Legislative Proposal Relating to

Formula Products and Foods Intended

for Infants and Young Children under
the Age of 36 Months in Hong Kong

Test Methods

3rd Technical Meeting with Trade

17 July 2013

1
Test Methods of Nutrients
 Test methods of nutrients are based on
the following Standards

 Recommended Methods of Analysis and Sampling

(Codex Stan 234-1999)
 International Standard Methods (e.g. ISO Methods,
AOAC Methods and EN Standard Methods)

Note: IF: Infant formula;

FF: Follow-up formula

2
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of  Codex Recommended Method Other 
analysis Standard 
Method
Protein Crude protein AOAC 991.20; ISO 8968‐1/2|IDF 20‐1/2: 2001 
(Type I method, Kjeldahl titrimetry) [IF]
Total  Moisture and  Total carbohydrates
carbohydrates ash AOAC 986.25 (Type I method, Determination by 
difference) [IF]
Moisture or total solids
AOAC 990.19; AOAC 990.20; IDF 21B:1987 or 
ISO 6731:1989 (Type I method, Gravimetry) [IF]
Ash
AOAC 942.05 (Type I method, Gravimetry) [IF]

Dietary fibre Total dietary  AOAC 991.43 (Type I, Gravimetry) [FF]

fibre

3
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of  Codex Recommended Method Other Standard 
anaysis Method
Total Fat AOAC 989.05; ISO 8381|IDF 123:2008 
(Type I Method, Gravimetry) [IF] 
ISO 8262‐1|IDF 124‐1:2005 (Type I 
Method Gravimetry) [IF] 

Fatty acids Linoleic acid, AOAC 996.06 (Gas chromatography) [IF]  AOAC 2012.13 (GC)

‐linolenic acid AOCS Ce 1h‐05 (09) (Gas chromatography) 
[IF] 

4
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Vitamin A All‐trans‐retinol  EN 12823‐1:2000 (HPLC) [IF] AOAC 2011.07 (UPLC)
and 13‐cis‐retinol AOAC 992.04 (HPLC) [FF] AOAC 2011.15 (HPLC)
AOAC 992.06 (HPLC) [FF] AOAC 2012.09 (HPLC)
AOAC 974.29 (Colorimetry) [FF]
Vitamin D Vitamin D3  EN 12821:2000 (D2 & D3,  AOAC 2011.11 (UPLC‐
(cholecalciferol) HPLC)* [IF] MS/MS)
and/or NMKL 167:2000 (D2 & D3, HPLC)  AOAC 2011.12 (UPLC‐
D2 (ergocalciferol) [IF] MS/MS) 
AOAC 992.26 (D2, HPLC) [IF] AOAC 2011.13 (LC‐MS/MS)
AOAC 995.05 (D2 & D3, HPLC)  EN 12821:2009 (HPLC 
[IF] method for all foodstuffs)
AOAC 2012.11 (LC‐MS/MS)
Vitamin E ‐tocopherol  EN 12822: 2000 (HPLC) [IF] AOAC 2012.09 (HPLC)
compounds  AOAC 992.03 (HPLC) [IF]

Note: *The standard EN 12821:2000 is replaced by EN 12821:2009

5
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Thiamine Thiamine EN 14122:2003 (HPLC) [IF]
AOAC 986.27 (Fluorimetry) [IF]

Riboflavin Riboflavin EN 14152:2003 (HPLC) [IF] AOAC 960.46 

AOAC 985.31 (Fluorimetry) [IF] (Microbiological method)**

Niacin Nicotinic acid and   prEN 15652:2009 (HPLC) [IF] AOAC 960.46 

nicotinamide AOAC 985.34 (Microbioassay  (Microbiological Method)**
and turbidimetry) [IF]

**AOAC 960.46 describes microbiological test method for B12, folic acid, niacin, 
pentothenic acid & riboflavin.

6
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Pantothenic  Pantothenic acid AOAC 992.07 (Microbioassay) [FF] AOAC 960.46 
acid (Microbiological Method)**
AOAC 2012.16 (UPLC‐
MS/MS)
Vitamin B6 Pyridoxine,  AOAC 2004.07; EN 14164:2008 
pyridoxal and   (HPLC) [IF]
pyridoxamine AOAC 985.32 (Microbioassay) [IF]
EN 14166:2009 (Microbioassay) 
[IF]
EN 14663:2005 (HPLC) [IF]

Vitamin K Vitamin K1 AOAC 999.15 (HPLC) [FF] AOAC 992.27 (HPLC)

EN 14148:2003 (HPLC) [FF]

**AOAC 960.46 describes microbiological test method for B12, folic acid, niacin, 
pentothenic acid & riboflavin.

7
Method reference for nutrients
Nutrients Definition Codex Recommended Method Other Standard Method
Folic acid Folic acid AOAC 992.05 (Microbioassay)  AOAC 2011.05 (Optical 
[IF] biosensor assay)
EN 14131:2003 (Microbioassay)  AOAC 2011.06 (UPLC‐
[IF] MS/MS) 
AOAC 960.46 
(Microbiological Method)**

Vitamin C Ascorbic acid and  EN 14130:2003 (HPLC) [IF] AOAC 985.33 (Titrimetric)

dehydroascorbic  AOAC 2012.21 (HPLC)
acid AOAC 2012.22 (UPLC)

**AOAC 960.46 describes microbiological test method for B12, folic acid, niacin, 
pentothenic acid & riboflavin.

8
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Vitamin B12 Vitamin B12 AOAC 986.23 (Turbidimetric  AOAC 2011.01 (Surface 
Method) [IF] Plasmon Resonance) 
AOAC 2011.08 (HPLC) 
AOAC 2011.09 (HPLC) 
AOAC 2011.10 (HPLC) 
AOAC 2011.16 (Surface 
Plasmon Resonance) 
AOAC 960.46 
(Microbiological Method)**

Biotin d‐biotin EN 15607:2008 (HPLC) [IF] EN 15607:2009 (HPLC)

**AOAC 960.46 describes microbiological test method for B12, folic acid, niacin, 
pentothenic acid & riboflavin.

9
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Calcium Calcium ISO 8070|IDF 119: 2007 (Flame  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
atomic absorption 
spectrophotometry) [IF]
AOAC 985.35 (Flame atomic 
absorption spectroscopy) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]
Chloride Chloride AOAC 986.26 (Potentiometry) 
[IF]
Iodine Iodine AOAC 992.24 (Ion‐selective  EN 15111:2007 (ICP‐MS)
potentiometry) [IF] [FF] ISO 14378‐2009 (HPLC)
AOAC 992.22 (HPLC)
AOAC 2012.14 (ICP‐MS)
AOAC 2012.15 (ICP‐MS)

10
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Iron Iron AOAC 999.11│NMKL139:1991 (AAS  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
after dry ashing) [IF]
AOAC 985.35 (Flame atomic
absorption spectrophotometry) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]
Magnesium Magnesium ISO 8070|IDF 119: 2007 (Flame  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
atomic absorption 
Spectrophotometry) [IF]
AOAC 985.35 (Flame atomic 
absorption Spectroscopy) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]

11
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Phosphorus Phosphorus AOAC 986.24  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
(Spectrophotometry) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]
Sodium and  Sodium and  ISO 8070|IDF 119:2007 (Flame  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
Potassium potassium atomic absorption 
spectrophotometry) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectrometry) [IF]
Zinc Zinc AOAC 985.35 (Flame atomic  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
absorption spectroscopy) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]

12
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Copper Copper AOAC 985.35 (Flame atomic  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
absorption Spectroscopy) [IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]
Manganese Manganese AOAC 985.35 (Flame atomic  AOAC 2011.14 (ICP‐OES)
absorption spectrophotometry) 
[IF]
AOAC 984.27 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]

13
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Selenium Selenium EN 14627:2005 (Hydride  AOAC 2011.19 (ICP‐MS) 
generation atomic absorption 
spectrometry) [IF]
AOAC 996.16 or AOAC 996. 17 
(Continuous hydride generation 
Flame atomic absorption 
spectrometry) [IF]
AOAC 2006.03 (ICP emission 
spectroscopy) [IF]

14
Method reference for nutrients
Nutrients Scope of analysis Codex Recommended Method Other Standard Method
Choline Choline AOAC 999.14 (Enzymatic  AOAC 2012.18 (UPLC‐
Colorimetric Method) [IF] MS/MS)
AOAC 2012.20 (IC)

Myo‐ Myo‐Inositol AOAC 2011.18 (HPLC) 

Inositol AOAC 2012.12 (IC)

L‐Carnitine L‐Carnitine AOAC 2012.17 (LC‐MS/MS)

15
Thank You

16