A.O.C.

S Official Method Ab 4-50

Formerly Ab 4-47
Revised 1957
Reapproved 1973
Reapproved 1989

Nitrógeno-Amonio-Proteína
Método kjeldahl modificado

Definición: este método determina con amoníaco el contenido total de nitrógeno de la muestra (ver notas, 1)
Alcance: aplicable a los cacahuetes(maníes).
Aparatos: 2. Pese 1.7032 g en el matraz kjeldahl. Los cálculos
Igual se llevan a cabo en términos de nitrógeno, pesar
1. Aparatos de digestión y destilación de Kjeldahl,
1.4008 g. y 0,7 g de óxido de mercurio, 15 g de
completos en buen estado, trampas y condensadores
Na2SO4 de K2SO4 y 30 ml de H2SO4 (véanse las
de tubo de estaño o de tubo de corrosión equivalentes
notas, 3 en este método).
(ver Notas, 2).
3. Coloque el matraz en la rejilla de digestión (en una
2. Frascos Kjeldahl, 800 ml.
posición inclinada) y caliente, por debajo del punto de
3. Frascos de recepción destilados, 500 ml o cualquier ebullición del ácido,agitar de 5 a 15 minutos o hasta
tamaño conveniente. que cese la formación de espuma.

Reactivos: 4. Aumentar la temperatura y digerir hasta que se

complete la digestión, conducir la digestión sobre el
1. Óxido mercúrico, grado reactivo (ver notas, dispositivo de brebaje, ajustar el trabajo con 250 ml de
precaución). H2O a 25 ° C en el matraz kjeldahl para hervir en 5
2. Ácido sulfúrico, sp. gr. 1.84 (ver notas, minutos. Digerir durante al menos 30 minutos después
precaución). de que el líquido se haya vuelto transparente e
incoloro (ver notas, 4).
3. Zinc metal, granular, 20 malla.
5. Enfríe, agregue aproximadamente 300 ml de agua,
4. Potasio, sulfato de sodio, A.C.S. grado. unos gránulos de zinc en solución preventiva, y una
suficiente solución de sulfuro (por lo general
5. Solución de potasio y sulfuro de sodio, 4% en agua.
alrededor de 25 ml) para precipitar el Mercurio.
6. Solución de hidróxido de sodio, gr. 1.50 (ver notas,
6. Transfiera con precisión una cantidad suficiente del
precaución).
ácido estándar al matraz receptor para que exista un
7. Solución de hidróxido de sodio 0.25 N, exceso de al menos 0,5 ml de ácido 0,5 N. Agregue
exactamente estandarizada (ser A.O.C.S. suficiente agua destilada para cubrir el extremo del
Especificación H 12-52). tubo del condensador. El destilado debe descargarse a
través de un tubo de vidrio en la parte inferior del
8. Ácido sulfúrico, 0.5 N: estandarizado con precisión matraz receptor.
(ver la Especificación A.O.C.S. H 13-52).
7. Mezcle completamente y agregue una solución
9. Solución indicadora de rojo de metilo, 0,1% en alcalina suficiente (generalmente 60 ml) para hacerlo
alcohol etílico o rojo de alizarina S, 0,3% en agua fuertemente alcalino. Introduzca el álcali por el
destilada. costado del matraz kjeldahl para que no se mezcle
Procedimiento: rápidamente con el ácido.

1. Use una porción de la muestra preparada como se 8. Conecte el matraz kjeldahl al extremo de pedido del
describe en A.OC.S. Método Av 3-49, procedimiento, tubo del condensador y mezcle el contenido con el
párrafo 2.
 A.O.C.S Official Method Ab 4-50
Formerly Ab 4-47
Revised 1957
Reapproved 1973
Reapproved 1989

agitador. Aplique calor y destile hasta que se hayan extremadamente cáusticos como el hidróxido de sodio
recolectado al menos 150 ml de destilado. y el hidróxido de potasio, siempre agregue pellets al
agua y no al revés. Estos álcalis son extremadamente
9. Valorar el contenido del matraz receptor con una
exotérmicos cuando se mezclan con agua. Tomar
solución de NaOH 0,25 N, con 3 o 4 gotas de
precauciones para manipular la solución caustica en
indicador.
caso de que el contenedor mixto se rompa por el calor
10. Realice una determinación en blanco de todos los extremo generado.
reactivos, utilizando un gramo de sacarosa en lugar de
Notas numeradas
muestra, simultáneamente con las muestras y
similares en todos los aspectos. 1. Ver A.O.C.S. método Ba 4b-87 para un
procedimiento alternativo que no requiere el uso de
11. Determine la humedad en las muestras analíticas
mercurio.
preparadas como se indica en los métodos AOCS Ab
3-49, procedimiento, párrafo 8. 2. Se recomienda encarecidamente el uso de tubos de
caucho resistente al agua y resistente a la humedad y
CÁLCULOS los tapones para conectar las piezas de vidrio.
Proceda como se indica en A.O.C.S. método Aa 5-38,
3. Se requiere ácido sulfúrico más concentrado para
sección de cálculos.
efectuar la digestión completa y al mismo tiempo
NOTAS evitar la pérdida de nitrógeno en el análisis de
muestras con alto contenido de grasa o aceite. Por lo
Precaución tanto, 30 ml. Concentrado.
El mercurio y los compuestos de mercurio son 4. El ácido sulfúrico se especifica como el mínimo
altamente tóxicos por ingestión, inhalación y para el análisis de los cacahuetes.
absorción de la piel. El TLV (como mercurio) es 0.50
mg / metro cúbico o aire. Consulte la sección de 5. La conversión completa de nitrógeno orgánico a
seguridad del laboratorio en el volumen 1 de esta nitrógeno amoniacal es esencial para obtener
edición para obtener un procedimiento que contenga resultados precisos y precisos. Una digestión más
la contaminación ambiental de los desechos de prolongada que 30 minutos después de que el líquido
mercurio de las digestiones de kjeldahl. La se haya vuelto transparente y sin color puede resultar
eliminación de cualquier residuo de mercurio debe necesaria incluso a través de la temperatura de
estar de acuerdo con las regulaciones locales y de la calentamiento especiada en el procedimiento, el
EPA. párrafo 4 se mantiene durante la digestión. Sin
embargo, se debe evitar la digestión prolongada, ya
El ácido sulfúrico es un ácido fuerte y causará que se puede perder algo de nitrógeno amoniacal por
quemaduras severas. Se debe usar ropa protectora oxidación. Deben evitarse partículas simples grandes,
cuando se trabaja con este ácido. Es un agente porque las partículas más grandes requerirán un
oxidante y no debe almacenarse cerca de materiales tiempo de digestión más largo.
orgánicos. Tenga mucho cuidado al mezclarse con la
evolución del calor del agua debido al agua que puede
causar salpicaduras explosivas. Siempre agregue el
ácido al agua, nunca al revés.
Los alcalinos pueden quemar la piel, los ojos y el
tracto respiratorio severamente. Use guantes de goma
gruesa y protector facial para proteger contra los
líquidos alcalinos concentrados. Use un dispositivo de
eliminación de humos o una máscara de gas para
proteger el tracto respiratorio del polvo o vapores
alcalinos. Cuando trabaje con materiales
 AOCS Método oficial Ab 4-91
Reemplazando Ab 4-50 - Reaprobado 1997

Nitrógeno-Amonia-Proteína
Método Kjeldahl modificado
Catalizador de dióxido de titanio y sulfato de cobre

DEFINICIÓN
Este método determina el contenido de nitrógeno total y la proteína como 6.25 veces el contenido de
nitrógeno de la muestra (ver notas, 1 y referencias, 1).
ALCANCE
Aplicable a los cacahuetes (maníes).

APARATO Agregar metal sintético granular como agente

regulador).
1. Aparatos de digestión y destilación de Kjeldahl:
completos con fuente de calor, trampas y 9. sacarosa-ACS.
condensadores de tubos no corrosivos equivalentes
(ver notas, 2). PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1. Para los cacahuetes, siga los pasos 1 y 2 en el
2. Frascos Kjeldahl: 800 ml, pirexTM o equivalentes.
procedimiento, método oficial AOCS Ab 3-49.
3. Frascos de recepción destilados: 500 ml o cualquier Después de una simple preparación, continúe con el
tamaño conveniente. siguiente procedimiento.
4. Use solo una bureta de vidrio clase A; calibre a PROCEDIMIENTO
intervalos de 10 mL usando líquido con conversiones
de densidad/peso de volumen a temperaturas 1. pesar 0.250 - 1.750 g de la muestra molida en el
especificadas. matraz, en el aparato de kjeldahl. Añada la mezcla de
catalizador (los paquetes de catalizador premezclados
REACTIVOS. están disponibles comercialmente y pueden usarse).
1. Mezcla de catalizador que contiene sulfato de 2. Agregue 30 ml de H2SO4 concentrado (ver notas,
potasio, 16,7 g + dióxido de titanio, 0,6 g + sulfato de 3) a la muestra y catalizador en el matraz de digestión.
cobre, 0,01 g + piedra pómez, 0,3 g. Incluya al menos un muestra de clorhidrato de lisina
de alta pureza cada día para verificar la exactitud de
2. Ácido sulfúrico - ACS sp. gr. 1.84; 95-98% de los parámetros de digestión. Si la recuperación no está
concentración: sin nitrógeno (ver notas, precaución). completa, realice los ajustes apropiados.
3. Solución de hidróxido de sodio - 0.25 N, 3. Agregue un poco de molido de semilla a la muestra
estandarizada con precisión (ver la especificación del matraz.
H12-52 de AOCS).
4. Para digerir la muestra, primero ajuste el calor para
4. Solución de hidróxido de sodio - 0,5 N, que 250 ml de agua a 25 ° C hiervan en 5 min.
estandarizada con precisión (ver la especificación Coloque el matraz simple en el estante de digestión en
H12-52 de AOCS). una porción inclinada y luego caliente el matraz de
5. Ácido sulfúrico: 0,5 N, estandarizado con precisión muestra a los 5 min. Tasa de hervor hasta que este
(ver la especificación AOCS H 13-52). denso; Los combustibles blancos limpian el bulbo del
matraz (aproximadamente 5 minutos). Agite
6. Solución indicadora de rojo de metilo: 0,1% en suavemente y continúe calentando durante 40 minutos
alcohol etílico o rojo de alizarina S-0,3% en agua adicionales después de que el líquido se haya vuelto
destilada. transparente e incoloro (ver notas, 4). Los frascos
kjeldahl debieron sinfonear un mínimo de tres veces
7. semilla molida hirviendo- 8-14 malla.
durante la digestión.
8. Zinc 20 malla de metal-granular. (Si el catalizador
5. Enfriar, agregar cuantitativamente unos 300 ml de
utilizado tiene piedra pómez añadida, no se necesita
agua y temperatura ambiente fría (ver notas, 5).
Agregue agua como medio para reducir la cantidad de reactivo llevado a través del método y destilado en 1
apelmazamiento. Si se producen golpes excesivos m L de ácido estándar
durante la destilación, aumentar el tiempo de dilución
de 300 ml a aproximadamente 350 ml. NA = normalidad del ácido estándar

6. Transfiera con precisión una cantidad suficiente del NB = normalidad de la base estándar
ácido estándar al matraz receptor de modo que exista Nota: para determinar el porcentaje de amoníaco,
un exceso de al menos 0,5 ml de ácido 0,5 N. Agregue sustituya 1703.06 por 1400.67 en la ecuación para
suficiente agua destilada para cubrir el final de la calcular el porcentaje de nitrógeno.
salida y conéctelo al extremo de salida del
condensador. El destilado debe descargarse a través de 2. Consulte la tabla de conversión de nitrógeno,
un vaso en el fondo de los matraces receptores. amoniaco y proteína en el método AOCS oficcial
Aa 5-91 para la conversión de nitrógeno (base en
7. Añada 0,5-1,0 g adicionales de semilla molida al la conversión de factor de 6.25) o de amoníaco
matraz de digestión refrigerado. Mezcle (basado en el factor de conversión de 5.14) a
completamente y agregue solución alcalina (reactivo, proteína.
3) para hacerlo fuertemente alcalino. Vierta el alcalino 3. La Tabla 1 enumera el departamento de factores
por el costado del frasco kjeldahl para que no se agrícolas de los Estados Unidos para convertir de
mezcle rápidamente con el ácido. porcentaje de nitrógeno a porcentaje de proteína
8. Conecte inmediatamente el matraz kjeldahl al otro (ver notas, 6 y referencias, 2).
extremo del condensador y mezcle completamente el PRECISIÓN
contenido mediante agitación. Aplique calor a
aproximadamente 7,5 minutos, hasta obtener un No hay estadísticas relacionadas con el rendimiento de
destilado hasta que se hayan recolectado al menos 150 este método para los cacahuetes (maníes). Se remite al
ml de destilado. lector a los métodos oficiales AOCS Aa 5-91 y Ba 4d-
90 para estadístico del análisis de harina de soja,
9. Tira el contenido del matraz receptor con solución concentrado de proteína de soja, semilla de algodón y
de NaOH 0,25 N, usando 3 o 4 gotas de indicador. harina de semilla de algodón.
10. Llevar a cabo una determinación en blanco de Tabla 1
sacarosa de todos los reactivos simultáneamente con
las muestras y similares en todos los aspectos. Productos y factores de
Corregir en blanco determinar con reactivos. conversión de proteínas.
11. El rendimiento de todo el método debe verificarse Semilla de algodón (tostada) Proteína = N x 5.30
con frecuencia mediante el análisis del instituto
Cacahuetes (secos) Proteína = N x 5.46
nacional de pruebas (NIST), el dihidrogenofosfato de
amonio certificado (material de referencia estándar Soja (tostada) Proteína = N x 5.71
194) o el hidrocloruro de lisina de alta pureza. Semilla de girasol (seca) Proteína = N x 5.30
12. Determine la humedad en la muestra de suelo Semilla de cártamo (seca) Proteína = N x 5.30
como se indica en el método oficial AOCS Ba 2ª-38, Carne de coco (cruda) Proteína = N x 5.30
sección de procedimiento.
Sésamo (seca) Proteína = N x 5.30
CÁLCULO Maíz Proteína = N x 5.25
1. Nitrógeno% = ([(NA x mLA) - (mLBK x NB) Mijo (sin procesar) Proteína = N x 5.83
- (mLB x NB)] x 1400.67) / (mg de muestra)
Arroz (marrón, largo, Proteína = N x 5.95
Dónde grano)

mLB = volumen, mL base estándar utilizada para la Trigo (rojo duro) Proteína = N x 5.83
muestra Harina de semilla de Proteína = N x 5.30
algodón
mLA = volumen, mL de ácido estándar utilizado para
la muestra Harina de maní Proteína = N x 5.46
Harina de soja Proteína = N x 5.71
mLBK = volumen, mL de base estándar necesaria
para disparar 1 mL de ácido estándar menos la base Harina de girasol Proteína = N x 5.30
estándar de mL necesaria para disparar el blanco de Harina de maíz Proteína = N x 5.25
Harina de cártamo Proteína = N x 5.30
NOTAS semilla de algodón y semillas de algodón) mostraron
que cuando 30 ml de ácido sulfúrico eran comparables
Precaución
con el óxido de mercurio catalizado en métodos.
El ácido sulfúrico es un ácido fuerte y causará Como resultado, las versiones de AOCS de este
quemaduras severas. Se debe usar ropa protectora método pueden especificar el uso de más de 20 ml de
cuando se trabaja con esta ácido. Es un agente ácido sulfúrico, pero por lo demás cumplen con la
oxidante y no debe almacenarse cerca de materiales versión de AOAC (referencias, 5).
orgánicos. Tengo mucho cuidado al mezclarlo con el
2. Se recomienda encarecidamente el uso de tubos y
agua debido a la evolución del calor que el que puede
tapones de goma resistentes al vapor y al agua para
causar la exposición a la salpicadura. Siempre agregue
conectar las piezas de vidrio.
el ácido al agua, nunca al revés.
3. Se necesitan más de 20 ml de ácido sulfúrico
Los alcalinos pueden quemar la piel, los ojos y las
concentrado para muestras con alto contenido de grasa
vías respiratorias severamente. Use guantes de goma
o aceite, ya que se requiere más ácido para efectuar
gruesos y protección facial para proteger contra
una digestión completa, evitar la pérdida de nitrógeno
soluciones alcalinas concentradas. Use un dispositivo
y evitar el apelmazamiento. En recientes estudios de
de eliminación de humos o una máscara de gas para
colaboración que incluyeron la aplicación de este
proteger el tracto respiratorio del polvo o vapor
método a la harina de semilla de algodón, se observó
alcalino. Cuando trabaje con materias
que cuando se usaban 30 ml de H2SO4, el
extremadamente cáusticas como el hidróxido de sodio
apelmazamiento se reducía y los resultados eran
y el hidróxido de potasio, siempre agregue pellets al
comparables con el método catalizado con axiuro de
agua y no al revés. Estos álcalis son extremadamente
mercurio.
exotérmicos cuando se mezclan con agua. Tome
precauciones para contener la solución cáustica en 4. La conversión completa de nitrógeno orgánico a
caso de que el contenedor de mezcla se rompa por el nitrógeno amoniacal es esencial para obtener
calor extremo generado. resultados precisos y precisos. Después de que el
líquido se haya vuelto transparente e incoloro, puede
NOTAS NUMERADAS ser necesario digerir la muestra durante
1. Este método ha sido evaluado a través de la aproximadamente 30-50 minutos adicionales. Las
comparación entre laboratorios de catalizadores y ha proporciones de reactivo, el aporte de calor y el
sido adoptado por el comité como el reemplazo oficial tiempo de digestión son factores críticos y no deben
del método catalizado de óxido mercúrico, método modificarse. Se debe evitar la digestión prolongada y
oficial AOCS Ba 4D-90 (usando la mezcla de las altas temperaturas, ya que las partículas más
catalizador de cobre / titanio) produce resultados más grandes requerirán un tiempo de digestión más
cercanos en el acuerdo con el método oficial AOCS prolongado.
Ba 4a-38 (óxido mercúrico), Ba 4b-87 (sulfato de
5. El producto de digestión refrigerado debe ser
cobre) y Ba 4c-87 (kjel-foss automático) se declararon
líquido o líquido con unos pocos cristales pequeños.
excedentes (obsoletos) en 1991.
El apelmazamiento antes de la adición de agua indica
El estudio colaborativo de la asociación de químicos que hay muy poco ácido residual al final del período
analíticos oficiales (AOAC) (referencias, 4) no mostró de digestión y puede dar como resultado valores bajos
sesgo al comparar el catalizador de Cu / Ti con Hg0. de nitrógeno.
La evaluación interlaboratorio AOCS (referencias, 3),
6. Los datos incluidos en la tabla 1 son solo
basada en peso de muestra, ácido, volumen, digestión,
informativos. Véanse las referencias, 6 para una
temperatura y tiempo, previamente especificado en el
explicación de la discusión de los factores de
método oficial AOCS Ba 4ª-38. Indicó un sesgo
conversión de nitrógeno a nitrógeno-proteína.
promedio de -0.244%, que fue estadísticamente
significativo al 99% de nivel de confianza. Los REFERENCIAS
factores que pueden afectar el sesgo del método son el
1. JONES, D.B., USDA circular N° 183,
peso de la muestra y el tamaño de partícula, la
UNITED STATES department of agriculture,
composición del catalizador, el uso de molido, el
1941.
volumen de ácido utilizado para la digestión, la
digestión y el tiempo de digestión. En 1991, dos
estudios adicionales de colaboración (harina de
2. Composition of foods, agriculture handbook
N° United States department of agricultura,
sections 12.
3. INFORM 1:884 (1990).
4. Kane P.F., J Assoc. Off. Anal. Chem. 70:907
(1987).
5. Oficial methods of analysis, AOAC
international gaithersbrug, MD,(16th ed. 1995,
4.3.03). Meth 988.05.
6. INFORM 3:727 (1992).