Cours de premire anne rsidanat

2012/2013

Service de Toxicologie

Ralis par : Yamoun Assia

Plan du cours
R

I/Introduction

E
C

II/Dfinitions

E
P
T

III/Classification des rcepteurs

E
U

IV/Cycle des rcepteurs

R
S

V/Conclusion

I/Introduction
Les substances biologiquement actives agissent :
* dose trs faible

*dune manire trs slective

Existence de Sites dactions privilgis

Notion de Rcepteur

C.Bernard: le curare agit spcifiquement

sur la plaque motrice
Paul Erhlich (1854-1915) dmontrrent
lexactitude de cette ide intuitive

les substances nagissent que fixes

II/Dfinitions

Macromolcule de nature polypeptidique

Interaction spcifique avec un ligand

Conversion en un effet
Modification du fonctionnement
cellulaire
Structures+Transduction du signal

Cest quoi un rcepteur ?

II/Dfinitions

Du latin ligandum qui doit se

lier .cest toutes substances
capables de se lier une cible
molculaire (rcepteur) sans
prjuger les consquences de
cette liaison (agonisme ou
antagonisme)

Cest quoi un ligand ?

II/Dfinitions

Segment du rcepteur ou se
fixe le ligand

Ensemble des ractions qui se droulent

entre l'activation dun R et l'effet
cytoplasmique /nuclaire

Cest quoi un site de liaison ?

Transduction du signal (Couplage)

II/Dfinitions

Liaison covalente

*Entre 2 atomes/ chacun d'eux fournit

un lectron
*Liaison solide +n'est pas, ou
seulement difficilement, rversible

Types de liaison ligand-R

II/Dfinitions
Liaison non covalente

Interactions lectrostatiques
Interaction

ionique

Interaction ion- Interaction diple

- diple
diple

Types de liaison ligand-R

II/Dfinitions
Liaison non covalente

Interactions de van der Waals

*Entre 2 groupements apolaires

*Des altrations spontanes /

transitoires de la rpartition
lectronique d'une molcule
*Diples transitoires de faible
amplitude
*Liaison lectrostatique de faible force

Types de liaison ligand-R

Canaux ioniques

Pr-membranaire
Permet le passage grande vitesse d'un ou
plusieurs ions
Types de canaux ioniques
Slectivement permables
Les canaux sont des facilitateurs de diffusion
Potentiel lectrochimique de l'ion considr
Un canal ne peut pas transporter un ion contre
gradient Pompe ionique

Types de canaux ioniques

Voltage-dpendants

Leur ouverture
dpend de la
modification de
la polarit
membranaire

Chimio-dpendants

Classe des R
ionotropes qui
s'ouvrent en
prsence
d'un ligand

III/Classification des rcepteurs

Les rcepteurs
membranaires

les Rcanaux

(Type I)

Les rcepteurs
intracellulaires(IV)

Les R coupls la
protine G(Type II)

Les R enzymes
(Type III)

1*Les rcepteurs canaux (Type I)

Rec ionotropes
Localisation: face externe de la mb cellulaire
Couplage: direct un canal ionique
Permet le passage des ions
R neurotransmetteurs rapides
Caractristique gnrale: rponse instantane
+ courte dure
Les rcepteurs nicotiniques de ACH( cationiques)
Les rcepteur A du GABA (anioniques)

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

Localiss au niveau du SNC/ synapse

ganglionnaire / plaque motrice

5 sous-units protiques
4 domaines transmembranaires/U

Rcepteurs ganglionnaires nicotiniques:

sous-units et ( 23)

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

Fonctionnement
physiologique

Fixation simultane de 2 ACh sur les 2 S/U

Ouverture d'un canal ionique/entre de Na+
Sortie de K+
Dpolarisation membranaire //PA
Propagation de PA nerf /nerf ///nerf / organe
effecteur

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

Myorelaxants bloquent ces rcepteurs

Ex: D-tubocuranine

La nicotine imite laction de lACH en se

fixant sur Rec nicotinique

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

Nicotine

Conditions physiologiques : aprs ouverture du canal Na+ / liaison

ACH *etat dsensibilis (rfractaire) avant de revenir au stade de repos

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

Nicotine
Conditions tabagiques : la nicotine remplace lAch et le rcepteur
reste rfractaire une plus longue priode

A*Les rcepteurs nicotiniques de ACH

La varnicline CHAMPIX

Dpendance la nicotine
Affinit +Slectivit ++
Rec nicotiniques neuronaux
Agoniste partiel

B*Les rcepteurs A du GABA

Localisation :SNC
Acide amino-butyrique
Slectifs pour lion ClFixation GABA sur rc A
Ouverture du canal
Entre ClPolarisation

Excitabilit

B*Les rcepteurs A du GABA

*Barbituriques /Ethanol/BNZ :
linteraction de GABA RecA
*Entre de Cl*Hyperpolarisation
*Effet sdatif
*Flumaznil :
*Antagoniste des BNZ
*Affinit pour les R des BNZ
Antidote lors dintoxication/BNZ

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

*Rc mtabotropes
*Cette famille englobe un grand nombre de rcepteurs de
neurotransmetteurs ,les rcepteurs aux enkphalines, aux opiacs,
* Plus de 40% des mdicaments ont pour effecteur un RCPG

La transmission de linformation du milieu extra cellulaire vers le

cytoplasme est assurs par une triade
Rcepteur

Protine G

Effecteur

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

A * Organisation
*Rcepteurs transmembranaires
*Ils fonctionnent en association avec une pr-G
cytosolique /ancre la mb au repos
*Protine G :capacit hydrolyser le GTP pendant le
droulement des voies de signalisation

*Pr- G : commutateur molculaire intermediaire

rcepteur /effecteurs cellulaires

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

A * Organisation
Structure gnrale

*RCPG: glycoprotines transmembranaires

traverse multiple -rcepteurs heptahlicodaux
*Partie N-terminale, extracellulaire+/-longue ,
glycosyle
*Partie C-terminale, intracellulaire, longue,
contenant les sites d'interaction avec les pr- G
+ Sites de rgulation par phosphorylation
Phosphorylation des RCPG /pr-kinases : effet inhibiteur, qui entre
en jeu dans la dsensibilisation lors d'une hyperstimulation

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

B*Protines G de transduction
Structure
*Protines G htrotrimriques
*3 sous-units , et
*20 isoformes
*Sites de fixation + d'hydrolyse du GTP
* conditionne la spcificit de la pr- G vis--vis du
rcepteur et des effecteurs
* / respectivement 5/13 isoformes
*N'ont pas de spcificit particulire
*Toujours associes en dimre
*Fonctions: l'ancrage la membrane + l'interaction
avec diffrents effecteurs

Cycle d'activation des protines G trimriques

Au repos : lie au dimre -
ancre la membrane et un GDP

Activation du rcepteur : pr- G interagit

avec la partie C-terminale d'un Rec active,
perd son affinit pour le GDP ; en
captant GTP, se dissocie du dimre -
active active son (ses) effecteur(s)

Hydrolyse du GTP : capable

d'hydrolyser son GTP en GDP + Pi, ce
qui la rend inactive
* Se rassocie au dimre -

Les diffrents types de protines G

Les diffrents types de protines G

*Toxine cholrique*

Cible :Pr- Gs

Fixation d ADP ribosyl sur la s/u s

Du coup la protine G ne peut plus hydrolyser le GTP, la S/U est

active de faon permanente

Stimule lAC

AMP c

Scrtion de Cl- /H2O par la muqueuse intestinale

Les diffrents types de protines G

*Toxine de la coqueluche*

Inhibe Gi
Augmenter la production d'AMPc
Par un mcanisme diffrent de la toxine du
cholra
aboutit un rsultat semblable

Les diffrents types de protines G

Petites protines G
Monomres de faible PM/Rpartition ubiquitaire
Proches des S/U des pr G de transduction
Activit GTPasique faible /stimule par des
pr- GAP (GTPase Activating Proteins)
5 familles : ras cancrogense
rho architecture du cytosquelette
rab transports intracellulaires
ran condensation des chromosomes
ARF bourgeonnement des vesicules

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G

Effecteurs enzymes

Effecteurs canaux ioniques

Adnylcyclase
Phosphodisterase GMPc
Phospholipase A2
Phospholipase C

Canaux potassiques
Canaux calciques

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G
Voie de l'adnylate cyclase

Voie lineaire
Module par les RCPGS et
les RCPGI

Voie de l'adnylate cyclase

Premier effecteur : l'adenylate cyclase (AC)

Le second messager : l'AMPc

Deuxime effecteur : PKA

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G

*Voie de l'adnylate cyclase

Premier effecteur : l'adenylate cyclase (AC)

*Glycoprotine transmembranaire

*9 isoformes /sites de liaison aux protines GS/ GI

*Toutes activables s

Toutes isoformes possdent des sites de

rgulation de l'activit de l'enz, qui peuvent
tre phosphoryls / PKA / PKC / CamK
Rle: hydrolyser l'ATP en AMPc
*Activateurs : s/ forskoline/calmoduline-calcium
*Inhibiteurs : i/NO/ calcineurine

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G
*Voie de l'adnylate cyclase

Le second messager : l'AMPc

*L'AMPc interagit principalement PKA

*L'AMPc est dgrad /PDE en 5'AMP

inactif
*Les med inhibiteurs de PDE prolongent
l'action de l'AMPc
*Tendance relcher les muscles lisses:
methylxanthines/ papaverine/ cafine

*Activateurs :Imidazols / GMPc / Ca2+

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G
*Voie de l'adnylate cyclase

Deuxime effecteur : PKA

*Protine-Kinase AMPc dpendantes
*Heterottramres cytosoliques
*Rrpartition ubiquitaire
*PKA inactive: ttramre4S/U identiques 2
2
*2S/U rgulatrices R2/2sites de fixation de
l'AMPc
* 2S/U catalytiques C2 activit SerylThreonyl-kinase
*Fixation AMPc sur s/u R2
*Modification de conformation
*Perte d'affinit pour s/u C2
*C2libres /actives

Deuxime effecteur : PKA

*S/U C2 : phosphorylation des serines et

threonines de la squence : ArgArgXSer/Thr
*Simplicit de la squence signal
*Spcificit de substrats : trs large
Mtabolisme
nergtique
Flux ioniques et
hydriques
transepitheliaux

Force de
contraction
cardiaque
Transcription du
gnome

Enzymes cls de voies cataboliques

Canaux ioniques: module dure

d'ouverture en l'allongeant
Prolonger la dure d'ouverture des
canaux calciques L (inotrope +)
Facteurs de transcription

CB1 / CB2 R : coupls une protine Gi

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G

Voie des phosphodiesterases

*t pr-Gt :cellules photo-rceptrices

*t pr-Gt active PDE : dtruit le GMPc
*RleGMPc :maintenir ouverts les canaux
sodiques
Dpolarisation du nerf optique
*Diminution du GMPc
Hyperpolarisation

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G

Voies des phospholipases

*Multiplicit des seconds messagers
*Lipophiles +diffusent hors de la cellule
(Ac arachidonique, PG, TXA2, leukotrines)
Activation

RCPG

Influx Ca++

Voies des phospholipases

Voie de la
phospholipase C

Voie de la
phospholipase A2

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G
Voies des phospholipases

Voie de la phospholipase C

La voie de la phospholipase C
est
active par l'intermdiaire des
RCPGQ/O/i

Voie de la phospholipase C

Premier effecteur : les phospholipases C (PLC )

Les seconds messagers: IP3/ DAG

Deuxime effecteur : cPKC Protine-Kinases C

Premier effecteur : les phospholipases C (PLC )

Phospho-inositidase

Production des 2 messagers IP3 / DAG

Les seconds messagers

IP3
* active

des rc canaux calciques

situes sur la mb du RE
*libration oscillatoire de Ca++
* activation des cPKC / calmoduline

DAG
*Active cPKC
* Ca++indispensable l'activation
des cPKC

Les seconds messagers

DAG +IP3 agissent en synergie dans la transduction du message

Deuxime effecteur : cPKC Protine-Kinases C

Activit Seryl-Threonyl-kinase
*Activation des cPKC :rapide +courte
*Activation prolonge ne serait pas ncessaire voire
nfaste/produits sont stables+difficilement dphosphoryls
*

Phorbol

Staurosporine/ Balanol/ Rottlerine

PKC

Cd2+

2* Les rcepteurs coupls la protines G (Type II)

C*Voies effectrices des protines G
Voies des phospholipases

Voie de la phospholipase A2

La voie de la phospholipase A2 est active

par l'intermdiaire de certains RCPG
muscariniques, 1-adrenergiques,
serotoninergiques et par les rcepteurs de la
bradykinine

Premier effecteur : la phospholipase A2 cytosolique (cPLA2)

Hydrolyse les phosphatidylcholines contenant l'ac arachidonique

Inhibe / AIS
Empchent la formation des
messagers inflammatoires

Le second messager : l'acide arachidonique (AA)

4*Voies de couplage aux canaux ioniques

*Canaux calciques type L : activs par des pr- G

*Canaux calciques types N/T :inhibs par des pr- G

[Ca++]intraC ++li calmoduline (CaM)

CaM-kinases
Phosphorylent de nombreuses pr-

La calmoduline

Pb2+

Pb2+
Pb2+

Pr-monomrique de 148 AA/ubiquitaire,

capable de s'associer aux Ca++
Cette liaison induit un changement de
conformation de la pr-, et forme un
complexe calmoduline/calcium

Ce complexe permet l'activation par

changement de conformation de
nombreuses pr- dont lAC

Pb2+

Pb2+ : active la calmoduline, en se

substituant au Ca2+ au niveau de son
site de liaison

4*Voies de couplage aux canaux ioniques

S/U de certaines pr- G est capable de

dclencher l'ouverture dune autre prcanal. C'est de cette faon que seront
par ex activs des canaux potassiques
Opiodes

Cellules nerveuses

Ouverture canaux potassiques

Hyperpolarisation
Influx de calcium
Libration de neurotransmetteurs
excitateurs / transmission synaptique

Exemples de RCPG

R muscariniques de lAch:

R adrnergiques :

M1, M3, M5: RCPGQ

R 1 : RCPGQ
R 2 : RCPGS / RCPGI
R 1, 2 : RCPGS

M2, M4 : RCPGI

R dopaminergiques :

R srotoninergiques :

R D1-like : RCPGS

R 5-HT1 : RCPGI
R 5-HT4/5/6/7: RCPGS
R 5-HT2 : RCPGQ

R D2-like : RCPGI

3*Les rcepteurs -Enzymes (Type III)

* Rcepteur possde lui-mme une activit enzymatique
* Rcepteur catalytique

A*Les rcepteurs activit guanylcyclase

ANF

NO
Soluble

Membranaire
GMPc

Agit directement en
activant les PDE/ certains
canaux

++ Indirectement par
l'intermdiaire de la
protine kinase PKG

B*Les rcepteurs activit tyrosine-kinase

Des facteurs de croissance

Voies de signalisation complexes

Stimulation du R/ H
Dimrisation + phosphorylation R
Activation PLC
Voies STAT (signal transducer and
activator of transcription)
MAPK (mitogen activated protein
kinase)

Interviennent dans la
transcription de plusieurs
gnes

De linsuline
-Phosphorylation de pr- intracellulaires
sur des rsidus tyrosine
-Modification des fonctions cellulaires
-Effets hypoglycmiants

C*Les rcepteurs activit tyrosine phosphatase

La structure de ces rcepteurs ressemble celle des rcepteurs

tyrosine kinase membranaires des facteurs de croissance

Ces rcepteurs sont capables de transmettre un stimuli extrieur

provoqu par un ligand qui reste inconnu
Il entranant une dphosphorylation de rsidus tyrosyl

4*Les rcepteurs intracellulaires (Type IV)

Rcepteurs qui rgulent la transcription de lADN

LAc rtinoque, les H strodes (cortisol, aldostrone, testostrone,

progestrone et stradiol), les H thyrodiennes et la vit D sont des
molcules qui se fixe sur des R lis des facteurs de transcription

Tout les rcepteurs cits sont considrs comme nuclaires

lexception des rcepteurs des corticodes qui peuvent tre
localiss soit au niveau cytosolique+++ ou nuclaire

A*Structure des rcepteurs

intracellulaires
*Protines monomriques de 100 1000 rsidus qui possdent au milieu une
rgion de 60 rsidus qui est le domaine de liaison avec lADN

Le domaine C
Comporte le site de
liaison des
ligands+intervient
dans la dimrisation
du R+fixation de la prinhibitrice HSP

Le domaine B
Riche en rsidus
cystyls, qui permet la
liaison du rcepteur
lADN

Le domaine A
NH2 terminal
Dont la fonction nest
pas bien dfinie

B*Fonctionnement dun rcepteur nuclaire

*Fixation rgions promotrices (HRE :hormon

response element)de gnes sous forme de dimre
*Dimres homo /htro-dimres

Caractristique commune: modulation de la transcription

de gnes

Rcepteurs des hormones strodes

*H lipophilie, traverse la mb et interagit avec le R
*R li Protine du choc thermique HSP 90
*Liaison hormone /rcepteur suivie/dissociation de
lHSP 90
*Complexe messager-R pntre dans le noyau /se
lie au DNA

*Complexe messager-R se dimrise avant

dinteragir/DNA
*Partie DNA ou le complexe hormone-R se fixe :
HRE
Consquence de l'interaction :
Activation /inhibition de la transcription du DNA en
mRNA /tRNA /rRNA

Rcepteurs des hormones strodes

(+)Lipocortine (annexine)
(-)phospholipase A2

(-)mdiateurs lipidiques de l'inflammation

(-)interieukines
(-)PLA2
(-)COX

AhR (Aryl hydrocarbon Receptor)

Le passage des HAP dans le cytoplasme

entraine une induction spcifique de
certaines enz mtabolisant les xnobiotiques
Un rcepteur cytoplasmique trs
spcifique des HAP : AhR li divers
facteurs cytoplasmiques Hsp90 + AhR
interacting protein (AIP)
Association :AhR/Hsp90 /AIP confre au
rcepteur cytoplasmique une
reconnaissance spcifique+optimale vis
vis de certains ligands et notamment les
HAP dont le benzo[a]pyrne

AhR (Aryl hydrocarbon Receptor)

Benzo[a]pyrne

BaP

Type

I Canal

II RCPG

III Rec-Enz

IV
Intracellulaire

Localisation

Membrane

Membrane

Membrane

Cytoplasme/
Noyau

Couplage

Direct

Protine G

Direct

Via DNA

Effecteur

Canal

Enzyme / canal

Enzyme

Transcription
gne

MEDIATEURS
RAPIDES

MEDIATEURS
LENTS

FACTEURS DE
CROISSANCE

HORMONE

R. Nicotinique
Gaba-Rec A

R. muscarinique
R. adrnergique

R. de linsuline
R. des cytokines

Exemple

R. strodes
H thyrodiennes
vitamine D
Ac. Rtinoque

*Synthse de faon continue / constante, internaliss ds la liaison dun

ligand dans des vacuoles cytoplasmiques Coated pits

*Extrioriss de nouveau/ dgrads dans les lysosomes
* Population des Rc surface accessibles aux mdicaments, par
exemple, est en changement continuel

Downregulation

Upregulation

Ainsi sexplique, par ex , la grande sensibilit des malades

une dcharge dAdrnaline endogne aprs larrt brusque
dun traitement par bta-bloquant , do un risque IDM

IV/Cycle des rcepteurs

Dsensibilisation des rcepteurs

Dans certains cas, la rptition de ladministration dun agoniste la
mme dose (Morphine) saccompagne dune rduction de
leffet :tolrance

Modification conformationnelle
Dcouplage biochimique de la
liaison du Rc / Enz effectrice
Rduction du nombre
des Rc de surface
Explications possibles

Conclusion
R
E
C
E

P
T
E
U
R
S

Le concept de rcepteur a t un facteur de

progrs dans la connaissance de nombreux
effets biochimiques, physiologiques et
pharmacologiques et dans le dveloppement de
mdicaments
Il na pas jou de rle majeur en
toxicologie, mais il est certain que cette
notion de rcepteur est dune grande utilit en
toxicologie molculaire pour la connaissance
des mcanismes daction de nombreux
molcules toxiques et mme dans le traitement
de certaines intoxications en utilisant des
antidotes

Merci pour
votre
attention

 Le succs nest
pas total ,
lchec nest pas
fatal:
Cest le courage de
continuer qui
compte