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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

“Norte de la Universidad Peruana”

FACULTAD DE CIENCIAS PECUARIAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS

ALIMENTARIAS

BIOLOGÍA

INFORME DE PRÁCTICA Nº 02
TÉCNICAS MICROSCÓPICAS, COLORANTES Y COLORACIONES

Integrantes:
1.Jhoan Nick Bautista Montano
2.willan Richard Enco Ramírez

Profesor: Dr. Demetrio Cieza Yrigoín

Cajamarca – Perú
2020
 PRACTICA Nº 02

TÉCNICAS MICROSCÓPICAS, COLORANTES Y COLORACIONES

I. INTRODUCCION

El microscopio es un instrumento de laboratorio indispensable para la investigación

científica, sobre todo en cuanto se refiere a la profundización del conocimiento en su más
fina estructura.
Es un instrumento sumamente delicado, con un sistema de iluminación y una parte óptica
sensible a roturas y rayaduras, por tanto, se debe tener especial cuidado en su traslado y
manejo.

Para que el microscopio sea utilizado en forma perfecta y de esta manera cumplir con los
objetivos planteados para el desarrollo de la asignatura, es necesario que el estudiante
aprenda a realizar una buena iluminación y enfoque, motivo de la presente práctica.

Los colorantes son sustancias que tienen la capacidad de trasmitir su color a otros cuerpos,
en la Biología son sumamente debido a que nos permite estudiar las diferentes estructuras a
nivel celular. Erlich, clasifica a los colorantes en dos grupos:

a. Por su origen en:

- Naturales: Son los que derivan de animales y vegetales: Ejm. Hematoxilina, carmín,
tornasol, azafrán, etc.
- Artificiales: Se obtiene por destilación fraccionada de la huella, se les conoce también con
el nombre de colorantes sintéticos Ejm. Violeta de genciana.

b. Por su Constitución o afinidad tintórica.

Básicos : Fucsina básica, violeta de genciana, hematoxilina, azul de metileno,
lugol, etc.
Ácidos : Eosina, fucsina ácida, ácido pícrico, etc.
Neutros : Wright, Leishman, Giemsa, etc.
Indiferente : Sudan III.

En el desarrollo de la presente práctica, se describen dos técnicas básicas de coloración:

Simple y Doble, utilizadas en el estudio morfológico-estructural de los organismos a
nivel celular, especialmente de bacterias.

Para la coloración simple estaremos utilizando azul de metileno, y otros mientras que
para la doble o compuesta, se emplea más de un colorante, tal es el caso de la coloración
de Gram, diferenciándose en Gram (+), cuando el yodo del lugol produce mayor fijación
que el violeta de genciana, observándose una coloración violácea, y Gram (-) cuando
cede el color violáceo por acción del alcohol acetona, mostrándose el color rojizo de la
safranina.

II. MATERIAL y MÉTODO

2. 1 Material
2.1.1 Materiales de laboratorio
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- Microscopio compuesto
- Violeta de genciana
- Lugol,
- Eosina
- Safranina
- Azul de metileno
- Hematoxilina
- Vasos de precipitación
- Lancetas estériles
- Alcohol acetona
- Aceite de cedro

2.1. 2 material biológico

- Letras pequeñas de etiquetas de medicamentos.
- Sangre
- Granos de maíz
- Cultivo de protozoarios
- Sarro dentario
- Un palito de fósforo.

2.2 Procedimiento

RECOMENDACIONES GENERALES

A. TRASLADO DEL MICROSCOPIO

 Sujete al microscopio por el brazo y por la base y transpórtelo en posición vertical.
 Coloque el microscopio sobre la mesa del laboratorio a unos 10 cm del borde.

B. LA ILUMINACION

 Con una franela limpie la superficie de los oculares, los lentes frontales, lentes del
sistema de iluminación en una sola dirección.
Nota. No quite ninguna de sus partes para limpiarlo a menos que el Profesor le
indique.

 Gire el revólver de modo que el objetivo de menor aumento o panorámico quede en

línea recta con el tubo óptico.
 Cuando el objetivo llega a su posición normal escuchará un sonido suave.
 Con el tornillo macrométrico, coloque el tubo óptico en su nivel más bajo. No lo
fuerce.
 Dirija la cara plana del espejo hacia la fuente de luz, si ésta es natural o la cara
cóncava si se trata de luz artificial.
 Encienda el microscopio y regule la entrada de la fuente de luz.
 Observe a través del ocular y abra el diafragma para mayor iluminación de su
microscopio.
 C. COLOCACION DEL PREPARADO
 Limpie su lámina porta objeto y lámina cubre objeto con una franela y manéjelo
sólo por el borde.
 Con un gotero deposite una gota de agua en el centro de su lámina porta objeto,
luego coloque en su posición correcta la letra del recorte escrito, de preferencial a
letra “a”, “e”.
 Coloque la lámina cubre objeto sobre la letra, luego seque el exceso de agua con el
papel absorbente (papel higiénico)
 Coloque la lámina portaobjeto en la platina del microscopio, la parte que tiene el
preparado debe estar sobre el orificio.

D. ENFOQUE
A MENOR, MEDIANO Y MAYOR AUMENTO
 Observando por el ocular y con ayuda del tornillo macrométrico trate de enfocar la
imagen, regula la cantidad de luz con el diafragma. Para localizar la imagen utilice
el carril.
 Gire el tornillo micrométrico para clarificar la imagen de acuerdo a la intensidad de
su vista.
 Observe a menor, mediano y mayor aumento, esquematice y coloque los aumentos
totales, en Resultados.
Recomendación. Al utilizar el objetivo inmediato superior, mueva solamente el
revólver y posteriormente clarifique la imagen con el tornillo macrométrico.

TECNICAS MICROSCOPICAS

Preparado microscópico en fresco. Se caracteriza porque se utiliza agua o un colorante sin fijar
la muestra al portaobjeto. Para la observación de estos preparados se utilizan los objetivos en
seco.

Preparado microscópico en seco. Cuando la muestra se fija previamente a la lámina porta

objetos, esta fijación se realiza mediante un frotis o una extensión.

La fijación de la muestra se realiza utilizando un calor suave o simplemente el secado al

ambiente.
Para la observación se utiliza generalmente el objetivo de inmersión.

PROCEDIMIENTO
Preparado en Fresco

Utilizando agua.
 Con un gotero, coloque una gota de un medio de cultivo de protozoarios.
 Coloque el cubreobjetos, los excesos de agua elimínelo con el papel absorbente.
 Observe y esquematice a mediano aumento.

Usando un colorante: lugol

 En la lámina portaobjetos, haz un raspado en el endospermo del maíz.
 Sobre la muestra, coloque una gota de lugol diluido previamente, luego el cubre objetos.
 Observe y esquematice a mayor aumento.
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Preparado en Seco
 Con ayuda de un mondadientes extrae una muestra del sarro dentario.
 Coloque la muestra en la parte central de su lámina portaobjetos, con el mondadientes
realice una extensión.
 Dejar secar al ambiente durante 3 ó 5 minutos, luego añadir dos gotas de violeta de
genciana.
 Lave con agua a chorro el preparado.
 Seque al medio ambiente o con calor moderado
 Coloque una gota de aceite de inmersión (o aceite de cedro) y observe a inmersión.
 Esquematice lo observado.

Los pasos generales para una coloración son:

- Extensión o frotis: De acuerdo a la Fig. N° 1 o Fig. N° 2 se coloca la muestra en la

lámina portaobjetos.
- Fijación: Dejando secar la muestra al medio ambiente o con fuego (mechero) lento.
- Tinción : Utilizando el colorante o los colorantes de acuerdo a los que se desea
observar.
- Lavado : Mediante una corriente de agua suave, se lava la muestra fijada y
coloreada.
- Secado : Al ambiente o a calor moderado.
- Observación : Para la cual se debe tenerse en cuenta que la láminas preparadas
estén totalmente secas, en especial para hacer una observación en inmersión.

Fig. N° 1: Representación esquemática de: Extensión de muestra.

Fig. N° 2: Representación esquemática de un frotis

PROCEDIMIENTO

A. Coloración simple: Aquella que se utiliza un solo colorante.

1. Con colorante básico.

a. Con una lámina porta objetos extrae la muestra de la mucosa labial.
b. Realiza un frotis de la muestra ( Fig. N° 2).
c. Fijación: Secar la muestra al medio ambiente o calor moderado.
d. Agregar 02 gotas de azul de metileno, dejar reposar 5 minutos
e. Lavar en agua corriente a chorro lento, y dejar secar al ambiente.
f. Observar y esquematizar a mediano y mayor aumento.

2. Con colorante neutro.

a. Desinfecte la pulpa del dedo mayor izquierdo con alcohol yodado, luego con una
lanceta estéril realice una punción, descarte la primera gota de sangre.
b. Realizar un frotis (Fig. N° 2):
- Coloque la gota de sangre en el extremo de una lámina porta objetos
- Coloque encima de la muestra el borde de otro porta objetos, formando un
ángulo de 45°
- Luego observar que la sangre se extiende por todo el borde de la porta objetos
superior, deslice hacia el otro extremo mediante un movimiento rápido y firme,
tratando de obtener un frotis fino y uniforme.
- Secar al medio ambiente, luego cubrir la muestra con 02 gotas del colorante
Wright y agregue el doble de gotas de agua.
- Dejar reposar durante 05 minutos.
- Lavar con agua de caño, el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente o
fuego lento.
- Observar a mayor aumento e inmersión.

B. Coloración compuesta: Aquella en que se emplea más de 02 colorantes.

1. Coloración Gram
- Con ayuda de un mondadientes extraer una muestra del sarro dentario
- Coloque el sarro dentario en la parte central del porta objetos y realice una extensión
(Fig. N° 1) con el mondadiente o estilete.

- Fijación: Dejar secar la muestra al medio ambiente o con calor moderado.

- Colocar sobre la muestra 02 gotas de violeta de genciana, dejar en reposo 05
minutos, luego lavar con agua de caño a chorro lento.
- Agregar 02 gotas de lugol, dejar reposar 05 minutos.
- Lavar en agua de caño a chorro lento.
- Decolorar con alcohol acetona, hasta que ya no desprenda colorante.
- Lavar nuevamente.
- Agregar 02 ó 03 gotas de safranina (contraste), dejar en reposo dos minutos.
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- Lavar y dejar secar al medio ambiente o fuego moderando.

- Observar y esquematizar a mayor aumento e inmersión (utilice aceite de cedro).

2. Coloración con Hematoxilina – Eosina. (láminas montadas)

- Observe y esquematice los cortes histológicos que el profesor le proporcionará

III. RESULTADOS:

Enfoque
Fig. Nº 1. De una letra a menor aumento Fig. Nº 2. De una letra a mediano aumento

Fig. 3. De una letra a mayor aumento

Fig. 4. Cultivo de protozoarios
 400 X 400 X

Fig. 5. Endospermo de maíz Fig. 6. Sarro dentario

400 X 400 X
7

Fig. Nº 7: Observación de células epiteliales con coloración simple

Con colorante básico

10x
40x
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Fig. Nº 8: Observación de células sanguíneas.

Coloración neutra

100x
600x

Fig. Nº 9: Observación de bacterias en sarro dentario

Coloración compuesta: Coloración de Gram

Fig. Nº 10: Observación de cortes histológicos

Coloración hematoxilina- Eosina
IV. DISCUSION
Se hará en base al siguiente cuestionario:
1. ¿Qué precauciones se debe tener en el manejo del microscopio compuesto?
Cuidados del microscopio se tiene que transportar con cuidado para no romperlo limpiar
el polvo de los lentes y los objetivos con un paño o papel pero suave para que no raye
los lentes.
2. ¿Cuál es la posición del condensador para observar un preparado microscópico en seco?

La fijación de la muestra se realizautilizando un calor suave o simplemente el secado al

ambiente.
Para la observación se utiliza generalmente el objetivo de inmersión.

3. ¿Qué tipo de imagen proporciona el objetivo?

La lente objetiva produce una imagen mayor, real e invertida, y la lente ocular, actuando

sobre ella, la hace más grande pero la deja invertida y virtual.

4. ¿Qué tipo de imagen proporciona el ocular?

El ocular logra que veamos la imagen del objetivo con un ángulo aparente mayor que si el

objeto estuviera en el punto próximo del ojo.

5. Esquematice el tipo de imagen que se forma en el ojo humano

6. Indique las diferencias entre un frotis y una extensión de una muestra.

 Un frotis de sangre consiste en examinar con un microscopio una muestra
de sangre que se somete un tratamiento especial. Un profesional de
laboratorio examina el tamaño, la forma y el número de los diferentes
tipos de células de la sangre, entre ellas:
 Una extencion de muestra es Es un análisis de sangre para observar la
cantidad y la forma de sus glóbulos rojos y blancos y las plaquetas para
ver si son normales. Una extensión sanguínea también puede detectar
parásitos en su sangre.
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7. Diferencia entre una imagen virtual y real. Esquematice.

Colorantes:

8. Qué importancia tiene la utilización de colorantes.

Enmascarar las variaciones naturales del color, mejorar los colores presentes
naturalmente, que te enamore más a la vista. Proteger los sabores y vitaminas del daño
ocasionado por la luz y de decoración, especialmente de pasteles y golosinas

9. Indica las diferencias entre los colorantes naturales y los artificiales.

los colorantes alimentarios son un tipo de aditivos alimentarios que proporcionan

color a los alimentos (en su mayoría bebidas), si están presentes en los alimentos
se consideran naturales y si por el contrario se añaden a los alimentos durante su
preprocesado mediante la intervención humana se denominan artificiales.
Considerando la afinidad tintórica de los colorantes ácidos, básicos y neutros.

Qué colorante usarías:

Para colorear citoplasma
Hematoxilina, y es capaz de teñir el citoplasma de un color azul o púrpura
 Para colorear núcleo
Utilizado con un molda diente, la hematoxilina tiñe los núcleos celulares de color azul
violeta a negro
.

Para observar estructuras citoplasmáticas

La eosina es un colorante aniónico que colorea las estructuras catiónicas en tonos de rosa. Se
colorea con eosina el citoplasma de las células.

10. ¿Qué diferencia encuentras entre una extensión y un frotis?

Un frotis consiste en la extensión de una muestra de fluido corporal (humano o animal)
sobre ... Cerca del centro hay un esquizonte y en la izquierda un trofozoíto. ... o algún
líquido especial, se somete a tinciones y generalmente se protege con un cubreobjetos,
lo que permite su estudio clínico mediante un microscopio

11. Indica algunos colorantes de origen animal.

 el carmín de cochinilla, obtenido por extracción del insecto, generalmente con agua acidulada
o amoníaco; la quermés, colorante rojo extraído del quermés animal; la sepia,
materia colorante parda procedente de la bolsa de tinta de la sepia

V. CONCLUSIONES
De acuerdo a tus resultados y a tu discusión, plantea tus conclusiones (mínimo 10
conclusiones)
1. En la coloración simple se da uso a un solo colorante.
2. Con el colorante básico se observó las células epiteliales.
3. Con el colorante neutro se observó las células sanguíneas.
4. Las células epiteliales son de color celeste.
5. Observamos las bacterias del sarro por medio del preparado en seco.
6. Se logro observar los cortes histológicos de las bacterias.
7. Las células sanguíneas son de forma circular de color rojo.
8. En la preparación de coloración la lamina se maneja de los costados.
9. Con el preparado en fresco se ve los microorganismos de toda materia liquida.
10. En la coloración compuesta se utiliza 2 o más colorantes.

Referencias bibliográficas
11. http://www.aduanas-mexico.com.mx/cgi-
bin/ctarnet/notas_ex/not_3203.html#:~:text=2)%20Como
%20materias%20colorantes%20de,los%20extractos%20colorantes
%20que%20se
12. https://es.wikipedia.org/wiki/Frotis_de_sangre
13. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-
897X2017000300012
14. https://brainly.lat/tarea/16760947#:~:text=Los%20colorantes
%20alimentarios%20son%20un,intervenci%C3%B3n%20humana
%20se%20denominan%20artificiales.
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