ENZYMOLOGIE

Dr RAMAMINIAINA Eddy
Biomolécules PACES

1
 Objectifs

• Citer les caractères généraux des enzymes

• Décrire la spécificité enzymatique
• Retenir la cinétique enzymatique
• Classer les enzymes

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 PLAN
1- Généralités
2- Mode d’action
3- Site d’action
4- Energie d’activation
5- La cinétique enzymatique
6- Contrôle et régulation
7- Classification des enzymes
8- Nomenclature des enzymes
3
 INTRODUCTION

• Organisme humain : siège de nombreuses

réactions chimiques
• Le métabolisme catalyse ces réactions en
utilisant des substances qui vont multiplier la
vitesse de celles-ci
• Ces substances sont des enzymes

4
 1 Généralités

1-Les enzymes sont des protéines présentant

des propriétés de catalyse spécifique d’une
réaction chimique
2-Les enzymes augmentent la vitesse des
réactions biochimiques
3-Les enzymes ne catalysent que des réactions
thermodynamiquement possibles

5
 1 Généralités

4-Les réactions biochimiques sont réversibles et

les enzymes accélèrent ces réactions jusqu’à
atteindre l’équilibre sans changer l’état de
cette équilibre = les concentrations des
différents produit de la réaction à l’équilibre
sont le même que celle qu’on aurait obtenu

6
 1 Généralités

5-Les enzymes participent directement au

mécanisme de la réaction et subit des
changement physique pendant son
déroulement mais elle retrouve son état initial
après la réaction
6-Ce retour à l’état initial permet de nouvelle
réaction

7
 1 Généralités
7-Les enzymes sont tous de nature protéique
Holoprotéine : Enchainement des acides aminés
Exemples : Pepsine, ribonucléase, uréase
Hétéroprotéines : En plus des acides aminés, il
y a un cofacteur
Cofacteur peut être : - ion métallique
- un coenzyme

8
 1 Généralités

8-Les enzymes sont hautement spécifique

Une enzyme donnée ne catalyse qu’une
réaction donnée
9-La localisation des enzymes est bien déterminé,
la destruction pathologique des cellules qui le
contiennent libère les enzymes

9
 1 Généralités

10-L’activité des enzymes peut être soumise à

une contrôle
11-Une déficience en une enzyme se traduit par
une altération +/- grave d’une séquence
métabolique définie
Une absence d’une enzyme peut entrainer une
lésion importante

10
 1 Généralités

12-La réaction enzymatique

ENZYME
SUBSTRAT PRODUIT
COFACTEUR
COENZYME

11
 1 Généralités
12-La réaction enzymatique

12
 1 Généralités
12-La réaction enzymatique
Substrat : molécule qui entre dans une réaction
pour y être transformé grâce à l’action
catalytique d’une enzyme
Les molécules qui entrent dans une réaction
enzymatique et sont définitivement modifiées
sont appelées substrats

13
 1 Généralités
12-La réaction enzymatique
Produit : La molécule qui apparait au cours
d’une réaction catalysé par une enzyme
La nouvelle molécule qui résulte de cette
transformation est appelée produit

14
 1 Généralités
12-La réaction enzymatique
Cofacteurs : C’est une substance chimique non
protéique, liée à une protéine, intervenant
dans une réaction enzymatique pour
transporter ou compléter un substrat, pour
accepter un produit,
Ces cofacteurs peuvent être des ions comme un
atome de zinc, une molécule d’eau

15
 1 Généralités
12-La réaction enzymatique
Coenzymes: Ce sont des molécules biologiques,
non protéiques, thermostables, non resp
specificité enzymatique, vitamines ou non

Coenzymes sont des cofacteurs donc des

molécules indispensables à la catalyse
enzymatique

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 2 Mode d’action
A- La spécificité enzymatique
spécificité à plusieurs niveau
a- La spécificité de la réaction
Une enzyme catalyse un seul type de réaction
Cette propriété permet la classification des
Enzymes
• Ex: hydrolase  réaction d’hydrolyse
oxydase  réaction d’oxydation
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 2 Mode d’action
A- La spécificité enzymatique
b- Spécificité du substrat
Les enzymes ne réagissent que sur son substrat
Ex : L’arginase ne réagit que sur l’arginine
L’osidase ne coupe qu’une liaison
osidique

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 2 Mode d’action
A- La spécificité enzymatique
c- Stéreo-spécificité
Exemple : Anomères α, β (isomères)
Les enzymes reconnaissent α ou β galactose
Le substrat c’est le galactoside
Pour couper la liaison β galactoside : on a la β
Galactosidase  ne réagit pas avec la liaison α
galactoside
19
 3 Site d’action
La transformation du substrat S en produit P sous
l’action de l’enzyme E se fait suivant la réaction
E+S ES P+E
L’enzyme participe donc vraiment à la réaction
pour former le complexe ES qui se dissocie pour
donner le produit P avec libération d’enzyme E

20
 3 Site d’action
La formation du complexe ES nécessite une
interaction entre S et E
La portion de la molécule d’enzyme où s’effectue
cette liaison ES s’appelle « site actif »

21
 4 Energie d’activation
Pour que cette réaction aura lieu à une vitesse
appréciable, il faut que les molécules qui doivent
agir les uns contre les autres soit activés
--- ENERGIE
Cette énergie d’activation peut être fournit par
chauffage

22
 4 Energie d’activation
Au laboratoire :
• L’augmentation de la température provoque
une augmentation d’énergie ==> collision
moléculaire
• Le rôle de l’enzyme est de baisser fortement
cette énergie d’activation

23
 5 La cinétique enzymatique
C’est la quantité de produit apparu ou la quantité
de substrat disparu par unité de temps sous
l’action d’une enzyme
V = dP/dt ou – dS/dt

24
 5 La cinétique enzymatique
La vitesse de la réaction s’exprime de plusieurs
façons
- Le nombre de molécule de produit apparue par
unité de temps
- le nombre de molécule de substrat transformé
par une mole d’enzyme
- En unité enzymatique : quantité d’enzyme qui
catalyse la transformation d’une micromole de
substrat par minute
25
 5 La cinétique enzymatique
vitesse initiale : On étudie la cinétique d’une réaction
enzymatique par la mesure de la vitesse initial

Vitesse

3
2

1
26
 5 La cinétique enzymatique
La vitesse initiale
- La partie rectiligne (1) la vitesse est constante
V= dP/dT= Constante (vitesse initiale)
- La droite s’infléchie (2) : la vitesse diminue
- (3) la vitesse s’arrête

27
 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
a. Concentration enzymatique
b. Concentration des substrats
c. Présence des cofacteurs
c. Influence des différents facteurs du milieu
- Influence de la température
A température basse il y a une inhibition
réversible : si on augmente la T° l’enzyme est
activé et la réaction reprend
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 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
c. Influence des différents facteurs du milieu
- Influence de la température
A température élevée : > 60 °C chute brutale de
l’activité correspondant à la perte du structure
tridimentionnelle de la protéine enzymatique
→Perte irréversible

29
 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
c. Influence des différents facteurs du milieu
- Influence du pH
La réaction enzymatique est très sensible au pH
pour plusieurs raisons
Le pH a une influence sur la dénaturation de la
protéine enzymatique donc sur la stabilité de
l’enzyme

30
 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
c. Influence des différents facteurs du milieu
- Les effecteurs chimiques
C’est un agent chimique qui modifie la cinétique
de la réaction enzymatique (activateurs et
inhibiteurs)

31
 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
 Les activateurs
Ils augmentent la vitesse de la réaction
Si on enlève les activateurs on revient à la
normale
Exemples : les ions Na +, K +, NH4+, Ca ++, Mg+
+

32
 5 La cinétique enzymatique
Les facteurs influençant la cinétique enzymatique
 Les inhibiteurs
Ils ralentissent la vitesse de la réaction
Si on enlève ces inhibiteurs la vitesse
revient à la normale
Exemple : La cystéine

33
 6 Contrôle et régulation
A- Régulation direct Enlever
A+B C
Utilisation
Si l’organisme a besoin de C, la réaction se
déroulera pour donner C
C sera immédiatement utilisé et l’équilibre ne se
produira pas

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 6 Contrôle et régulation
B- Régulation indirect
a- Régulation suivant le milieu
La voie métabolique est régulé en fonction de
- la concentration d’enzyme et de substrat
- pH intracellulaire
- concentration en cofacteur ou en coenzyme

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 6 Contrôle et régulation
B- Régulation indirect
b- Régulation au niveau de la synthèse de l’enzyme

Il n’y a pas de synthèse de protéine enzymatique

que lorsqu’il y a nécessité de la réaction

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 6 Contrôle et régulation
B- Régulation indirect
c- Régulation hormonale
Certaines hormones agissent sur l’activité de
certaines enzymes
Exemple : La glycogènolyse
Sous contrôle des hormones hyperglycémiantes
qui sont l’adrénaline et le glucagon

37
 6 Contrôle et régulation
B- Régulation indirect
d- Régulation allostérique
Dans certains cas le produit final de la suite de
réaction inhibe l’ enzyme qui catalyse le début
de réaction
E1 E2 E3

A B C X
E active

X+ -X
38
E inactive
 7 Classification des enzymes
A cause de leur spécificité de réaction, il est
possible de classer les enzymes
On classe les enzymes selon le type de réaction
catalysé
On distingue 6 classes
1- Les oxydo-réductases 4- Les lyases
2- Les Transférases 5- Les isomérases
3- Les hydrolases 6- Les ligases
39
 7 Classification des enzymes
1- Les oxydo-réductases
Ils catalysent la réaction d’oxydo-réduction
a-L’oxydase : utilise l’oxygène selon la réaction
2H+
1/2O2 + 2e- O-- H20
Exemple : cytochrome oxydase

40
 7 Classification des enzymes
b- Les oxyg ènases
Fixent directement l’oxygène
A + O2 AO2
c- Les transhydrogènases
Catalyse la réaction de deshydrogènation des
substrats et le transfert de ses hydrogènes sur un
accepteur A
RH2 + A R + AH2
41
 7 Classification des enzymes
2- Les transférases
Ce sont des enzymes qui catalyse la réaction de
transfert d’un radical d’un donneur vers un
accepteur
R-R’ + X R + R’X Simple transfert
R-R’ + XY RX + R’Y Double transfert
Le donneur RR’ n’est jamais l’hydrogène
L’accepteur X et Y n’est jamais H20 ou H3PO4
42
 7 Classification des enzymes
2- Les transférases
On classe les transférases d’après la nature du
radical transféré
Exemple : méthyltransférase
Phosphotransférase (transphosphokinase)

43
 7 Classification des enzymes
3- Les hydrolases
Catalyse la réaction d’hydrolyse
R-R’ + H2O RH + R’OH
Les hydrolases fonctionnent sans coenzymes et
on les classent d’après la liaison coupée
Exemples : Esterase : coupe la liaison ester
Osidase : coupe la liaison osidique
Peptidase : coupe la liaison
peptidique 44
 7 Classification des enzymes
4- Les Lyases

Catalyse le déplacement d’un groupement à partir

d’un substrat après une coupure d’une liaison C-X

45
 7 Classification des enzymes
5-Les isomérases
Assurent le réarrangement intramoléculaire
Il y a différents types
Racemase : Isomère L Isomère D
Cis-trans isomèrase : Forme CIS  Forme TRANS
Epimèrase : D-galactose  D-glucose

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 8 Nomenclature des enzymes
Nom de l’enzyme se termine par ASE
Exception : INE (trypsine, papaïne, pepsine)
Numéro d’ordre : 4 chiffres
1e chiffre : La classe de l’enzyme
2e chiffre : La nature du groupement donneur
3e chiffre : La nature du groupement accepteur
4e chiffre : Suivant le substrat

47
 8 Nomenclature des enzymes
Exemple : 1-1-1-27
1: oxydo-réductase
1: CHOH
1: NAD+
27: Acide malique

48
 8 Nomenclature des enzymes
Le nom systématique
- La nature du donneur
- La nature du produit
- Le type de réaction catalysée
Glucose Glucose 6P
accepteur
ATP ADP
donneur

ATP glucose 6P transférase

49
9 Intérêts du dosage des enzymes
Si lésion d'un organe, augmentation des
enzymes provenant de cet organe dans le sang

Exemple : enzymes cardiaques en cas de lésion

cardiaque, enzymes hépatiques en cas de lésion
hépatique

50
 9 Intérêts du dosage des enzymes
• Certaines maladies avec déficit enzymatique

Exemples :
– L'acatalasie : maladie héréditaire du
métabolisme rare, causée par le déficit d'une
enzyme, appelée catalase

51
 9 Intérêts du dosage des enzymes
• Certaines maladies avec déficit enzymatique

Exemples :
– La maladie de Gaucher : déficit enzymatique
en glucocérébrosidase, qui entraîne
l'accumulation de lipides, les
glucocérébrosides, dans les cellules de
stockage de l'organisme

52
COENZYMES

53
 Définition
Les coenzymes sont des molécules
biologiques, non protéiques, thermostables
Les coenzymes sont des cofacteurs donc des
molécules indispensables à la catalyse
enzymatique

54
 I Caractères généraux
1-Les coenzymes se différencient de
l’apoenzyme par leur nature non protéique
Apoenzyme : partie protéique d’une enzyme
2-Les coenzymes sont des molécules à faible
poids moléculaire
3-Les coenzymes sont des composées
thermostables contrairement aux protéines
qui sont thermolabiles

55
 I Caractères généraux
4-Les coenzymes apparaissent dans le
stœchiométrie de la réaction c.à.d de façon
quantitative dans la réaction (# apoenzymes)

56
 I Caractères généraux
5- Les coenzymes réagissent donc comme un
substrat
Ils se diffèrent par le fait que le coenzyme
retrouve toujours son état initiale après une
ou deux réactions
6- Les coenzymes ne sont pas responsables de la
spécificité enzymatique, seul l’apoenzyme
joue un rôle dans cette spécificité

57
 I Caractères généraux
7- Les coenzymes sont des molécules à grande
mobilité électronique
Ils servent à des transfert soit d’électron soit
de proton ou d’atome hydrogène soit des
radicaux ou groupement divers

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 CLASSIFICATION
I- Coenzymes vitaminiques
A- Transfert de groupement
- Thyamine (B1)
- Pyridoxal phosphate (B6)
- Coenzyme-A (B5)
- Acide tetrahydrofolique (FH4 ou B9)

59
 CLASSIFICATION
I- Coenzymes vitaminiques
B- Oxydo-réduction
- NAD+ : nicotinamide adénine dinucléotide
- NADP+ : nicotinamide adénine dinucléotide
phosphate
- FMN : flavine mononucléotide
- FAD : flavine adenine dinucléotide

60
 CLASSIFICATION
II- Coenzymes non vitaminiques
A- Transfert de groupement
- Adénosine méthionine
- Acide lipoique
- Nucléoside triphosphate

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 CLASSIFICATION
II- Coenzymes non vitaminiques
B- oxydo-réduction
- Coenzymes hématiniques
- Coenzymes quinoniques

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 CONCLUSION
Coenzyme :
- un des substrats de la réaction
- plus fortement lié à l’enzyme
- peut réagir successivement après de
nombreuses réactions
- transfert d’électron, de proton, de groupement
- réaction d’oxydo-réduction

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MERCI DE VOTRE ATTENTION

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