AMILASA CNPG Liquiform Ref.

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Instrucciones de Uso

Finalidad . Sistema para determinación de la a-Amilasa en muestras El reactivo no abierto, cuando se almacena en las condiciones
de sangre, orina u otros líquidos biológicos. especificadas, es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la
etiqueta. Durante el manejo de los reactivos están sujetos a
Uso profesional. contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar
la reducción de la estabilidad.
[Solamente para uso diagnóstico in vitro]

Precauciones y cuidados especiales

Principio . La alfa-Amilasa hidroliza el sustrato 2-cloro-p-nitrofenil-a-
D-maltotriosídeo (CNPG3), liberando 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y Acciones como pipetear el sustrato con la boca, soplar en el sustrato,
formando 2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltósido (CNPG2), maltotriosa usar el material contaminado con saliva, sudor y mantener el envase
(G3) y glucosa (G). La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol destapado pueden contaminar el reactivo con cantidades microscópicas
puede medirse fotométricamente y proporciona una medida directa de la de saliva o sudor, que son capaces de dañar irreversiblemente el sustrato.
actividad de la α-Amilasa en la muestra. Al igual que en toda reacción enzimática, la estricta observación del
tiempo y de la temperatura de incubación es de gran importancia para la
a-amilasa calidad de los resultados obtenidos.
10 CNPG3 9CNP + 1 CNPG2 + 9G3 + 1G
Los estudios de estabilidad han señalados que la absorbancia del
sustrato, medida contra el agua, presenta un incremento de 0,0015 por
Características del sistema . Los últimos métodos para la mes. Elevaciones repentinas de la absorbancia del sustrato señalan
determinación de α-Amilasa se basan en la producción de p-nitrofenol a contaminación y su utilización debe ser descontinuada.
partir de la hidrólisis de sustratos bien definidos de oligosacáridos, con
grupos de bloqueo asociados al desecho de carbohidrato terminal. La Los cuidados habituales de seguridad deben aplicarse en la manipulación
acción hidrolítica de a-Amilasa en esos oligosacáridos produce varias de los reactivos. El reactivo contiene azida sódica que es tóxica. No beba
cadenas de tamaños distintos, y requieren el acoplamiento de las y, en caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente
reacciones enzimáticas auxiliares para liberar el p-nitrofenol. En muchos con agua y acúdase a un médico. La azida puede formar compuestos
casos, la presencia de trazas de amilasa como contaminante de las altamente explosivos con tuberías de plomo o cobre. Por lo tanto, utilice
enzimas auxiliares disminuye en gran medida la estabilidad de esos grande volumen de agua para desechar el reactivo.
sustratos.
El reactivo contiene asimismo tiocianato de potasio, que es venenoso. No
El ensayo propuesto utiliza un sustrato cromogénico, 2-cloro-p- ingerir
nitrofenol, vinculado a matotriosa. La a-Amilasa actúa directamente en
ese sustrato, y libera una cantidad mayor que el 90% del cromóforo CNP,
Materiales necesarios y no fornecidos.
cuya velocidad de formación puede medirse en modo cinético. Se utiliza
un sustrato en medio líquido, que no requiere el empleo de enzimas
auxiliares para la formación del producto coloreado, así se obtiene una 1. Fotómetro con cubeta con termostato capaz de medir, con precisión la
estabilidad prolongada del sustrato. absorbancia a 405 nm.
2. Pipetas para medir muestras y reactivos.
El sistema Labtest es de fácil aplicación en analizadores automáticos y
semiautomáticos, que son capaces de medir una reacción cinética en
3. Cronómetro.
405 nm. La alta linealidad del ensayo disminuye en gran medida el 4. Calibrador - Línea Calibra H - Ref. 80, Labtest.
número de muestras que deben ser diluidas.
Muestra
Metodología . Sustrato 2-cloro-p-nitrofenil-a-D-maltotriosídeo

(
(CNPG3). Usar suero, plasma (heparina), orina y líquidos (ascítico, duodenal o
pleural). Las muestras que contienen citrato EDTA u oxalato producen
Reactivo resultados falsamente disminuidos.

1. - Sustrato - Almacenar entre 2-8ºC La actividad enzimática es estable 7 días entre 15-25ºC y varios meses
entre 2-8ºC. No use muestras con signos de contaminación microbiana.
Contiene tampón £100 mM, pH 6,2; 2-cloro-p-nitrofenil-a-D-
maltotriosídeo 560 mM; cloruro de sodio 350mM; acetato de calcio
Las muestras de orina deben recogerse en intervalo de 2 a 24 horas.
6,0 mM; tiocianato de potasio 900 mM y azida sódica 14,6 mM.

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Cuando se determina la amilasa en la muestra de orina, se debe también R1: 200 mL
determinar la creatinina en la misma muestra. El resultado deberá
Muestra: 4 mL
informarse como Relación Amilasa/Creatinina (U/g) con el objetivo de
compensar las variaciones de la actividad de amilasa en las muestras 37 ºC
obtenidas en cada micción. Las muestras de orina deben almacenarse
entre 2-8ºC. No añada preservativo. 0 405 nm 2,5 4,5 mim
A1 A2
Se debe generar un Procedimiento Operativo Estándar (POP) para la
recogida, preparación y almacenaje de la muestra. Se hace hincapié en
que los errores debido a la muestra, pueden ser mucho mayores que los *La definición del modelo de calibración debe adecuarse a cada modelo
errores que sobrevienen durante el procedimiento analítico. del equipamiento. En caso de dudas, por favor, póngase en contacto con
el Servicio de Apoyo al Cliente Labtest.
Puesto que ninguna prueba conocida puede asegurar que las muestras de
sangre no transmiten infecciones, todas ellas deben considerarse como **Los volúmenes de las muestras y de los reactivos pueden modificarse
potencialmente infecciosos. Por lo tanto, al manejarlas, se deben cumplir proporcionalmente sin afectar el rendimiento de la prueba. En caso de
las normas establecidas para la bioseguridad. reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen
mínimo requerido para la medición fotométrica.
Para desechar los reactivos y el material biológico, se sugiere la
aplicación de las normas locales, estaduales o federales de protección Procedimiento manual
ambiental. Condiciones óptimas de reacción:
Longitud de onda: 405 nm;
Cubeta termostatizada a 37 ± 0,2ºC con 1,0 cm de espesor de solución;
Interferencias
Banda de pasaje £2 nm;
Valores de bilirrubina hasta 10 mg/dL, hemoglobina hasta 200 mg/dL y Luz espuria £0,1.
triglicéridos hasta 1800 mg/dL no interfieren significativamente en la
reacción. Si se cumple las condiciones óptimas de reacción mencionadas
previamente, se puede optar por la utilización del factor 6829.
Fármacos colinérgicos, narcóticos (morfina) y alcohol producen
resultados falsamente elevados de la amilasa sérica. Tome 2 tubos de ensayo y proceda de la siguiente manera:

La presencia de macroamilasa en la muestra de suero, que es resultante Prueba Calibrador

de la composición de la amilasa con proteínas de alto peso molecular, Muestra 0,02 mL ----
puede producir resultados falsamente elevados en la ausencia de la Calibrador* ---- 0,02 mL
pancreatitis. En estos casos no se observa aumento de actividad de la Reactivo 1 1,0 mL 1,0 mL
amilasa en la orina.
*Se recomienda la utilización de calibrador Calibra H - Labtest.

Procedimiento
1. Tras la adición del reactivo, homogeneizar y transferir inmediatamente
Parámetros para los analizadores automáticos para la cubeta de reacción termostatizada a 37 ± 0,2ºC. Esperar 30
segundos.
Parámetros Aplicación
Tipo de Reacción Cinética 2. Realizar la lectura de la absorbancia inicial (A1) en 405 nm disparando
Dirección de Reacción Creciente al mismo tiempo el cronómetro. Repetir la lectura después de 2 minutos
l de Onda primario 405 nm (A2).
l de Onda secundario 700 nm
Temperatura 37ºC Al igual que con toda la medición de la actividad enzimática, la estricta
2 puntos observación del tiempo y de la temperatura de incubación es de gran
Calibración Punto 0: Blanco (Agua desionizada/Salina) importancia para la calidad de los resultados obtenidos.
Punto 1: Calibrador 1
Con el objetivo de evaluar la linealidad de la reacción, se debe registrar la
Modelo de Calibración* Lineal
absorbancia con intervalos de 1 minuto, y verificar si las diferencias de
Volumen de Muestra** 4 mL
absorbancia en cada minuto son equivalentes.
Volumen de R1** 200 mL
Lectura 1 150 segundos tras la adición de R1 +
(Absorbancia 1) muestra
Cálculos . Como en la mayoría de las veces no se puede trabajar bajo
condiciones óptimas de reacción, las buenas prácticas del laboratorio
Lectura 2 270 segundos tras la adición de R1 +
(Absorbancia 2) recomiendan realizar la calibración del ensayo con el empleo del
muestra
calibrador indicado por el fabricante del reactivo. Labtest indica el
calibrador Calibra H - Ref. 80 para calibración del sistema Amilasa CNPG.

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DA/minuto Prueba o Calibrador = (A2-A1)/2 Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de la calidad que defina claramente los
Actividad del Calibrador reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos y criterios para los
Factor = pliegos de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y
DA/min Calibrador registro de las actividades. Materiales de control deben utilizarse para
monitorear la inexactitud de la medición y desviaciones de la calibración.
Amilasa (U/L) = DA/min Prueba x Factor Se propone que los pliegos para el coeficiente de variación y error total se
basen en los componentes de la variación biológica (VB)1,2,3.
Ejemplo
Relación depuración de amilasa/depuración de
Calibrador
A1 = 0,158 A2= 0,290
creatinina . En la mayoría de los casos de pancreatitis aguda
sobreviene elevaciones concomitantes de amilasa sérica y urinaria, pero
en ciertos casos la elevación de la amilasa urinaria no es acompañada por
0,158 - 0,290
una elevación paralela de la amilasa sérica. Por lo tanto, la evaluación de
DA/min Prueba = = 0,066
la depuración de amilasa/depuración de creatinina, expresada en
2
porcentual, ofrece mayor valor de diagnóstico en los casos de
pancreatitis aguda y pancreatitis recurrente.
Prueba
A1 = 0,092 A2= 0,132
Determinar la actividad de amilasa y la concentración de creatinina en el
suero y en una muestra de orina y aplicar los resultados en la siguiente
0,132 - 0,092
fórmula.
DA/min Calibrador = = 0,020
2
Amilasa en la orina (U/L) x Creatinina en el suero (mg/dL)
Relación (%)= x 100
Actividad del Calibrador (U/L) = 454
Amilasa en el suero X Creatinina en la Orina (mg/dL)

454
Factor = = 6878 Intervalo de referencia . Estos valores deben usarse apenas
0,066 como guía. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
intervalo de referencia en la población atendida.
Actividad de la Amilasa (U/L) = 0,040 x 6872 = 136 U/L
Suero/Plasma
Amilasa en orina/Hora 25 a 125 U/L

Amilasa (U/L)x volumen orina (mL) Orina

Amilasa en Orina (U/h) = Hasta 30 U/h
1000 x tiempo de recogida (h)
Relación Amilasa urinaria/Creatinina urinaria
Relación Amilasa/Creatinina Hasta 400 U/g

Amilasa (U/L)x100 Depuración de Amilasa/Depuración de Creatinina

Relación Amilasa Creatinina (U/g) = 1,0 a 4,0%
Creatinina (mg/dL)
Conversión de U/L para Unidades SI: mKat/L = U/L x 0,0167
Calibración . Usar calibrador Calibra H - Ref. 80, Labtest.
Caracterización de Rendimiento4
Intervalo de calibraciones
Cuando indica el control interno de la calidad. Exactitud . En tres muestras con valores de 182, 542 y 886 U/L se han
Si se utiliza un nuevo lote de reactivos. añadido cantidades distintas de analito en el que se obtiene
Si se utiliza nuevos envases de reactivos de un mismo lote, y en caso de recuperaciones entre 104,8 y 107,6%. El error sistemático total medio
que se realice una nueva calibración durante la utilización del envase obtenido fue de 6,4%, lo que cumple con la especificación deseable
anterior. basada en los componentes de la Variación Biológica de error total que es
£± 7,4%2.
Linealidad
La reacción es lineal hasta 1700 U/L. Para valores mayores, se debe
disolver la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Realizar una nueva
medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.

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Estudios contrastivos de métodos . El método propuesto ha Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores
sido contrastado con otro producto de metodología análoga, y se iguales a 1613 y 1629 U/L se han utilizados para evaluar la respuesta del
obtuvieron los siguientes resultados: sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Con
la utilización de factores de dilución que variaron de 2 a 4 se han
Método Amilasa encontrado recuperaciones entre el 105 y el 114%. Los resultados
Contrastivo CNPG señalan que el método cumple con la especificación deseable para el
error total (£±14,6%) basada en los componentes deseables de la
Número de muestras 40 40
Intervalo de Variación Biológica2.
30 - 999 33 - 1027
concentraciones (U/L)
Método Labtest = 1,0104x
Significancia clínica . La amilasa sanguínea tiene origen en dos
Ecuación de regresión fuentes principales: páncreas y glándulas salivares. Otras fuentes
Método Contrastivo - 1,80
potenciales de amilasa sérica son los órganos de la reproducción y el
Coeficiente de correlación 0,996
hígado. La elevación de la amilasa sérica no es un hecho especifico de la
pancreatitis, ya que niveles elevados también ocurren en el infarto
Con la utilización de la ecuación de regresión, el error sistemático (sesgo) mesentérico, embarazo ectópico roto, uremia, colelitiasis, parotiditis
estimado, es igual a 2,55% para una muestra con actividad de amilasa epidérmica y en individuos portadores de macro-amilasemia. En esta
igual a 50 U/L, 0,46% para una muestra con actividad de amilasa igual a última condición, la amilasa no aparece en la orina. Drogas como morfina
120 U/L y 0,14% para una muestra con actividad de amilasa igual a y analgésico análogo, diuréticos tiazídicos, provocan elevaciones
200 U/L. Estos errores son menores que el error sistemático analítico de transitorias de la amilasa sérica.
la especificación deseable basada en la variación biológica que es
£±7,4%. La determinación de la amilasa sérica y urinaria son las pruebas más
útiles para el diagnóstico de la pancreatitis.y en muchos casos la relación
entre las depuraciones de creatinina y amilasa puede ser útil en el
Estudios de precisión . Los estudios de precisión se han realizado diagnóstico de la pancreatitis aguda. En este caso, el valor de la relación
con la utilización de muestras con valores de actividades iguales a
es de entre 7,0 y 15,0%.
52, 120 y 202 U/L.
Observaciones
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
N Media DE (U/L) CV (%) 1. La limpieza y secado del material utilizado son factores fundamentales
Muestra 1 20 52 0,77 1,55 para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos.
Muestra 2 20 120 1,60 1,09
Muestra 3 20 202 2,71 0,54 2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua deionizada o destilada utilizada en
Reproducibilidad - imprecisión total el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
N Media DE (U/L) CV (%)
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
Muestra 1 20 52 0,89 2,22
conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
Muestra 2 20 120 1,68 1,83
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
Muestra 3 20 202 2,47 1,64
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
La imprecisión total obtenida para las muestras cumple con la deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
especificación deseable para la imprecisión total basada en la variación resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
biológica que es £4,4%6. un programa de control de la calidad del agua.

El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado en las

Referências
actividades de 50, 120 y 200 U/L son iguales a 6,22, 3,48 y 2,85%,
respectivamente.
1. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-
501.
Los resultados señalan que el método cumple con la especificación
deseable para el error total (£±14,6%) basada en los componentes
2. Ricos C, Desirable Specifications for Total Error, Imprecision, and Bias,
deseables de la Variación Biológica2.
derived from intra- and inter-individual biologic variation. Disponível
em: http://westgard.com/biodatabase1.htm (acesso em 24/01/2012).
Sensibilidad metodológica . Una muestra de proteína que
contiene 47 U/L relativa a la actividad de amilasa se ha utilizado para 3. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
calcular el límite de detección del ensayo, una vez que se ha encontrado Diagnóstica 2005.
un valor igual a 2,4 U/L, equivalente a 3 veces la desviación estándar de
20 replicaciones de la muestra. 4. Labtest: Datos de archivo.

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5. Genzyme Diagnostics. a-Amylase Teste Reagent,1996. Informaciõnes al consumidor
6. Kaufman RA, Tietz NW.ClinChem 1980;26:846-53. [Términos y Condiciones de Garantía]

7. Pesce AJ Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St, Louis: The C.V. Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
Mosby Co., 1987;817-830. las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
8. Roseblum JL. Clin Chem 1992;38:920. los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.

Presentación
Producto Referencia Contenido
Labtest Diagnóstica S.A.
Amilasa CNPG Liquiform 142-2/30 1 2 x 30 mL
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Amilasa CNPG Liquiform Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
142-4/33 1 4 x 33 mL Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Labmax 560/400
Customer Service e-mail: customerservice@labtest.com.br

Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos y semi-

automáticos. Revisión: Abril, 2013 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 260117 Reproducción bajo previa autorización

El número de tests en aplicaciones en los sistemas automáticos depende

de los parámetros de programación.

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