
COOMBS DIRECTO

DG Gel Newborn

FENOTIPO RH 5% 10% ul 9min

DG Gel RH Pheno

7.
1. Técnicas para laDeterminación de Grupos Sanguíneos ABO yRh
Determinación de Lectinas Anti-A1 y Anti-H
Técnica en Tubo

Agregar l gota de
Anti-A Lectina

4 Lect

Leer e interpretar
el resultado
Centrifugar 15 seg
3400 rpm
Agregar 1gota
de suspensión
de eritrocitos

Suspensión
de eritrocitos
del 3-4% Agregar 2 gotas
de Anti-H Lectina

AntiH

Centrifugar 15 seg Leer e interpretar

el resultado
3400 rpm
Agregar 1gota Mezclar e incubar
5 minutos
de suspensión
de eritrocitos a temperatura ambiente
8.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Determinación del Antígeno D débil

Técnica en Tubo

EAnti-0
Cotrel Incubar 15 min
a 37° C 1 2
Centrifugar 15 seg
3400 rpm y leer

1gota de eritrocitos Lavar3 veces con SS/

(2-4% SSI) a cada tubo
1gota de anti-D tubo 1
1gota de control tubo 2

Sila lectura
es negativa
Checkcell
Anti-lgG,-C3d
Centrifugar 15 seg VD
Centrifugar 15 seg orspstl

3400 rpm y leer 3400 rpm y leer ND 2

Adicionar 1gotas de Adicionar l o2 gotas de AGH

eritrocitos sensibilizados

9.
1. Técnicas para la Determinación de Grupos Sanguíneos ABO y Rh

Determinación del AntígenoD débil

Tarjeta DGGel Coombs

Eritrocitos al 1%
500 ulde DG Gel Sol

5 ulde eritrocitos
DCH HGAMGAGAS

Diagnostic Grifols, S.A. Incubar 15 min a 37°C

Agrega 50 pl de suspensión de
eritrocitos a cada columna.
Ant-D
Agrega 25 ul de anti-D y 25 ul de h-Hr,
Ontro

control a lacolumna correspondiente

3+
Heralrs:$
Hemas's
Hamolse Leer el resultado
Centrifugar 9 min
Interpretar el resultado 990 rpm

10.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Determinación de Fenotipo Rh
Tarjeta DGGel Rh Pheno
10 ul de eritrocitos al 5%

Eritrocitos al 5%
500 ul de DG Gel Sol

25 ul de eritrocitos

Diagnostic Gritok, SA

0900

Centrifugar 9 min
990 rpm

Leer el resultado
Interpretar el resultado

11.
2. Técnicas para la DeterminaciÏn de Pruebas de Compatibilidad Sanguinea

Pruebas de Compatibilidad Sanguínea

PC MAYOR PCmenor Autotestigo
MUESTRA (PCM) (PCm) (AT)
En un tubo adicionar En un tubo adicionar En un tubo adicionar

Eritrocitos
del receptor 2-4% 1gota 1gota

Suero o plasma 2 gotas 2gotas

del receptor

Eritrocitos 1gota
del donador 2-4%

Plasma
del donador 2gotas

12.
 Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Pruebasde Compatibilidad Sanguínea en Tubo

Técnica Salina
Incubar Centrifugar
Centrifugar 15 seg 3400 rpm
75 seg3400 rpm 60 min a37°C

Leer y registrar
elresultado Si las lecturas son
menores a 2+ onegativas
PCM PCm AT

Lavar 3 veces
Con SSI

Centrifugar
Checkcell
15 seg 3400rpm
Aat-gG,-C
Leer y registrar el
resultado y si la
lectura es negativa
Adicionar l gota de eritrocitos Adicionar 1 ó 2gotas de AGH
sensibilizados

13.
2. Técnicas para la Determinación de Pruebas de Compatibilidad Sanguínea

Pruebas de Compatibilidad Sanguínea en Tubo

Técnica Albúmina
PCM PCm AT

Centrifugar Incubar Centrifugar

15 seg 3400 rpm S0-60min a 37°C 15 seg 3400rpm
Leer y registrar
el resultado
Si las lecturas son menores
Agregar 2 gotas a 2+ o negativas
de albúmina al 22%

,Lavar 3 veces Con SSI

Centrifugar
15 seg 3400 rpm
Checkrel

Leer y registrar el
resultado y si la
lectura es negativa
Adicionar 1gota Adicionar 1 ó2 gotas de AGH
de eritrocitos sensibilizados

14.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Pruebas de Compatibilidad Sanguíneaen Tubo

Técnica LISS(L0-1ON)
PCM PCm AT

Incubar Centrifugar
Centrifugar 15 seg 3400rpm
15 seg 3400 rpm 70 min a 370
Leer y registrar
el resultado Si las lecturas son menores
a 2+ o negativas
Agregar 2 gotas
de LISS (LO-ION)

Lavar 3 veces Con SSI

Centrifugar
15 seg 3400 rpm
Checkcel!
aed Poolos Red D Leer y registrar el
gtatbulin Cart

VD) resultado y si la
lectura es negativa Adicionar 1 ó2 gotas de AGH
Adicionar 1gota
de eritrocitos sensibilizados

15.
2. Técnicas para la Determinación de Pruebas de Compatibilidad Sanguínea

Pruebas de Compatibilidad Sanguínea

en Tarjeta DGGel Coombs
PCM: 50 ul de suspensión al 1% de eritrocitos del donador +25 ul suero o plasma del receptor
PCm: 50 pl de suspensión al 19% de eritrocitos del receptor +25 ul plasma del donador
AT: 50 ul de suspensión de eritrocitos del receptor +25 ul suero o plasma del receptor

Eritrocitos al 1%
500 ul de DGGel Sol

5 ul de eritrocitos

Plasma
y/o
(Suero
Receptor Q
PCM PCm AT
Donador
Plasma Incubar 15 min a 37°C
)tos
A%
y/o 3NZ0743 Diagnostic Gritols, S.A.
(Suero

Hendiss DP
HemyaS
Hamdeue

Leer e interpretar Centrifugar 9 min

el resultado
Incompatible Compatible 990rpm

16.
 Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON
2gotas 1gota
de suero o de eritrocitos
plasma 2-4%

Rastreo de
Anticuerpos Irregulares
7gota
de panoscreen de Técnicaen Salina
cada fasco de células I III AT
en el tubo
correspondiente

Mezclar todos Incubar 37° C

Mezclar todos
los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpmy 2
Incubar 22° C
30 min
-3: los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
4 50-60 min

leer *leer

Lavar 3 Silas lecturas Mezclar todos

8
Adicionar
2 gotas
de AGH
7 veces
Con SS/ 6 Son menores a 2+
o Negativas
+5 los15 segtubos,3400centrifugar
rpm y
leer

Mezclar todos Agregar Mezclar todos

9 los tubos, centrifugar

15 seg 3400 rpm y
-10 1gota
de eritrocitos
sensibilizados
11 los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpm y
"leer
*leer
Si los resultados son negativos
*Leer los tubos uno por uno y registrar el resultado con grados de aglutinación.
17.
 3. Técnicas para la Determinación de Rastreo e ldentificación de Anticuerpos Irregularec
2 gotas 1gota
de suero o de eritrocitos
plasma 2-4%

Rastreo de
Anticuerpos Irregulares
1gota
de panoscreen de cada Técnica en Albúmina
frasco de células en el II III AT
tubo correspondiente + 2
gotas de albúmina 22%

Mezclar todos Incubar 37° C Mezclar todos

los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
"leer
2 30-60min
-3 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer

Adicionar Lavar 3 Si las lecturas

2 gotas
de AGH
5 veces
Con SS/
menores a 2+
o Negativas

Mezclar todos Agregar Mezclar todos

7 los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpmy leer
Si los resultados
8 1gota
de eritrocitos 9 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
sensibilizados *leer
son negativos
*Leer los tubos uno por uno y registrar el resultado con grados de aglutinación.
18.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON
2 gotas 1gota
de suero o de eritrocitos
plasma 2-4%

Rastreo de
Anticuerpos Irregulares
1gota
de panoscreen de cada
frasco de células en el II III AT
Técnicaen LISS
tubo correspondiente + 2
gotas de LISS (LO-ION) (LO-ION)

Mezclar todos Incubar 37° C Mezclar todos

los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpmy 2 10 min
3 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpmy
*leer
*leer

Adicionar Lavar3 Silas lecturas

6 2 gotas
de AGH
5 veces
Con SS/ 4 Sonmenoresa 2+
oNegativas

Mezclar todos Agregar Mezclar todos

los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpmy
8 7gota
de eritrocitos
sensibilizados
9 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer *leer
Si los resultados son negativos
Leer los tubos uno por uno y registrar el resultado con grados de aglutinación.
19.
3. Técnicas para la Determinación de Rastreo e ldentificación de Anticuerpos Irregulares

Rastreo de Anticuerpos Irregulares

Tarjeta DGGel Coombs
1
Eritrocitos
al 1%

Suero o
Plasma

15001SD0

AT
Incubar 15 min a 37°C
Eritrocitos al 1%
Diagnostic Grifols, S.A.
500ul de DGGel Sol

5 ul de eritrocitos 1. Agregar 1gota (50 u) de eritrocitos de Serascan Diana 2 en la columna correspondiente.

2. Para el autocontrol agregar 50ul de eritrocitos del receptoro donador al 1%.
3. Adicionar 25 pl de suero o plasma en las 3 columnas.

0900

Hemolisis
Hemchsis
Hernóllse

Centrifugar 9 min
Leer e interpretar los resultados 990 rpm
20.
 Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON
Identificación
1gota
de Anticuerpos
2 gotas
de suero o plasma
de eritrocitos
2-4%
Irregulares
acada tubo

Técnica Salina
9 10 11 12 13 14 15 16 AT

Incubar
Mezclar todos

1gota de eritrocitos de Panocell de cada frasco en el tubo correspondiente.

los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpm y
-2 22° C
30 min

*leer

Mezclar todos Incubar Mezclar todos

9 10!
5 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y 4 37° C
50-60 min 3 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpmy
*leer
*/eer

Lavar 3 Adicionar
Silas lecturas
6 SOn menoreS
a 2+ o Negativas
-7 veces
ConSSI -8 2gotas
de AGH

Agregar Mezclar todos Mezclar todos

11: 1gota
de eritrocitos
sensibilizados
-10 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
"leer
los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpmy
*leer
Si los resultados son negativos
*Leer los tubos uno por uno y registrar el resultado con grados de aglutinación.
21.
3. Técnicas para la Determinación de Rastreo e ldentificación de Anticuerpos Irregulares

Identificación
2gotas 1gota de Anticuerpos
de suero o plasma de eritrocitos
acada tubo 2-4% Irregulares
Técnica Albúmina
1 2 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 AT

Mezclar todos Incubar

1gotade eritrocitos de Panocell de cada frasco en el tubo

los tubos, centrifugar +
15 seg 3400rpm y 2 37° C
30-60 min
correspondiente +2 gotas de albúmina al 22% "leer

Lavar 3 Si las lecturas Mezclar todos

12E
5 veces
Con SS/
menores
a 2+ oNegativas 3 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpmy
*leer

Adicionar Mezclar todos

6 2 gotas
de AGH
7 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer
Si los resultados son negativos

Mezclar todos
Agregar

9 los tubos, centrifugar

15 seg 3400rpm y
8 1gota
de eritrocitos
sensibilizados
*leer
*Leer los tubos uno por uno y registrar el resultado con grados de aglutinación.
22.
 Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON
Identificación
1gota
de Anticuerpos
2 gotas
de suero oplasma
de eritrocitos
2-4%
Irregulares
acada tubo

Técnica LISS (LO-1ON)

2 9 10 11 12 13 14 |15

Mezclar todos Incubar

1gota de eritrocitos de Panocell de cada frasco en el tubo

los tubos, centrifugar
15 seg 3400rpm y
-2 37° C
10 min

correspondiente +2 gotas de L/SS (LO-/ON) *leer

Lavar 3 Si las lecturas Mezclar todos

5 veces
Con SS/
4 Son menores
a 2+ o Negativas -3 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer

Mezclar todos
Adicionar

6 2 gotas
de AGH
7 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer
Si los resultados son negativos

Mezclar todos Agregar

9 los tubos, centrifugar
15 seg 3400 rpm y
*leer
8 1gota
de eritrocitos
sensibilizados

*Leer los tubos uno por unoy registrar el resultado congrados de aglutinacÍón.
23.
 3. Técnicas para la Determinación de Rastreo e ldentificación de Anticuerpos Irregulares

Identificación de Anticuerpos Irregulares

Tarjeta DGGel Coombs
ra Diaea
Ara Dand
Eritrocitos al 19% del
receptor o donador

Suero o Plasma

1 2 3 4 5678: 9: 10: AT

Eritrocitos 1%
Diagnostic Grifols, S.A. Diagnostic Grifols, SA.
500 ul DG Gel Sol 029
3020293

5 ul eritrocitos
1.Agregar l gota (50 l) de eritrocitos de panel 11 ldentisera en la columna correspondiente.
2. Para el autocontrolagregar 50 ul de eritrocitos del receptor odonador al 1%.
3. Adicionar 25 ulde suero o plasma en las 12 columnas.

0900

Incubar 15 min a 37°C

Centrifugar 9 min
990 rpm
24.
 Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Prueba de Antiglobulina Directa

Técnica en Tubo

cerCy

Muestra anticoagulada Lavar3 veces Preparar suspensión Transferir 1gota

Con EDTA Con SS/ de eritrocitos al 3-4% en un tubo

Centrifugar
15 seg 3400 pm

Leer y registrar
Adicionar el resultado
7gota de células y si es negativo
sensibilizadas
Adicionar 1-2
gotas de AGH

25.
4. Técnicas para la Determinación de Antiglobulina Directa
Titulaciónde la Prueba de Antiglobulina Directa
Realizar diluciones seriadas del antisuerocon SSI

SP* 1:2 7:4 7:8 1:16 7:32 1:64 7:128 7:256 1:512

50 uldel reactivo diluido

Mezclary Centrifugar
50 ul de eritrocitos (2-5%) 30 seg 3400 rpm

( (
Leer y registrar resultados

SP* Suero Puro

26.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Prueba de Antiglobulina Directa

Tarjeta DGGel Coombs
50 ulde eritrocitos
500 ul de DG Gel Sol al 1% del paciente
+5 ul de eritrocitos

CDANG

Preparar dilución de
Muestra anticoagulada Lavar3 veces 3020793 Oiagnostic Grifols, SA.
eritrocitos al 1% con
ConEDTA Con SS/ DGGel Sol

0900

Hetuss DE
2.
Hernc,s
herdsé

Leer e interpretar
el resultado
Centrifugar
9min 990 rpm

27.
4. Técnicas para la Determinación de Antiglobulina Directa

Prueba de Antiglobulina Directa

Tarjeta DGGelDCScan
50ul de eritrocitos
500ul de DG Gel Sol al 1% del paciente
+5 ulde eritrocitos

AHG gG C3d Ct AHG IgG C3d Ctl.

Preparar dilución de
Muestra anticoagulada Lavar 3 veces eritrocitos al 1% Con
Con EDTA Diagnostic Gritols, S.A.
Con SS/ DGGel Sol

34 Hemdliss
Hemolysis
Harndlise

Leer e interpretar
el resultado
Centrifugar
9 min 990rpm

28.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Colocar 1ml
de eritrocitos Rutteries

Len
en un tubo oe 12x75 Euting Solution

Lavar los Añadir 20

Colocar el Añadir 15
eritrocitos gotas de sol sobrenadante gotas de
Elución.
Con en un tubo buffer de
solución Mezclar 4 veces
limpio fosfatos
de lavado y centrifugar y mezclar
4 veces 45 seg

Centrifugar y
transferir aun
tubo limpio
ELU-KIT II SE RAUZA PaNE!

Elución Ácida para Estudio de Anticuerpos

Prueba ade Antiglobulina Modificada
AHG

Lavar 1 gota Lavar1vez Dispensar 2

de células de Añadir
-15 Con 5 a 10 go gotas de suerO
panel y 2 gotas tas de solución de Coombs,
decantar para de
eluido de lavado y mezclar,
obtener un
botón seco decantar para centrifugar
Incubar 10 min obtener un y leer
a37C boton seco

29.
5. Técnicas de Elución y Adsorción

Centrifugar 1 miny
retirar el sobrante

En otro tubo
Lavar los Añadir 30 gotas añadir 4
eritrocitos y de la suspensión gotas de sol 1
diluir del 3-5% de eritrocitos en
Con SSI un tubo limpio 16 gotas de sol 2

EGA-KIT
Añadir esta
Elución ácida mezcla a la
Suspensión
( de eritrocitos
para estudio de antígenos
Desechar el Inmediatamente
Resuspender O
del 3-59%. Realizar sobrenadante y añadir 4 gotas de
solución 3. Mezclar
el Coombs resuspender con -15
directo. Si la SS. Lavar 3 veces por inversión y
prueba es positiva si los eritrocitos centrifugar 30 seg.
se puede dar un nopresentan color
tratamiento más. marrón.
Incubar atemperatura
ambiente un tiempo
máximo de 2min

30.
Manual de Técnicas de Inmunohematologia LICON

Elución de Anticuerpos por calor

Solución
de albúmina Centrifugar 2 min,
al 6% con Colocar vv regresar el tubo Con el eluido
$SI la solución Incubar a56°C
por 10min, a 56°Cy separar realizar pruebas
anterior con 500 ul elsobrenadante.
agitando cruzadas o panel
eritrocitos lavados Recentrifugar y
vigorosamente de anticuerpos
(tubo 13x100) decantar en tubo
cada 2 min irregulares
limpio

Elución de Anticuerpos concloroformo

Solución
de albúmina Incubara56°C Centrifugar
al 6% Con por 5 min, 2 min y
SSI mezclando con decantar
aplicador en otro tubo
El eluido estálisto
Colocar v/v 1. Tapar con Centrifugar 5 min, para realizar
la solución pruebas cruzadas
anterior con eritrocitos
un tapón de Con pipeta
cauchoy mezclar pasteur retirar oidentificación
lavados (tubo 13x100), elsobrenadante
vigorosamente 15 seg de anticuerpos
añadir un vol.
2. Mezclar por y transferirlo irregulares
equivalente
de cloroformo
inversión 1min a tubo 12x75
y destapar

31.
5. Técnicas de Elución y Adsorción

Aloadsorción

+ Centrifugar 2 min

0.5 ml de suero 0.5 ml de eritrocitos Incubar 45 a60min

Conmezcla de fenotipo conocido a37°C
de aloanticuerpos

Separar suero Alas células realizar

elución para estudiar
adsorto en un tubo
+ anticuerpos

32.
Manual de Técnicas de lnmunohematología LICON
Muestra
del paciente

Autoadsorción
Realizar Elución
para estudiar
+
antígenos

0.5 ml. de 0.5 ml. de suero

eritrocitos del paciente con
0.5 ml. de eritrocitos del mezcla de alo +
tratados
paciente con CD positivo autoanticuerpos
del paciente

Separar suero
adsorto en un tubo

Centrifugar
+

Eritrocitos Suero Incubar

con Aloanticuerpos 45-60 min a 37°C
COn
autoanticuerpos

33.
 6. Técnicas para el Control de Calidad en Inmunohematología

Técnicas para el control de Calidad

de Reactivos de Inmunohematología
Avidez

Mezclar en un área
de aproximadamente
25 mm de diámetro.
Rotar la placa
de lado a lado.

Eritrocitos al 1gota de eritrocitos

+
10% (ABO)
40% (Rh) 1gota de antisuero

Nota: Tomar el tiempocon un cronómetro desde el momento de la mezcla hasta el momento de inicio de la aglutinación.

34.
Manual de Técnicas de
lnmunohematología LICON
1 Especificidad E+lgo +C3d
A Rir
B
Suspensión de
eritrocitos del2 al 5%
Reactivo
+ +
Anti-A

Anti-B

+ + +
Anti-AB

Anti-AT
Lectina

Anti-H
Lectina + +

Anti-D +

Control

Suero de Coombs
Poliespecífico +

35.
6. Técnicas para el Control de Calidad en
Inmunohematología
Titulación
Realizar diluciones seriadas de Antisuero con SsI

SP* 1:2 7:4 7:8 1:16 1:32 7:64 1:128 1:256 7:512

50ul del reactivVo diluido

Mezclary Centrifugar
50 ul de eritrocitos (2-5%) 30 seg 3400 rpm

Leer y registrar resultados

SP* SueroPuro
36.
 Manual
agiutinación
"POtenCia.demora.
Resuspender
" "
Lectura
El
1+ 2+ 3+ 4+ titulo
"NOTA: de
Aes Técnicas
de
Ver partir e/
acopea suavemente
O
recíproco
Los
Conglomerados adel
4+,
eritrocitos resultado a de
de cada de
los
Inmunohematología
Estados Ocasionalmente Grandes uno la las
Eritrocitos Con Gran ode
se definidos mayor
delas ce/ulas
mueven número
cantidad
Unidos estos Potencia
Título y
aglomerados Total aalutinaciones
dilución
dispersos pero y
exicanos. libremente. algún moderado en se bajo
de un
finos Aglutinación
les
conglomerados solo del
con asigna iluminación
lemento conglomerado aque(cçmulos suero LICON
de en
Nopueden pocos cçmulo
eritrocitos un laque
hay titulación,
valor
para de eritrocítos grande da
apropiada,
conglomerados contener pequeños
20 unade
positivos pequeño libres
numérico
(COmpulecturd
eritrocitos se
libres leer
anota
Médicos.
visibles o macroscópicamente
menos) lectUrd
Segunda
po
Fdición Sa

2011 y
Puntos
05 O8
Sin
02 10 12
 6. Técnicas parael Control de Calidad en Inmunohematología

Evaluación Física en Tarjetas DGGel

. Observar "claramente" " Se debe observar

la diferencia entre elgel elgel sin presencia
yel sobrenadante. de burbujas.

. Observar un volumen Elgel no deberá

presentar canmbios
unifornme en todos
de coloración.
los pocillos. AHG A H G H |HG
"No se deben
.No se deben observar particulas
observar gotas de gel extrañas.
en la cámara de reacción.
3020293
Diagnostic Grifols, S.A.

38.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Controlde Calidad
Control de Calidad Tarjetas DGGel
Tarjetas DGGel Coombs
ABO-Rh (2D)

A B AB D D Ctl. NA N
12 3AHG AHG |AHG AHG
1. Eritrocitos nosensibilizados
2. Eritrocitos sensibilizados (|lgG) 3021546 Diagnostic Gritols, S.A.
3. Eritrocitos sensibilizados (C3d)
3020293
Diagnostic Grifols, S.A.

Se necesitan Cuatro muestras

de grupo conocido
. Se utilizan tres pocillos
A1Positivo
A2 Positivo
Se utilizan tres células BPositivo
Conocidas ONegativo
. Se utilizan cuatro tarjetas
" Se realiza PAD a cada
unade ellas (una para cada célula conocida)
" Se realiza grupo directo e inverso
* Ver técnica en la página 27 * Ver técnica en la página 3
39.
6. Técnicas para el ontrol de Calidad en Inmunohematología

Control de Calidad Control de Calidad

Tarjetas DGGel Newborn Tarjetas DGGelConfirm

A B D Ctl. A B D Ctl.
B 4B Ctl. IgG AHG
ABO1 ABO2 ABO3 RHT RH

Diagnostic Grifols, S.A. 3021746

Diagnostic Grifols, SA.
202R40R

Se necesitan Cuatro muestras conOcidas .Se necesitan cuatro muestras

de grupo conocido
A1Positivo 1. Eritrocitos no sensibilizados A1Positivo
A2 Positivo 2. Eritrocitos sensibilizados (lgG) A2Positivo
BPositivo 3. Eritrocitos Sensibilizados (C3d) B Positivo
O
Negativo O Negativo
" Se utilizan cuatro tarjetas . Se utilizan dos tarjetas
(una para cada célula conocida) (una para cada célula conocida)

Se realiza grupo directo y prueba Se realizagrupo hemático

antiglobulina directa.
*Ver técnica en la página6
* Ver técnica en la página 5
40.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Control de Calidad
Control de Calidad
de Eritrocitos
Tarjetas DGGel Rh Pheno
de Panel y SemipanelDre
Ausenciade hemólisis, turbidez, en el
"Aspecto fisico: extrañas, formación de geles
cipitados, particulas
sobrenadante u otra anomalia

R1 R1 R2 R2 1 12516
308S276
Diagnostic Grifols, SA.

. Se necesitan dos células de

fenotipo Rh conocidas Eritrocitos Homocigotos Heterocigotos Carentes
Células RIR1 para el para el del
Suero antígeno antígeno antígeno
Células R2R2
Anti-D Positivo Positivo

. Se utilizan una tarjeta

Negativo
Anti-Fy, Positivo PostivO
Se realiza Fenotipo Rh

* Ver técnica en la página 11

41.
7. Lavado de Material de Vidrio y su Control de Calidad

Lavado de Material de Vidrio

Preparar la solución con Cepillar el instrumental (tubos de vidrio)

detergente enzimático
Con agua caliente. -2 bajo el agua para evitar salpicaduras y
formación de aerosoles. Use un cepillo suave.

5 El tubo debe ser

revisado en busca
de materia orgánica.
4 Secar e/ tubo en
horno de secado. 3
Enjuagar el tubo con abundante agua
destiladacaliente. Si esto no fuera
posible, por lo menos el último enjuague
deberá ser conagua destilada.

Sise detecta suciedad omateria

6 Usar unalupa en
una zona iluminada.
-7 orgánicaen el material, éste debe
volver al proceso de lavado

42.
Manual de Técnicas de lnmunohematología LICON
Controlde Calidad
de Material de Vidrio
/64 /128 /256
1/512
SD /2 /4 1/8 /16 /32

1. Realizar diluciones seriadas

con SSI tamponada del Suero de
Coombs poliespecifico.

2. Colocar 2 gotas de cada

dilución del suero de Coombs en
cada tubo.

3. Agregar 1gota de eritrocitos

sensibilizados.

4. Centrifugar30seg a 3400 pm.

5. Leere interpretar el resultado.

6. Eligir la dilución
con aglutinación de 2+.

43.
7Lavado de Material de Vidrio ysu Control de Calidad

Control de Calidad de Materialde Vidrio

Falsos Negativos
1. Elige unamuestra al azar de los tubos lavados para realizar el
control.

2 4 5 6 7

2+ 2. Colocar 2 gotas de la dilución 2+ en cada tubo.

3. Agregar una gota a cada tubo de eritrocitos sensibilizados
4. Centrifugar 30 seg a3400 rpm.
5. Leer e interpretar los resultados.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo Tubo 7 Tubo 8 Tubo 9

2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+

6. Si en algún tubola lectura es negativa estO seráindicativo de que el material está mal lavado.

44.
Manual de Técnicas de Inmunohematología LICON

Controlde Calidad de Material de Vidrio

Falsos Positivos

1. Elige unamuestra al azar de los tubos lavados para realizar el control.

7 2 3 4 5 6 7 9

2+ 2. Colocar 2 gotas de la dilución 2+ en cada tubo.

3. Agregar una gota a cada tubo de eritrocitos no sensibilizados
4. Centrifugar 30 seg a 3400 rpm.
5. Leer e intepretar los resultados.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7 Tubo 8 Tubo 9

6. Sien algún tubo la lectura es positivaesto será indicativo de que el material está mal lavado.
45.
BIBLIOGRAFÍA

lnsertos de reactivos de la línea GRIFOLS.

lnsertos de reactivos de la línea IMMUCOR,
Manual Técnico. 17th ed, AABB, 2012.
Sally VR. Serologic problem solving. AABB, 2005.
Sangre Humana y sus Componentes
Norma Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012, Para la Disposición de
con Fines Terapéuticos.
dispositivos médicos, México 2011.
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, suplemento para