Manual de Bacteriologia y Patogenia Bacteriana

INSTITUTO TECNOLGICO DE SONORA
DIRECCIN DE RECURSOS NATURALES

DEPTO. DE CIENCIAS AGRONMICAS Y
VETERINARIAS
MANUAL DE PRACTICAS DEL

LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y PATOGENIA
BACTERIANA
MC JORGE ALBERTO ROBLES MASCAREO
MC ANA LAURA MIRANDA ROMERO
MADN MARIBEL CASTRO URREA
Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

Dra. Ana Laura Miranda R. M.C. Jorge Alberto Robles M. - MADN. Maribel Castro U.
DIRECTORIO
RECTOR
DR. ISIDRO ROBERTO CRUZ MEDINA
VICERECTOR ACADMICO
DR. JESUS HECTOR HERNANDEZ LOPEZ
VICERECTOR ADMINISTRATIVO
MTRO. JAIME RENE PABLOS TAVARES
DIRECTOR ACADMICO
DIRECCIN DE RECURSOS NATURALES
DR. JAIME GARATUZA PAYAN
JEFE DE DEPARTAMENTO
CIENCIAS AGRONMICAS Y VETERINARIAS
Ph.D. JAVIER ROLANDO REYNA GRANADOS
INDICE
Pgina

2
INTRODUCCIN
REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA Y
PATOGENIA BACTERIANA
PRCTICA 1. Medidas de seguridad en el laboratorio de microbiologa
PRCTICA 2. Morfologa microscpica y tinciones simples
PRCTICA 3. Morfologa colonial y aislamiento por estra cruzada
PRCTICA 4. Tincin de gram
PRCTICA 5. Tincin de ziehl-nielsen
PRCTICA 6. Tinciones selectivas
PRCTICA 7. Aislamiento de hongos y morfologa colonial
PRCTICA 8. Cultivo de anaerobios
PRCTICA 9. Uso de medios selectivos
PRCTICA 10. Uso de pruebas bioqumicas
PRCTICA 11. Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos
PRCTICA 12. Coleccin y envo de muestras al laboratorio
PRCTICA 13. Anlisis bacteriolgico de procesos piognicos
PRCTICA 14. Anlisis bacteriolgico de heces y orina
PRCTICA 15. Anlisis bacteriolgico de rganos
PRCTICA 16. Mecanismos de patogenicidad
PRCTICA 17. Anlisis bacteriolgico de alimentos para consumo animal
BIBLIOGRAFA
ANEXO 1. Lineamientos generales de laboratorios del itson
ANEXO 2. Riesgo biolgico
ANEXO 3. Cuidados y manejo del microscopio
ANEXO 4. Lavado, esterilizacin y desinfeccin de materiales
ANEXO 5. Tabla de interpretacin de prueba de sensibilidad a antimicrobianos
ANEXO 6. Formatos de reporte
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INTRODUCCIN
La adquisicin de habilidades y conocimientos que implican el aprendizaje de la
Bacteriologa y Patogenia Bacteriana, tiene implcito para el facilitador del curso y el
estudiante, el manejo de microorganismos potencialmente patgenos o patgenos
para su salud. De ah que resulta indispensable la comunicacin clara y participacin
responsable de cada uno de los integrantes del grupo con la finalidad de minimizar y

controlar los riesgos biolgicos, fsicos y qumicos que se presentan en la realizacin

de cada una de las prcticas que se describen en este manual.
El Manual de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana del Instituto Tecnolgico de Sonora
tiene como objetivo ser una gua para el alumno y el facilitador del curso en el proceso
de aprendizaje, da inicio con la presentacin de los lineamientos del Laboratorio de
Bacteriologa y Patgena Bacteriana y se desarrolla de tal forma que permite al
alumno construir su propio conocimiento a travs de la adquisicin de habilidades
manuales, de observacin minuciosa y del conocimiento a un nivel descriptivo, por lo
que al inicio las prcticas de laboratorio son muy sencillas y permiten la integracin
gradual del conocimiento, hasta la participacin del alumno en actividades de campo
como la toma de muestras, la integracin de la historia clnica, que implican el manejo
y contacto con las
diferentes especies animales, as como la interaccin con los
productores para recabar la informacin necesaria, culminando en la aplicacin e

integracin del conocimiento para llegar a un diagnstico definitivo. Se incluyen
adems en las ltimas sesiones el manejo de pruebas semi automatizadas con
principios biotecnolgicos, que tienen gran demanda por su precisin y rapidez, con
esto se pretende brindar al alumno herramientas actualizadas y conocimientos de
vanguardia para su posterior aplicacin en el rea mdica.
LINEAMIENTOS INTERNOS
DEL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA Y PATOGENIA BACTERIANA
Este documento tiene como objetivo evitar los riesgos de exposicin y accidentes de
contaminacin con microorganismos en el laboratorio.
1. Los maestros, alumnos de servicio social y estudiantes usaran siempre bata blanca,
limpia, abotonada y de manga larga.
2. La tolerancia mxima para permitir el acceso de los alumnos al laboratorio es de 10
minutos.

3. Usar el cabello recogido, calzado cerrado. No se permitir el acceso con pantaln

corto por riesgo de quemaduras y contaminacin.
4. Los alumnos deben tener las uas cortas, sin alhajas (anillos, reloj, pulsera, etc.)
5. No se permite el uso de sombrero y gorras.
6. El alumno guardar sus objetos personales en las gavetas.
7. Est prohibido introducir alimentos, comer, beber, fumar y masticar chicle en el
laboratorio.
8. Apagar el telfono celular al ingresar al laboratorio, no se permitir su uso interno.
9. Evitar llevarse objetos a la boca, tocarse la cara, cabello, ojos, etc.
10. Mantener limpia la mesa de trabajo, desinfectarla al inicio y al trmino de la
prctica.
11. Las cajas de petri y materiales de laboratorio contaminados se les retirara la cinta
adhesiva y etiquetas y se colocarn en el rea sucia para su posterior esterilizacin y
lavado.
12. Los portaobjetos y pipetas contaminados, se colocarn en recipientes con
desinfectante, en el rea sucia, para su posterior lavado.
13. Es requisito indispensable para el ingreso al laboratorio que el alumno lleve el
manual de practicas correspondiente.
14. En caso de heridas o erosiones en la superficie corporal, el alumno dar aviso al
maestro, quien evaluar la magnitud de la lesin y aplicar las medidas de seguridad
necesarias para el caso.
15. El alumno dar aviso inmediato al maestro en caso de derramarse un cultivo viable
o romperse una caja de petri.
16. Antes de salir verifique que las llaves de gas y agua estn bien cerradas.
17. Lavar perfectamente sus manos con agua y jabn y aplicarse el antisptico a
disposicin antes de salir del laboratorio.
18. Los reportes de cada prctica se entregarn una semana despus de concluida,
sin excepcin.
19. Los exmenes se aplicarn al inicio de cada prctica.

20. Es obligatorio que el alumno entregue el diagrama de flujo previo a la realizacin

de la prctica.
21. Todos los alumnos estn obligados a participar en el da asignado para la
esterilizacin y limpieza de los materiales.
ATENTAMENTE
Academia de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana
Prctica 1
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
INTRODUCCIN
Ante los mltiples casos que se han presentado de infecciones asociadas al
laboratorio en los ltimos aos, organismos internacionales como la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS), han recomendado tomar medidas preventivas para
proteger la salud de los investigadores, tcnicos laboratoristas y estudiantes. Si se
consideran estas medidas de seguridad el personal que trabaja en laboratorios de
microbiologa puede minimizar el riesgo de infeccin.
Las medidas de seguridad deben ser adecuadas para el tipo de microorganismo en
estudio, pues estos varan en su capacidad de producir infecciones. Algunos pueden

ser inofensivos, otros pueden causar sntomas leves; otros ms pueden ser graves
para la salud y los menos pueden tener una amplia capacidad de difundirse y causar
brotes epidmicos. Esta gama
ha permitido a los investigadores clasificar a los
microorganismos en cuatro grupos de riesgo. Estos se han publicado en las Medidas

de seguridad del programa de Microbiologa de la Organizacin Mundial de la Salud,
(ver anexo 2).
COMPETENCIA: El alumno aplicar
las medidas de seguridad que se han
implementado en el laboratorio de bacteriologa y patogenia bacteriana para la

proteccin de la salud y se comprometer a seguir los lineamientos marcados en el
Manual de Laboratorios del ITSON.
DESARROLLO DE LA PRCTICA:
Mtodos microbiolgicos
a) El alumno procesar la lectura sealada por el maestro en relacin al Riesgo
Biolgico del Manual de Laboratorios del ITSON, as como la clasificacin de los
microorganismos, las barreras de proteccin y el tipo de laboratorio. Se sugiere la
lectura del Captulo I del libro Mtodos microbiolgicos de Collins (1989).
b) El alumno identificar en el laboratorio las reas de trabajo, rea sucia y de lavado;
adems del equipo y los materiales de bioseguridad, as como su uso.
Equipo de bioseguridad.
Extintor
Materiales para bioseguridad
Guantes de asbesto
Guantes de latex
Cubrebocas
Lentes antisalpicaduras

Bata
Desinfectantes y antispticos
Cofia
Depsitos de material punzocortante
Bolsas de residuos biolgico infecciosos

RESULTADOS
Lee y analiza en grupo el anexo 1 del lineamiento generales del laboratorio del itson y
el anexo 2 de riesgo biolgico.
ASIGNACIN
Elaborar un mapa conceptual sobre la importancia de la bioseguridad en la prevencin
de enfermedades y accidentes dentro del laboratorio de microbiologa. Del capitulo I
medidas de seguridad en laboratorio de Collins (1989).
Prctica 2
MORFOLOGA MICROSCPICA Y TINCIONES SIMPLES
INTRODUCCIN
El microscopio es un instrumento que seguramente ha sido utilizado por los
estudiantes en otros cursos, sin embargo se ha incluido en este curso para recordar su
manejo y desarrollar la habilidad para trabajar con el objetivo de inmersin cuyo uso es
obligado en la observacin de microorganismos y sus estructuras.
El microscopio compuesto es un instrumento de precisin que consiste en una serie
de lentes diseadas y acomodadas para proveer las mximas amplificaciones posibles
del espcimen que se va a observar. El aumento total que se puede alcanzar en un
microscopio compuesto depende de la combinacin del ocular con el objetivo y se
obtiene multiplicando el nmero de aumento del ocular por el nmero de aumento del
objetivo. En el anexo 2, se pueden ver los cuidados y manejo del microscopio.
Tratar de observar a los microorganismos con un microscopio ptico sin un contraste
adecuado es casi imposible, ya que como los microorganismos estn compuestos
8

sobre todo de agua, que es el medio en el que normalmente estn suspendidos, es

como tratar de ver un objeto blanco sobre un fondo blanco. Las tinciones que se usan
en microbiologa se desarrollaron para incrementar el contraste entre el espcimen y el
fondo que lo rodea, ante la necesidad de poner de manifiesto la forma, tamao y
agrupacin de las bacterias, as como sus estructuras. Fue Roberto Koch quien
introdujo en microbiologa el uso de preparaciones fijas o permanentes (frotas), al dejar
secar al aire las preparaciones en fresco y sin teir, para fijarlas qumicamente y
teirlas despus con colorantes derivados de la anilina. En la actualidad, la mayora
de las tcnicas de tincin usan frotis fijos que consisten en colocar sobre un
portaobjetos, una suspensin de bacterias que se deja secar. A la preparacin as
obtenida, se le pasa rpidamente sobre una flama para que el calor fije las clulas al
portaobjetos. La accin desnaturalizante del calor deshidrata la suspensin y mata a la
mayora de las bacterias, dejndolas en posibilidad de ser teidas posteriormente, as
mismo, evita que las bacterias se desprendan del portaobjetos durante los diferentes
procesos de tincin. Es importante saber que algunas bacterias pueden sobrevivir
a la fijacin del calor, por lo que todo frotis fijo debe considerarse
potencialmente infeccioso.
En el
procedimiento de tincin se emplea un slo colorante. Una vez fija la
preparacin, se le agrega la solucin colorante y se deja actuar aproximadamente un

minuto, se enjuaga con agua para quitar el exceso de colorante, se deja secar y se
procede a observar al microscopio.
Los colorantes son sustancias que originalmente se derivaron de la anilina y que
qumicamente estn constituidos por uno o ms anillos aromticos. Estos anillos
aromticos presentan sustituyentes llamados cromforos que son responsables del
color, formando los compuestos cromgenos. Estos cromgenos presentan adems,
grupos ionizables llamados auxocromos que permiten unir el colorante a estructuras
de carga contraria de clulas y tejidos. Sin estos grupos las soluciones coloridas no
podran teir.

Figura1. Colorante safranina
Fuente: http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/v10n3/larez.html
COMPETENCIA: El alumno diferenciar la forma y agrupacin microscpica de los

microorganismos mediante el uso de tinciones simples y el microscopio compuesto.
MATERIAL:
Microscopio de campo luminoso
Aceite de inmersin
Soluciones de cristal violeta, azul de metileno,
Tela suave y papel seda

Lpices de colores
Verde de malaquita, safranina y fucsina bsica.

Cultivo de bacterias
Portaobjetos
Asa bacteriolgica
Mechero de Bunsen
Puente de coloracin.
MTODOS:
Antes de iniciar con los procedimientos de la prctica leer el anexo
1. Elaboracin de frotis a partir de un medio slido
-
Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados
Con el asa bacteriolgica o un gotero, coloca una pequea gota de agua en el

centro del portaobjetos.
10

Con el asa estril toma una pequea cantidad de crecimiento y con movimientos
giratorios haz una suspensin homognea en la gota de agua, extendindola
para formar una pelcula delgada.
Esterilice nuevamente el asa.
Deja secar al aire el frotis
Fija el frotis al calor pasando la parte posterior del portaobjetos dos o tres veces
por la flama del mechero, hasta alcanzar una temperatura que sea soportable
en el dorso de la mano. Es importante que la laminilla no se caliente demasiado
pues podras calcinar a las bacterias modificando as sus caractersticas
morfolgicas y tintoriales.
Colocar el frotis en el puente de tincin y cubrirlo con el colorante seleccionado

durante un minuto
Lavar con chorro de agua suave y escurrir
dejar secar al aire y observar al microscopio con todos los objetivos 10X, 40X y
100X
2. Elaboracin de frotis a partir de medio lquido

- Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados.
- Sin poner agua, coloca con el asa estril dos o tres gotas del cultivo en el centro
del portaobjetos y extindelas para formar una pelcula delgada y homognea.
- Deja secar al aire los frotis
- Fija los frotis al calor como se explico en el caso anterior.
- Colocar el frotis en el puente de tincin y cubrirlo con el colorante seleccionado
durante un minuto
- Lavar con chorro de agua suave y escurrir
- Dejar secar al aire y observar al microscopio con todos los objetivos 10X, 40X y
100X
- Realizar los dibujos correspondientes de cada una de las observaciones
realizadas, indicando formas y agrupaciones. Compara tus observaciones con
la figura 2.
ASIGNACIN:
11

1. Incluir en el reporte los esquemas de las preparaciones observadas con los

objetivos 10x, 40x y100x de cada uno de los microorganismos.
2. Investiga quien fue Roberto Koch y haz una resea de sus principales aportaciones
a la microbiologa.
3. Investiga la forma, y caractersticas generales de los microorganismos que
observaste e incluye la referencia de las fuentes consultadas.
Prctica 3
MORFOLOGA COLONIAL Y AISLAMIENTO POR ESTRA CRUZADA
INTRODUCCIN
Adems del mtodo de las diluciones para aislar microorganismos, existen otros que son
cualitativos, siendo el de la estra cruzada el ms comn. Este consiste en tomar
directamente de la muestra que nos interesa, una pequea cantidad con ayuda del asa
bacteriolgica que se deposita en la superficie del medio de cultivo slido; luego se
hacen estras con movimientos sucesivos del asa hacia un lado y otro, a la vez que se
recorre de una orilla hacia el centro de la placa. Este procedimiento es equivalente a las
diluciones ya que cada vez que se va extendiendo el contenido microbiano a lo largo de
la estra, llegar el momento en que an cuando se tenga en un principio una gran
cantidad de organismos, se obtendrn colonias aisladas en algn punto a lo largo de la
serie de estras. Un buen aislamiento en placa se dar cuando se obtengan colonias
aisladas de microorganismos, con una distancia que nos permita distinguir y
describir su morfologa colonial. La observacin cuidadosa de las colonias ha
mostrado que las caractersticas morfolgicas suelen ser constantes el medio de cultivo
usado y que stas varan en apariencia dependiendo del grupo microbiano. Esto ha
permitido iniciar el reconocimiento de los principales grupos de microorganismos sin
llegar a ser una identificacin definitiva.
Las caractersticas que se toman en cuenta para describir la morfologa colonial
son las descritas a continuacin y que se observan en la figura 2.
12

Tamao: medir el dimetro en milmetros

Color: coloracin de la colonia y del medio de cultivo
Forma: pueden ser puntiformes, circulares o irregulares
Elevacin: pude ser plana, elevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada o
crateriforme.
Bordes: pueden ser enteros, lobulados, ramificados, filamentosos, dentados o
irregulares.
Superficie: puede ser lisa, rugosa o granular.
Luz reflejada: puede ser brillante o mate
Luz transmitida: puede ser opaca, transparente o translcida.
Consistencia: puede ser dura o suave, esta ltima puede ser butirosa, mucoide o
friable.
Figura 2. Morfologa colonial
13

FUENTE
COMPETENCIA: Adquirir los conocimientos necesarios para diferenciar las formas

coloniales bacterianas y desarrollar las habilidades para poder llevar a cabo el
aislamiento de bacterias por medio de la tcnica de estra cruzada.
MATERIAL:
Cajas petri con medios de cultivo:
1. Generales (Agar Nutritivo)
2. Diferenciales (Agar Sal Manitol, Verde Brillante y TCBS)
3. Caldo tripticaseina de soya (medio lquido en tubo).
4. Agar Nutritivo inclinado (en tubo).
Cultivos bacteriolgicos varios:
Bacillus,
2. Pseudomonas
1.
Cultivos de levaduras:
1. Torula sp,
.- Escherichia coli,
- Staphylococcus .
- Klebsiella pneumoniae
- Sacharomyces.
Materiales:
Asa bacteriolgica
Portaobjetos
Mechero de Bunsen
Cubreobjetos
Chispa
Regla
Gradilla
Puente para tincin
Bolsa de plstico transparente
MTODO
Descripcin de la morfologa colonial.
1. Escoger 2 medios de cultivo diferentes y seleccionar una colonia aislada .
2. Medir cada una de las colonias (usar regla) y expresarlo en mm.
3. Describir el color de cada colonia.
14

4. Describir la forma, borde, elevacin y superficie de acuerdo a la gua anexa.

5. Observar la luz reflejada y transmitida a contraluz, sin abrir la caja de Petri.
6. Apreciar la consistencia tocando la colonia con el asa previamente flameada y
enfriada.
I. Procedimiento para la siembra en estra cruzada.
NOTA IMPORTANTE: Sembrar y manipular los cultivos en un rea aproximada de
20 cm alrededor del mechero de Bunsen.
No abrir la caja fuera de esta rea.
No hablar mientras siembres y manipules los cultivos.
1. Flamear y enfriar el asa bacteriolgica.
2. Tomar una pequea porcin de una colonia aislada.
3. Tocar el agar suavemente y deslizar el asa sin rasgarlo a manera de zigzag.
(Observar el esquema anexo en la parte marcada con el nmero 1 (primer
cuadrante).
4. Flamear al rojo el asa, enfriar y extender las ltimas lneas de siembra del
primer cuadrante. (Observar el esquema anexo en la parte marcada con el
No.2. (segundo cuadrante).
5. Repetir el mismo procedimiento segn se indica en el esquema, en el tercero y
cuarto cuadrante.
6. Practica este procedimiento en las circunferencias anexas al final de esta
prctica usando un lpiz.
Figura 3. Tcnica de aislamiento por estra cruzada
15

7. Identifica las cajas con los siguientes datos:

Nmero de equipo.
Horario de laboratorio
Nombre del cultivo bacteriano.
8. Incubar las cajas hasta las 24 horas a 37C. (El maestro indicar el rea a usar
de la incubadora).
9. Describir la morfologa colonial de una colonia aislada de cada una de las cepas
bacteriolgicas que se proporcionaron.
10. Introducir las cajas de Petri en una bolsa de plstico (solicitarla en el almacn) y
colocarlas en el refrigerador con su respectiva identificacin.
II. Siembra en medios slidos en tubo con agar inclinado
1. Tomar una asada del cultivo a sembrar con el asa previamente esterilizada
y enfriada
2. Abrir el tubo de agar cerca de la flama, sin soltar la tapadera
3. Introducir el asa con el cultivo hasta el fondo del tubo
4. Arrastrar el asa haciendo zigzag sobre la superficie del agar
5. Incubar los tubos durante 24 hrs a 37C (el maestro indicar el rea a usar
de la incubadora)
6. Introducir los tubos en una bolsa de plstico y colocarlas en el refrigerador
con su respectiva identificacin.
16

III. Siembra en medio lquido

1. Tomar una asada del cultivo a sembrar con el asa previamente esterilizada
y enfriada
2. Abrir el tubo de agar cerca de la flama, sin soltar la tapadera
3. Introducir el asa con el cultivo hasta el fondo del tubo
4. Agitar el asa vigorosamente dentro del medio de cultivo
5. Incubar los tubos durante 24 hrs a 37C (el maestro indicar el rea a usar
de la incubadora)
6. Introducir los tubos en una bolsa de plstico y colocarlas en el refrigerador
con su respectiva identificacin
ASIGNACIN
1.
Investiga al menos otros 2 mtodos de aislamiento de cultivos bacterianos.
2.
Compara el mtodo desarrollado en la practica con los mtodos que

investigaste, seala adems las ventajas y desventajas de cada uno de
ellos.
Prctica 4
TINCIN DE GRAM
INTRODUCCIN
17

En 1884 un mdico dans, Hans Cristian Gram, desarroll y public un mtodo de

tincin que lleva su nombre y que es de enorme utilidad en cualquier laboratorio de
bacteriologa. La tcnica adems de revelar detalles referentes a la forma y agrupacin
bacteriana, como cualquier otra tcnica de tincin, permite clasificar a las bacterias en
dos grandes grupos Gram positivas y Gram negativas.
La diferenciacin de Gram se tiene en el color que adquieren las bacterias cuando se
tratan con el colorante cristal violeta seguido por una solucin yodurada de potasio
(lugol), como mordiente o mordente. Ciertas bacterias pierden la coloracin violeta
rpidamente cuando se decoloran con alcohol etlico, en tanto que otras la pierden con
ms lentitud. Despus de la decoloracin se usa un colorante de contraste que casi
siempre es safranina. Las bacterias resistentes a la decoloracin conservan una
tonalidad azul o morada clasificndose como Gram positivas. Las bacterias que no
pueden retener la tincin con cristal violeta, toman la coloracin de contraste
presentando una coloracin rosa o roja; a estas bacterias se les denomina Gram
negativas. Es importante observar que la base de esta diferenciacin es ms bien la
velocidad de decoloracin que una caracterstica absoluta de las bacterias, por lo que
el procedimiento se debe realizar con mucho cuidado.
La afinidad tintorial mostrada por las bacterias Gram positivas y Gram negativas, se
debe a las diferencias en la estructura de la pared celular. Las bacterias Gram
negativas tienen una capa delgada de peptidoglicano rodeada de una membrana
externa construida de fosfolpidos y lipopolisacrido.
La tincin de Gram es aplicada en forma universal como primer paso en la
identificacin
de
las
bacterias.
Desafortunadamente
existen
algunos
grupos
bacterianos en los cuales la tincin de Gram no es de utilidad taxonmica, por ejemplo:

las espiroquetas, micobacterias, clamidias, rickettcias y micoplasmas.
18

El mtodo de la tincin de Gram ha sufrido varas modificaciones y algunas de stas

son incluso mejores que el mtodo original. Los objetivos principales para modificar la
tincin han sido:
1.
Obtener un colorante primario ms estable que el original, ya que ste se

deteriora rpidamente
2.
Reducir el tiempo requerido para completar la tcnica.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn los conocimientos necesarios para aplicar la

tcnica de tincin de Gram en especies bacterianas conocidas y poder determinar si
pertenecen al grupo Gram positivo o Gram negativo.
MATERIAL
Solucin de cristal violeta
Solucin de lugol
Solucin de alcohol-acetona
Solucin de safranina
Portaobjetos
Asa bacteriolgica
Mechero Bunsen
Microscopio
Aceite de inmersin
Cepas de Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus y Escherichia coli.
Puente para tincin
MTODOS
1. Tincin de Gram
-
Haga frotis de cada bacteria y fjelos a la flama del mechero, tome en cuenta el
procedimiento a seguir si los hace a partir de medio slido o lquido.
Cubra los frotis con la solucin de cristal violeta (colorante primario).
19

Deje actuar esta mezcla por 1 minuto.

-
Escurra el exceso de colorante y lave con un chorro suave de agua.
Sacuda la laminilla para evitar gotas gruesas de agua y aplique la solucin

de lugol (mordente). Deje actuar por 1 minuto.
Escurra el exceso de lugol y lave con un chorro suave de agua.
Sacuda la laminilla y aplique el alcohol-acetona (agente decolarante) durante 3

a 5 segundos. Corte el proceso de decoloracin lavando con agua.
Sacuda el frotis y aplique safranina (colorante de contraste) y djelo

por
10 -20 segundos.
Lave por ltimo con un chorro de agua suave y deje secar el frotis al aire y
use
actuar
un papel absorbente presionando ligeramente sin tallar.
Observe al microscopio con el objetivo de inmersin.
INFORME
1.
Haga esquemas de las preparaciones realizadas con las cepas de referencia y

anote el nombre de las bacterias, la forma, agrupacin y su reaccin de Gram.
2.
Haga esquemas de las preparaciones de las mezclas de bacterias teidas.
ASIGNACIN
1. Explique cual es el paso crtico en la tincin de Gram.
2. Indique al menos dos factores que pueden alterar los resultados en la tincin de
Gram.
3. Anote cinco gneros bacterianos de importancia veterinaria que sean Gram
positivos y cinco Gram negativos.
20

PRCTICA 5
TINCIN DE ZIEHL-NIELSEN
INTRODUCCIN
Adems de la tincin de Gram, hay otra tincin diferencial empleada en bacteriologa
que es la tincin de Ziehl-Nielsen o cidorresistente. Esta tincin se fundamenta en
que la mayora de las bacterias son decoloradas por una mezcla de alcohol-cido
siendo la excepcin las de los gneros Mycobacterium y Nocardia. Estos gneros
bacterianos forman un grupo de microorganismos que se definen, con base en
sus propiedades tintoriales, como bacilos cido alcohol resistentes (BAAR). Son
relativamente impermeables a los colorantes bsicos, pero una vez teidos, retienen
fuertemente el colorante y resisten la decoloracin con solventes orgnicos
21

acidificados. La propiedad de ser cido-alcohol resistente est determinada por la

composicin de la pared celular, la cual adems de la peptidoglicana, est constituida
por un alto porcentaje de glicolpidos hidrofbicos (ceras), como el cido miclico en
Mycobacterium y el cido nocrdico en el gnero Nocardia. La presencia de estas
cepas hidrofbicas previenen la penetracin de soluciones acuosas, siendo la causa
de que estos microorganismos no puedan ser teidos por los mtodos convencionales
como la tcnica de Gram.
En la actualidad la tincin de Ziehl-Neelsen tiene gran importancia como una de las
pruebas en el diagnstico de Mycobacterium tuberculosis agente causal de
tuberculosis, enfermedad granulomatosa crnica tanto del hombre como de los
animales y cuya incidencia ha aumentado recientemente.
Es importante mencionar que en el anlisis de un frotis de material clnico
sospechosos de contener bacilos tuberculosos, el hallazgo de un solo bacilo cido
alcohol resistente tiene valor diagnstico ya que en la mayora de los casos no son
abundantes. Sin embargo la interpretacin del hallazgo debe hacerse con cautela y
con base en la historia clnica y otras pruebas de laboratorio, debido a la existencia de
especies saprofitas de Mycobacterium y que podran conducir a un diagnstico falso.
Por otra parte, existen algunas especies de Corynebacterium y Nocardia que
ocasionalmente pueden comportarse como bacterias cido-alcohol resistente.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn los conocimientos para llevar a cabo la
tincin de Ziehl-Nielsen sobre clulas bacterianas conocidas para poner de manifiesto
las diferencias entre las bacterias cido alcohol-resistentes y las que no lo son.
MATERIAL:
Solucin fucsina fenicada
Solucin de alcohol cido
Solucin de azul de metileno
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Puente de coloracin
Portaobjetos
Mechero de Bunsen
Microscopio
Asa bacteriolgica
Aceite de inmersin
Cepas de Staphylococcus aureus, Bacillus y Klebsiella
Montajes de Mycobacterium tuberculosis teidos con Zielh-Neelsen
MTODOS:
Tcnica de Ziehl-Neelsen.
1.
Haga dos frotis con las cepas asignadas.
2.
Deje secar los frotis al aire y fjelos con calor.
3.
colocar papel filtro sobre el frotis
4.
Cubra los portaobjetos con fucsina fenicada.
5.
Caliente suavemente con la flama del mechero hasta la emisin de vapores y

mantenga la emisin durante cinco minutos.
NOTA: El colorante no debe hervir ni secarse, por lo que puede continuar
agregando colorante conforme sea necesario.
6.
Dejar enfriar
7.
Escurra el exceso de colorante y retire suavemente el papel
8.
lave con un chorro de agua suave.
9.
Decolore exhaustivamente con alcohol cido, realizando dos decoloraciones de

un minuto cada una
10.
Lave con un chorro suave de agua.
11.
Cubra el frotis con azul de metileno y djelo actuar durante un minuto.
12.
Lave por ltimo con un chorro suave de agua y deje secar la preparacin.
13.
Observe los frotis con objetivo de inmersin.
14.
Describa la morfologa microscpica de las cepas a las que realiz la tincin y al

montaje de Mycobacterium tuberculosis y realice esquemas de c/u de los frotis.
23

Las bacterias cido alcohol resistentes (BAAR +) se tien de color rojo y las no
cido-alcohol resistentes (BAAR -) de color azul.
INFORME
1.-
Describa la morfologa microscpica de las cepas a las que realiz la tincin de

Ziehl-Nielsen y haga esquemas de cada uno de los frotis
ASIGNACIN
1 Investigar Por qu es necesario calentar el colorante primario en esta tcnica?
2. Investigar a que se debe la propiedad de algunas bacterias de ser cido-alcohol
resistente.
PRCTICA 6
TINCIONES SELECTIVAS
INTRODUCCIN
Muchas estructuras bacterianas se pueden observar en condiciones adecuadas, sobre
todo cuando se aplican ciertas tcnicas de tincin. Aunque algunos constituyentes
celulares son comunes en todas las clulas, otros solo los poseen ciertas especies.
Las tinciones selectivas se utilizan para poner de manifiesto estructuras celulares o
bien para obtener informacin acerca de sus componentes a travs de su reaccin con
los colorantes. En general las tcnicas de tincin se basan en el hecho de que la
estructura celular que se desea poner de manifiesto tiene mayor grado de afinidad por
los colorantes utilizados, que el resto de la clula. As se puede teir o poner de
manifiesto estructuras como la cpsula, pared celular, material gentico, fimbrias o
pilis, flagelos, endoesporas e inclusiones citoplasmticas.
Los colorantes cidos, que no tien a la clula, son a veces tiles para revelar las
capas superficiales con bajo ndice de refraccin, como la cpsula, que se encuentra
sobre la pared celular envolviendo a las bacterias. La mayora de las cpsulas
bacterianas estn compuestas por polisacridos mientras que otras son de naturaleza
24

polipeptdica. La cpsula desempea un papel importante en la virulencia de algunas

bacterias patgenas, ya que les confieren propiedades antifagocticas que interfieren
con los mecanismos de defensa de los organismos infectados. Las cpsulas no
pueden observarse en frotis teidos con las tcnicas usuales, porque son incapaces
de retener el colorante y porque los procesos de fijacin al calor y el lavado las
disuelven; por lo tanto, las tinciones negativas como la de rojo congo y la de tinta china
o nigrosina donde no se tie la bacteria pero s su alrededor y no se usa el calor, ni
sustancias qumicas fuertes, resultan ser la mejor opcin.
Las esporas bacterianas o endoesporas son estructuras producidas durante el ciclo
de vital de ciertos gneros, que presentan una gran resistencia a agentes fsicos y
qumicos debido al nmero y estructura qumica de sus cubiertas. Por sta misma
razn, las endoesporas son impermeables a los colorantes y en una tincin normal, se
observan como estructuras altamente refringentes y sin teir. Sin embargo cuando se
aplica calor a un frotis cubierto de verde malaquita como en el caso de la tcnica de
Schaeffer y Fulton, se facilita la penetracin del colorante. El lavado y teido posterior
con safranina como colorante de contraste, permite ver a las endoesporas de color
verde dentro de clulas rojas.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn y aplicaran los conocimientos para realizar
algunas tcnicas de tincin selectivas y observar algunas
estructuras bacterianas
(cpsulas y endoesporas).
MATERIAL
Solucin de cristal violeta
Solucin de lugol
Solucin de alcohol-acetona
Solucin de verde malaquita
Solucin de safranina
Solucin de rojo congo
Solucin mordente de cpsula
25

Papel filtro
Agua destilada
Portaobjetos
Pinzas de diseccin sin dientes
Puente de tincin
Mechero de Bunsen
Asa bacteriolgica
Pizeta
Microscopio
Aceite de inmersin
Cepas de Klebsiella pneumoniae, Bacillus sp y Staphylococcus aureus
MTODOS
I. Observacin de cpsula
Tcnica del rojo congo
1. Coloque una pequea gota de rojo congo en el centro del portaobjetos.
2. Tome un poco de cultivo de Klebsiella pneumoniae y suspndala en la
gota de rojo congo, extindala hasta formar una pelcula delgada.
3. Deje secar al aire y NO FIJE EL FROTIS AL CALOR.
4. Cubre el frotis con mordente de cpsula y djelo actuar por un minuto.
5. Lave el frotis con agua destilada y deje secar al aire.
6. Observe el portaobjetos con lente de inmersin.
7. Repita el mismo procedimiento con la cepa de Staphylococcus aureus.
8. Realice los esquemas de sus observaciones.
9. Al terminar la observacin, deseche la preparacin en un frasco con
desinfectante.
NOTA: La cpsula se observar como una zona clara o transparente
alrededor de la bacteria, que se observa de color rojo en un campo color azul
oscuro.
26

Figura 4. Estructura bacteriana
Figura 5. Observacin microscpica de capsula
Fuente: www.alaquarium.com/bacterias
Fuente: ASM MicrobeLlibrary.org
II. Observacin de esporas.

Tcnica de tincin de Gram.
1. Haga un frotis de la manera usual con Bacillus.
2. Tia el frotis por la tcnica de Gram.
3. Observe el frotis con lente de inmersin.
4. Repita el mismo procedimiento con el cultivo de K.pneumoniae.
5. Realice los esquemas de sus observaciones.
27

6. Al terminar la observacin, deseche la preparacin en un frasco con

desinfectante.
NOTA: Las bacterias Gram positivas se vern de color azul o morado, y las
esporas se observaran como zonas claras sin teir.
Las bacterias Gram negativas se vern de color rosa o rojo, observe la
ausencia de las esporas.
Tcnica de Schaeffer y Fulton.

1. Haga un frotis de la manera usual con Bacillus.
2. Cubra el frotis con un papel filtro e imprgnelo con verde malaquita.
3. Caliente el frotis con el mechero hasta la emisin de vapores.
4. Mantenga la emisin por cinco minutos. Evite que el colorante hierva o
se seque el frotis.
5. Deje enfriar y desprenda suavemente el papel filtro.
6. Lave el frotis exhaustivamente con un chorro de agua suave y sacdalo
para eliminar el exceso de agua.
7. Cubra el frotis con safranina y djela actuar por un minuto.
8. Lave con un chorro de agua suave.
9. Secar al aire la preparacin o con ligera presin con toallas absorbentes.
10. Observe con lente de inmersin.
NOTA: Las esporas se observarn de color verde y las bacterias de
color rojo.
Figura 6. Esporas bacterianas. A) subterminales b y c) centrales d) terminales
28

Fuente: Johnson T. And Case C (1992).
Figura 7. Esporas bacterianas.
Fuente
ASIGNACIN
1. investigue cinco ejemplos de bacterias de importancia en veterinaria que tengan
capsula.
2. investiga que compuestos qumicos pueden formar a las capsulas.
3. investigar tres ejemplos de bacterias de importancia en veterinaria que formen
esporas.
4. investigar cuales son las partes que forman a una espora bacteriana.
29

PRCTICA 7
AISLAMIENTO DE HONGOS Y MORFOLOGA COLONIAL
INTRODUCCIN
Los hongos son organismos eucariticos unicelulares o filamentosos con paredes
celulares compuestas de quitina y otros polisacridos, no fotosintticos, saprofitos o
parsitos, quimiorganotrficos aerobios que se nutren por absorcin y se propagan por
esporas producidas en condiciones normales de reproduccin sexual y asexual. Esta
definicin tan vaga y amplia se hizo para abarcar todas las anomalas morfolgicas y
fisiolgicas que ocurren entre los hongos.
La clasificacin de los hongos se basa en gran parte en las estructuras de
reproduccin que incluyen la naturaleza del ciclo biolgico, las estructuras
reproductoras y las esporas. Los principales grupos taxonmicos se basan en las
esporas de reproduccin sexual. Aunque en un sentido sistemtico formal las
levaduras no son diferentes del resto de los hongos, en la prctica es frecuente que
stas se traten por separado de los hongos filamentosos tanto en los sistemas de
clasificacin como de identificacin, ocurriendo lo mismo para otro tipo de hongos
como son las setas. Algunos hongos presentan un comportamiento dimrfico, esto
significa que pueden presentar una forma filamentosa y otra levaduriforme
30

dependiendo del ciclo de vida, del hbitat en el que se encuentren o de las

condiciones de cultivo.
Tradicionalmente los hongos se han separado en dos grandes grupos, los
Mixomicetos y los Eumicetos. Los mixomicetos representan la lnea divisoria entre
los protozoos y los hongos. Desde el punto de vista veterinario, los hongos tienen gran
inters debido a que algunas especies causan enfermedades (micosis) y otras se
desarrollan en el alimento para animales produciendo micotoxinas, que pueden
provocar intoxicaciones alimenticias.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn las habilidades para llevar a
cabo el
aislamiento de hongos, y realizar la diferenciacin de las estructuras que los forman

mediante una descripcin morfolgica tanto macroscpica como microscpica
MATERIAL
Cajas de petri con agar rosa de bengala
Cajas petri con agar dextrosa Sabouraud
Tubos de ensaye de 16 X 150 con 10 ml de formaldehdo al 10%
Asa en ngulo recto
Portaobjetos y cubreobjetos
Puente de coloracin
Solucin de lactofenol azul de algodn.
Barniz de uas transparente
Fenol al 3 %.
Algodn
Papel Kraft.
Microscopio
Cubrebocas
Guantes de latex
Jabn antisptico lquido verificar con Jorge si esta en el listado de uso del maestro.
31

Cepas de Penicillium sp, Aspergillus sp y Sacharomyces cerevisae o Torula

MTODOS
PRIMERA SESION
Aislamiento de hongos
NOTA IMPORTANTE
Coloca el cubre bocas de modo que proteja tu nariz y boca.
Evita moverte de un lugar a otro para evitar el desplazamiento de las
esporas.
Coloca un tapete humedecido con fenol al 3 % en la superficie de la
mesa donde vas a trabajar.
1. Revisa antes de iniciar que hayas cumplido con las indicaciones de la NOTA
IMPORTANTE.
2. Coloca sobre el papel humedecido los cultivos de hongos a sembrar, el mechero
de bunsen y los medios de cultivo.
3. Esteriliza al fuego el asa doblada en ngulo recto (90) y toma un poquito del
micelio areo.
4. Siembra el hongo por picadura en el centro de una placa de agar dextrosa
Sabouraud.
5. Repite el mismo procedimiento con la placa de agar Rosa de Bengala.
6. Siembra el hongo levaduriforme (Sacharomyces o Torula) estriando sobre la
placa de agar.(como en la prctica 3)
7. Sella las placas con cinta maskintape.
8. Incuba los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente durante 3 - 4
das.
9. Revisa los medios de cultivo cada 24 a 48 hrs.
10. Anota los cambios de forma y color que se presentan.
32

Observacin de la morfologa microscpica.

IMPORTANTE.
2. Coloca sobre el papel humedecido los cultivos de hongos a sembrar, el
mechero de bunsen y los medios de cultivo.
3. Marca con lpiz de cera los portaobjetos y coloca en el centro una gota de
lactofenol azul de algodn.
4. Haz una suspensin con un poquito del micelio revolviendo exhaustivamente
para separarlo.
5. Coloca un cubreobjeto.
6. Observa con objetivos 10X y 40X.
7. Realiza los dibujos de las estructuras que observes.
8. Compara tus dibujos con los esquemas anexos.
9. Repite el procedimiento para la levadura, pero tiendo con Gram
SEGUNDA SESIN
IMPORTANTE.
2. Coloca sobre el papel humedecido los cultivos de hongos que sembraste en
la primera sesin y el mechero de bunsen.
3. Describe la morfologa colonial de los hongos, intercambindolos entre los
equipos.
4. Describe las siguientes caractersticas y registrar conforme se pide en el
cuadro siguiente.
33

Cuadro 1. Caractersticas a evaluar de la morfologa colonial de los hongos.

Tamao
Aspecto
Mide en cm, Observa

el dimetro de superficie
la
colonia hongo,
fungal.
puede
Color del
Color del
Produccin y
micelio areo
micelio
color del
vegetativo
pigmento
la Observa
del cambios
y y
ser; descrbelos
partiendo
aterciopelado,
centro
difusible
el Nota
algn
de grueso del agar cambio de color
que color
algodonoso,
grnulos
los Observa
describe
color
el en el medio de
del cultivo original.
del crecimiento
a
la fungal.
o periferia.
pulvurulento.
5. Realiza preparaciones en fresco de los dos hongos seleccionados.
6. Coloca un poco de micelio areo en un portaobjetos que contenga una gota
de lactofenol azul de algodn.
7. Dispersa el micelio en el colorante.
8. Cubre la preparacin con un cubreobjetos.
9. Observa la preparacin al microscopio usando objetivos seco dbil y seco
fuerte.
10. Describe la morfologa microscpica considerando las siguientes
caractersticas mostrados en cuadro 2 y compara con las figuras 8 y 9.
Cuadro 2. Morfologa microscpica

Dimetro de micelio
Microsifonado,
macrosifonado
Tipo de micelio
o Observa las hifas. Describe si son
34

cenoctico.
septados,
ramificadas, pigmentadas o
hialinas
Figura 8.Tipo de esporas y estructuras reproductoras.
Fuente: Williams et. al (1997).

Figura 9. Tipos de Hifas
Fuente: Williams et. al (1997).

ASIGNACIN
1. Realice los esquemas de la morfologa colonial de los hongos que se
observaron.
35

2. Investigue en libros, revistas, artculos y fuentes confiables sus caractersticas

y estructuras microscpicas.
3. Realice esquemas de sus estructuras microscpicas.
PRCTICA 8
CULTIVO DE ANAEROBIOS
INTRODUCCIN
Un factor que influye de
manera importante en el crecimiento microbiano es el
oxgeno y aunque es un gas muy reactivo, muchos microorganismos dependen de la

disponibilidad del oxgeno molecular como nutriente. Los microorganismos se pueden
clasificar de acuerdo a sus necesidades y tolerancia al oxgeno en: aerobios estrictos,
microaerofilicos,
anaerobios
facultativos,
anaerobios
estrictos
anaerobios
aerotolerantes. Los aerobios estrictos dependen del oxgeno, ya que lo utilizan como
aceptor final de electrones en la cadena respiratoria y no pueden llevar a cabo la
fermentacin. Los microaerofilicos no requieren de oxgeno pero lo toleran a bajas
concentraciones. Los anaerobios facultativos utilizan el oxgeno si est disponible,
pero tambin pueden crecer en ausencia del mismo, ya que pueden realizar un
metabolismo oxidativo o fermentativo dependiendo de las condiciones de cultivo. Los
anaerobios estrictos no pueden utilizar el oxgeno ya que solo pueden efectuar un
metabolismo fermentativo e incluso no crecen o mueren en presencia de oxgeno
debido a que les resulta txico an a bajas concentraciones, mientras que los
anaerobios aerotolerantes crecen a bajas o elevadas concentraciones de oxgeno
aunque no lo utilicen en su metabolismo. An cuando la toxicidad del oxgeno se
manifiesta claramente sobre los anaerobios, a concentraciones elevadas resulta txico
incluso para los aerobios estrictos ya que el oxgeno es un agente oxidante fuerte,
capaz de generar un grupo de radicales libres (singlete, superxido, perxido e
36

hidrxilo), que reaccionan sobre molculas orgnicas. Los microorganismos que

toleran el oxgeno, por lo general contienen enzimas que los protegen de la toxicidad
como son la catalasa, peroxidasa y la superxido dismutasa.
Mientras que la aereacin se emplea para incrementar el crecimiento de los
microorganismos aerobios, el oxgeno debe ser excluido del medio de cultivo para
permitir el crecimiento de los anaerobios estrictos. Esto se puede hacer agregando
sustancias reductoras al medio de cultivo que reaccionan con el oxgeno molecular
disuelto, eliminndolo. Por ejemplo, frecuentemente se aade tioglicolato de sodio,
cistena u otros compuestos que contienen grupos sulfhidrilos.
En los medios lquidos se suele burbujear nitrgeno, hidrgeno o bixido de carbono
para desplazar al oxgeno y posteriormente se sella el recipiente para evitar que entre
de nuevo el oxgeno.
Adems, hay muchos modelos de cmaras de cultivo para
anaerobios que se emplean para eliminar el oxgeno de la atmsfera. Estos modelos

como el sistema GasPack, generan hidrgeno el cual reacciona con el oxgeno
mediante un catalizador dentro de la campana produciendo agua; tambin se genera
bixido de carbono para reemplazar el volumen de gas agotado por la conversin de
oxgeno a agua. En todos estos mtodos es recomendable utilizar indicadores de
oxido-reduccin como el azul de metileno y la resarzurina que permiten conocer las
condiciones del sistema; en condiciones oxidadas los indicadores estn coloreados y
en condiciones reducidas son incoloros. La cuantificacin del estado de oxidacin de
un medio se expresa por la relacin del potencial de xido-reduccin (O/R). El
potencial se puede medir utilizando electrodos y un potencimetro, cuando los valores
son positivos significa que hay oxgeno disuelto en el medio y los compuestos
orgnicos estn parcialmente oxidados, cuando son negativos significa que no hay
oxgeno disuelto y los compuestos orgnicos estn reducidos.
37

COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn los conocimientos y habilidades para poner

en prctica algunas tcnicas para el aislamiento y cultivo de bacterias anaerobias.
MATERIAL
Tubos de 16 X 150 con 5 ml de agua destilada estril
Tubos de 16 X 150 con tapn de rosca con caldo tioglicolato
Tubos de 16 X 150 con tapn de rosca con caldo nutritivo
Pipetas Pasteur estriles
Cajas de petri con gelosa sangre
Plastilina
Muestra de material fecal animal
Cepas de Clostridium sp, Bacillus subtilis y Escherichia coli
MTODOS
PRIMERA SESIN
1. Aislamiento de bacterias anaerobias de material fecal.
- Adicionar aproximadamente un gramo de muestra a un tubo con 5 ml de agua
destilada estril, agitar y dejar sedimentar durante 10 minutos.
- Tomar una asada del sobrenadante y sembrar por estra cruzada en una placa de
gelosa sangre.
- Agitar de nuevo el tubo y calentar la muestra a ebullicin por 10 minutos y dejar
sedimentar otros 10 minutos.
- Sembrar otra placa con gelosa sangre.
- Incubar laS cajas en anaerobiosis a 37 C durante 40 horas.
2. Cultivo de bacterias anaerobias en medios lquidos.
- Inocular con ayuda de una pipeta Pasteur estril cada una de las cepas
proporcionadas en los tubos con caldo tioglicolato y caldo nutritivo.
38

- Incubar a 37 C durante 24 - 48 horas.

3. Cultivo de microorganismos anaerobios por comensalismo.
-
Divide una caja de gelosa sangre en dos y en un lado siembra una asada de
Clostridium sp y del otro lado una asada de Bacillus subtilis.
Sella con plastilina los bordes de la caja
Incuba a 37 C durante 24 - 48 horas.
SEGUNDA SESIN
1.
Describe la morfologa colonial de dos colonias aisladas a partir de la

muestra de materia fecal y la morfologa microscpica utilizando la tincin
de
2.
Gram.
Observa el crecimiento de las cepas bacterianas sembradas en los medios

lquidos y discute los resultados.
3.
Observa el crecimiento de la bacteria anaerobia y de la aerobia y realice un

frotis y tincin de Gram de cada uno. Haga esquemas.
ASIGNACIN
1. Investiga en libros, revistas y artculos confiables al menos tres bacterias
anaerobias de importancia en medicina veterinaria.
2. Investiga los patrones de crecimiento bacteriano en diferentes medios de cultivo de
las bacterias anaerobias
39

PRCTICA 9
USO DE MEDIOS SELECTIVOS
INTRODUCCIN
Los requerimientos nutricionales de las bacterias son muy variados, lo cual hace
necesario contar con una amplia gama de medios de cultivo. La seleccin de stos
depende de la cantidad y variedad de microorganismos en la muestra a estudiar, del
tipo de microorganismo que se prefiere aislar y los que se quiere eliminar para que su
abundancia no los encubra o dificulte el aislamiento.
Basados en la utilidad diagnstica de los medios de cultivo, es posible hacer la
siguiente clasificacin:
Medios simples.- Son medios que promueven el desarrollo de microorganismos
nutricionalmente poco exigentes. Estos medios reciben tambin el nombre de medios
bsicos o generales. Se utilizan principalmente para muestreos de medio ambiente o
superficies, anlisis cuantitativos y conservacin de cepas.
Medios enriquecidos.- Son medios que han sido suplementados con nutrientes que
proporcionan factores de crecimiento para promover el desarrollo de microorganismos
de requerimientos nutricionales exigentes. Estos medios contienen generalmente uno
40

o ms de los siguientes ingredientes: sangre, suero, plasma lquido asctico, huevo

carne vitaminas, aminocidos especficos, NAD o hemina, entre otros.
Medios selectivos: Estos medios contienen sustancias inhibidoras para suprimir
parcial o totalmente el desarrollo de microorganismos no deseados. Las sustancias
utilizadas con mayor frecuencia son colorantes, sales inorgnicas, sales biliares,
antibiticos y detergentes. Los medios selectivos tienen una gran utilidad para el
aislamiento de grmenes patgenos a partir de muestras clnicas que contengan
bacterias de la microflora normal.
Medios diferenciales.- Estos medios contienen indicadores que permiten diferenciar
algunos gneros o especies bacterianas por el aspecto caracterstico de sus colonias.
La mayora de los medios selectivos son tambin diferenciales. Ejemplos: Agar verde
brillante, agar ENDO, agar eosina azul de metileno, agar Salmonella-Shigella, agar
McConkey. Estos permiten diferenciar enterobacterias fermentadoras de lactosa
(coliformes).
Medios de enriquecimiento.- Estos medios son lquidos y poseen efecto inhibitoria
sobre ciertos gneros bacterianos, favoreciendo al mismo tiempo el desarrollo de otros
que se encuentran en menor proporcin en la muestra. Son medios muy utilizados en
la bacteriologa del tracto intestinal, principalmente para el enriquecimiento de
Salmonella sp. a partir de muestras de heces en las cuales el nmero de salmonelas
puede ser muy pequeo en comparacin al elevado nmero de bacterias que
normalmente habitan el tracto intestinal. Estos medios se inoculan mediante un hisopo
o bien depositando la muestra en el medio a una proporcin de 1:10, ejemplo, un
gramo de muestra en 10 ml de medio, El perodo de incubacin de estos medios debe
ser de 12-18 horas y es necesario resembrar a partir de ellos, en medios selectivos y
diferenciales para identificar colonias caractersticas. Ejemplos de stos medios son el
caldo selenito y el caldo tetrationato, medios de enriquecimiento para Salmonella sp.
41

Medios de transporte.- Son medios utilizados para el transporte de las muestras

clnicas desde el lugar de su coleccin hasta el laboratorio. Su finalidad es preservar
la viabilidad de los microorganismos cuyo aislamiento va a intentarse posteriormente.
La composicin de este tipo de medios vara considerablemente de acuerdo al
microorganismo cuya viabilidad se desea preservar. Estos medios pueden ser desde
una simple solucin fisiolgica amortiguada, hasta medios ms complejos que
contengan sustancias inhibidoras, agentes reductores, sustancias osmticamente
activas (sacarosa), suero, etc. Algunos ejemplos de estos medios son: Medio de Stuart,
medio de Carry-Blair, utilizados como medios de transporte de uso general para un
gran nmero de bacterias aerobias y anaerobias. Medio Campy-thio y medio ClarkDufty, diseados para preservar la viabilidad de Campylobacter sp. y la solucin
amortiguadora de Bovarnyk, para preservar la viabilidad de Chlamidias y Riquettsias.
Medios especiales.- Son medios que no pueden ser fcilmente agrupados en alguno
de los grupos de medios descritos anteriormente y la mayora son utilizados para
comprobar una o ms caractersticas bioqumicas de los microorganismos.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn las habilidades para poder identificar
diferentes tipos de medios de cultivo y su utilidad en el aislamiento e identificacin de
bacterias.
MATERIAL
Caja petri con agar Mac Conkey
Caja petri con agar eosina azul de metileno
Caja petri con agar Staphylococcus
Caja de petri con agar Sal y manitol
Tubo de 13X100 con caldo glucosado
Tubo de 13 X 100 con medio Stuart
Tubo de 16 X150 con Caldo bilis verde brillante al 2%
42

Cepas de Escherichia coli, Salmonella cholerae suis, Proteus sp y Staphylococcus

aureus, Bacillus sp.
MTODOS
1. Medios de cultivo selectivos
1) Sembrar por estra cruzada la mezcla de bacterias (Gram + y -) proporcionada
por el profesor en el Agar Sal y manitol y el Agar Verde brillante.
2) Sembrar por estra cruzada los cultivos puros antes mencionados en los medios
de cultivo restantes, conforme lo indica las tablas 1 y 2 anexas.
3) Identificar las cajas de petri y los tubos con el nombre del cultivo.
4) Formar un paquete con las cajas y los tubos sembrados para incubar a 37C
durante 24-48 horas.
5) Observar el cambio de color que se da en los medios de cultivo, la morfologa
colonial de los cultivos.
6) Interpretar los resultados, de acuerdo al tipo de medio de cultivo y el
microorganismo sembrado, registra conforme se te pide en los cuadros 3 y 4.
INFORME
1)
Describa la morfologa colonial de las cepas proporcionadas y sembradas en

los diferentes medios de cultivo.
2)
Indica los cambios de color que se aprecian en los medios de cultivo y a que
se atribuyen.
3)
Interprete y discuta los resultados.
4)
Complete las tablas anexas con sus observaciones.
ASIGNACIN:
43

1) Investiga la composicin qumica de los medios de cultivo lquidos y slidos que

sembraste.
2) Investiga y explica a que se atribuyen los cambios que observaste en los
medios de cultivo conforme a la cepa bacteriana que sembraste en cada uno de
ellos.
Cuado 3. Caractersticas y composicin qumica del medio de cultivo.

Medio de
Color del
Indicador
Tipo de
Cepa
Forma de
cultivo
medio de
que
medio de bacteriana siembra en el
cultivo
contiene el
cultivo
medio de
medio
cultivo
Caldo
E.coli
glucosado
Salmonella
Caldo bilis
verde
E.coli
brillante
Medio Stuart
S.aureus
Mac Conkey
Salmonella
Verde
Mezcla de
brillante
Eosina Azul
bacterias
Proteus
de metileno
A.Estafilococ
S.aureus
cus 110.
Sal y manitol
Mezcla de
44

bacterias
Agar nutritivo
Bacillus
Cuadro 4. Cambios del medio de cultivo y morfologa bacteriana

Medio
de Cepa
cultivo
bacteriana
Morfologa
Forma
colonial
agrupacin
bacteriana
y Modificacin
en el medio a
y las 24 hrs de
tincin de Gram cultivo

Caldo
E.coli
glucosado
Salmonella
Caldo
bilis
verde
E.coli
brillante
Medio Stuart
S.aureus
Mac Conkey
Salmonella
Verde
Mezcla
de
brillante
bacterias
Eosina Azul Proteus
de metileno
45

A.Estafilococ S.aureus
cus 110.
Sal y manitol Mezcla
de
bacterias
Agar nutritivo Bacillus
PRACTICA 10
USO DE PRUEBAS BIOQUIMICAS
INTRODUCCIN
La identificacin de una bacteria a partir de una muestra clnica exige su aislamiento
en cultivo puro, de ah que es muy importante la tcnica d siembra y el uso de
diferentes medios de cultivo. Sin embargo el crecimiento de las bacterias implica
necesidades de ciertos nutrientes para llevar a cabo su metabolismo, el cual puede
variar segn el tipo de bacteria de que se trate, de ah el uso de una gran variedad de
46

pruebas bioqumicas que miden la presencia o ausencia d enzimas que participan en

el catabolismo del sustrato que se aade al medio diferencial.
Muchas de estas pruebas se leen mediante los cambios de color que se producen en
los medios de cultivo por la presencia de indicadores de pH. As se usan medios
diferenciales como por ejemplo: el caldo rojo de fenol, al cual se le adicionan
carbohidratos (glucosa, trehalosa, maltosa, fructosa) para valorar la fermentacin de
azucares mediante la observacin de burbujas de gas de hidrogeno o dixido de
carbono atrapadas en un vial invertido y la acidificacin del medio original se har
evidente por el viraje de color rojo original a amarillo.
Existe una gran variedad de pruebas bioqumicas que auxilian al mdico clnico o al
microbilogo en la identificacin del gnero y la especie del agente patgeno presente
en una muestra clnica, esto es de gran importancia, pues con la correcta
interpretacin de estos hallazgos podr confirmarse el diagnstico del agente causal
de la enfermedad y con ello podrn adoptarse las medidas teraputicas y preventivas
idneas segn el caso.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn los conocimientos y habilidades para
identificar, inocular e interpretar las diferentes pruebas bioqumicas utilizadas para la
identificacin bacteriana.
MATERIAL
Tubos de 13x100 con medio SIM
Tubos de 13x100 con citrato de Simmons
Tubos de 13x100 con caldo glucosado
Tubos de 13x100 con medio TSI
Tubos de 13x100 con agar urea
Portaobjetos
Solucin de rojo de metilo
47

Solucin de alfa-naftol
Solucin de KOH o KOH al 40 %
Solucin de KOH al 3%
Reactivo de Kovac`s
Cepas bacterianas de: E. coli, Salmonella sp, Klebsiella sp, Proteus sp, Streptococcus
sp y Staphylococcus aureus
METODOS
1. Prueba para confirmacin de la tincin de Gram o de KOH al 3%
-
Esta prueba consiste en colocar sobre un portaobjetos una gota de KOH al 3% y

con el asa hacer una suspensin de la colonia de bacterias a probar
Mezclar con movimientos giratorios de 1 a 3 minutos
Separar el asa de la mezcla, si se forma una hebra o hilo viscoso, indica

que se trata de bacterias Gram negativas, si esto no sucede, se tratar de
bacterias Gram positivas
Realiza esta prueba con diferentes cultivos Gram + y
Diagrama 1. Pruebas Bioqumicas Gram. (+)
48

Tincin de Gram
Cocos (+)
Bacilos corto (+)
Bacilo largo (+)

Bacillus spp
Con esporas
Catalasa (+) o (-)
Catalasa
Centrales
Terminales
subterminales
(+) Listeria spp
Corynbacterium
spp
Catalasa (+)
Coagulasa (+)
Bacilo grueso c/
esporas
Centrales,
terminales o
subterminales
Centrales,
terminales o
subterminales
(-) Erysipelothriz
spp
Actinomyces
pygenes
Staphylococcus
aureus
Catalasa (-)
Streptococcus spp
49

Diagrama 2. Pruebas Bioqumicas Gram (-)

Bacilos Gram (-)
Oxidasa
Positivo (+)
Negativo (-)
Pasteurella spp
Hemophilus spp
Bordetella spp
Enterobacterias
Actinobacillus spp
Pseudomonas spp
Aeromonas spp
Morazella spp
TSI, UREA, SIM,

CITRATO
TSI, UREA, SIM,

CITRATO, LITMUS,
MILK, SUGARS
Interpretar resultados
y consultar
referencia.
Interpretar resultados
y consultar
referencia.
2. Pruebas bioqumicas para bacterias Gram negativas

2.1. Medio TSI
50

Sembrar por picadura y estra en la superficie de los tubos de TSI cada una de
las cepas proporcionadas
Incubar los tubos a 37C durante 24 horas
Observar e interpretar los resultados como sigue:
a)
Fermentacin de glucosa: color amarillo en el fondo del tubo
b)
Fermentacin de lactosa: color amarillo en la superficie del medio
c)
Produccin de gas: burbujas en el fondo del tubo
d) Produccin de cido sulfhdrico: precipitado de color negro en el fondo del

tubo
2.2. Prueba de rojo de metilo y Vogues-Proskauer
-
Sembrar en dos tubos de caldo glucosado o medio RM-VP las cepas

proporcionadas
Incubar a 37C durante 24-48 hrs
Observar e interpretar los resultados como sigue:

a) Prueba de rojo de metilo: Aada al tubo 5 gotas del reactivo rojo de metilo
y sin agitar observe la presencia de un anillo de color rojo en la
superficie del medio; la prueba ser negativa cuando no exista el color
rojo
b) Prueba de Vogues-Proskauer: Aada al tubo 6 gotas de alfa-naftol y dos
gotas de KOH creatina, agitar suavemente y dejar reposar el tubo de 10 a 15
min. La prueba positiva ser la aparicin de color rojo en la superficie
del tubo y en la negativa no hay coloracin roja
2.3. Utilizacin de citrato

-
Sembrar un tubo de citrato de Simmons por estra en la superficie, para cada

cepa proporcionada
Incubar los tubos a 37C durante 24-48 hrs.
Observar e interpretar el resultado como sigue: El crecimiento y vire del

indicador de verde a azul, significan que el microorganismo dio la prueba a
la utilizacin del citrato.
51

2.4. Medio SIM

-
Sembrar por picadura utilizando el asa recta, un tubo con medio SIM para cada
cepa proporcionada
Incubar los tubos a 37C durante 24-48 hrs
Observe e interprete los resultados como sigue:

a) Produccin de cido sulfhdrico: precipitado de color negro
b) Movilidad: positivo si hay turbiedad, e inmvil si solo hay crecimiento en la
picadura
c)
Produccin de indol: Aada 5 gotas de reactivo de Kovacs, la coloracin roja

indica que la prueba es positiva.
2.5. Produccin de ureasa
Siembre el agar inclinado
una asada de cultivo abundante sobre la
superficie
Incube a 37C de 1 a 7 das
La reaccin positiva se observa al virar el medio a un color rosa intenso
Si no hay cambios en el medio de cultivo, es negativo
3. Pruebas bioqumicas para bacterias Gram positivas

3.1 prueba de catalasa: Esta prueba es muy til para la diferenciacin de los
estreptococos de los estafilococos y micrococos
- Sobre un portaobjetos colocar una gota de perxido de hidrgeno al 3%, y con
el asa tomar una de las colonias
- Mezclar la colonia con la gota con movimientos giratorios
- La lectura se hace inmediatamente, si aparece un burbujeo la prueba es
positiva
52

NOTA: Pueden presentarse falsos positivos si la colonia se toma de un medio

adicionado con sangre
3.2 Prueba de coagulasa
- Tomar con el asa aproximadamente 5 colonias del medio de Baird Parker e
introducirlas en el vial que contiene el plasma hidratado e incubar a 37C de 1 a
3 hrs
- Evitar agitar el tubo para observar la formacin del coagulo, se considera la
prueba positiva si el contenido del tubo en ms de tres cuartas partes
presenta la formacin de un coagulo compacto
Segunda sesin: Interpreta segn la prueba realizada, revelando las
reacciones bioqumicas, a travs de los cambios en medio utilizados.
INFORME
Haga una tabla donde coloque los resultados de las pruebas bioqumicas de las cepas
utilizadas en la prctica.
Defina conforme las reacciones bioqumicas observadas y su morfologa al menos el
genero de los microorganismos analizados.
ASIGNACIN
Investiga las reacciones bioqumicas en fuentes confiables (Libros, Revistas, Pg.
Web y Artculos) de las cepas bacterianas que utilizaste en la prctica.
PRCTICA 11
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS
53

INTRODUCCIN
La observacin del afecto inhibidor de algunos microorganismos sobre otros data
desde 1874. Pasteur y otros investigadores observaron que infectando a un animal
con Pseudomonas aeruginosa, lo protega contra Bacillus anthrasis.
Posteriormente se us el trmino antibiosis para explicar el efecto de inhibicin sobre
otros microorganismos y el trmino de antibitico para la sustancia que causa tal
efecto. Este fenmeno puede apreciarse al realizar pruebas de sensibilidad a
antimicrobianos. Las pruebas de uso ms comn y comercial son las de difusin en
agar, en las que se aplica una fuente de antibitico a una superficie de medio slido: el
agente difunde a travs del
medio inhibiendo el crecimiento del microorganismo
sensible. Sin embargo, en la actualidad se conocen varios factores que pueden influir
en el tamao de la zona de inhibicin.
Ejemplo: 1) Los componentes del medio de cultivo: Ingredientes como la peptona,
triptona y extracto de levadura, pueden variar en su contenido mineral, y minerales
como el calcio, magnesio y el hierro, disminuyen la actividad de los aminoglucsidos y
aumentan el efecto del cido fusdico. Otro ejemplo es el efecto de los carbohidratos
sobre la ampicilina y la furantona.
2) Efecto del pH: La actividad de los aminoglucsidos se ve aumentada en medio
alcalino; as como la presencia de dixido de carbono en la estufa y carbohidratos
fermentables en los medios de cultivo, pueden inducir condiciones cidas.
3) Tamao del inculo: Se ha observado que las siembras densas disminuyen en
algn grado las zonas de inhibicin, por lo que los cultivos en caldo y las
suspensiones en medio slido se pueden diluir para obtener el inculo idneo.
Las pruebas de susceptibilidad bacteriana por el mtodo de difusin en agar, son
pruebas cualitativas en las que se utilizan discos de papel filtro impregnado con
54

concentraciones conocidas de los diferentes agentes quimioteraputicos (sensidiscos).

Estos discos se colocan sobre la superficie del agar previamente sembrado con la
cepa problema. Despus de la incubacin, se observan zonas o halos de inhibicin del
desarrollo bacteriano alrededor de los discos con los quimioteraputicos, a los cuales
el microorganismo es susceptible. Por el contrario, si la cepa bacteriana es resistente,
se presenta crecimiento alrededor del disco.
El uso indiscriminado de los antimicrobianos ha originado la seleccin de cepas
bacterianas multiresistentes, por lo que resulta difcil predecir la susceptibilidad con
base a la experiencia clnica. Muchas cepas de microorganismos tradicionalmente
sensibles a ciertos antibiticos son ahora resistentes, debido principalmente a la
amplia distribucin de plsmidos de resistencia mltiple.
COMPETENCIA: Los alumnos adquirirn los conocimientos y habilidades para realizar
e interpretar las pruebas de sensibilidad a antimicrobianos por difusin en agar
MATERIAL
Colorantes para tincin de Gram.
2 portaobjetos.
Cajas petri con agar Mueller-Hinton
Hisopos estriles
Discos de papel filtro impregnados con quimioteraputicos
Frascos de alcohol
Pinzas y gradilla
Mechero Bunsen
2 tubos con Solucin salina fisiolgica
Tubo 0.5 de la serie de Mac Farland.
Cepas crecidas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus
MTODOS
55

Realice una tincin de Gram de una colonia caracterstica de E.coli y S. aureus.
PREPARACIN DE INOCULO:
-
Tome varias colonias (2-3) caractersticas de E .coli y suspndalas en una tubo

con sol. Salina fisiolgica homogenizando con movimientos suaves para
evitar derrames.
Compare la turbidez de esta suspensin con la turbidez del tubo 0.5 de Mac.
Farland.
Ajuste la turbidez si es necesario adicionando una colonia ms.
Repita este mismo procedimiento con la cepa de S.aureus.
INOCULACIN DE LAS PLACA DE MUELLER HINTON:

-
Humedezca un hisopo en la suspensin de la cepa de E. coli y exprima el

exceso en las paredes del tubo.
Inocule una placa de agar Mueller-Hinton sembrando en toda la superficie del

agar con el hisopo y permita que la placa seque de 3 a 5 minutos.
Coloque los sensidiscos sobre la superficie del agar ayudndose con la pinza
previamente flameada en alcohol y presinalos ligeramente para poner en
contacto el antibitico con la cepa.
Repita el procedimiento anterior, con la cepa de Staphylococcus aureus.
Incube las placas a 37C durante 24 horas
Mida (en mm) el dimetro de inhibicin del crecimiento producido por cada
antibitico y anote los resultados.
Interprete segn la tabla 1. Interpretacin de antibiograma segn los halos de

inhibicin.
Tabla 1. INTERPRETACIN DE ANTIBIOGRAMA

TABLA DE INTERPRETACIN DE ANTIBIOGRAMA
R=resistente; I=intermedio; S=sensible
Abreviatura Agente antimicrobiano
Contenido del disco
Dimetro de halo de inhibicin
en mm
R
I
S
AK
Amikacina
<14
15-16
>17
Enterobacteriaceae 30 g
AM
Ampicilina
10g
<13
14-16
>17
Staphyloccocus spp
<28
>29
Enterococous spp
<16
>17
56

Streptococcus spp
CB
CF
FEP
CTX
CAZ
CRO
CXM
CL
DC
ENX
E
GE
LEV
NET
NF
PEF
PE
TE
SXT
NOR
ENR
CIP
100g
Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa
Cefalotina
Cefepime
Cefotaxima
Ceftazidima
Ceftriaxona
Cefuroxima
Cloranfenicol
Dicloxacilina
1 g
Staphyloccocus spp
Enoxacina
Eritromicina
15 g
Enterococcus spp
Gentamicina
Levofloxacina
Netilmicina
Nitrofurantoina
Pefloxacina
5 g
Penicilina
10U
Staphyloccocus spp
Enterococcus spp
N. gonorrhoeae
Streptococcus spp
Tetraciclina
Trimetoprim-sultametoxazol
25 g
Nafloxacina
5 g
Ceptioflur
Enrofluxacina
5 g
Florfenicol
Ciprofluxacin
5 g
>24
Carbencilina
< 19
<13
<14
<14
<14
<14
<13
<14
<12
20-22
14-16
15-17
15-17
15-22
15-17
14-20
15-22
13-17
>23
>17
>18
>18
>23
>18
>21
>23
>18
<10
<14
11-12
15-17
>13
>18
<13
<12
<13
<12
<14
<14
14-22
13-14
14-16
13-14
15-16
15-22
>23
>15
>17
>15
>17
>23
<28
<14
<26
<14
<10
<17
<17
<17
<16
<17
27-46
15-18
11-15
18-20
18-20
18-21
17-20
18-20
>29
>15
>47
>24
>19
>16
>21
>21
>22
>21
>21
INFORME
1.
Anote el resultado de la actividad de los antibiticos en placa sobre E. coli y S.

aureus en la tabla siguiente.
Tabla 2. Actividad de los antibiticos sobre E. coli y S aureus.

ANTIBITICO
E. coli
Sensibilidad
S.aureus
Sensibilidad
Nombre /
57

abreviatura
Medida en mm
del halo
R=resistente;
I=intermd
Medida en mm
del halo
R=resistente;
I=intermdio
io;
; S=sensible
S=sensibl
e
2.
Mencione aquellos antibiticos con mejores resultados de inhibicin para cada

cepa bacteriana y si se trata del mismo antibitico o no. Explique porqu.
Fundamentado con investigacin confiable (libros, artculos, revistas).

ASIGNACIN: Investigar acerca de las consecuencias del uso irracional de los
antimicrobianos en los animales en produccin y elabora un ensayo. (Incluye las
copias de la fuente de informacin).
58

PRCTICA 12
COLECCIN Y ENVIO DE MUESTRAS AL LABORATORIO
INTRODUCCIN
La bacteriologa y micologa clnicas se encargan del estudio de las muestras de
pacientes de los cuales se sospecha una enfermedad infecciosa. El laboratorio de
bacteriologa y micologa veterinaria puede apoyar al mdico veterinario de la
siguiente manera:
-
Confirma el diagnstico presuntivo
Sugiere la quimioterapia de la enfermedad
Colabora en el conocimiento epidemiolgico de las enfermedades
Permite la elaboracin de productos biolgicos como las bacterinas
Los resultados del examen bacteriolgico y micolgico, as como la rapidez con que
stos sean obtenidos, no dependen solo de los mtodos de laboratorio empleados,
sino tambin de la forma en que sean colectadas y envidas las muestras clnicas.
59

Dichos resultados pueden verse influenciados por la presencia de microorganismos

que son parte de la flora microbiana normal, por la migracin bacteriana post-mortem o
por la aplicacin de antimicrobianos antes del envo de la muestra. El mdico debe
tener en mente estos factores para realizar la interpretacin de los resultados
obtenidos por el laboratorio.
Los problemas que con mayor frecuencia se presentan en la identificacin bacteriana y
micolgica en el laboratorio son:
-
Envo de muestras no representativas de la enfermedad en cuestin
Toma de muestras sin asepsia
Envo de muestras en condiciones inadecuadas
Falta de historia clnica completa y de un diagnstico presuntivo
Por lo tanto, es indispensable tener conocimientos previos sobre la correcta obtencin

y envo de muestras al laboratorio. A continuacin se enlistan algunas normas
generales:
1. Tomar la muestra del sitio anatmico ms representativo del problema, de
preferencia en la etapa aguda de la enfermedad.
2. Las muestras obtenidas a partir de animales muertos debern tomarse dentro
de las tres primeras horas de ocurrida la muerte o sacrificio.
3. Las muestras deben colectarse bajo estrictas condiciones de asepsia. Tanto el
material de coleccin como el recipiente en que la muestra sea transportada
debern ser estriles. Este ltimo preferentemente debe tener un tapn de
rosca.
4. Los especimenes colectados no deben entrar en contacto con desinfectantes
5. Las muestras deben identificarse con los siguientes datos: especie, raza, edad,
sexo, arete o nombre del animal, as como la direccin, telfono y nombre del
propietario
6. Una vez colectadas las muestras deben enviarse al laboratorio dentro de las
siguientes 4-24 hrs, en hielo o congelantes, en cajas de poliuretano
60

7. Cuando sea necesario el uso de hisopos para la coleccin de muestras, estas

deben enviarse en medio de transporte (Stuart, Cary-Blair, etc)
8. Debe de anexarse la historia clnica completa que incluya: La hora de coleccin
de la muestra, hora de la muerte del animal (si es el caso), nmero de animales
infectados, signos y lesiones que presenta el animal; adems si el animal del
que proviene la muestra fue tratado con antimicrobianos (cual) y el diagnstico
presuntivo.
9. Es muy importante hacer notar que el manejo de las muestras debe realizarse
con precaucin, ya que algunos agentes causantes de las enfermedades
infecciosas de los animales, constituyen un riesgo para la salud humana.
COMPETENCIA: Los alumnos desarrollaran las habilidades necesarias para
seleccionar los procedimientos ms adecuados de la toma y envo de muestras para
su envo al laboratorio de diagnstico bacteriolgico.
MATERIAL
Tubos con medio de transporte Stuart
Hisopos estriles
Jeringas desechables estriles
Bolsas de plstico estriles
Recipiente estril para muestra de orina
Guantes de ltex
METODOS
1. Asignar a cada equipo el tipo de muestra que deber traer, de que forma la
podr colectar y la forma de transportacin al laboratorio. Es indispensable que
provenga de un animal enfermo.
Para realizar prctica 13 anlisis bacteriolgico de procesos biognicos
-
Muestra 1: Pus,
abscesos, exudado de heridas, hisopos nasales, hisopos
auditivos, exudados farngeos, segn lo asignado por el maestro.

Farngeo
61

Exudados
nasal
Auditivo
Para realizar prctica 14 anlisis bacteriolgicos de heces y orina

-
Muestra 2: Orina o heces de cerdo, bovino o equino segn lo asignado por el

maestro
Para realizar prctica 15 anlisis bacteriolgico de rganos 12

-
Muestra 3: rganos afectados con lesiones visibles de la especie animal

asignada por el maestro.
Corazn
Rin
Pulmn
rganos
Intestino
Hgado
Bazo
Linfonodulos
Cerebro
Nota: Las muestras correspondern a la solicitada por el maestro en el tiempo

indicado para realizacin de cada una de las prcticas 13,14 y 15.
INFORME
1. Anexe la historia clnica de la muestra en cuestin en el reporte.
2. Describa detalladamente los pasos seguidos para la toma y envo de la muestra
que obtuvo para la prctica de anlisis bacteriolgico de productos biolgicos.
ASIGNACIN
62

Entregar una secuencia fotogrfica numerada de los pasos de la toma de muestra,

con la descripcin del procedimiento en cada imagen. La asignacin se entregar
en un disco (por equipo).
PRCTICA 13
ANLISIS BACTERIOLGICO DE PROCESOS PIOGNICOS
INTRODUCCIN
El estudio de la microflora normal o patgena de los animales o humanos, requiere de
conocimientos previos sobre toma y envo de muestras al laboratorio, tipos de medios
de transporte y de aislamiento de microorganismos, as como de antecedentes propios
de los microorganismos que se deben estudiar. Para esta prctica se han seleccionado
algunos productos biolgicos a estudiar y se hace referencia a los posibles
microorganismos involucrados en procesos infecciosos.
Procesos piognicos: Son aquellas infecciones asociadas a microorganismos que
estimulan la formacin de pus, que se forma po la acumulacin de leucocitos y restos
del microorganismo. Dentro de los procesos infecciosos quedan incluidos los abscesos
que son una forma de inflamacin localizada y llena de pus, la mayora estn rodeadas
de tejido conectivo, capilares proliferantes y leucocitos. Las manifestaciones clnicas
asociadas a la presencia de abscesos dependen de su localizacin y etiologa. Hay
abscesos que no son detectados, sino hasta el momento de la necropsia, por ejemplo:
abscesos hepticos, cervicales, etc. Mientras que otros producen un malestar
generalizado en el animal, como los abscesos en la cavidad oral, pulmn, etc.
La etiologa de los procesos piognicos puede ser muy variada, sin embargo, la ms
comn es la bacteriana. Entre los microorganismos piognicos ms comunes se
encuentran:
63

Aerobios y facultativos
Anaerobios
Staphylococus aureus
Actinomyces spp.
Streptococcus spp.
|Fusobacterium necrophorum
Corynebacterium spp.
Clostridium perfringens
Peptococcus spp.
Escherichia coli
Peptostreptococcus spp.
Proteus spp.
Propionibacterium spp.
Pasteurella multocida
Bacteroides spp.
Eubacterium spp
COMPETENCIA: El alumno enviara correctamente una muestra de un proceso

piognico, para su estudio y seleccionar los materiales necesarios para el aislamiento
e identificacin de un posible agente patgeno.
MATERIAL
Hisopos estriles
Placas con agar sal manitol
Microscopio
Placas con agar sangre
Asa bacteriolgica
Pruebas bioqumicas para Gram (-)
Mechero de bunsen
Agar TSI o Kliger
Puente de tincin
Agar urea de Christensen
Portaobjetos
Agar citrato de Simons
Jeringa desechable
Medio SIM
Bolsas de plstico
Prueba de oxidasa
Encendedor de piedra
Reactivo de Kovacs
Regla
Hidrxido de potasio al 3 %
Tubos de solucin salina fisiolgica
Reactivo de rojo de metilo
Tubo 0.5 de serie de MacFarland
Agua destilada
Perxido de hidrgeno al 3%
Colorantes para t. De Gram
Sensidiscos para Gram + y
Pruebas bioqumicas para Gram (+)

Prueba de oxidasa
64

Agar Mueller Hinton
Caldo urea o agar urea de Christensen
Pinzas y tijeras para flamear
Cloruro de sodio al 6.5%
Alcohol al 70%
Caldo sangre
Papel Kraft
Metodologa para procesos piognicos:
Primera sesin
Con un hisopo estril toma la muestra y depostala en el primer cuadrante de

cada una de las placas de agar sangre y agar sal y manitol.
Con el asa bacteriolgica, completa la siembra aislando por estra cruzada e

incuba las placas a 37 C durante 24 - 48 horas.
Segunda sesin
Describe en cada placa, la morfologa colonial de aquellas que sospeches sean

causantes del proceso infeccioso.
NOTA: Considera a las colonias predominantes de un solo tipo.
Realiza un frotis de cada colonia y telos por Gram.
Si son bacterias gram negativas, siembra las pruebas bioqumicas e incbalas

por 24 hrs a 37 C, si no hay cambios espera hasta 72 hrs.
Realiza un antibiograma.
Si son bacterias gram positivas realiza las pruebas bioqumicas e incbalas

por 24 hrs a 37 C, si no hay cambios espera hasta 72 hrs.
Realiza un antibiograma.
Tercera sesin
Interpreta junto con el profesor los resultados de las pruebas bioqumicas y del
antibiograma para identificar al microorganismo aislado y su sensibilidad a los
antimicrobianos.
ASIGNACIN
1. Investiga en fuentes de informacin confiables, las caractersticas morfolgicas
de las bacterias identificadas
65

2. Investiga la enfermedad que la bacteria identificada produce, incluyendo la

descripcin de la enfermedad, especies afectadas, modo de transmisin y
tratamiento.
3. Incluye al menos dos referencias bibliogrficas consultadas
INSTITUTO TECNOLOGICO DE SONORA
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA Y PATOGENIA BACTERIANA
PRCTICA 14
ANLISIS BACTERIOLGICO DE HECES Y ORINA
INTRODUCCIN
Muestras de orina: Las infecciones urinarias se diagnostican frecuentemente en los
perros. Estas se presentan tambin en otras especies, pero por lo general no se
envan muestras al laboratorio de estos animales. Algunos de los microorganismos que
causan infecciones en los perros, pueden producirlas tambin en otras especies de
animales domsticos. Ejemplos:
Perro
Proteus mirabilis
Bovinos
Corynebacterium renale
Porcinos
Eubacterium suis
C.renale
Staphylococcus aureus
Enterococcus
Escherichia coli
Enterobacter spp.
Streptococcus pyogenes
Streptococcus viridans
Corynebaterium renale
66

Las infecciones urinarias causadas por bacterias del gnero Leptospira, son por lo
general enfermedades primarias de los animales, que en ocasiones pueden
transmitirse al hombre. Algunas especies o serotipos importantes son:
Leptospira icterohemorragiae
L. canicola
Rata, ratones
Perros, bovinos, porcinos, zorrillos,
chacales.
L. pomona
Bovinos, porcinos, zorrillos,

mapaches, gato montes.
L. grippotyphosa
Mapache, ratn, zorro, ardilla,,

conejo
L. hardjo
Bovinos.
El hombre puede adquirir la enfermedad a partir de animales infectados y aguas

contaminadas. Los veterinarios y empleados del rastro se encuentran sujetos a mayor
riesgo de adquirir la infeccin.
Para obtener muestras de orina se recomienda tomar en cuenta varias condiciones de
bioseguridad como son el uso de bata abotonada, guantes, lentes y cubrebocas. Se
puede realizar la puncin de vejiga, la cateterizacin de la uretra o durante la miccin.
Para la obtencin de las muestras del tracto reproductor se pueden usar hisopos
estriles para el tero, cuello o vagina y de semen en caso de machos, envindolas en
un medio lquido, o en un medio de transporte. Las muestras de orina y de semen
deben conservarse en refrigeracin.
Muestras de heces: Cuando existe una infeccin bacteriana del intestino, una de las
primeras manifestaciones clnicas es la diarrea y ocasionalmente otros signos como
67

deshidratacin, dolor abdominal, septicemia, toxemia y fiebre dependiendo del agente

etiolgico, adems de la edad; la especie del animal y la resistencia individual. De
acuerdo con la presentacin en el animal, la enteritis puede ser aguda o crnica. En la
enteritis aguda la diarrea se presenta sbitamente, las heces son blandas y liquidas
con olor desagradable y en algunos casos con moco o sangre abundante. La
coloracin es variable dependiendo del agente etiolgico. A este tipo de diarreas se
asocian las siguientes bacterias:
Escherichia coli
Salmonella spp.
Serratia spp.
Serpulina hyodisenteriae
Clostridium spp.
Candida spp.
Actinobacillus spp.
Campylobacter spp.
En la enteritis crnica la diarrea se caracteriza por ser de consistencia blanda, con o

sin presencia de moco y por lo general su olor es normal. La prdida progresiva de
peso y la emaciacin son frecuentes y generalmente no hay anormalidades sistmicas.
A estas diarreas se asocian las siguientes bacterias:
Mycobacterium paratuberculosis
Proteus spp.
Pseudomonas
Candida spp.
Salmonella spp.
El diagnstico de los problemas entricos incluye el anlisis por parte del mdico
veterinario de los cambios patolgicos funcionales en los animales, as como
problemas de higiene en el manejo de excretas, agua y alimentos como posibles
fuentes de contaminacin, y del anlisis bacteriolgico para determinar el agente
infeccioso involucrado, con el fin de establecer un control epidemiolgico y evitar
prdidas econmicas.
68

COMPETENCIA: El alumno una vez colectada la muestra, la transportara
al
laboratorio, para llevar a cabo el aislamiento e identificacin de un posible agente

patgeno y determinar su sensibilidad a antimicrobianos.
Es indispensable que las muestras provengan de un animal enfermo, la muestra
de orina debe ser turbia o sanguinolenta y las heces deben ser diarreicas.
MATERIAL
Hisopos estriles
placas con agar verde brillante
Microscopio
Placas con agar MacConkey
Asa bacteriolgica
Mechero de bunsen
Placas con agar Mueller-Hinton

Tubos con caldo lactosado
Puente de tincin
Tubos con caldo selenito
Portaobjetos
Pruebas bioqumicas para Gram (-)
Encendedor de piedra
Agar TSI o Kliger

Agar urea de Christensen
Agua destilada
Agar citrato de Simons
Prueba de oxidasa
Medio SIM
Perxido de hidrgeno al 3%
Reactivo de Kovacs
Hidrxido de potasio al 3%
Reactivo de rojo de metilo
Colorantes para Tincin de Gram
Pruebas bioqumicas para Gram (+)
Sensidiscos para Gram + y
Caldo sangre
Frascos de vidrio
Caldo urea o agar urea de Christensen
Pinzas para flamear

Alcohol al 70%
Cloruro de sodio al 6.5%

Carbohidratos, etc.
Muestras de orina
* Primera sesin
69

- Usando una pipeta Pasteur estril, inocula aproximadamente 1 ml de orina en

un tubo con caldo lactosado e incuba a 37 C durante 18 - 24 horas. Del
crecimiento obtenido, siembra una placa con agar verde brillante.
- Siembra con el asa 2 o 3 gotas de orina en una placa de agar sangre y asla
por estra cruzada. Incuba la placa a 37 C por 24 - 48 horas.
* Segunda sesin
- Describe la morfologa colonial de al menos una colonia de las aisladas en las
placas de agar sangre y verde brillante, haga los frotis respectivos y telos por
la tcnica de Gram para describir la morfologa microscpica.
- Los aislamientos que resultaron simbrelos en los tubos para las pruebas
bioqumicas correspondientes.
* Tercera sesin
- Lee los resultados de las pruebas bioqumicas y junto con apoyo del maestro
identifica a nivel de gnero tus aislamientos.
- De las bacterias identificadas, selecciona una e inocula una placa de agar
para realizar un antibiograma. Interpreta tus resultados a las 24 hrs.
3. Muestras de heces
* Primera sesin
- Siembra una asada de la muestra en la placa de agar Mac Conkey y asla por
estra cruzada. Incuba la placa a 37 C durante 24 - 48 horas.
- Inocula aproximadamente 0.5 g de la muestra en el tubo con caldo selenito.
- Incuba a 37C durante 18-24 horas y subcultiva en el medio de verde brillante
sembrando por estra cruzada e incuba a 37 C durante 24 horas.
* Segunda sesin
- Describe el crecimiento microbiano en ambos medios de cultivo, selecciona
una colonia de cada placa y anota las caractersticas de la morfologa
70

microscpica de las colonias sembradas. Realiza un frotis y tilo con Gram,

siembra las pruebas bioqumicas correspondientes.
* Tercera sesin
- Lee los resultados de las pruebas bioqumicas y con apoyo del maestro,
identifica a nivel gnero tus aislamientos.
- De las bacterias identificadas, selecciona una y siembra una placa de agar
para realizar el antibiograma.
- Interpreta tus resultados a las 24 hrs.
ASIGNACIN
1. Investiga las caractersticas morfolgicas de las bacterias identificadas
2. Investiga la enfermedad que la bacteria identificada produce, incluye la descripcin
de la enfermedad, especies animales afectadas, modo de transmisin y tratamiento.
Consulta al menos 2 autores.
PRCTICA 15
ANLISIS BACTERIOLGICO DE ORGANOS
INTRODUCCIN
El anlisis bacteriolgico de rganos est recomendado cuando se sospecha de
muertes por septicemia o por el hallazgo de lesiones macroscpicas en uno o varios
rganos especficamente relacionados con alguna enfermedad. Ejemplo: en las
neumonas (pulmn), enteritis (intestino), abortos (rganos fetales), encefalitis
(cerebro), etc. La eleccin de las muestras depender de la experiencia del clnico, del
diagnstico presuntivo y de los hallazgos a la necropsia.
71

El anlisis bacteriolgico y micolgico constituye en estos casos un apoyo en el

diagnstico definitivo. Los siguientes son algunos ejemplos de microorganismos
tpicamente asociados a septicemias:
Brucella spp
Erysipelothix spp.
Leptospira spp.
Haemophilus spp.
Pasteurella spp.
Bacillus anthracis
Clostridium spp.
Pseudomonas spp.
Listeria monocytogenes
Campylobacter spp.
Salmonella spp.
Escherichia coli
Criptococcus spp.
Leccidioides spp.
Histoplasma spp
Blastomyces spp.
COMPETENCIA:
El
alumno
enviar
una
muestra
de
rganos
afectados
correctamente al laboratorio, y llevar a cabo la identificacin del agente bacteriano,

as como la prueba de sensibilidad a antimicrobianos.
MATERIAL
Placas con agar sal y manitol
Placas con agar verde brillante
Placas con agar Mac Conkey
Tubos con medio de transporte Stuart Placas de Microscan para Gram positivos
Placas de Microscan para Gram negativos. Alcohol de caa al 70 %.
Equipo de tincin de Gram
Mechero de Bunsen
Asa bacteriolgica
Hisopos estriles
Microscopio
Pinzas y tijeras de diseccin
Muestra de rganos
Puente de tincin
Aceite de inmersin
Portaobjetos
Papel aluminio
Papel Kraft
Vaso de precipitado de 250 ml
Tripie
Malla de asbesto
Guante de asbesto
Esptula
Pizeta con desinfectante
72

MTODOS
En esta prctica se analizarn las muestras asignadas a cada equipo en la prctica
anterior, mismas que debern haber tomado y transportado correctamente al
laboratorio.
4. Muestras de rganos
* Primera sesin
- Deposita la muestra sobre un papel limpio y esteriliza la superficie utilizando
cualquiera de los siguientes mtodos:
a) Con pinzas estriles toma el fragmento de rgano y humedcelo con alcohol,
flamalo rpidamente y depostalo en una caja estril.
b) Calienta la esptula en el mechero de Bunsen y quemar la superficie del
rgano.
c) En el caso de rganos muy pequeos, se recomienda introducir la muestra en
un recipiente con agua hirviendo durante 2 o 3 segundos.
- Con instrumental estril (previamente flameado), corta un trozo de la muestra a
travs de la superficie que fue previamente descontaminada.
- Con pinzas estriles toma el trozo de tejido por la parte externa y frota con la
cara interna el primer cuadrante de la caja con agar sangre, y con el
asa
bacteriolgica completa la tcnica de aislamiento por estra cruzada.

- Introduce el trozo de la muestra en el caldo tioglicolato, asegrate de que
llegue al fondo del tubo para lo cual puedes auxiliarte con el asa estril. Sella el
tubo con aceite mineral.
- Incuba los medios de cultivo a 37 C durante 24 horas.
NOTA: EN TIEMPO EXTRACLASE
Seleccionar una colonia predominante de cada placa, realiza las tinciones de Gram
que sean necesarias para asegurar una colonia pura para la siguiente sesin. Realiza
73

la resiembra de las colonias puras en agar Mac Conkey o Agar sangre, segn
corresponda.
* Segunda sesin
-
Describe la morfologa de las colonias puras aisladas en agar Mac Conkey

sangre.
Identificacin de bacterias por el sistema MICROSCAN
1. Con el asa de plstico desechable tocar 3 o 4 colonias aisladas, cuidando de no

perforar o rayar el agar
2. Retirar el exceso de muestra desprendiendo del asa el cilindro unido a ella
3. Abrir un frasco del diluyente e insertar el asa con la muestra en l
4. Agitarlo vigorosamente de 8 a 10 veces, o hasta suspender la bacteria en la
solucin.
5. Vaciar la suspensin bacteriana en la placa acanalada.
6. Colocar la tapa que tiene las puntas para extraccin de la suspensin
bacteriana.
7. Fijar la micropipeta mltiple a la tapa.
8. Llevar a cabo la extraccin de la suspensin bacteriana.
9. Retirar la placa a inocular de su envoltura.
10. Realizar la descarga de la suspensin bacteriana y retirar la tapa y la
micropipeta
11. En la placa inoculada existen algunos pocillos cuyos nombres se encuentran
subrayados, a los cuales se les adicionaran tres gotas de aceite mineral a cada
uno
12. Colocar una tapadera e incubar a 37C por 24 hrs.
Tercera sesin
Para realizar la lectura, es necesario adicionar algunos reactivos en pocillos
especficos, indicados en la tabla de interpretacin
PARA GRAM NEGATIVOS
74

Adicionar al pozo IND 3 gotas de reactivo de Kovacs
Adicionar al pozo VP 1 gota de KOH y 1 gota de alfa-naftol
Adicionar al pozo TDA 1 gota de Cloruro frrico
Adicionar al pozo NIT 1 gota de cido sulfanlico y 1 gota de N,N-dimetil
Realizar la prueba de oxidasa a la bacteria en una tira reactiva
PARA GRAM POSITIVOS

-
Adicionar al pozo NIT 1 gota de cido sulfanlico y 1 gota de N,N-dimetil
Adicionar al pozo VP 1 gota de KOH y 1 gota de alfa-naftol
Adicionar al pozo PYR 2 gotas de peptidasa
Comprobar la hemlisis de la bacteria
- Lee
los resultados de las placas con ayuda del profesor e i9ntroducer la
informacin en el sistema LABPRO para identificar al menos a nivel de gnero los

aislamientos.
INFORME
Realiza tu informe anotando cada uno de los pasos que seguiste desde la obtencin
de la muestra hasta la identificacin del gnero bacteriano y anexa la hoja de
resultado del sistema LABPRO.
ASIGNACIN
4. Investiga las caractersticas morfolgicas de las bacterias identificadas
5. Investiga la enfermedad que la bacteria identificada produce, incluyendo
descripcin de la enfermedad, especies afectadas, modo de transmisin y
tratamiento.
75

Practica 16
MECANISMOS DE PATOGENICIDAD
INTRODUCCIN:
76

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se refiere a un grupo de mtodos

de ensayo que tienen en comn, ya sea un antgeno o un anticuerpo especfico ligado
a un soporte slido, un "sorbente". El ligando afn a continuacin, se puede unir
indirectamente al soporte slido a travs de la unin "inmunoabsorbente", lo que
permite o bien la deteccin de la "sorbente" unida a ligando.
Prctica
17
ANLISIS BACTERIOLGICO DE ALIMENTOS PARA CONSUMO ANIMAL
INTRODUCCIN
77

Con el anlisis bacteriolgico de los alimentos se pretende detectar y controlar las

fuentes de contaminacin de los alimentos para consumo humano y animal. Para este
fin la microbiologa sanitaria toma en consideracin los siguientes aspectos:
- Determinar la calidad sanitaria de las materias primas y del producto final.
- Determinacin de las causas de alteracin de un alimento.
- Evaluacin de la eficiencia en los procesos de lavado, desinfeccin de equipo,
utensilios y superficies de trabajo.
- Evaluacin de la eficacia de los desinfectantes.
- Evaluacin de la eficacia de los procesos de esterilizacin y pasteurizacin.
- Deteccin de portadores sanos de microorganismos potencialmente patgenos entre
el personal que maneja alimentos.
- Diagnstico de posibles causas de brotes infecciosos e intoxicaciones asociadas al
consumo de alimentos.
Debido al riesgo en salud pblica que representa el consumo de alimentos
contaminados es necesario reglamentar las normas de calidad e higiene para los
diferentes tipos de alimentos.
Anlisis bacteriolgico de alimento concentrado: Este anlisis se recomienda
realizarlo en alimento para animales elaborado con harinas producidas a partir de
carne, sangre, hueso, pluma y pescado, cuando exista la posibilidad de que este
producto sea el responsable de infecciones entricas en grupos de animales.
En este caso el anlisis es primordialmente cualitativo, no obstante, cuando se
pretende relacionar la carga bacteriana con enterotoxemias, se han establecido lmites
de 1X102 a 1X103 UFC/g de muestra.
COMPETENCIA:
El alumno realizar la tcnica para el anlisis bacteriolgico de los
alimentos para consumo animal e interpretar conforme a las Normas Oficiales

Mexicanas (NOM) si el alimento es apto para su consumo.
78

MATERIAL
Tubos de 16x150 con 4.5 ml de agua peptonada bufferada, estril
Mortero
Mechero de Bunsen
Perilla de plstico
Pipetas serolgicas de 1 ml estriles
Pipeta serolgica de 10 ml estril
Tubos de 16x150 con caldo selenito cistina
Matraz de 100 ml con 60 ml de Agar Tripticasena de Soya (TSA)
Pruebas bioqumicas para Gram Negativos.
Cajas de petri estriles
Caja de petri con agar Mac Conkey
Caja de petri con agar Salmonella - Shigella
Guantes de asbesto
Varilla acodada y alcohol para flamear.
Bao Mara
Contador de colonias
Muestras de alimentos slidos: Concentrado para ave, cerdo, bovinos, perros y
conejos.
MTODOS
Previo a la prctica, se pedir a los equipos que traigan una muestra de alimentos
concentrados para diferentes especies, a los cuales se les harn los siguientes
anlisis: Cuenta total de mesoflicos, cuenta de coliformes y determinacin de
Salmonella.
1. Preparacin de la muestra
79

Por tratarse de una muestra slida: alimento concentrado, en este caso es necesario
mezclar la muestra con un diluyente a una dilucin 1:10 (una parte del alimento por 9
del diluyente). Para la homogenizacin de la muestra se requiere de un mortero.
2. Cuenta total de mesoflicos
2.1 Realiza diluciones decimales del alimento, utilizando los tubos con 4.5 ml de agua
peptonada bufferada. Se recomienda hacer las diluciones de 10 -1 a 10-5.
2.2 Etiqueta tres cajas de petri estriles con las tres ltimas diluciones y deposita en
la base de la caja, 0.5 ml de cada dilucin en su caja correspondiente, comenzando
por la dilucin mayor.
2.3 A cada caja de petri conteniendo las diluciones de la muestra, agregar
aproximadamente 20 ml de agar de soya tripticasena (TSA), previamente fundido y
enfriado en el bao mara hasta 45C, mezcla con movimientos rotatorios y deja
solidificar. Incuba a 37C durante 24 - 48 horas.
2.4
Realiza el conteo de colonias de aquellas cajas con 30 a 300 colonias.
Si el conteo se dificulta por el exceso y tamao de colonias, hacer uso del

contador FELISA. Para el uso de los cuadrantes del contador, considerar
2.5 Determinar las unidades formadoras de colonia (UFC) por gramo de muestra para
cada placa seleccionada. Toma en cuenta que sembraste 0.5ml y multiplcalo por la
inversa de la dilucin para calcular el nmero de UFC/g de la muestra. Toma en cuenta
la primera dilucin para el caso de las muestras slidas (mezcla 1:10) y reporta como
UFC / g.
2.6 Obtener el promedio de las UFC/g de muestra de las placas.
3. Cuenta de organismos coliformes totales
Dentro de este grupo se incluyen a bacilos Gram negativos aerobios, no esporulados,
que fermentan la lactosa con produccin de gas dentro de 48 horas de incubacin a
35C. Se utilizan como indicadoras de contaminacin fecal.
80

3.1 Repetir los procedimientos descritos en el paso 2.1 o utilizar los mismos tubos si
se trata del mismo alimento.
3.2 Inocule 0.5 ml de las tres ltimas diluciones a las cajas de petri con agar Mac
Conkey, empezando por la ms diluida, y distribuya la muestra usando la varilla
acodada. Espere a que seque la muestra e incube las cajas a 37C durante 24 - 48
horas.
3.3 Realiza el conteo de aquellas colonias de apariencia rosa (fermentadoras de
lactosa) y efecta los clculos como se indica a partir del punto 2.4.
4. Determinacin de la presencia de Salmonella sp.
4.1 A partir del macerado inicial pasar 1 ml del sobrenadante a un tubo con 10 ml de
caldo soya tripticasena e incuba por 24 horas a 37C.
4.2 Transcurrida la incubacin, transfiere 1 ml del cultivo a un tubo con 10 ml de caldo
selenito cistina. Homogeniza e incuba a 37C por otras 24 horas.
4.3 Agita el tubo con caldo selenito y siembra aislando por estra cruzada en caja de
petri con agar salmonella-shigella. Incuba a 37C por 24 horas.
4.4 Observa los cultivos para identificar las colonias sospechosas de Salmonella
(no fermentadoras de lactosa, de color claro y con punto oscuro al centro).
4.5 Selecciona dos colonias tpicas para realizar pruebas bioqumicas.
INFORME
Presente los resultados de los anlisis realizados por su equipo de laboratorio y
discuta dichos resultados.
81

ASIGNACIN
1.- Investiga la tcnica para la cuenta viable de Staphylococcus aureus.
2.- Investiga y realiza un ensayo acerca de cmo repercute en la salud de los animales
la contaminacin del alimento con Salmonella, Staphylococcus y bacterias coliformes.
BIBLIOGRAFA
82

1. Alexander K.Steve y Strete Dennis. Microbiology. A photographic atlas for the

laboratory. Benjamn Cummings 2001.
2. Black, J.: Microbiology, principles and applications. 3 rd ed. PRENTICE HALL.
1996.
3. C.H.Collins, Patricia M. Lyne: Mtodos microbiolgicos. ACRIBIA. Zaragoza,
Espaa. 1989
4. Collins, Lyne, Grange. : Microbiological Methods. Butterworth Heinemann. 1995.
5. Cottral.
George.1989.
Microbiologa
Veterinaria.
LA PRENSA MEDICA
MEXICANA, S. A. Mxico, D. F.
6. Johnson T. And Case C. Laboratory experiments in Microbiology. 3rd edition.
Benjamin Cummings. 1992.
7. Koneman. Color atlas and textbook of Diagnostic Microbiology. 5 th ed.
LIPPINCOTT WILLIAMS AND WILKINS. 1997.
8. Prez, M, J, Suarez, F, Flores R. 1990. Bacteriologa General. Principios
Qumicos Biolgicos. Primera edicin. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA
DE MEXICO.
9. Lippincott Williams and Wilkins (1997), Koneman. Color atlas and textbook of
Diagnostic Microbiology. 5th ed.
10. Hughes R. y Smith A. 2013. American Society for Microbiology (ASM).
MicrobeLlibrary.org
consultado
en:
http://www.microbelibrary.org/library/laboratory-test/3041-capsule-stainprotocols.
11. Fan S. 2013. American Society for Microbiology (ASM). MicrobeLlibrary.org
consultado en: http://www.microbelibrary.org/library/laboratory-test/3088-elisa
12.
13.
14.
83

ANEXO 1. LINEAMIENTOS GENERALES DE LOS LABORATORIOS DEL ITSON

(APARTADO VII. ALUMNOS)
84

7.1
Solo tendrn derecho a realizar las prcticas de laboratorio, los alumnos que
estn oficialmente inscritos en la materia correspondiente.
7.2
El alumno que falte a una prctica, sin motivo justificado ante su maestro, pierde
derecho a la misma.
7.3
Ningn experimento debe de ser iniciado por el alumno hasta que se haya dado
las instrucciones pertinentes y cuente con la aprobacin del instructor.
7.4
Ningn equipo deber ser operado parcial o totalmente hasta que ser reciban las
instrucciones correspondientes y cuente con la aprobacin del instructor.
7.5
Al finalizar la prctica, deber efectuarse la limpieza del rea de trabajo, equipo,

materiales o instrumental bajo la supervisin del instructor y de acuerdo con lo
estipulado en el Manual de Seguridad de Laboratorios.
7.6
Ningn equipo deber ser desarmado parcial o totalmente a menos que sea
requisito indispensable de la prctica y as est estipulado en el manual de curso.
7.7
El deterioro o falla del equipo deber ser comunicado de inmediato al instructor.
7.8
Todas las reglas de seguridad establecidas en el Manual de Seguridad e Higiene

de Laboratorios debern observarse estrictamente. La violacin de alguna de
ellas, implicarn un sancin, que puede ir desde la amonestacin hasta la
expulsin parcial o total, de acuerdo con el artculo 35 de la Ley Orgnica de esta
institucin.
7.9
Los alumnos podrn hacer uso de los laboratorios fuera de la hora programadas
siempre y cuando cumplan con los siguientes requisitos:
a) Se presenten todos los integrantes del equipo de trabajo.
b) Se trate de una prctica donde no se hayan alcanzado los resultados
esperados, el maestro titular deber analizar la solicitud y en su caso,
apruebe su repeticin de acuerdo a la disponibilidad de reactivos.
c) Que no sea solicitado este servicio frecuentemente por el mismo equipo
de trabajo.
d) Se realice da y hora asignados por el maestro, cuidando que el equipo,
materiales y/o laboratorio no estn comprometidos para el desarrollo de
una prctica programada.
85

e) Que se tenga excedentes en inventarios de los reactivos requeridos por

la prctica.
f) Los alumnos al realizar esta prctica debern registrarse en el formato
disponible para ello en el almacn del edificio.
g) Los alumnos debern dejar limpia el rea de trabajo al finalizar la sesin.
h) Los alumnos firmarn la hora de salida del aula.
i) Los alumnos aceptan que se les aplique los estipulado en el punto 8.2 a
8.5 de la seccin correspondiente a aspectos econmicos de este
lineamiento
La no asistencia en el horario asignado para cubrir una repeticin solicitada
segn el punto 7.9 de este lineamiento ocasionar la perdida de derecho a este
servicio.
ANEXO 2. RIESGO BIOLGICO

Definicin.
86

Riesgo biolgico es aquel susceptible de ser producido por una exposicin no

controlada a agentes biolgicos. Entenderemos por agente biolgico cualquier
microorganismo y sus excreciones, cultivo celular o endoparsito humano capaz de
producir enfermedades, infecciones, alergias, o toxicidad.
Existe riesgo biolgico en los laboratorios donde se trabaja con microorganismos,
cultivos celulares, se experimenta con animales. Tambin existe este riesgo cuando se
efectan actividades mdicas y paramdicas con seres humanos o animales. El trabajo
con animales en granjas y establos, as como trabajo con muestras como las aguas
residuales.
Recomendaciones generales.
1. Se delimitar y sealizar las zonas de trabajo
2. No se comer, beber o fumar en el laboratorio. Bajo ningn concepto se
guardarn alimentos o bebidas en refrigeradores del laboratorio.
3. Se extremar la higiene personal, lavndose las manos antes y despus de
cada tarea.
4. En caso de que hubiere, cubrir las heridas cutneas con guantes. No emplee
anillos, pulseras, joyas, etc.
5. La manipulacin de cualquier muestra se efectuar siempre con guantes y con
gafas o pantallas antisalpicaduras. Cuando menos mascarillas contra vapores.
6. Toda muestra se transportar siempre en recipiente con tapa ajustable y cierre
hermtico que impida la salida de fluidos y vapores.
7. Todas las actividades al trabajar con productos biolgicos
deben realizarse
cuidadosamente para evitar la formacin de gotas y aerosoles.

8.
En el caso de que durante una operacin de centrifugacin se produjese la

ruptura de los tubos en el interior del equipo, se esperar al menos durante 5
minutos para abrir la tapa del mismo. Posteriormente se desinfectar equipos,
materiales y superficies de trabajo con un producto de efectividad constatada
(para el tipo de agente infeccioso que se este trabajando; esto de acuerdo a
recomendacin por el instructor.
87

9. Se restringir en la medida de lo posible, el uso de agujas y jeringuillas. Se

desechar las jeringas y agujas de un solo uso en contenedores especiales
(indeformables, no perforables, sin fisuras para evitar derrames) sin ser
encapsuladas.
10. El material contaminado que deba ser descontaminado en un lugar exterior al
laboratorio se colocar en un contenedor especial (indeformables, no
perforables, sin fisuras para evitar derrames), debidamente sealizado.
11. Todo material de desecho o residuo biolgico previamente esterilizado debe ser
sometido a un programa de gestin de residuos (ver manual de disposicin de
residuos). No mezcle los residuos contaminados biolgicamente con otro tipo de
residuos.
PARA TAREAS CON ANIMALES
12. Se manipular al animal siempre en silencio y con tranquilidad. Evitar en todo
momento su sufrimiento innecesario ya que adems puede inducir al animal a
defenderse y a producir lesiones.
13. Se usar siempre guantes en la extraccin de sangre o procedimientos
invasivos, en el contacto con lquidos que requieran precauciones universales
(lquido amnitico, pericardio, peritoneal, pleural, semen, secreciones vaginales
y cualquier lquido contaminado con sangre), en contacto con mucosas, piel no
intacta y para manipular objetos o superficies manchados con lquidos
corporales. Tambin se han de usar guantes cuando se tengan cortes, araazos
o lesiones en la piel de las manos.
14. Se efectuar lavado de las manos despus de quitarse la bata y los guantes
antes de dejar la estancia, e inmediatamente si se han ensuciado de sangre. En
los trabajos en granjas y establos se extremar la higiene personal tras la
realizacin de las tareas.
15. Se recomienda el uso de batas desechables cuando la ropa pueda ser
manchada por lquidos corporales, sangre, excreciones o secreciones. El resto
de ropa que se utilice para estas actividades, ser lavada frecuentemente,
88

preferiblemente sin mezclar con ropa que vaya a ser utilizada en menesteres no
laborales.
16. Se debe usar pantalla antisalpicaduras, bata y mascarilla protectoras cuando
haya riesgo de salpicaduras o proyeccin de lquidos corporales.
17. Las gotas de sangre que se derramen debern limpiarse rpidamente con un
desinfectante.
89

ANEXO 3. CUIDADOS Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I. Cuidados del microscopio.
1. Transportar el microscopio sujetndolo del brazo con una mano y colocar la otra
debajo de la base para sostenerlo
2. Colocar cuidadosamente el microscopio en su mesa de trabajo en un sitio sin
vibraciones.
3. Limpiar el sistema mecnico con un trapo suave que no deje pelusa y el sistema
ptico con papel seda. No manejar las lentes con los dedos.
4. Limpiar las lentes antes y despus de usarlo en clases, solo con papel seda.
5. No arrastrar, golpear o inclinar el microscopio.
II.
Manejo del microscopio
1. Conectar y encender la lmpara.

2. Colocar el objetivo seco dbil (10 X) en posicin.
3. Subir el condensador hasta el tope.
4. Abrir o cerrar el diafragma hasta lograr una adecuada iluminacin. La
iluminacin excesiva disminuye el contraste.
5. Colocar la preparacin en la platina y ajustarla con las pinzas o en el carrete para
portaobjetos.
6. Iniciar el enfoque usando el tornillo de ajuste grueso (macromtrico) y
despus de ajuste fino (micromtrico), hasta obtener una imagen ntida.
7. Sin mover los tornillos cambiar al objetivo
seco fuerte (40 X) usando el porta
objetivos giratorio (revlver) y enfocar de nuevo usando el micromtrico.

8. Una vez localizado el campo de inters y antes de cambiar al objetivo de inmersin,
colocar
una
pequea
gota
de
aceite de
inmersin
en la preparacin y sin
mover los tornillos proceda a colocar el objetivo de (100X) en posicin. Enfocar la

preparacin usando solamente el tornillo micromtrico y cuidando de no presionar
demasiado el portaobjetos con el objetivo porque puede romper la preparacin y rayar
la lente.
90

9. Al terminar de hacer sus observaciones, limpiar el microscopio como se indic,

bajar la platina hasta el tope inferior y dejar el revlver en el objetivo de menor
aumento o donde no lo tiene.
10. Entregar o guardar el microscopio con el cable enrollado y cubierto con la funda.
11. Avise a sus profesores de cualquier irregularidad que note en el
puesto
que
en
otras
clases
de
laboratorio
pueden utilizar
microscopio
el
mismo
instrumento y culparse a usted por cualquier parte que se haya daado

anteriormente y que se notifique despus.
91

ANEXO 4. PROCEDIMIENTOS PARA EL LAVADO, ESTERILIZACIN Y

DESINFECCIN DE MATERIALES UTILIZADOS EN LABORATORIO.
92

ANEXO 5. TABLA DE INTERPRETACIN DE PRUEBA DE SENSIBILIDAD A

ANTIMICROBIANOS.
TABLA DE INTERPRETACIN DE ANTIBIOGRAMA
R=resistente; I=intermedio; S=sensible
Abreviatura Agente antimicrobiano
Contenido del disco
Dimetro de halo de inhibicin
en mm
R
I
S
AK
Amikacina
<14
15-16
>17
AM
Ampicilina
10g
<13
14-16
>17
Staphyloccocus spp
<28
>29
Enterococous spp
<16
>17
Streptococcus spp
>24
CB
Carbencilina
100g
Enterobacteriaceae
< 19
20-22
>23
<13
14-16
>17
CF
Cefalotina
<14
15-17
>18
FEP
Cefepime
<14
15-17
>18
CTX
Cefotaxima
<14
15-22
>23
CAZ
Ceftazidima
<14
15-17
>18
CRO
Ceftriaxona
<13
14-20
>21
CXM
Cefuroxima
<14
15-22
>23
CL
Cloranfenicol
<12
13-17
>18
DC
Dicloxacilina
1 g
Staphyloccocus spp
<10
11-12
>13
ENX
Enoxacina
<14
15-17
>18
E
Eritromicina
15 g
Enterococcus spp
<13
14-22
>23
GE
Gentamicina
<12
13-14
>15
LEV
Levofloxacina
<13
14-16
>17
NET
Netilmicina
<12
13-14
>15
NF
Nitrofurantoina
<14
15-16
>17
PEF
Pefloxacina
5 g
<14
15-22
>23
PE
Penicilina
10U
Staphyloccocus spp
<28
>29
Enterococcus spp
<14
>15
N. gonorrhoeae
<26
27-46
>47
Streptococcus spp
>24
TE
Tetraciclina
<14
15-18
>19
SXT
Trimetoprim-sultametoxazol
25 g
<10
11-15
>16
NOR
Nafloxacina
5 g
<17
18-20
>21
Ceptioflur
<17
18-20
>21
ENR
Enrofluxacina
5 g
<17
18-21
>22
Florfenicol
<16
17-20
>21
CIP
Ciprofluxacin
5 g
<17
18-20
>21
93

ANEXO 6. FORMATOS DE REPORTE

REPORTE DE PRCTICA 1
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
I. RESULTADOS
II. ASIGNACIN
Elaborar un mapa conceptual sobre la importancia de la bioseguridad en la prevencin
de enfermedades y accidentes dentro del laboratorio de microbiologa.
III. BIBLIOGRAFA
Usar el formato APA. Se deben reportar al menos dos autores, y deben estar
referenciados en el texto de la discusin.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
94

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
MORFOLOGA MICROSCPICA Y TINCIONES SIMPLES
I. RESULTADOS
1. A partir del frotis elaborado en un medio slido:
Cuadro1. Resultados de la morfologa microscpica.
Esquemas del microorganismo 1 con el objetivo 10 X.
FORMA:__________________________________
AGRUPACIN: ____________________________
Esquemas del microorganismo1 con el objetivo 40 X.

FORMA:_________________________________
__________________________________________
_
AGRUPACIN:______________________________
__________________________________________
_
Esquemas del microorganismo 1 con el objetivo
100X.
FORMA:_________________________________
__________________________________________
_
AGRUPACIN:______________________________
95

__________________________________________
_
2. Frotis elaborado a partir de un medio lquido:

Cuadro 2. Resultados de la morfologa microscpica.
Esquemas del microorganismo 2 con el objetivo 10
X.
FORMA:_________________________________
__________________________________________
_
AGRUPACIN:______________________________
Esquemas del microorganismo 2 con el objetivo 40
X.
FORMA:_________________________________
__________________________________________
_
AGRUPACIN:_____________________________
Esquemas del microorganismo 2 con el objetivo

100 X.
FORMA:_________________________________
__________________________________________
_
AGRUPACIN:______________________________
II. DISCUSIN DE RESULTADOS

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
96

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________________
III. ASIGNACIN
1. Investiga quien fue Roberto Koch y haz una resea de sus principales aportaciones
a la microbiologa.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
2. Investiga la forma y las caractersticas generales de los microorganismos que
investigaste.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
97

IV. CONCLUSIONES
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
MORFOLOGA COLONIAL Y AISLAMIENTO POR ESTRA CRUZADA
I. RESULTADOS
1. A partir de la siembra en un medio slido:
Cuadro1. Resultados de la descripcin de morfologa colonial macroscpica.
Descripcin:
Tamao:
Color:
Forma:
Elevacin:
Bordes:
Superficie:
Luz reflejada:
Luz transmitida:
Consistencia:
Descripcin:
Tamao:
Color:
98

Forma:
Elevacin:
Bordes:
Superficie:
Luz reflejada:
Luz transmitida:
Consistencia:
2. Elaborada a partir de un medio lquido:
Cuadro2. Descripcin de la morfologa colonial o macroscpica.
Descripcin:_________________________________
_
___________________________________________
_
II. DISCUSION DE RESULTADOS

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
99

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
III. ASIGNACIN
1. Investiga al menos otros 2 mtodos de aislamiento de cultivos bacterianos.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
2. Compara el mtodo desarrollado en la prctica con los mtodos que investigaste,
seala adems las ventajas y desventajas de cada uno de ellos.
100

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
IV. CONCLUSIONES
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
101

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
TINCIN DE GRAM
I. RESULTADOS
Cuadro1. Descripcin de la morfologa bacteriana
Descripcin:
Nombre de la bacteria:
Forma:
Agrupacin:
Reaccin de Gram
Descripcin:
Forma:
Agrupacin:
Reaccin de Gram
Descripcin:
Forma:
Agrupacin:
Reaccin de Gram
Cuadro2. Descripcin de la morfologa bacteriana.
102

Descripcin:_________________________________
_
Descripcin:_________________________________
_
Descripcin:_________________________________
_

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
103

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
III. ASIGNACIN
1. Explique cual es el paso crtico de la tincin de Gram.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
2. Indique al menos dos factores que pueden alterar los resultados en la tincin de
Gram.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
3. Anote cinco gneros bacterianos de importancia veterinaria que sean Gram
positivos y cinco Gram negativos
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
104

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
IV. CONCLUSIONES
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_______________________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
TINCIN DE ZIEHL-NIELSEN
I. RESULTADOS
Cuadro1. Descripcin de la morfologa bacteriana o microscpica.
105

Esquema del microorganismo 1 con el objetivo 100

X.
Descripcin:
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
X.
Descripcin.
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
X.
Descripcin:
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_

106

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_______
III. ASIGNACIN
1. Investigar Por qu es necesario calentar el colorante primario en esta tcnica?
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_______________________________________________________
2. Investigar a que se debe la propiedad de algunas bacterias de ser acido-alcohol
resistentes.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
IV. CONCLUSIONES
107

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_______________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
TINCIONES SELECTIVAS
I.
RESULTADOS
Observacin de la cpsula con la tincin de rojo congo.
Cuadro1. Resultados de la morfologa bacteriana microscpica.
X.
Descripcin:

X.
Descripcin.
108

__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
2. Resultados de la observacin de esporas con la tincin de Gram.

Cuadro 2. Resultados de la morfologa bacteriana o microscpica.
X.
Descripcin:
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
X.
Descripcin.
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
__________________________________________
_
109

3. Resultados de la observacin de bacterias Gram positivas y Gram negativas con

tincin de Scheafer y Fulton.
Cuadro 3. Resultados de morfologa bacteriana (microscpica)
Esquema del microorganismo 1 con el objetivo 100 X.
Descripcin:_________________________________
_
___________________________________________
_
___________________________________________
_
___________________________________________
_
___________________________________________
_
___________________________________________
_

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
110

_____________________________________________________________________
_________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
III. ASIGNACIN
1. Investigue 5 ejemplos de bacterias de importancia en veterinaria que tengan
cpsula.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
2. Investigue que compuestos qumicos pueden formar las capsulas.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
3. Investigue tres ejemplos de bacterias de importancia en veterinaria que pueden
formar esporas.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
111

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
4. Investigar cuales son las partes que forman a una espora bacteriana.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
IV. CONCLUSIONES
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
112

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
AISLAMIENTO DE HONGOS Y MORFOLOGA COLONIAL
I. RESULTADOS
PRIMERA SESIN
1) Realiza los dibujos de los hongos de la primera sesin, tal como se observan en
las cajas de petri
113

2) Realiza los dibujos de las observaciones microscpicas de la primera sesin

10X
10X
10X
40X
40X
40X
HONGO 1
HONGO 2
LEVADURA
SEGUNDA SESIN
Registra las caractersticas de
sembraste.
la morfologa colonial de los hongos que
HONGO 1
114

Tamao (cm) ______________________________________________________

Aspecto __________________________________________________________
Color del micelio areo _______________________________________________
Color del micelio vegetativo ___________________________________________
Produccin de pigmento difusible ______________________________________
HONGO 2
Tamao (cm) _______________________________________________________
Aspecto __________________________________________________________
Color del micelio areo______________________________________________
Color del micelio vegetativo__________________________________________
Produccin de pigmento difusible______________________________________
Describe la morfologa microscpica considerando las siguientes caractersticas
y compara tus dibujos con los esquemas anexos.
HONGO 1
Dimetro del micelio: __________________________________
Tipo de micelio: _______________________________________
Hifas: _______________________________________________
HONGO 2
Dimetro del micelio: __________________________________
Tipo de micelio: _______________________________________
Hifas: _______________________________________________
Con las caractersticas observadas, trata de identificar al menos el gnero de los
hongos con que trabajaste en la prctica
HONGO 1 _______________________________________
HONGO 2 _______________________________________
II. ASIGNACIN
Investigar en diferentes fuentes de informacin las caractersticas macroscpicas y
microscpicas de los microorganismos con los que se realizo la prctica
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
115

__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
III. DISCUSIN DE RESULTADOS
Debes buscar informacin sobre las formas de cultivo para hongos, formas de
identificacin y la importancia que estos tienen en la medicina veterinaria.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
_________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
116

__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
____________________________________________________________
IV. CONCLUSIONES
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
______________________________________
V. BIBLIOGRAFA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
117

_____________________________________________________________________
________________________________________________________________
REPORTE DE LA PRCTICA 8
CULTIVO DE ANAEROBIOS
I. RESULTADOS
AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS DE MATERIAL FECAL.
Dibuja el crecimiento bacteriano de la siembra en la
caja de Petri de la muestra de heces
DESCRIPCIN MORFOLGICA DE LAS COLONIAS AISLADAS DE LA MUESTRA DE

HECES
CARACTERISTICA
Tamao
Color
Forma
Elevacin
Bordes
Superficie
COLONIA 1
COLONIA 2
118

Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
DESCRIPCIN MICROSCPICA
CARACTERISTICA
FORMA
AGRUPACIN
GRAM
ESPORAS
BACTERIA 1
BACTERIA 2
CULTIVO DE BACTERIAS ANAEROBIAS EN MEDIOS LQUIDOS
CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS POR COMENSALISMO
119

Tincin de Gram de
Bacillus
Tincin de Gram de
Clostridium
Realiza un dibujo de la caja con los cultivos

II. ASIGNACIN
- Investiga al menos tres bacterias anaerobias de importancia en medicina veterinaria
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
__________________
- Investiga los patrones de crecimiento bacteriano en diferentes medios de cultivo de
bacterias anaerobias.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
120

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
III. DISCUSIN DE RESULTADOS:
Dirigida a la formacin de esporas en bacterias anaerobias como proteccin ante
condiciones ambientales adversas y el efecto del oxigeno en las bacterias.
Se deben consultar al menos dos autores, mismos que deben estar referenciados en el
texto de la discusin.
_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
121

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
IV. CONCLUSIN
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________
V. BIBLIOGRAFA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
__________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________________________
122

USO DE MEDIOS SELECTIVOS
I. RESULTADOS
Complete las tablas anexas con sus observaciones de laboratorio e investiga las
columnas en blanco.
Medio de
cultivo
Color del
medio de
cultivo
Indicador
que
contiene el
medio
Tipo de
medio de
cultivo
Cepa
bacteriana
Caldo
glucosado
E. coli
Salmonella
Caldo bilis
verde brillante
E. coli
Medio Stuart
S. aureus
Mac Conkey
Salmonella
Verde brillante
Mezcla de
bacterias
Eosina Azul de
metileno
Proteus
Agar
Estafilococcus
110.
Sal y manitol
S. aureus
Agar nutritivo
Bacillus
Forma de
siembra en el
medio de
cultivo
Mezcla de
bacterias
123

Medio de
cultivo
Caldo
glucosado
Cepa
bacteriana
Morfologa colonial
Forma y
agrupacin
bacteriana y
tincin de
Gram
Modificacin en
el medio a las
24 hrs de
cultivo
E. coli
Salmonella
Caldo
bilis
verde
E. coli
brillante
Medio Stuart
S. aureus
Mac Conkey
Salmonella
Verde
brillante
Mezcla
de
bacterias
Eosina Azul Proteus

de metileno
A.Estafilococ S. aureus
cus 110.
Sal y manitol Mezcla
de
bacterias
Agar nutritivo Bacillus
II. ASIGNACIN:
Investiga y explica a que se atribuyen los cambios que se producen en los medios de
cultivo conforme al metabolismo bacteriano de dos cepas seleccionadas.
124

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
________________________________________________
Dirigida hacia los factores de crecimiento y
nutricionales necesarios para las
diferentes bacterias, y las ventajas de la utilizacin de diferentes tipos de medios de

cultivo. Se deben reportar al menos dos autores, y adems deben estar referenciados
en
el
texto
de
la
discusin.
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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125

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
IV. CONCLUSIN
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
126

_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
V. BIBLIOGRAFIA
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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USO DE PRUEBAS BIOQUMICAS
I. RESULTADOS
Descripcin macroscpica de las colonias seleccionadas.
CARACTERISTICA
Tamao
Color
Forma
Elevacin
Bordes
Superficie
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
COLONIA 1
COLONIA 2
COLONIA 3
127

Tincin de Gram
PRUEBAS BIOQUMICAS PARA BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
REACCIN
Tubo de TSI
Fermentacin de lactosa
Fermentacin de glucosa
Produccin de gas
BACTERIA 1
BACTERIA 2
Tubo de SIM
Produccin de cido sulfhdrico
Produccin de indl
Movilidad
Utilizacin de Citrato de Simmons
Produccin de ureasa
Prueba de rojo de metilo
Prueba de Vogues-Proskauer
Gnero y especie
PRUEBAS BIOQUMICAS PARA BACTERIAS GRAM POSITIVAS

CARACTERSTICA
Forma
Agrupacin
Prueba de catalasa
Prueba de coagulasa
Gnero y especie
BACTERIA 1
BACTERIA 2
II. ASIGNACIN
Investiga las reacciones bioqumicas de las cepas bacterianas que utilizaste en la
prctica.
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128

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III. DISCUSIN DE RESULTADOS
Dirigirla hacia la interpretacin de las reacciones bioqumicas para la identificacin
bacteriana. Se deben reportar al menos dos autores y deben estar citados en el texto
de la discusin.
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129

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IV. CONCLUSIN
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V. BIBLIOGRAFA
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130

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____________________________________
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS
I. RESULTADOS
Realice un esquema de los halos de inhibicin observados en la prueba de difusin
en agar (antibiograma).
Antibiograma1
Antibiograma 2
Anote el resultado de la actividad de los antibiticos en placa sobre los cultivos

bacterianos utilizados
ANTIBITICO
GRAM
NEGATIVO
Nombre / abreviatura
Medida en mm
del halo
GRAM
POSITIVO
Medida en mm del
halo
SENSIBILIDAD
131

II. ASIGNACIN: Investigar acerca de las consecuencias del uso irracional de los
antimicrobianos en los animales en produccin y elabora un ensayo.
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_________________________________________________

De los antibiticos probados y sensibles, indica cuales utilizaras y por qu,
justificando en funcin del microorganismo y la enfermedad que ocasiona. Se deben
consultar al menos dos autores y citarse la discusin.
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133

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III. CONCLUSIN
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IV. BIBLIOGRAFIA
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_________________________________
COLECCIN Y ENVIO DE MUESTRAS A LABORATORIO
I. RESULTADOS
Completar el formato de recepcin de casos clnicos del laboratorio de diagnstico que
incluye datos generales del cliente, historia clnica y el diagnstico presuntivo con la
informacin requerida.
134

Realice esquemas de la tincin de Gram del frotis tomado directamente de muestra.
Enlista los materiales utilizados para la toma y envo de muestras.

MATERIALES
PARA LA TOMA DE
MUESTRA
MATERIALES
PARA EL ENVIO DE MUESTRA
MATERIALES
DE BIOSEGURIDAD
INCLUIR EL FORMATO DE RECEPCION DE MUESTRAS EN LAS PRACTICAS
II. ASIGNACIN:
Entregar una secuencia fotogrfica numerada e impresa de los pasos de la toma de
muestra, con una breve descripcin al pie de cada figura.
135

Investiga las precauciones y medidas de seguridad que deben adoptarse para la toma
de muestra asignada por el maestro.
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Dirigida a las medidas de bioseguridad y el riesgo del mdico veterinario para adquirir
enfermedades zoonticas. Se deben consultar al menos dos autores y citarse en el
texto de la discusin.
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136

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IV. CONCLUSIN
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_____________________________________________________________________
V. BIBLIOGRAFA
Usar formato APA. Se deben reportar al menos dos autores, y deben estar
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
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137

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____________________
ANLISIS BACTERIOLGICO DE PROCESOS PIOGNICOS
I. RESULTADOS
Realice esquemas de la tincin de Gram del frotis tomado directamente de muestra.
Dibuja la morfologa microscpica de las bacterias aisladas en cultivo puro.

Tincin de Gram
Tincin de Gram
138

Describe la colonia seleccionada de cada uno de los medios de cultivo.

CARACTERISTICA
COLONIA 1
Agar sangre
COLONIA 2
Agar Sal y manitol
Tamao
Color
Forma
Elevacin
Bordes
Superficie
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Tincin de Gram
Registra los resultados de las pruebas bioqumicas realizadas para su interpretacin.
REACCIN
Tubo de TSI
Produccin de gas
BACTERIA 1
BACTERIA 2
Tubo de SIM
Produccin de indl
Movilidad
Produccin de ureasa
Prueba de Voges-Proskauer
Forma
Agrupacin
Prueba de catalasa
Prueba de coagulasa
Gnero y especie
139

Registra la lectura e interpretacin de la sensibilidad a los antibiticos sobre la cepa

identificada.
Nombre del antibitico
Abreviatura
Medida en mm
del halo
SENSIBILIDAD
II. ASIGNACIN.
Investigar acerca de las enfermedades ocasionadas por el agente bacteriolgico
identificado. (Al menos 2 autores).
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________
140

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III. CONCLUSIN:
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IV. BIBLIOGRAFIA:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________
ANLISIS BACTERIOLGICO DE HECES Y ORINA
I. RESULTADOS
Realice esquemas de la tincin de Gram del frotis elaborado a partir del Agar Verde
brillante y de la placa de agar sangre.
141

AGAR SANGRE
Tincin de Gram
AGAR VERDE BRILLANTE

Tincin de Gram

CARACTERISTICA
COLONIA 1
Agar sangre
COLONIA 2
Agar Verde Brillante
Tamao
Color
Forma
Elevacin
Bordes
Superficie
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Tincin de Gram
Registra los resultados de las pruebas bioqumicas realizadas para su interpretacin.
REACCIN
Tubo de TSI
Produccin de gas
BACTERIA 1
BACTERIA 2
Tubo de SIM
Produccin de indl
Movilidad
Utilizacin
de Citrato
Simmons
Produccin de ureasa
de
142


Forma
Agrupacin
Prueba de catalasa
Prueba de coagulasa
Gnero y especie

identificada.
Nombre del antibitico
Abreviatura
Medida en mm
del halo
SENSIBILIDAD
II. ASIGNACIN
identificado. Consulte al menos 2 fuentes de informacin.
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143

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III. CONCLUSIN:
_____________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________
IV. BIBLIOGRAFIA:
144

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ANLISIS BACTERIOLGICO DE ORGANOS
I. RESULTADOS
Anexar el formato de registro de casos clnicos para estudio bacteriolgico.
Realice esquemas de la tincin de Gram del frotis elaborado a partir del Agar Mac
Conkey y de la placa de Agar sangre.
AGAR SANGRE
Tincin de Gram
AGAR MAC CONKEY

Tincin de Gram

CARACTERISTICA
COLONIA 1
Agar sangre
COLONIA 2
Agar Mac Conkey
Tamao
Color
Forma
Elevacin
145

Bordes
Superficie
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Tincin de Gram
Identifica las reacciones positivas de la placa inoculada de Microscan comparndola
con la tabla indicadora del sistema.
REACCIN PARA GRAM POSITIVOS
Tubo de TSI
Produccin de gas
BACTERIA 1
BACTERIA 2
Tubo de SIM
Produccin de indl
Movilidad
Produccin de ureasa
Forma
Agrupacin
Prueba de catalasa
Prueba de coagulasa
Gnero y especie
Anexar tabla para lectura de la concentracin mnima inhibitoria.
identificada.
GENERO Y ESPECIE
Concentracin INTERPRETACION
146

Nombre del
antibitico
Abreviatura
REACCIN PARA GRAM NEGATIVOS

Tubo de TSI
Produccin de gas
BACTERIA 1
MS
BACTERIA 2
Tubo de SIM
Produccin de indl
Movilidad
Produccin de ureasa
Forma
Agrupacin
Prueba de catalasa
Prueba de coagulasa
Gnero y especie
147

Anexar tabla para lectura de la concentracin mnima inhibitoria EN anexos

identificada.
GENERO Y ESPECIE
Nombre del
antibitico
Abreviatura Concentracin
INTERPRETACION
S
MS
III.
ASIGNACIN
identificado. Consulte al menos 2 fuentes de informacin.
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148

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______________________________________________________
IV. CONCLUSIN:
_____________________________________________________________________
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V. BIBLIOGRAFIA:
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_____________________________________________________________________
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______________________________________________________________
ANLISIS BACTERIOLGICO DE ALIMENTOS PARA CONSUMO ANIMAL
I. RESULTADOS
Cuenta
Total
de
Organimos
mesoflicos
aerobios (UFC/g)
149

Organismos
coliformes
Totales
(UFC/g)
Salmonella
(Ausente/Presente
en
____g)
II. ASIGNACIN:
1. Investiga la tcnica para la cuenta viable de Staphylococcus aureus.
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2. Investiga y realiza un enssayo a cerca de como repercute en la salud de los
animales la contaminacin del alimento con Salmonella, Staphylococcus y bacterias
coliformes.
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150

Dirigida a si el alimento es apto o no para el consumo de los animales segn lo

recomendado o establecido en las normas nacionales por las instituciones legales
correspondientes. Se deben consultar al menos dos autores y citarse en el texto de la
discusin.
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IV. CONCLUSIN
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V. BIBLIOGRAFA
Usar formato APA. Se deben reportar al menos dos autores, y deben estar
151

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152

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DIRECCIN DE RECURSOS NATURALES

MANUAL DE PRACTICAS DEL

Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

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controlar los riesgos biolgicos, fsicos y qumicos que se presentan en la realizacin

diferentes especies animales, as como la interaccin con los

productores para recabar la informacin necesaria, culminando en la aplicacin e

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3. Usar el cabello recogido, calzado cerrado. No se permitir el acceso con pantaln

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20. Es obligatorio que el alumno entregue el diagrama de flujo previo a la realizacin

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ha permitido a los investigadores clasificar a los

microorganismos en cuatro grupos de riesgo. Estos se han publicado en las Medidas

las medidas de seguridad que se han

implementado en el laboratorio de bacteriologa y patogenia bacteriana para la

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Depsitos de material punzocortante

Bolsas de residuos biolgico infecciosos

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sobre todo de agua, que es el medio en el que normalmente estn suspendidos, es

procedimiento de tincin se emplea un slo colorante. Una vez fija la

preparacin, se le agrega la solucin colorante y se deja actuar aproximadamente un

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Figura1. Colorante safranina

COMPETENCIA: El alumno diferenciar la forma y agrupacin microscpica de los

Tela suave y papel seda

Verde de malaquita, safranina y fucsina bsica.

Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados

Con el asa bacteriolgica o un gotero, coloca una pequea gota de agua en el

Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

Deja secar al aire el frotis

Colocar el frotis en el puente de tincin y cubrirlo con el colorante seleccionado

Lavar con chorro de agua suave y escurrir

2. Elaboracin de frotis a partir de medio lquido

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1. Incluir en el reporte los esquemas de las preparaciones observadas con los

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Tamao: medir el dimetro en milmetros

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COMPETENCIA: Adquirir los conocimientos necesarios para diferenciar las formas

Bolsa de plstico transparente

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4. Describir la forma, borde, elevacin y superficie de acuerdo a la gua anexa.

Figura 3. Tcnica de aislamiento por estra cruzada

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7. Identifica las cajas con los siguientes datos:

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III. Siembra en medio lquido

Investiga al menos otros 2 mtodos de aislamiento de cultivos bacterianos.

Compara el mtodo desarrollado en la practica con los mtodos que

Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

En 1884 un mdico dans, Hans Cristian Gram, desarroll y public un mtodo de

bacterianos en los cuales la tincin de Gram no es de utilidad taxonmica, por ejemplo:

Manual de Laboratorio de Bacteriologa y Patogenia Bacteriana

El mtodo de la tincin de Gram ha sufrido varas modificaciones y algunas de stas

Obtener un colorante primario ms estable que el original, ya que ste se