Informe 3. Hidrolisis de ALmidon

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN: ANÁLISIS ENZIMÁTICO DE LA DIAZTASA
STARCH HYDROLYSIS:ENZYMATIC ANALYSIS DIASTASE

Moreno C, PalaciosA.
Corporación Tecnológica de Bogotá, Tecnología en Química IndustrialDepartamento
BogotáColombia
15/12/2014
ypalacios03@ctb.edu.co
RESUMEN que se almacena la glucosa y a partir del cual, la

glucosa puede ser movilizada con fines
Con el objetivo de realizar una hidrólisis
metabólicos por degradación
enzimática y hacer un estudio cinético de una
enzimática. (Geissman, págs. 567-568). El
solución que contenía enzima (α-amilasa).
almidón está constituido por amilosa con enlaces
1-4 y amilopectina con ramificaciones entre
Se prepararon soluciones de la enzima (diastasa)
enlaces 1-6.
al 2% y del sustrato (almidón) también al 2 %
para así realizar la hidrólisis de esté obteniendo
El término hidrólisis aplica a las reacciones
como producto dextrinas. Mediante el uso de
químicas orgánicas o inorgánicas donde el agua
tartrato de cobre alcalino y el arsenomolibdato,
efectúa una doble descomposición con otro
se midieron las absorbancias a 620 nm para
compuesto, el hidrógeno va para un compuesto y
realizar la curva y obtener una gráfica
el hidroxilo a otro, en el caso del almidón
de Michaelis-Menten para evaluar la acción
esta hidrólisis puede ser catalizada por enzimas
enzimática de la diastasa.
(Reinaldo J. Velasco et al. 2008).
La hidrólisis de almidón se realiza en dos etapas:
Palabras Clave: Diastasa, almidón, sustrato,
Licuefacción y sacarificación, la licuefacción es
enzima.
la primera etapa en la que actúan enzimas
ABSTRACT
como α-amilasa y β amilasa dando lugar a la
With the objective of carrying out a enzymatic hy formación de dextrinas. La etapa de
drolysis and make a kinetic study of sacarificación, se realiza utilizando enzimas
a solution containing enzyme (α-amilasa). como glucoamilasas, pululanasas o mezclas de
enzimas, que forman moléculas de D-glucosa a
Preparing enzyme solutions (diastase) and 2% partir de las dextrinas obtenidas durante la
of substrate (starch) also performed well at 2% licuefacción. La actividad de estas enzimas
to conduct the hydrolysis of this product obtained depende principalmente de la temperatura y el
as dextrins. Using alkaline copper tartrate and ar pH (Anaya V. F. J. 2004; Mera l, et al. 2003).
senomolibdato absorbances were measured at
620 nm for the bend and obtain a Michaelis-
MATERIALES Y MÉTODOS
Menten plot for evaluating the enzymatic action
of diastase. Tabla 1 Materiales.
Key Words:
Material Cantidad
Diastase, starch, substrate, enzyme.
Vaso de precipitado de 2
INTRODUCCIÓN 250 ml
El almidón es un poliglucosido constituido por Vaso de precipitados 1
restos de glucosa unidos por enlaces α- de 50mL
glucosidicos, es un polisacárido de reserva en el Vidrio de reloj 1
Micro espátula 1 5 0.016
0,375
Tubos de ensayo 9 0,24
6 2.86×10-3
Pipeta grad. de 10ml 2 0,178
0,043
Se prepararon dos soluciones, una de amilasa 2%

en NaCl 0.1% y una solución de almidón 3% en Grafica Michaelis-Menten
buffer (Acetato de sodio 1M, Ácido acético 0.003
1M). En 9 tubos de ensayo se adicionaron los
Absorbancia/Tiempo
0.0025
volúmenes de las soluciones anteriormente
preparadas (Tabla 2). Estos se dejaron reaccionar 0.002
por 10 minutos, luego se llevaron a ebullición 0.0015
por 5 minutos más, una vez se enfriaron se 0.001
adiciono 1 ml de solución de tartrato de cobre
0.0005
alcalino dejando los tubos 5 minutos en baño de
María. Por último se agregó a cada tubo 1 ml de 0
0 0.02 0.04 0.06
solución de arsenomolibdato, homogenizando Absorbancia
por inversión.
Finalmente se centrifugo por 3 minutos a 2000 Ilustración 1 Gráfica de Michaelis-Menten.
rpm y se midió absorbancia a 620 nm.
Debido a la desviación cinética en los datos
experimentales (dado por la inhibición del
Tabla 2 Soluciones en los tubos de ensayo. sustrato) no se logró trazar con precisión la
hipérbola michaeliana requerida, es por esto que
Tubo BB BS BE 1 2 3 4 5 6 no se logro determinar los valores de K m y Vm, lo
Almidón que se observa en la gráfica es la fase pre-
- 3 - 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
ml estacionaria donde la velocidad de reacción va en
Agua ml 1 0.5 0.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 aumento constante relacionada con las
Enzima concentraciones de las sustancias reaccionantes.
- - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Para que se pueda ver la fase estacionaria se dice
ml
que la velocidad de formación de productos debe
ser uniforme y por tanto la concentración del
RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE complejo permanece constante. (Macarulla &
RESULTADOS Marino, 1992). La grafica de Lineweaver-
Burk da una representación lineal de la gráfica
Acción Enzimática de la Diastasa de Michaelis-Menten dando del inverso de la
Tabla 3 Absorbacia de las soluciones. velocidad inicial frente al inverso de la
concentración inicial de sustrato permitiendo
Tubo BB BS BE hallar el valor de km y de Vmax más
Absorbancia 0.000 0.135 0.025 exactos. No se realizó la gráfica de Lineweaver-
Burk porque en un principio no se obtuvieron los
valores Km y Vm mediante la ecuación
Tubo Absorbancia [S] mM µM/min de Michaelis-Menten, sin estos no se puede
1 0,049
obtener la representación doble recíproca
0,086 5,73×10-3 (Lineweaver-Burk).
2 6.26×10-3
0,041
0,094
3 6.13×10-3 Hidrolisis del Almidón
0,043
0,092
4 7.3×10-4 Para la degradación del almidón se usó la enzima
0,124
0,011 hidrolasa (diastasa) la cual ejerce un efecto
catalítico sobre la hidrolisis produciendo la
ruptura de los enlaces α 1-4 ya sea espectrofotómetro (Rakoff, 1980), relacionando
de amilosa o amilopectina. La hidrolisis hace que
la absorbancia con la concentración.
la molécula de almidón sea cada vez más
pequeña dando la alfa amilasa
y amilopectina esta ultima una vez por acción de
nuevo de la amilasa rompe los enlaces α 1-4
produciendo dextrinas las cuales son fragmentos
de polisacáridos más pequeños que el almidón
con uniones de glucosa lineales o ramificadas .
Según la siguiente reacción:
Según la siguiente reacción:

Ilustración 3 Formación del azul de molibdeno a partir de la
descarboxilación del azúcar oxidado.
CONCLUSIONES
 No se logró realizar el estudio
cinético de la α-amilasa a partir de la
hidrolisis enzimática del almidón, ya que
no se obtuvo los valores de Km y Vm.
(MacFaddin, 2003, pág. 388)  Se realizó la hidrolisis parcial del
La solución de tartrato alcalino se usa como almidón con la producción de dextrinas.
 La Temperatura y el pH que
reactivo de Fehling la cual se basa en la acción
afectan la velocidad de la reacción deben
reductora que tienen los azúcares (por la permanecer constantes.
presencia del grupo carbonilo que presentan)
Bibliografía
sobre los iones cúpricos en medio alcalino, este  Geissman. (1973). Principios de
Química Orgánica. Barcelona: Reverte
se oxida a ácido y reduce la sal de cobre (II) en
S.A.
medio alcalino a óxido de cobre (I), que forma un  MacFaddin, J. (2003). Pruebas
bioquímicas para la identificación de
precipitado de color rojo.
bacterias de importancia clínica
. Argentina: Panamericana S.A.
 Macarulla, J., & Marino, A.
(1992). Bioquímica Cuantitativa (Vol.
2). Barcelona: Reverte, S.A.
 Rakoff, H.
(1980). Quiica organica fundamental. M
Ilustración 2 Formación de cobre reducido a partir del
tartrato de cobre y el azúcar reductor.
exico D-C: Limusa.
El arsenomolibdato forma una tonalidad azul

debido a que ocurre una descarboxilación sobre
el azúcar reductor, la cantidad de azul de
molibdeno es proporcional a la concentración de
azucares presentes en la muestra, la intensidad
del color puede ser cuantificable con

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