Practica N°9 Antibioticos

PRACTICA N°9
SUSCEPTIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS
OBJETIVO
 Evaluar la actividad antimicrobiana de los antibióticos mediante la técnica de Kirby-Bauer.
PRELABORATORIO
1. Mencione mínimo tres variables que pueden afectar la exactitud y fiabilidad de los resultados
de un antibiograma.
 La enfermedad subyacente y condición clínica del huésped.

 Las propiedades farmacológicas del agente antimicrobiano.
 La administración de otros agentes terapéuticos adicionales y otros factores ejercen una
fuerte influencia sobre el desenlace final.
2. ¿Qué es una cepa ATCC?
Las cepas ATCC son una herramienta indispensable y eficaz para el control de calidad interno
en los cultivos de microbiología.
Las cepas ATCC son microorganismos certificados para el control de calidad en microbiología y
es utilizado en disciplinas como la clínica, alimenticia, farmacéutica, cosmética o ambiental.
Sus características genotípicas y fenotípicas garantizan la identidad del microorganismo y al
tener esta documentación, el laboratorio evitará realizar pruebas adicionales para la
identificación de las cepas, lo que se traduce en ahorro de tiempo y recursos, y son usadas en
los laboratorios de microbiología para controlar diferentes procedimientos.
3. ¿Qué otros métodos se utilizan para determinar la susceptibilidad antimicrobiana?
 Método susceptibilidad de difusión en disco.

 Método de concentración inhibidora mínima semicuantitativo.
 Método de microdilucion semiautomatizada.
4. ¿En qué casos debe solicitarse un antibiograma?
El antibiograma suele solicitarse al mismo tiempo que el cultivo, ya sea de sangre, orina, liquido
biológico o de una herida. Sin embargo, el antibiograma se realiza normalmente cuando los
resultados del cultivo son positivos para uno o varios microorganismos. También puede solicitarse
un antibiograma si la infección no responde al tratamiento, para averiguar si el patógeno ha
desarrollado resistencias y para conocer que agente antimicrobiano resultara mas eficaz para
combatir la infección.
INTRODUCCIÓN
Los antibióticos son compuestos orgánicos que inhiben el crecimiento bacteriano. Sin embargo, no
todas las bacterias son igual de sensibles frente a un mismo antibiótico, de ahí que antes de usar
cualquier antibiótico se hace necesario probar la sensibilidad de la bacteria frente a diferentes
antibióticos para escoger el de mayor sensibilidad y con una dosis menor, lo que permitirá reducir
los posibles efectos secundarios cuando ese antibiótico se use terapéuticamente. La técnica in
vitro más usada para realizar estas pruebas de sensibilidad o antibiogramas es la técnica de Kirby-
Bauer.
Método de antibiograma por sensidiscos:
En este método, se disponen discos de papel de filtro, impregnados con cantidades conocidas de
antibióticos, sobre un medio de Agar sembrado con un cultivo puro de la bacteria del paciente. A
medida que el antibiótico se difunde en el Agar, se produce un gradiente de concentración que,
después de una incubación apropiada, permite determinar la actividad del antibiótico mediante la
medida de la zona de inhibición alrededor del disco.
Este método estandarizado se conoce como " METODO DE KIRBY BAUER" y es útil para cultivos
puros y gérmenes de crecimiento rápido.
La técnica incluye la utilización de Agar Mueller Hinton, un inoculo estándar y sensidiscos

comerciales de potencia conocida. Las zonas de inhibición se describen como "Sensibles,
intermedios o resistentes”, de acuerdo a la acción que ejerce el antibiótico sobre la bacteria en
estudio.
Existen comercialmente métodos miniaturizados manuales y automatizados que dan oportunidad

de probar un mayor número de antibióticos y obtener resultados en menor tiempo, lo cual es de
gran ayuda para la terapia dirigida a los pacientes.
MATERIALES
Tubos con solución salina.
Cultivo puro del germen que se va a probar
Caja de Petri con Agar Mueller Hinton con una profundidad de 4 mm
Sensidiscos con antimicrobianos de acuerdo a las concentraciones estipuladas por el método
Tubos estandarizados a la escala 0.5 de Mac Farland.
Asas calibradas.
Escobillones estériles.
Mecheros.
Gradillas.
Papel kraft.
Incubadora.
Guantes, bata, encendedor*
PROCEDIMIENTO
Preparación del inoculo
 Con un asa tocar la superficie de 4 ó 5 colonias aisladas y transferirlas al tubo que contiene
solución salina, mezcle la suspensión hasta obtener una solución homogénea.
 Comparar la turbidez de la suspensión bacteriana con la del tubo 0.5 de la escala

turbidimétrica de Mac Farland, estas deben ser iguales, repita el procedimiento cuantas veces
sea necesario para alcanzar la turbidez deseada.
Inoculación de la caja de Mueller Hinton
 Impregne el escobillón estéril totalmente con la suspensión bacteriana.
 Exprimir el exceso contra la pared del tubo, y sembrar el Mueller Hinton en cuatro planos
diferentes rotando la caja 90 grados cada vez. Tapar la caja y dejar en reposo por 5 minutos
para permitir la absorción del exceso de líquido.
Aplicación de los Sensidiscos
 Seleccionar 6 sensidiscos de acuerdo a la bacteria inoculada
 Con la ayuda de una pinza (o con un dispensador de sensidiscos) obtener cuidadosamente los
discos de los tubos y disponerlos sobre el Agar, presionando suavemente para conseguir
completo contacto entre el antibiótico y el Agar.
 Los discos deben quedar a 15 mm de la orilla de la caja y a 24 mm de otro sensidisco
 Incubar las cajas a 37 oC por 18 a 24 horas
 A las 24 horas realizar lecturas de las zonas de inhibición con la ayuda de una regla
milimetrada, midiendo el diámetro del halo inhibición
 Comparar con las tablas el tamaño del halo inhibición de cada antibiótico para determinar sí es
sensible, intermedio o resistente, con las tablas de referencia del CLSI para cada
microorganismo. Ver Anexos (Tablas CLSI Sthaphylococcus; Tablas CLSI Enterobacterias).
RESULTADOS
1. Germen: ___________________________________________________________________
Interpretación
Diámetro del halo
Antibióticos Sigla (Sensible, intermedio o
en mm
resistente)
1. Doxycycline (D030) 1.5mm Intermedio
1. Ampicillin (Amp10) 0mm resistente
1. Levofluxacin (Lev5) 3mm sensible
1. Choloramphenicol (C30) 1.3mm intermedio
1. Imipenem (Ipm10) 2mm sensible
1. Sulphamethozale (SXT25) 3mm sensible
2. Escriba Para cada uno de los antibióticos seleccionados la familia y el mecanismo de acción
1. Doxiciclina
2. Ampicilina
3. Levofloxacina
4. Choloramphenicol
5. Imipenem
6. Sulphamethozale
3. ¿Cuál es el tratamiento de elección de acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica de

laboratorio? justifique su respuesta.
REFERENCIAS
- María Piedad Sánchez. Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica. Biobacter Ltda.

5ª. Edición 1998
- Mindy J. Perilla, MPH. Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de

Susceptibilidad a los Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la
Salud Pública en el Mundo en Desarrollo. Organización Mundial de la Salud 2004, CDS
Centro de Recursos de Información Organización Mundial de la Salud 1211 Geneva 27
Switzerland.

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SUSCEPTIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS

 Evaluar la actividad antimicrobiana de los antibióticos mediante la técnica de Kirby-Bauer.

 La enfermedad subyacente y condición clínica del huésped.

2. ¿Qué es una cepa ATCC?

3. ¿Qué otros métodos se utilizan para determinar la susceptibilidad antimicrobiana?

 Método susceptibilidad de difusión en disco.

4. ¿En qué casos debe solicitarse un antibiograma?

Método de antibiograma por sensidiscos:

La técnica incluye la utilización de Agar Mueller Hinton, un inoculo estándar y sensidiscos

Existen comercialmente métodos miniaturizados manuales y automatizados que dan oportunidad

Tubos con solución salina.

Cultivo puro del germen que se va a probar

Caja de Petri con Agar Mueller Hinton con una profundidad de 4 mm

Sensidiscos con antimicrobianos de acuerdo a las concentraciones estipuladas por el método

Tubos estandarizados a la escala 0.5 de Mac Farland.

Guantes, bata, encendedor*

Preparación del inoculo

 Comparar la turbidez de la suspensión bacteriana con la del tubo 0.5 de la escala

Inoculación de la caja de Mueller Hinton

 Impregne el escobillón estéril totalmente con la suspensión bacteriana.

Aplicación de los Sensidiscos

 Seleccionar 6 sensidiscos de acuerdo a la bacteria inoculada

 Los discos deben quedar a 15 mm de la orilla de la caja y a 24 mm de otro sensidisco

 Incubar las cajas a 37 oC por 18 a 24 horas

1. Doxycycline (D030) 1.5mm Intermedio

1. Ampicillin (Amp10) 0mm resistente

1. Levofluxacin (Lev5) 3mm sensible

1. Choloramphenicol (C30) 1.3mm intermedio

1. Imipenem (Ipm10) 2mm sensible

1. Sulphamethozale (SXT25) 3mm sensible

3. ¿Cuál es el tratamiento de elección de acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica de

- María Piedad Sánchez. Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica. Biobacter Ltda.

- Mindy J. Perilla, MPH. Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de

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