DNA

AISLAMIENTO DE DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA
IDENTIFICACIÓN DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Objetivo: etilendiaminotetraacético, que es un agente
 Aislar, purificar y caracterizar quelante, que puede crear complejos con iones
espectrofotométricamente DNA de guayaba divalentes, dado que el Ca2+ es un cofactor
 Identificar por cromatografía en capa fina las requerido por las nucleasas, su secuestro por el
bases nitrogenadas del DNA y RNA EDTA evita la degradación del DNA, el NaCl …
aprovechando su propiedad para absorber El almidón de la guayaba se hidroliza por la
luz UV. acción de la enzima amilasa, la cual rompe los
Introducción: enlaces α 1, 4.
Los ácidos nucleicos representan la cuarta gran La solución saturada de NaCl provoca la
clase de macromoléculas. Éstas, igual que las precipitación salina de proteínas y el SDS al 10
proteínas y los polisacáridos, contienen % es un compuesto tensioactivo aniónico
múltiples unidades monoméricas similares que antipático, toma la parte lipídica de la célula y
se unen en forma covalente para producir forma semimicelas, además rompe enlaces no
polímeros grandes. El DNA y RNA son muy covalentes de las proteínas, por lo que deshace
apropiados para funcionar como portadores de la membrana y libera el contenido de la célula.
información genética en virtud de sus Despues de la centrifugación se obtienen tres
estructuras covalentes. Los nucleótidos tienen fases: En la superior se encuentra el DNA, en la
tres componentes: un azúcar con cinco media las proteínas coaguladas y en la inferior
carbonos, uno o más grupos fosfato y un la mezcla de cloroformo: alcohol isoamílico.
compuesto nitrogenado débilmente básico El sobrenadante se vierte en alcohol 96° para la
llamado base, las cuales son derivadas de precipitación de los polímeros biológicos entre
pirimidina (tiene un solo anillo de cuatro átomos los cuales se encuentra el DNA de guayaba
de carbono y dos de nitrógeno) y purina (tiene
un sistema de anillos fundidos de pirimidina y de Resultados:
imidazol). Los dos tipos de bases son no Se anexa:
saturados, con dobles enlaces conjugados. Esta Grafica 1. Espectro de absorción de DNA de
propiedad hace que los anillos sean planos, y guayaba.
también explica su capacidad de absorber la luz
ultravioleta.
El RNA está formado por: el azúcar D-Ribosa,
bases nitrogenadas (adenina, guanina, citosina
o uracilo) y el grupo fosfato.
El DNA esta formado por: el azúcar
desoxirribosa (el prefijo desoxi indica que el
carbono 2´ del azúcar carece del átomo de
oxigeno), bases nitrogenadas (adenina,
guanina, citosina o timina) y el grupo fosfato. El
DNA se encuentra en el núcleo de las células
eucarióticas y para su extracción es necesario:
un procedimiento mecánico para romper la
pared y membrana celular y así facilitar su La determinación de la concentración de DNA
extracción, es importante mencionar que el obtenido en mg/ mL se realizó por tres métodos
proceso debe ser llevado en condiciones en que diferentes:
se inhiban las enzimas degradativas de los Método 1. Se anexa Figura 1. Nomograma para
ácidos nucleicos (nucleasas), además de que el el cálculo de las concentraciones de ácidos
DNA obtenido debe ser purificado. nucleicos y proteínas.
Análisis de la técnica: Factor de dilución: 3
A 15 g de guayaba se le adiciono una solución Valor obtenido del nomograma para ácidos
de Tris/EDTA/NaCl, trisaminometano, que es un nucleicos: 0.016 mg / mL
regulador de pH, ácido
AISLAMIENTO DE DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA
IDENTIFICACIÓN DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
𝑚𝑔
∴ Á𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑖𝑐𝑜𝑠 = 3(0.016) = 0.048 ⁄𝑚𝐿
Método 2: Mediante la fórmula:
𝐴260 0.656 ∗ 3
[𝐷𝑁𝐴] = ∗ 𝐹𝐷 =
22500 22500
−5 𝑔 𝑚𝑔
= 8.74𝑥10 ⁄𝑚𝑙 𝑜 𝑏𝑖𝑒𝑛 0.0874 ⁄𝑚𝑙
Método 3: Mediante la relación:
50 𝜇𝑔 𝐷𝑁𝐴 𝑝𝑢𝑟𝑜 − 1 𝐴260
𝑥 − 𝐴260
∴ 𝑥 = 𝐴260 ∗ 50 𝜇𝑔 𝐷𝑁𝐴 𝑝𝑢𝑟𝑜 ∗ 𝐹𝐷
𝑥 = 0.656 ∗ 50 ∗ 3
𝜇𝑔 𝑚𝑔
= 98.4 ⁄𝑚𝑙 𝑜 𝑏𝑖𝑒𝑛 0.098 ⁄𝑚𝑙
Calculo de la pureza:
𝐴260 𝑛𝑚
𝑝𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = ≈2
𝐴280 𝑛𝑚
0.656𝑛𝑚
𝑝𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = = 0.9252
0.709𝑛𝑚
Discusión de resultados:
El espectro de absorción del DNA puro presenta
un máximo a una absorbancia de 260 nm que
corresponde a los ácidos nucleicos y un mínimo
en 230 nm correspondiente a enlaces
peptídicos, sin embargo, los datos de la
espectrofotometría indican un comportamiento
distinto al mencionado, pues la absorbancia a
230 nm y 280 nm son mayores a 260 nm, éste
resultado indica la presencia en mayor cantidad
de proteínas y enlaces peptídicos en
comparación al DNA

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