Tesis Del Semen en Cuy
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pe
Spermova 2020; 10(2): 94- 101
Artículo original - Original paper DOI. 10.18548/aspe/0008.14
Morphological and morphometric characterization of the guinea pig sperm (Cavia porcellus)
Urbano Cabeza1, César Ordóñez1, Aydee Meza1 , Hernán Cucho1
RESUMEN
El objetivo del estudio fue determinar las características morfológicas y morfométricas del
espermatozoide de cuy (Cavia porcellus), utilizando un sistema de análisis de imágenes. Se colecto
semen de cinco cuyes del tipo 1, de cuatro meses de edad (1.19 ± 0.15 kg) por el método de
electroeyaculación, entre 3 y 5 veces por cada animal, realizándose un total de 22 colectas
adecuadas. Se determinó el volumen, pH, concentración espermática, movilidad total y porcentaje de
espermatozoides vivos. Las muestras para el análisis de la morfología y morfometría espermática
fueron teñidas con Spermac®, y analizadas utilizando el software Motic Image Plus®. La morfología
se analizó en función de la dinámica de su reacción acrosomal, distinguiéndose 4 clases. Se determinó
la longitud, anchura, área, perímetro, elipticidad, elongación, regularidad y rugosidad de la cabeza
del espermatozoide de cuy, así como la longitud de la pieza intermedia y de la cola del
espermatozoide. La morfología del espermatozoide de cuy se analizó con un diseño completo al azar,
y los parámetros morfométricos mediante bloques al azar, empleando la prueba de Duncan para
comparar medias en ambos casos. Con relación a la morfología, se halló diferencias significativas (P<
0.05) en la distribución porcentual de clases, siendo la más recurrente la clase 2 (41.67%), superior a
los otros 3 grupos. Se halló un efecto animal (P< 0.05) en las variables morfométricas de cabeza y
pieza intermedia de los espermatozoides de cuy. Las medidas morfométricas del espermatozoide de
cuy fueron, longitud (7.45 ± 0.29 µm), anchura (6.55 ± 0.25 µm), área (43.02 ± 3.03 µm2), perímetro
(26.56 ±1.07 µm), longitud de la pieza intermedia (12.02 ± 0.70 µm) y longitud de la cola del
espermatozoide (92.96 ± 3.96 µm).
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lo cual se realizó la dilución de la muestra empleando base Tris En este estudio, al realizar las evaluaciones morfológicas de
(Souza, 2009), hasta alcanzar una concentración final de 10 – los espermatozoides, se encontraron las 4 clases descritas por
15 millones de espermatozoides por mL. Las evaluaciones de Kim et al., (2001), discriminándose de forma visual estas
la movilidad total, porcentaje de espermatozoides vivos, células, en cada una de las clases; todas las evaluaciones
morfología y morfometría espermática se realizaron con la morfológicas fueron realizadas por el mismo operador.
muestra diluida. La movilidad de los espermatozoides se
evaluó utilizando un sistema CASA ‐ Mot (ISAS®v1, Proiser R + El segundo análisis efectuado, fue el de las características
D, Paterna, España), empleando un objetivo de 10X de morfométricas, para ello se analizaron 1025 imágenes de los
contraste de fase negativo, los archivos de video se grabaron espermatozoides evaluados morfológicamente. La cantidad de
y analizaron a 25 cuadros por segundo (fps) durante un espermatozoides evaluados de cada clase estaba en función
segundo. La movilidad total (MT), se definió como el porcentaje de las proporciones halladas al realizar la evaluación
de células móviles dentro de la muestra, esta variable se precedente.
analizó en un microscopio de contraste de fases (UOP; Proiser Se midieron los siguientes parámetros morfométricos: longitud
R+D) del sistema ISAS® v1. (L, µm), anchura (W, µm), área (A, µm2) y perímetro (P, µm) de
la cabeza del espermatozoide; la longitud de la pieza
El porcentaje de espermatozoides vivos se valoró empleando intermedia y de la cola del espermatozoide, para las
eosina y nigrosina (Minitube®, Tiefenbach, Alemania), usando mediciones se empleó el software Motic Image Plus 2.0®. De
5 µL de semen, que luego fue mezclado con la misma cantidad las medidas de longitud, anchura, área y perímetro, se
de eosina y nigrosina, las muestras se evaluaron en un determinaron los parámetros de forma de la cabeza del
microscopio trinocular con cámara (Motic BA310; Kowloon, espermatozoide: elipticidad (L/W), elongación ([L-W]/[L+W]),
Hong Kong), empleando el objetivo de 40X, se contó no menos regularidad (πLW/4A) y rugosidad (4πA/P2). Todas las
de 100 espermatozoides por muestra. evaluaciones morfométricas fueron realizadas por el mismo
operador. El estudio de la morfometría de un espermatozoide
Análisis de la morfología y morfometría del espermatozoide de nos permite detectar alteraciones en la espermiogénesis y en
cuy la maduración epididimaria (Hidalgo et al., 2006), lo que
conllevaría a una eficiente selección de reproductores.
Se realizaron frotis empleando 5µL de muestra de semen, una
vez secos (20 minutos), se tiñeron con Spermac® (Stain Análisis estadístico
Enterprises, Onderstepoort, Sudáfrica), según protocolo del
producto. Se aplicó la estadística descriptiva para el volumen, pH,
concentración espermática, movilidad total y porcentaje de
El primer análisis que se realizó fue el de morfología, espermatozoides vivos. Se determinó la normalidad de datos
empleando los frotis preparados con Spermac®, para su con la prueba de Kolmogorov-Smirnov y la homogenidad de
estudio se usó un microscopio con cámara (Motic BA310; varianzas con la de Levene.
Kowloon, Hong Kong) de 3.0 Megapíxeles, las imágenes
fueron tomadas con el software Motic Image Plus 2.0®, La distribución morfológica porcentual por clases no
utilizando el objetivo de 40X, la resolución de las imágenes fue presentaba distribución normal, fue transformada por su
de 2048 x 1536 pixeles, se capturaron 6325 logaritmo decimal, y analizada con un diseño completamente
espermatozoides de las 22 colectas. al azar, la comparación de medias se hizo con la prueba de
Duncan (α=0.05).
Kim et al., (2001), ha diferenciado 4 clases de células
espermáticas de cuy, en función de la dinámica de la reacción Todos los parámetros morfométricos del espermatozoide
de su acrosoma y de los patrones de tinción que éstos excepto el área de la cabeza, no mostraban distribución
produjeron, indican que los espermatozoides de cuy de la clase normal, se empleó el procedimiento Transreg del SAS para su
1, son células completamente intactas; los de la clase 2 tienen transformación. Estas variables fueron analizadas con un
un acrosoma que empieza a hincharse levemente producto del diseño de bloques al azar, la comparación de medias se hizo
inicio de la reacción acrosomal. Los espermatozoides de clase con la prueba de Duncan (α=0.05). Todos los procedimientos
3, presentan un acrosoma que empieza a descomponerse; las estadísticos se realizaron con el programa SAS v 9.4.
células de la clase 4 han perdió la mayoría, si no todo el
contenido acrosómico (Figura 1). RESULTADOS
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Tabla 2. Distribución porcentual (%) de la clasificación morfológica de los espermatozoides de cuy en función de su dinámica
acrosomal.
Clase Cuy
Promedio
morfológica 1 2 3 4 5
1 27.86 29.40 26.84 28.43 28.74 28.19b
2 44.20 39.70 38.40 43.83 42.70 41.67a
3 7.94 11.68 10.02 6.07 6.18 8.44d
4 20.00 19.23 24.74 21.67 22.38 21.70c
Número total de células de cada animal: cuy 1 = 1281; cuy 2 = 972; cuy 3 = 1317; cuy 4 = 1127; cuy 5 = 1628. a-d Superíndices
distintos dentro de columna indican diferencias significativas entre clases. P < 0.05.
Morfometría espermática
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Tabla 3. Variables morfométricas de la cabeza, pieza intermedia y cola del espermatozoide de cuy (media ± DS) en función de
su clase morfológica.
Clase morfológica
Variable Promedio
1 2 3 4
Longitud (µm) 7.40 ± 0.31b 7.44 ± 0.29b 7.24 ± 0.26c 7.62 ± 0.19a 7.45 ± 0.29
Anchura (µm) 6.54 ± 0.26a 6.57 ± 0.25a 6.36 ± 0.23b 6.57 ± 0.21a 6.55 ± 0.25
Área (µm2) 42.41 ± 3.08b 42.85 ± 3.03b 42.33 ± 3.39b 44.64 ± 2.16a 43.02 ± 3.03
Perímetro (µm) 26.55 ± 1.02a 26.74 ± 0.99a 25.50 ± 1.25c 26.33± 1.06b 26.56 ±1.07
Elipticidad 1.13 ± 0.04b 1.13 ± 0.04b 1.14 ± 0.02b 1.16 ± 0.02a 1.14 ± 0.04
Rugosidad 0.76 ± 0.02c 0.75 ± 0.02c 0.82 ± 0.06a 0.81 ± 0.04b 0.77 ± 0.04
Elongación 0.06 ± 0.02b 0.06 ± 0.02b 0.06 ± 0.01b 0.07 ± 0.01a 0.06 ± 0.02
Regularidad 0.90 ± 0.04a 0.90 ± 0.03a 0.86 ± 0.04c 0.88 ± 0.03b 0.89 ± 0.04
Longitud PI (µm) 11.95 ± 0.70b 12.11 ± 0.73a 11.74 ± 0.65c 11.91 ± 0.54b 12.02 ± 0.70
Longitud cola (µm) 92.89 ± 3.77a 93.42 ± 4.07b 90.75 ±3.61c 92.30 ± 3.52b 92.96 ± 3.96
DS: desviación estándar. PI: pieza intermedia. Número total de células de cada clase morfológica: clase 1 = 203; clase 2 = 590;
clase 3 = 67; clase 4 = 165. a-c Superíndices distintos dentro de filas indican diferencias significativas entre variables. P < 0.05.
Hubo efecto animal (P< 0.05) en las variables morfométricas mostraban bajos coeficientes de variación (3.16 a 7.04%),
de cabeza, longitud de la pieza intermedia y cola del excepto la elongación que mostraba un 24.33%.
espermatozoide de cuy (Tabla 4). Las variables morfométricas
Tabla 4. Variables morfométricas de la cabeza, pieza intermedia y cola del espermatozoide de cuy (media ± DS) en función del
animal.
Animal
Variable
1 2 3 4 5
Longitud (µm) 7.38± 0.25b 7.47 ± 0.27a 7.47 ±0.33a 7.49 ±0.33a 7.43 ±0.27a
Anchura (µm) 6.54± 0.23a 6.52 ± 0.26b 6.58 ±0.24a 6.56 ±0.29a 6.55 ±0.24a
Área (µm2) 43.10± 2.89a 42.69 ± 3.21b 43.43 ±3.07a 43.09 ±3.38a 42.73 ±2.62b
Perímetro (µm) 26.57± 1.07a 26.42 ± 1.08a 26.64 ±1.08a 26.49 ±1.22a 26.62 ±0.92a
Elipticidad 1.13± 0.03c 1.15 ± 0.04a 1.14 ±0.04b 1.14 ±0.03a 1.14 ±0.03b
Rugosidad 0.77± 0.04a 0.77 ± 0.04a 0.77 ±0.04a 0.77 ±0.04a 0.76 ±0.03b
Elongación 0.06± 0.01c 0.07 ± 0.02a 0.06 ±0.02b 0.07 ±0.01a 0.06 ±0.02b
Regularidad 0.88± 0.04c 0.90 ± 0.03a 0.89 ±0.04b 0.90 ±0.04a 0.90 ±0.03a
Longitud PI (µm) 11.95 ± 0.60a 11.86 ± 0.72b 12.09 ±0.75a 11.94 ±0.67b 12.20 ±0.70a
Longitud cola (µm) 92.90± 4.20b 91.82 ± 3.71c 93.83 ±3.77a 91.29 ±3.80c 94.31 ±3.47a
DS: desviación estándar. PI: pieza intermedia. Número total de células por animal: cuy 1=216; cuy 2=184; cuy 3=230; cuy 4=170;
cuy 5=225. a-c Superíndices distintos dentro de filas indican diferencias significativas entre variables. P < 0.05.
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Existen reportes que han evaluado la morfología del Esta investigación es el más completo reporte sobre las
espermatozoide de cuy, en función de otras especies como los características morfométricas del espermatozoide de Cavia
conejos (Benavides et al., 2020) u otros roedores, es por ello porcellus, con parámetros no solamente de dimensiones de su
que los valores de espermatozoides normales que se informan cabeza, también de su forma, de su pieza intermedia y cola
son elevados como 95% (Freund, 1969); 96% (Pinduisaca, espermática.
2018); 81.74% (Benavides et al., 2020); pero en dichas
evaluaciones, no se ha considerado que los espermatozoides CONCLUSIONES
de cuy muestran un capuchón acrosomal que excede la cabeza
espermática (Figura 1 y 2), y que al momento de colectar su Se halló 4 clases morfológicas de espermatozoides de cuy en
semen a éste lo podemos encontrar en diferentes estados, función de su dinámica acrosomal, las clases 1 y 2, que
desde intacto hasta ausente, peculiaridad que comparte con el representarían a las células intactas alcanzan alrededor del
cuy silvestre (Cavia aperea) (Cooper et al., 2000). Esta 70% de los espermatozoides, también se encontró un efecto
característica debería ser más valorada al realizar la animal (P< 0.05) en las variables morfométricas de cabeza y
evaluación de la morfología espermática del cuy, y que en pieza intermedia de los espermatozoides de cuy, variables que
nuestro caso alcanza alrededor del 70% de células intactas y muestran escasos coeficientes de variación.
con probable capacidad fecundante, y que se podría
considerar como normales. CONFLICTO DE INTERESES
Se encontró que aproximadamente el 30% de Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés
espermatozoides colectados no presentan acrosoma, o lo han personal o económico, ni sus intereses han influenciado en los
perdido en su mayor parte, que podríamos considerarlos resultados del estudio.
anormales; en la investigación no se ha determinado defectos
especialmente de la cola espermática, por lo cual posiblemente CONTRIBUCIÓN DE LOS AUTORES
este grupo sea algo mayor.
Preparación y ejecución: HC, UC, AM; desarrollo de la
metodología: UC, AM, CO; concepción y diseño: HC; edición
del artículo: HC, UC, AM; supervisión del estudio: HC, CO.
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