PRACTICA NO.

RECONOCIMIENTO CROMATOGRAFICO DE PLANTAS MEDICINALES

APROBADA EN COLOMBIA: PERFILES CROMATOGRAFICOS
Objetivos
1. Realizar el perfil cromatográfico de 6 plantas de uso medicinal aprobado en
Colombia

2. Identificar en el perfil de cada planta los metabolitos secundarios utilizados

como marcadores

3. Comparar el resultado obtenido con los datos reportados en la literatura y

concluir si el material analizado cumple con lo estipulado en la literatura desde
el punto de vista del perfil cromatografico

4. Realizar el perfil cromatografico de una muestra problema y compáralo con los

perfiles de las plantas medicinales observadas en la practica

INTRODUCCION
Una planta medicinal contiene en uno o más de sus órganos sustancias que
pueden ser utilizadas con finalidad terapéutica o que son precursores para la
hemisintesis químico-farmacéutica; las Drogas vegetales son la parte o las partes
de la planta medicinal utilizada en terapéutica y que contienen los principios
activos.
La OMS considera que los medicamentos herbarios comprenden las hierbas
(plantas medicinales, los materiales vegetales (drogas vegetales), las
preparaciones de hierbas y los productos herbarios acabados (fitoterapeuticos),
que contienen como ingredientes activos bien partes de plantas u otros materiales
vegetales, o combinaciones de ambos.
Los componentes de un extracto obtenido de plantas, pueden ser separados
utilizando métodos cromatográficos, la cromatografía en capa fina puede ser
utilizada con el fin de reconocer el perfil cromatográfico de un extracto de una
planta en particular; este perfil cromatográfico es específico para cada extracto
bajo condiciones establecidas de fase estacionaria, fase eluente y reveladores; e
indica la presencia de metabolitos típicos del material vegetal, si el material
vegetal pertenece a una planta de uso medicinal aprobado se convierte en materia

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prima para la elaboración de fitoterapeuticos los cuales según la legislación
colombiana deben cumplir con ciertos criterios de calidad
El decreto 2266 el cual se reglamentan los regímenes de registros sanitarios, y de
vigilancia y control, sanitario y publicidad de los productos fitoterapéuticos; en el
artículo 13 define los controles de calidad para reconocimiento de materia prima
vegetal e indica que se debe hacer reconocimiento de caracteres físicos dentro
de los cuales se encuentra la realización del perfil cromatográfico, para identificar
de manera cualitativa la presencia de metabolitos con relevancia biológica o
taxonómica, los cuales son conocidos como marcadores
En la práctica de laboratorio se realizará el perfil cromatográfico para los
siguientes materiales vegetales aprobados como planta de uso medicinal en
Colombia:
1. Hojas de boldo: Peumus boldus, familia Monimiaceae, para confirmar
presencia de alcaloides

2. Flores de sauco: Sambucus nigra, familia Adoxaceae para confirma

presencia de flavonoides

3. Flores de caléndula: Calendula officinalis, familia Asteraceae para confirmar

presencia de flavonoides

4. Partes aéreas frescas de ajenjo: Artemisia absiuntium, familia Asteraceae

para confirmar presencia de lactonas sesquiterpenicas

5. Semillas de hinojo: Foeniculum vulgare, familia Apiacee, para determinar

presencia de componentes mayoritarios del aceite esenciales

6. Flores de manzanilla: Matricaria cahmomilla, familia Asteraceae, para

identificación de presencia de componentes mayoritarios del aceite esencial

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 RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE BOLDO
(Peumus boldus, Monimiácea: página 44)
La droga vegetal la constituyen las hojas de boldo secas y molidas, que contienen
0.2-0.5 % de alcaloides totales de tipo oxoaporfina, siendo el componente principal
la boldina
Extracción: 2-4 gr de droga seca y molida se agitan por 15 minutos con 15 ml de
ácido sulfúrico 0.1 N, filtrar y lavar el residuo solido con 10 ml de ácido sulfuric 0.1
N, adicionar amoniaco concentrado a la fase acida hasta pH alcalino,
posteriormente realizar partición con 2 porciones de 10 ml de dietil-eter. Secar la
fracción de dietil eter con sulfato de sodio, llevar la fracción etérea a sequedad y re
disolver en 2 ml de metanol
Fase estacionaria: silicagel 60F254
Fase movil: Tolueno: Acetato de etilo: Dietilamina 70:20:10
Revelador: UV 365 nm, o Reactivo de Dragendorff

Rf Sustancia Color Revelador

Azul Lámpara UV 365 nm

0,3 Boldina
Café Dragendorff
Azul Lámpara UV 365 nm
0,25 Isoboldina
Café Dragendorff

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE FLORES

DE SAUCO, (Sambucus nigra, Caprifoliácea: página 218)
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen 1.5 a 2% flavonoides
totales tales como glicósidos de quercetina: hiperosido, rutina, quercitrina,
isoquercitrina, Kaemferol 7-O-ramnosido. Ademas de 3% de acidos
fenolcarboxilicos como: clorogenico, ferulico, cafeico y sus esters.
Extracción: 1 g. de droga pulverizada se extrae con 10 ml de metanol
durante 5 minutos sobre un baño de agua a aproximadamente 60°C. El
filtrado se utiliza para la cromatografía.
Fase estacionaria: Sílica gel 60F254
Fase móvil: Acetato de etilo: Acido fórmico: Ácido acético: Agua 100: 11:
11: 26

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Revelador: Revelador para productos naturales (NP/PEG)
Revelador numero 1 (NP: Ester del ácido β-etilamino difenilborico al 1% en
metanol)
Revelador numero 2 (PEG: polietilenglicol 4000 al 5% en etanol) UV 365 nm

Rf Sustancia Color
0,4 Rutina Amarillo
0,5 Ácido Clorogenico Azul-Blanco fluorescente
0,65 Isoquercitrina Amarillo
0,9 Ácido cafeico Azul-Blanco fluorescente

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE FLORES DE

CALENDULA, (Calendula officinalis, Asterácea: página 216)
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen 0,3 a 0,6% flavonoides
totales tales como glicósidos de isoramnetina:
Extracción: 1 g. de droga pulverizada se extrae con 10 ml de metanol durante 5
minutos sobre un baño de agua a aproximadamente 60°C. El filtrado se utiliza
para la cromatografía.
Fase estacionaria: Sílica gel 60F254
Fase móvil: Acetato de etilo: Acido fórmico: Ácido acético: Agua 100: 11: 11: 26
Revelador: Revelador para productos naturales (NP/PEG)
1. Revelador numero 1 (NP: Ester del ácido β-etilamino difenilborico al 1% en
metanol)
2. Revelador numero 2 (PEG: polietilenglicol 4000 al 5% en etanol)
3. UV 365 nm

Rf Sustancia Color
0,2 Glucocidos de qercetina Amarillo-naranja
0,4 Rutina Amarillo
0,45 Narcisina: isoramnetin 3-O- rutinosido Amarillo
0.5 Ácido clorogenico Azul-Blanco fluorescente
0,9 Ácido cafeico Azul-Blanco fluorescente

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 RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE AJENJO
(Artemisia absinthium L., Asterácea: página 90)
La droga la constituyen las hojas 0.3% y Flores 1.5%, contienen lactonas
serquiterpenicas de sabor amargo (absintina, anabsintina, artabsina en planta
fresca
Extracción: 1 g. de droga pulverizada se extrae Durante 10 minutos con 10 ml de
Metanol a 60°C sobre un baño de agua. La mezcla se filtra y el filtrado se evapora
hasta un volumen de aprox. 2 ml.
Fase estacionaria: silicagel 60F254
Fase móvil: Diclorometano: Acetona 85:15
Revelador: Vainillina ácido sulfúrico
1. Solución numero 1(vainillina etanolica al 1%)
2. Solución numero 2 (ácido sulfúrico 10% en etanol)
3. Calentamiento en estufa 110°C por 5 minutos

Rf Sustancia Color
0,26 Anabsintina Gris violeta
0,3 Absintina Gris violeta
0,6 Artabsina Gris azul

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE HINOJO

(Foeniculum vulgare, Apiácea, página 168)
La droga la constituyen las semillas, las cuales contienen 4 -6% de aceite
esencial. El aceite esencial contiene principalmente trans anetol (50 -80% en
la variedad dulce, 60 -80% en la variedad vulgare), metilchavicol, safrol,
anisaldehído y fenchona (0.4 -0.8% en la variedad dulce, 12 -22% en la
variedad vulgare).

Extracción: para ser un aceite esencial debe obtenerse por destilación por
arrastre con vapor de agua según el método oficial de la Farmacopea Europea III,
pág. 62, utilizando 10 g. de muestra, 200 ml de agua, 2 horas de destilación a
una rata de 2-3 ml /min.
Por efectos de tiempo se extraerá con diclorometano asi: 1 g. de droga
pulverizada se extrae por agitación durante 15 minutos con 10 ml de

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diclorometano. El filtrado obtenido se evapora a sequedad. El residuo se disuelve
en 1 ml de diclorometano
Fase estacionaria: Sílica gel 60F254
Fase móvil: Tolueno: Acetato de Etilo 93:7
Revelador: Vainillina ácido sulfúrico
1. Solución número 1(vainillina etanolica al 1%)
2. Solución número 2 (ácido sulfúrico 10% en etanol)
3. Calentamiento en estufa 110°C por 5 minutos

Rf Sustancia Color
0,4 Linalool (alcohol terpenico) Azul
0,5 Eugenol Café
0,9 Anetol Rojo-Violeta

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE

MANZANILLA (Matricaria chamomilla, Asterácea, pagina186)
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen 0.5 -1.5% de aceite
esencial. El aceite esencial a su vez contiene chamazuleno 0 -15%, bisabolol
10 - 25%, bisabolol óxidos A y B (ambos 10-25%), poliínas 1-40%, farneseno
15%.
Extracción: se debe hacer de forma igual al hinojo
Fase estacionaria: Sílica gel 60 Fase móvil: Tolueno: Acetato de Etilo 93:7
Revelador: Vainillina -Ácido sulfúrico
1. Solucion número 1(vainillina etanolica al 1%)
2. Solucion número 2 (ácido sulfúrico 10% en etanol)
3. Calentamiento en estufa 110°C por 5 minutos

Rf Sustancia Color
0,2 Óxidos A y B de bisabolol Amarillo/Verde
0,25 Alcohol terpenoide Violeta
0,35 Bisabolol Violeta

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 0,5 – 0,6 Poliínas Pardo
0,95 Azuleno Rojo violeta
0,99 Farneseno Azul-Violeta

REACTIVOS Y MATERIALES NECESARIOS PARA PROCEDIMIENTO

EXPERIMENTAL

• 1 gramo de muestra vegetal seca y molida: flores de sauco, flores de caléndula,

semillas de hinojo, flores de manzanilla, 2-4 gramos de hojas secas y molidas de boldo,
2-4 gramos de muestra fresca de hojas de ajenjo
• Baño maría
• Ultrasonido
• Rotaevaporador
• 6 f ra sco s o be a ke rs d e 5 0 m l pa ra rea liza r lo s e xt ra ct o s
• Lámpara UV-VIS
• Placas de Sílica gel en aluminio para TLC 25460F de 10 x10 cm
• 4 cámaras de cromatografía
• Tubos de ensayo limpios
• Lápiz de grafito, marcador para vidrio, regla
• Solventes puros: Metanol, Diclorometano, Dietil eter
• Mezclas eluentes:
• Tolueno: Acetato de etilo: Dietilamina 70:20:10
• Acetato de etilo: Acido fórmico: Ácido acético: Agua 100: 11: 11: 26
• Diclorometano: Acetona 85:15
• Toleueno: acetate de etilo 93:7
• Reveladores: NP/PEG, Vainillina- ácido sulfúrico (solución 1 y 2), reactivo de
dragendorff
• Ácido sulfúrico 0,1 N
• Amoniaco concentrado 25%
• Algodón o gasa para filtrar
• Papel filtro
• Papel indicador de pH
• Sulfato de sodio anhidro
• Capilares
• Patrones: rutina, boldina, anetol, bisabolol

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

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Notas
1. Cada pareja de estudiantes debe consultar el perfil cromatografico y los
componentes principales de los extractos de las plantas asignadas
utilizando como texto de consulta el libro PLANT DRUG ANALYSIS, para
posteriormente discutir en el informe de laboratorio si los perfiles se ajustan
a lo reportado en la literatura para las plantas y la muestra problema.

2. Cada pareja de trabajo preparará el extracto correspondiente a la planta

asignada lo marcara y lo pondrá a disposición del grupo de laboratorio para
realización de perfiles cromatográficos, además a cada pareja de trabajo se
le entregara un extracto problema para realizar su perfil cromatográfico en
las diferentes series eluentes e identificar si corresponde a alguno de los
perfiles obtenidos de las plantas en la práctica.

3. Recuerde marcar de una manera clara y adecuada cada muestra y la serie

elutropica a la que pertenece en las placas a utilizar.

4. Las aspersiones con los reveladores se deben realizar únicamente en

campana de extracción y se deben dejar secar antes de retirarlas dela
campana.

5. Al finalizar el proceso de cromatografía las mezclas eluentes utilizadas se

desechan en residuos no clorados a excepción de las que contengan
solventes clorados (Diclorometano) que se desechan residuos clorados

6. Las placas de cromatografía secas y los papeles de filtro secos se

desechan en bolsa roja

Metodología recomendada
1. A cada pareja de trabajo se le asigna la elaboración de un extracto de una
planta medicinal previamente asignada y se le entregara un extracto
problema numerado.

2. En una placa de 10 x10 cm de silicagel se siembra el extracto de la planta

(según corresponda sistema eluente), la sustancia de referencia si se
dispone de ella y las seis muestras problema

3. En el Sistema Tolueno: Acetato de etilo: Dietilamina 70:20:10, se eluye

la fracción alcaloidal de las hojas de boldo, el patrón de boldina y las 6

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 muestras problema, en una placa de 10 x 10 cm de silicagel, se observa
con lámpara uv y luego se revela con reactivo de Dragendorff

4. En el sistema Acetato de etilo: Acido fórmico: Ácido acético: Agua 100:

11: 11: 26, se eluyen los extractos de flores de sauco y caléndula, el patrón
de rutina y las 6 muestras problema en una placa de 10 x 10 cm de
silicagel, se revela con NP/PEG y se observa con lámpara uv a 365 nm.

5. En el sistema Diclorometano: Acetona 85:15, se eluye el extracto de

hojas de ajenjo y las 6 muestras problema, en una placa de 10 x 10 cm de
silicagel, se revela con vainillina-ácido sulfúrico, se deja secar y se calienta
a 110ºC por 5 minutos, observa la aparición de clores.

6. En el sistema Tolueno: Acetato de etilo 93:7, se eluye el extracto de

semillas de hinojo y flores de manzanilla, los patrones de anetol y bisabolol
y las 6 muestras problema, en una placa de 10x10 cm de silicagel, se
revela con vainillina-acido sulfúrico, se deja secar y se calienta a 110ºC por
5 minutos, observa la aparición de clores.

7. En todos los casos se toman los Rf y los colores obtenidos para cada perfil,
si se desea se pueden tomar fotografías después de revelado

TABLA DE PROCEDIMIENTO GENERAL

PÁGINAS
MUESTRA EXTRACCIÓN ELUENTE REVELADOR PATRONES METABOLITOS A PLANT
VISUALIZAR DRUGS

Hojas de Método acido para Tolueno: 1. UV 254 nm Boldina Alcaloides 44

Boldo extraer alcaloides Acetato de etilo: 2. Aspersión con reactivo
Dietilamina de Dragendorff
70:20:10
1. Aspersión con reactivo
Flores de Acetato de etilo: NP (solución 1) Rutina Flavonoides 218
sauco Acido fórmico: 2. Dejar secar
Ácido acético: 3. Aspersión con reactivo
Metanol, Agua PEG (solución 2)
Flores de Calor 25º C y, 100: 11: 11: 26 4. Dejar secar Rutina Flavonoides 216
caléndula ultrasonido 5 5. Observar UV 365 nm
minutos por 2 No se Lactonas 90
Hojas de veces Diclorometano: 1. Aspersión con dispone de sesquiterpenicas
ajenjo Acetona Vainillina (solución 1) absintina por
85:15 2. dejar secar el momento
3. Aspersión con Ácido Anetol Aceites esenciales: 168
Semillas
sulfúrico (solución 2) Eugenol terpenos,
de hinojo Diclorometano Tolueno:
4. Dejar secar fenilpropanos
ultrasonido 5 Acetato de etilo 5. Calentar 110ºC por 5
Flores de minutos 2 veces 93:7 Bisabolol Aceites esenciales: 186
minutos
manzanilla terpenos,
fenilpropanos

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Bibliografía
1. Plant Drug Analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas. Second Edition
By H. Wagner and S. Bladt (Universität München). Photographs by V. Rickl.
Springer-Verlag, Brooklyn, New York. 1996. 384 pp. ISBN 3-540-58676-8.

2. DECRETO NUMERO 2266 DE 2004 (Julio 15). Por el cual se reglamentan

los regímenes de registros sanitarios, y de vigilancia y control sanitario y
publicidad de los productos fitoterapéuticos. Ministerio de la protección
social, 2004

3. DECRETO NUMERO 3553 DE 2004 (28/10/2004). Por el cual se modifica

el Decreto 2266 de 2004 y se dictan otras disposiciones. Ministerio de la
protección social, 2004

4. The European Pharmacopoeia. 8th Edition

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