LINEA LIQUIDA

Bilirrubina Total
C Método DPD para la determinación de bilirrubina total
AA
en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE

La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, ALMACENAMIENTO
es captada por el hígado para su conjugación y excreción Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC)
en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido MUESTRA
es una patología provocada por incompatibilidad materno- Suero o plasma
fetal en la que se produce una destrucción excesiva de a) Recolección: obtener de la manera habitual. Proteger de
glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la la luz natural o artificial envolviendo el tubo con papel negro.
bilirrubina sérica con el consecuente riesgo de difusión del b) Aditivos: en caso de que la muestra sea plasma, debe
pigmento al sistema nervioso central produciendo toxicidad, usarse heparina o EDTA para su obtención.
por lo que la determinación de la bilirrubina en estos niños c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
recién nacidos resulta sumamente importante. interferencias por hemólisis hasta una concentración de
hemoglobina de 500 mg/dl (0,5 g/dl) ni lipemia hasta una
FUNDAMENTOS DEL METODO concentración de 500 mg/dl (5 g/l) de triglicéridos. No obs-
La bilirrubina indirecta, unida a la albúmina, es liberada por tante, muestras hiperlipémicas o con hemólisis moderada
un tensioactivo. La bilirrubina total reacciona con la sal de pueden conducir a resultados erróneos.
diclorofenildiazonio (DPD) formando un azocompuesto de Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
color rojo en solución ácida. drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
REACTIVOS PROVISTOS muestra debe ser preferentemente fresca. En caso de no
A. Reactivo A: solución acuosa conteniendo ácido clorhí- efectuarse el ensayo en el momento, la muestra puede
drico 150 mmol/l y tensioactivo. conservarse hasta 48 horas en refrigerador (2-10oC).
B. Reactivo B: solución acuosa conteniendo sal de diclo- La acción de la luz es capaz de destruir hasta un 50% de la
rofenildiazonio 1,5 mmol/l en ácido clorhídrico 150 mmol/l. bilirrubina presente en la muestra, por lo que debe protegerse
cuidadosamente.
REACTIVOS NO PROVISTOS
Calibrador A plus de Wiener lab. MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
- Espectrofotómetro
INSTRUCCIONES PARA SU USO - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
Reactivos Provistos: listos para usar. Antes de utilizar, - Cronómetro
mezclar por inversión. - Analizador automático
El Reactivo B puede presentar una ligera turbidez que no
afecta su reactividad. CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 546 nm (520 - 550 nm)
PRECAUCIONES - Temperatura de reacción: 25oC (30oC o 37oC)
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". - Tiempo de reacción: 5 minutos 30 segundos
Los reactivos son corrosivos. R34: provoca quemaduras. - Volumen de muestra: 80 ul
S24/25: evitar el contacto con los ojos y la piel. S26: en caso - Volumen final de reacción: 1,28 ml
de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundante-
mente con agua y acúdase a un médico. S28: en caso de
contacto con la piel, lávese inmediata y abundantemente PROCEDIMIENTO
con agua. S37/39: usar guantes adecuados y protección En 3 tubos marcados BR (Blanco de Reactivos), BM
para los ojos/la cara. (Blanco de Muestra/Calibrador/Control) y M (Muestra/
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales Calibrador/Control), colocar:
de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. BR BM M
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
Reactivo A 1 ml 1,2 ml 1 ml
acuerdo a la normativa local vigente.

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 PERFORMANCE
Agua destilada 80 ul - -
a) Reproducibilidad: se aplicó el protocolo EP15-A del CLSI.
Muestra - 80 ul 80 ul Se analizaron tres niveles de concentración, cada uno por
Mezclar e incubar exactamente 30 segundos. Luego cuadruplicado durante 5 días. Con los datos obtenidos, se
agregar: calcularon la precisión intraensayo y total.
Reactivo B 0,2 ml - 0,2 ml Precisión intraensayo (n = 20)

Mezclar e incubar 5 minutos. Inmediatamente después, Nivel D.S. C.V.

leer en espectrofotómetro a 546 nm (520 - 550 nm), 8,5 mg/l ± 0,28 mg/l 3,29 %
llevando a cero el aparato con el Blanco de Reactivo 46,1 mg/l ± 0,31 mg/l 0,67 %
(BR). Lectura 1 (DO1): BM (Blanco de Muestra o BC 164,5 mg/l ± 1,21 mg/l 0,74 %
(Blanco de Calibrador). Lectura 2 (DO2): M (Muestra) o Precisión total (n = 20)
C (Calibrador).
Nivel D.S. C.V.
8,5 mg/l ± 0,30 mg/l 3,53 %
46,1 mg/l ± 0,77 mg/l 1,67 %
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
164,5 mg/l ± 3,15 mg/l 1,92 %
El color de la reacción es estable durante 30 segundos, por
lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese tiempo. b) Linealidad: la reacción es lineal hasta 250 mg/l de bili-
rrubina. Para valores superiores, repetir la determinación
CALCULO DE LOS RESULTADOS empleando muestra diluida 1:2 ó 1:4 con solución fisiológica,
Bilirrubina Total (mg/l) = (DO2 M - DO1 BM) x f multiplicando el resultado obtenido por 2 ó 4 según el caso.
c) Límite de detección: depende del fotómetro empleado
donde:
y de la longitud de onda. En espectrofotómetros con cube-
X* mg/l
tas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para un ∆A de
f=
DO2 C - DO1 BC 0,001 el mínimo cambio de concentración detectable será

de 0,031 mg/dl.
(*)
concentración de bilirrubina total en el Calibrador A plus
de Wiener lab. PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
Para las instrucciones de programación consulte el manual
METODO DE CONTROL DE CALIDAD del usuario del analizador en uso. Para la calibración, debe
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad usarse Calibrador A plus de Wiener lab.
(Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas
de bilirrubina total, con cada determinación. PRESENTACION
240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
VALORES DE REFERENCIA 2 x 20 ml Reactivo B
Bilirrubina total en suero o plasma: (Cód. 1120008)
- Adultos: hasta 10 mg/l
240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
- Recién nacidos:
2 x 20 ml Reactivo B
Nacidos a término Prematuros (Cód. 1009334)
Sangre de cordón < 20 mg/l < 20 mg/l
hasta las 24 hs 14 - 87 mg/l < 80 mg/l 240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
hasta las 48 hs 34 - 115 mg/l < 120 mg/l 2 x 20 ml Reactivo B
del 3º al 5º día 15 - 120 mg/l < 160 mg/l (Cód. 1009244)
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el 240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
nivel promedio del adulto al mes del nacimiento. 2 x 20 ml Reactivo B
En los prematuros, los niveles tardan más en alcanzar la (Cód. 1009605)
normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepática.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios BIBLIOGRAFIA
valores de referencia. - Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin.
Chem. 5th Ed.: 966, 2001.
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI - Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975).
Bilirrubina (umol/l) = Bilirrubina (mg/l) x 1,71 - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 5th ed., 2000.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO - CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004.
La acción de la luz, tanto sobre las muestras como sobre - Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd
las soluciones standard, es capaz de destruir en una hora ed. (2001).
hasta el 50% de la bilirrubina presente.

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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Caústico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Wiener lab.
PM-1102-12 2000 Rosario - Argentina
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