“Año de la universalización de la salud”

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

CURSO: BIOLOGÍA - MICROBIOLOGÍA

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO Nª02

MICROSCOPÍA

Estudiante: MARCO ANTONIO CERVANTES SACACHIPANA

Código: 2018-120025
Turno: Miércoles 3:00pm – 5:00pm
Docente: Carlos Francisco Tito Vargas

TACNA - PERÚ
2020
 MICROSCOPÍA

I. INTRODUCCÍON:

Los seres vivos simples o complejos están compuestos por células (arqueas, bacterias y
eucariotas), los cuales son muy pequeñas y para ser observadas a simple vista, y por lo tanto se
requieren de los microscopios para amplificar dichos organismos. El microscopio es el
instrumento óptico necesario en un laboratorio de biología, ya que gracias a un sistema de
lentes y fuentes de iluminación permiten la observación de organismos o sus estructuras que
no pueden ser apreciados en detalle a simple vista, a su vez la biología celular comenzó con la
microscopia óptica. Hoy en día existe una gran variedad de microscopios y según la fuente de
iluminación utilizada, se agrupan en microscopios ópticos y microscopios electrónicos.
Etimológicamente la palabra microscopio proviene de dos voces griegas: Micros = pequeño y
scopium = ver u observar. Los microscopios pueden ser ópticos o electrónicos

Microscopios ópticos: la fuente de iluminación es la luz y los lentes son oculares y objetivos. De
campo oscuro. Permiten la observación de formas celulares que destacan brillantes sobre un
fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales. De contraste de fases.
Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las
diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las rodea, permiten la
observación de células vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tinción de las mismas. De
interferencia. Permiten observar células vivas sin teñir, obteniéndose una imagen en relieve de
las mismas. De fluorescencia. La fuente de iluminación proporciona luz ultravioleta que excita
ciertas moléculas presentes en las células (bien de forma natural o añadida a la preparación)
que emiten fluorescencia en el espectro visible.

Microscopios electrónicos: La fuente de “iluminación” son electrones y las “lentes” son

electroimanes. De transmisión. Permiten la observación de muestras teñidas con sustancias
que son resistentes al paso de electrones y cortadas dando lugar a láminas finas, denominadas
cortes finos. Los electrones no son visibles directamente por lo que éstos se envían a una
pantalla que emite fluorescencia más o menos intensa según el número de electrones que
inciden en ella. Las estructuras celulares que se tiñan más intensamente impedirán el paso de
electrones y por lo tanto no permitirán la emisión de fluorescencia, por lo que estas
estructuras aparecerán oscuras en un fondo más brillante. Se consiguen entre 10.000 y
100.000 aumentos. De barrido. Permiten la observación de células enteras, sin necesidad de
cortes finos, de modo que aparecen los relieves originales y las superficies externas. Alcanzan
entre 1000 y 10000 aumentos. Microscopio de Fuerza Atómica (AFM): es una poderosa técnica
usada para investigar un amplio rango de propiedades a escala manométrica, que incluye
topografía de muestras y mecánica, por nombrar algunos. Para imágenes, una punta afilada
rastrea la superficie, iluminando su estructura. Típicamente la superficie se crea grabando la
deflexión de una viga flotante (movimiento), la cual se mide monitoreando la reflexión de un
punto de láser sobre la viga flotante a través de una serie de fotodiodos.

II. OBJETIVOS.
- Conocer e identificar las diferentes partes del microscopio compuesto y sus
respectivas funciones.
- Aprender a manejar correctamente el microscopio.
- Adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, células y
organismos.
 III. MATERIALES.

-
Microscopio compuesto
-
Lámina portaobjeto
-
Laminillas cubreobjetos
-
Goteros
-
Papel milimetrado
IV. PROCEDIMENTO.
A. Descripción de las partes del microscopio:

El microscopio se divide en tres sistemas: sistema óptico, sistema de iluminación y parte

mecaniza.

1. Sistema óptico

Ocular: Consta de un sistema de lentes planas, convexas, dispuestas en un tubo cilíndrico de

metal, con un diafragma intermedio, ambos lentes presentan las caras planas hacia el ojo del
observador y las caras convexas hacia el objeto. La lente que va cerca al ojo del observador (es
el ocular) y la lente inferior (es la lente de campo o colectora), el cual recibe la imagen ya
formada por el objetivo, siendo una imagen luminosa y corregida de aberraciones. En la parte
lateral del tubo cilíndrico del ocular lleva inscrito: 4x, 5x, 10x, 15x, etc. Que indica el N° de
aumentos del ocular, dando una imagen virtual y derecha formándose la altura del diafragma.

Lentes Objetivos: Son lentes situados cerca del preparado de la muestra. Un objetivo está
constituido por tubo metálico y cilíndrico y en su interior lleva un sistema de lentes destinados
a proporcionar una imagen real e invertida del objeto en estudio. La lente de la parte inferior
(es la lente frontal). En la parte lateral de cada tubo metálico llevan inscrito: 4x, 10x, 40x, 60x,
95x, o 100x, que indican el N° de aumentos del objetivo y a su vez la apertura numérica
(capacidad de reunión de la luz de objetivo) siendo de 0,30 para el objetivo de 10x, de 0,65
para el de 40x y de 1,30 para el de 100x.

Los objetivos pueden ser de dos clases:

a) Objetivos a seco: Son aquellos que entre el objetivo y la muestra no llevan ninguna
sustancia, y son usados para preparados en fresco y los aumentos pueden ser: pequeño
aumento (mayor de 0 y menor de 10x) y de gran aumento mayor de 30 y menor de 90x).

b) Objetivos de inmersión: llevan un líquido (comúnmente aceite de cedro) entre el objetivo y

el preparado de la muestra este aceite tiene un índice de refracción de 1,5 usados para
preparados en seco.

Características de los objetivos

Escala de reproducción: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y su imagen, por
ejemplo, 4:1, 40:1, 65:1, etc. (donde 1 representa el tamaño del objeto y 4,40 y 65 representa
el aumento de su imagen).

Poder definidor: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos nítidos.

Límite de resolución: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para q puedan
visualizarse por separado.

Poder de resolución: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles más finos. Está en
relación inversa con el límite de resolución.
Poder de penetración. Es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos
del preparado. Es inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento.

Distancia frontal: es la distancia de la lente frontal al preparado colocado en la platina, cuando

está enfocado. Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción del objetivo.

Pequeño aumento: entre 0.5cm y 3cm, Mediano aumento: entre 3mm y 0.5cm

Pequeño aumento: entre 1mm y 3mm, Inmersión: entre 0.8mm y 1.2mm

Aumento total: El ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la
imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y del ocular. Ejemplo: Si
tenemos colocado el objetivo cuya escala de reproducción es de 40:1 y nuestro ocular tiene un
aumento de 10x, entonces el aumento total será de 40x10 = 400

2. Sistema de iluminación

Espejo o lámpara de iluminación: Tiene dos caras (cóncava y plana) y es móvil en todas
direcciones. La cara cóncava se empleas de preferencia con iluminación artificial y la plana
para luz natural. Y los microscopios que traen lámpara incorporada carecen de estos espejos.

Diafragma: Es un dispositivo constituido por un sistema de laminillas metálicas dispuestas

concéntricamente, regulando la entrada de luz emitida por la emitida por el espejo o la
lámpara.

Condensador: Está constituido por un sistema de dos o más lentes montadas dentro de un
cilindro cónico truncado de metal. Su ubicación está por debajo de la platina. Su función es la
de concentrar o concentrar la luz emitida por la lámpara.

Portafiltros: Este dispositivo permite colocar filtros de diferentes colores que facilitan la
observación.

3. Sistema mecánico

El pie: Es la base sobre el cual se apoya el microscopio y tiene por lo general forma rectangular
o de “Y”.

La columna o brazo: Ubicada en la parte posterior de los sistemas ópticos y de iluminación.

Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

La platina: Estructura metálica plana en la que se coloca el preparado o muestra que se va a

observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el paso de los rayos
luminosos a la preparación. Puede ser fija o giratoria mediante tornillos laterales que pueden
centrar el preparado.

El tubo óptico: Tiene forma cilíndrica y esta ennegrecido para evitar molestias que ocasionan
los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan oculares

El revolver: Estructura giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al
girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan posición de trabajo.

El carril: Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación con
movimiento de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.
El tornillo macrométrico: Este tornillo permite ascender o descender la platina junto con el
preparado. Deslizándose en forma vertical por medio de una cremallera este tornillo permite
movimiento largo enfocando con mayor rapidez la preparación.

El tornillo micrométrico: Este dispositivo permite moviendo casi imperceptibles de la platina en

forma vertical, logrando el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un
tambor graduado en divisiones de 0.001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y a la
vez puede medir el espesor de los objetos en observación.

B) El manejo del microscopio

Iluminación.

- Verificar que el diafragma del condensador este abierta.

- Encender la lámpara y observar a través del ocular que el campo microscópico esté
completamente iluminado.
- Verificar que el tubo óptico este a unos 3cm de la platina.

Preparación de la muestra.

- Con ayuda de una tijera recortar un trozo de papel alrededor de 3x3 mm que incluya
una letra “e” o “3”.
- Colocar la letra en el portaobjeto agregando una gota de agua.
- Colocar el cubreobjetos sobre la muestra.
- Colocar el preparado sobre la platina.

Enfoque de la muestra.

- Ubicar el portaobjeto de modo que la letra quede en el medio de la apertura de la

platina. Con el tornillo micrométrico bajar lentamente el tubo hasta que el extremo
inferior este a 1 mm
- aprox. de la muestra.
- Observar a través del ocular hasta que la letra sea visible.
- Mejorar la imagen con el tornillo micrométrico hasta lo mejor foco posible. Y
ajustando el diafragma se mejora la claridad de la imagen.
- Comparar la posición de la imagen de la letra en el ocular con la posición de la letra
sobre el portaobjeto.
- Dibujar la letra observada, indicando su posición y calcular su tamaño en número de
aumentos.

4. Cambio de objetivo
- Girar el revólver y centrar el objetivo de mediano aumento.
- Enfocar y aclarar la imagen con el tornillo micrométrico.
- Describir lo observado. Dibujar y estimar el tamaño de la imagen en número de
aumentos.
 V. RESULTADOS.

Partes de un microscopio.

Pasos para preparar una muestra.

Existen dos formas básicas de preparar una muestra para el microscopio: la preparación en
fresco o húmeda y la preparación en seco.

Preparación en fresco

La preparación en fresco es ideal para la observación de microorganismos o de tejidos

biológicos que requieren ser hidratados.

1. Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro del

portaobjetos con la ayuda de una pipeta.

2. Si la muestra es sólida colocamos primero unas gotas de agua destilada o de solución

salina sobre el portaobjetos y a continuación un fragmento de la muestra con la ayuda
de unas pinzas.

3. Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus lados sobre el
portaobjetos de modo que forme un ángulo de aproximadamente 45 grados.

4. A continuación, podemos soltar con cuidado el cubreobjetos de modo que quede

colocado sobre el líquido que hemos depositado anteriormente. (Mediante este
procedimiento se evita la formación de burbujas dentro de la muestra. En caso de que
hayan aparecido burbujas entre el portaobjetos y el cubreobjetos será necesario
repetir el procedimiento anterior.)

5. En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos podemos

eliminarlo mediante papel absorbente.
Las preparaciones en fresco mantienen la hidratación durante un periodo de
aproximadamente 30 minutos.

Si se requiere mantener la muestra hidratada durante un espacio de tiempo más largo pueden
sellarse los bordes del cubreobjetos con vaselina. En este caso se evita la evaporación del
líquido durante unas horas o incluso unos días.

Preparación en seco

La preparación en seco es ideal para muestras que no necesitan hidratación. Esto incluye, por
ejemplo, un cabello, granos de polen, esporas, muestras de plantas, insectos, etc.

1. Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar primero

una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en el microscopio
mediante luz transmitida.

2. Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos con la ayuda de

una pinza. Si la muestra tiene un cierto volumen es recomendable utilizar un
portaobjetos con una cavidad cóncava.

3. Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un cubreobjetos. Esto evita
también que el objetivo llegue a tocar la muestra en caso de cometer algún error
durante la manipulación del microscopio.

La ventaja de las muestras en seco es que no tienen problemas de deshidratación y pueden

mantenerse preparadas para una observación posterior.

Preparación con tinción

Existen distintas técnicas para aplicar una tinción que se adecuan a los distintos tipos de
muestras.

Si hemos preparado una muestra en fresco, podemos aplicar un tinte siguiendo los siguientes
pasos:

1. Depositamos unas gotas del tinte sobre uno de los bordes del cubreobjetos.

2. Colocamos papel absorbente al lado opuesto del cubreobjetos para forzar el

movimiento del tinte a través de la muestra.

3. Una vez la muestra ha absorbido el tinte retiramos el papel absorbente.

Los tintes permiten aumentar el contraste y facilitar la observación de algunos detalles

concretos de la muestra. Existen tintes de distintos colores y características adecuados para
distintos tipos de muestras.
Muestras ópticas en el microscopio.

Nombre Fotografía Descripción

βακτηρία baktēría ‘bastón’
Microorganismo unicelular sin núcleo
diferenciado, algunas de cuyas especies
descomponen la materia orgánica,
Bacteria mientras que otras producen
enfermedades.
Vista obtenida con el objetivo 40x

Célula Vista microscópica de las células de la

vegetal planta que muestra la superficie de la hoja

Célula procedente de la mucosa bucal

(200x)
Se observa un pliegue del tejido epitelial
por lo que no se percibe con claridad la
Célula
delimitación entre las células. En la foto se
animal
ven varias células, con sus núcleos. La foto
se realizó con un microscopio óptico
fotográfico monocular. El ocular tenía 5x y
la imagen se captó con el objetivo de 40x.
Candida albicans
Es una levadura saprófita (clasificada como
un hongo diploide asexual) que prolifera
únicamente dentro del cuerpo humano.
Célula de Se encuentra generalmente en zonas
un hongo húmedas del cuerpo, como la boca, los
intestinos delgado y grueso y la vagina.

Esta fotografía hecha con microscopio de

una muestra de agua del medio natural da
fe de la diversidad que envuelve a un
protozoo ciliado depredador como
Protozoario Paramecium caudatum, que es el
personaje que nos interesa aunque no el
único pues en nuestros «caldos»
aparecerán más especies susceptibles de
ser devoradas.
VI. CONCLUSIONES.
- Con la presente práctica pudimos reconocer las partes del microscopio con lo cual se
pudo observar el portaobjetos colocado sobre la platina en distintas dimensiones (4x,
10x, 40x).
- Se debe seguir los cuidados indicados del mantenimiento y manipulación del
microscopio, para evitar que estos estén en mal estado, se debe realizar su limpieza al
iniciar y al finalizar su uso.
- Realizando una fácil operación matemática podemos determinar el tamaño
aproximado de una célula, todo a partir de las medidas de nuestro campo visual y la
medida de nuestro objetivo.
VII. BIBLIOGRAFIA.
- Gray, P. (1964). Handbook of Basic Microtechnique. Mc Graw Hill Nook Co. New York.
302 pp.(2001). Instrucciones de manejo. Axiostar plus. Microscopio de luz transmitida
y Fl.
- Garcia Galvez, J. M. (s.f.). Manual de Laboratorio Biología. Lima: Ciencia y Técnica
Editores.TT
- Audesirk T. (1997). Biología. México: Editorial Prentice Hall