COCOS

GRAM
POSITIVOS

Staphylococcus Streptoccocus
y
Micrococcus Enterococcus

Catalasa
B. Staphylococcus A. Streptoccocus
Micrococcus Enterococcus
(positivo) (negativo)
Tenemos la tincion de gramm que dara positivo a los
microorganismo que tengan una envoltura formada por un
90porciento de peptidoglicano , estad daran un color violeta
azulado como se ven en las fotos.

La prueba de la catalaza consiste en exponer el microorganismo

al peróxido de hidrógeno, y si este es capas de descomponerlo en
agua y oxígeno es porque es catalaza positivo osea tiene la
enzima. Se visualizara el desprendimiento de burbujas
procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.
 AGAR SANGRE Patrones
hemolíticos

BETA: Lisis total de los GAMMA: Sin lisis

glóbulos rojos
ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos y
formacion de pigmentos verdes (bili-verdina)

Bilis esculina

PYR

-
S. viridans
+
- + Enterococcus spp R
Sensibilidad
s
Optoquina
S. agalactiae (grupo B) S pyogenes (grupo Streptococuus grupo
S. grupo C,F,G A) D
S. pneumoniae
Enterocoocus spp
Solubilidad en
- bilis
+
Bacitracina SXT

s R

S pyogenes (grupo A)
• La Optoquina; Cocos Gram positivos que presentan colonias alfa hemolíticas cuando crecen en medios sólidos suplementados con
5-10 % de sangre de carnero. Se pueden diferenciar mediante la realización de pruebas bioquímicas como la prueba de sensibilidad a
la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis. La optoquina inhibe el desarrollo de Streptococcus pneumoniae mientras que otros
estreptococos no son inhibidos o presentan una zona pequeña de inhibición alrededor del disco.

• Solubilidad en bilis: Las sales de bilis, especificamente el desoxicalato y taurocolato tinene la capacidad de lisar selectivamente a
streptococcus pneumoniae, cuando una suspensión del microorganismo se agrega a una solucion de las sales. Spneumoniae produce
enzimas autoliticas que son responsables de la caracteristica umbilicada de la colonia de cultivos viejos. La adicion de sales biliares a
la suspensión de la basteria activa las autolisinas y acelera el proceso de lisis, lo cual esta asociado a la disminucion de la tencion
superficial entre el medio y la membrana celular bacteriana.

• Bilis esculina Objetivo: separar los estreptococos del grupo D y Enterococcus de los demás grupos de estreptococos. Fundamento: se
basa en la capacidad de los estreptococos del grupo D y Enterococcus para crecer en un medio de cultivo que contiene 40% de bilis y
de hidrolizar la esculina a esculetina; ésta se combina con el citrato ferroso que posee el medio, dando un complejo de color negro.
La concentración de bilis es fundamental, ya que existen estreptococos del grupo viridans que son capaces de crecer a
concentraciones menores de bilis. Procedimiento: se realiza sembrando en superficie tubos de agar bilis esculina inclinado.
Interpretación de resultados: una reacción positiva se evidencia como ennegrecimiento del medio.

• PYR : Objetivo: separar Streptococcus pyogenes y Enterococcus de los demás estreptococos. S. pyogenes y Enterococcus poseen la
capacidad de hidrolizar el substrato PYR (pirridonil ß-naftilamida) debido a que poseen la enzima l-piroglutamil aminopeptidasa En
general siempre se revelan por un cambio de color ROJO FENOL.

• Bacitracina SXT: Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolíticos (Grupo A y Grupo C)Con crecimiento alrededor del disco
de Bacitracina grupo B, Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina grupo A

*Del S. viridans todos son positivos menos el Grupo Mitis

*Sanguis, Mitis, Mutans, Slivarius, Anginosus, Bovis.
*Enterococcus puede presentar hemolisis tipo alfa, beta o gamma dependiendo de donde proviene la sangre
empleada en el medio de cultivo
 NaCL 6,5%

Test de
CAMP

+ -
S. agalactiae (grupo B) S. grupo C,F,G
Streptococcus grupo D
Enterococcus spp
+
-
Hidrolisis
del pirubato
E. faecalis
+

Telurito E. faecalis
E. faecium

- E. faecium
 Prueba de CAMP Objetivo: separar Streptococcus agalactiae de los demás estreptococos ß-
hemolíticos. Fundamento: los estreptococos del grupo B producen una proteína extracelular difusible
llamada “factor CAMP” (iniciales de los autores que lo describieron) que actúa sinérgicamente con la
ß-lisina de S. aureus, potenciando la lisis de los eritrocitos y creando la punta de flecha. Procedimiento:
se realiza estriando un cultivo del estreptococo ß-hemolítico en estudio en forma perpendicular a una
estría de un estafilococo productor de ß-lisina, en placas de agar sangre. Se incuban. Interpretación de
los resultados: la prueba positiva se evidencia por la presencia de una zona de potenciación de la
hemólisis en forma de punta de flecha en el lugar donde se contactan las dos estrías.

 Hidrolisis del pirubato: Se utiliza para detectar la hidrolisis de hipurato sodico por los estreptococos
b- hemoliticos grupo B. Cuando es hidrolizado por la enzima bacteriana hipuricasa da lugar a acido
benzoico y glicina. La prueba rapida de hipurato utiliza ninhidrina para detectar la presencia de glicina.
La ninhidrina y la glicina producen una reaccion por la cual se elimina el grupo amini y se origina agua
y amoniaco. El amoniaco atraviesa una secuencia de pasos para producir un color morado.

 Prueba de tolerancia a la sal (caldo salado) Objetivo: separar los enterococos, capaces de crecer en
caldo salado, de los demás estreptococos del grupo D. Fundamento: se basa en la capacidad de los
enterococos de crecer en una concentración de 6,5% de NaCl. Se trata de un medio de cultivo líquido
que contiene además de NaCl, glucosa y un indicador de pH: púrpura de bromocresol. Procedimiento:
se inocula el caldo salado con la cepa a estudiar y se incuba 18-24 horas a 35ºC. Interpretación de los
resultados: se considera la prueba positiva cuando aparece turbidez con o sin acidificación del medio,
que se observa como un viraje de color del púrpura al amarillo. La no aparición de turbidez indica una
prueba negativa.

 Telutiro ; Agar que contiene una concentración de NaCL y Telurito, las bacterias que resisten al NaCL
y reducir el telurito de potasio producen colonias de color negro, E. faecalis es positivo para sobrevivir
en este medio mientras E. faecium no