Practica 8 Analitica 4

“Determinación de parabenos por cromatografía de
líquidos de alta eficiencia.”
INTRODUCCIÓN
La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de
una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase
estacionaria es sílica que se ha tratado con RMe2SiCl . La fase móvil actúa de portador de
la muestra. La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la
solución emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la
columna. Estas interacciones químicas, determinan la separación de los contenidos en la
muestra. La utilización de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza de los
compuestos a determinar.
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento

(HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la
estabilidad térmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales

lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto
peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra
disponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación.
En esta práctica se determinó el contenido de parabenos en una muestra de crema
corporal.
Los parabenos son los conservadores más empleados en productos cosméticos. Desde un
punto de vista químico son derivados del ácido para-hidroxibenzoico, Entre ellos los más
empleados son metilparabeno, propilparabeno, y el butilparabeno. Por lo general se emplea
más de un paraben en un producto y muchas veces se encuentran en combinación con otro
tipo de conservadores para dar protección a un mayor número de microorganismos. El uso
de mezclas de parabenos permite bajar la dosis necesaria e incrementar la actividad
preservadora.
OBJETIVOS
● Conocer los componentes básicos del cromatógrafo de líquidos de alta resolución,
así como su manejo y cuidados necesarios
● Seleccionar las condiciones instrumentales óptimas para la cuantificación de
parabenos
● Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos para cuantificar parabenos en una
muestra comercial mediante el método de estándar externo.
MATERIALES Y MÉTODOS
materiales reactivos equipo
➔ matraces ➔ metilparabeno ➔ Cromatógrafo de

volumétricos de 10, ➔ propilparabeno líquidos con detector
25ml ➔ butilparabeno UV/Vis.
➔ probeta 50 y 250 ml ➔ metanol
➔ piseta
➔ vasos precipitado
➔ micropipeta 100-
1000µl
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
RESULTADOS
Tabla 1. Comparación de resultados a diferentes flujos de la F.M

Metilparabeno Propilparabeno
Flujo Tiempo de Area Tiempo de Area

retención retención
1.5 1.536 2173693 2.422 1287422
1.2 1.917 2678609 3.018 1569945
1.0 2.308 3170218 3.637 1817159
0.7 3.299 4566484 5.164 2649081
Tabla 2. Factor de capacidad, resolución y eficiencia a diferentes flujos de la F.M

Resolución Metilparabeno Propilparabeno
Flujo RS K’ N K’ N
1.5 5.85 0.3161 2549 1.075 2859
1.2 6.44 0.3130 3179 1.0671 3444
1.0 6.42 0.4021 3052 1.2095 3483
0.7 6.73 0.3978 3306 1.1881 4047
Tabla 3. Sistemas para la curva de calibración

Metilparabeno Propilparabeno
Concentración Tiempo de Area Tiempo de Area

(ppm) retención retención
(min) (min)
5 1.851 167896 2.903 150457
10 1.912 508466 3.008 295799

20 1.910 998443 2.998 587170
30 1.908 1662499 2.989 977556
40 1.905 2042379 2.977 1200281
50 1.917 2678609 3.018 1569945
Muestra 1.914 129696 - -
Gráfico 1. Área de metilparabeno en función de su concentración
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Se determinó la concentración de parabenos en una muestra comercial de crema corporal

“Vasenol” por cromatografia de liquidos de alta eficiencia, por el método de estándar
externo, utilizando un cromatógrafo de líquidos con detector UV/VIS a una λ254nm en una
columna C-18 de 15cm, a un flujo de 1.2ml/min, con un volumen de inyección de 20 µl,
utilizando una fase móvil metanol-agua 70:30.
En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna
que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las
interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y
estacionaria
Para la primera parte de la experimentación se seleccionó la fase móvil óptima, esto

variando la concentración de esta. Primero se inyectó una fase móvil metanol-agua 80:20 y
posteriormente la proporción 70:30, en esta parte se pudo observar que se tiene un mayor
tiempo de retención en la proporción 70:30, esto debido a que al aumentar la cantidad de
agua aumentamos la polaridad de la FM por lo que al ser más polar se volvió más afín a la
columna y es por esto que su tR es mayor. Debido a esto esta fue la fase móvil utilizada
durante el resto de la experimentación.
Posteriormente se variaron los flujos de la FM obteniendo asi que entre más grande es él
flujo el tiempo de retención es menor esto debido a la cantidad de muestra inyectada; entre
menos fase móvil inyectamos mas rapida sera su salida debido a la cantidad de esta , como
se observa en los cromatogramas 1,2,3 y 4 se eligió el flujo de 1.2 debido a que ya existe
una eficiencia y selectividad adecuada, porque en el caso del mayor tiempo de retención
(flujo de 1.5) se presentan picos más anchos, y esto tampoco es una condición favorable,
por esta razón se eligió el flujo de 1.2 ya que presenta un buen tiempo de retención para
distinguir la separación de los picos, sin que estos presenten una anchura elevada. Si
observamos la tabla dos podemos decir que la elección del flujo fue adecuada ya que
tenemos una buena resolución y una alta eficiencia en comparación de todos los
parámetros para los otros flujos. Para obtener el factor de capacidad se utilizó la fórmula
k’=
Mientras que para obtener la resolución y la eficiencia se tuvo que realizar el siguiente
cálculo, debido a que no se contaba con el valor de la anchura de la base en los
cromatogramas y solo se contó con la anchura a la mitad del pico.
Wb= 1.70 (W 1/2)
2
N=16(
Rs=
En un principio se modificó la práctica originalmente planteada en el manual, ya que en este

se pretendia usar como estándar interno al propilparabeno, pero debido a que algunas
cremas presentan a este parabeno y como sabemos el estándar interno no puede ser uno
de los analitos de interés, se propuso utilizar el butilparabeno como estándar interno. La
práctica se llevó a cabo usando esta condición, hasta que se observó que en los
cromatogramas de fase móvil y flujo variante si aparece el pico perteneciente al
butilparabeno, mientras que en el caso de la muestra este no se presentaba, llegando a la
conclusión que lo único que diferenciaba a los estándares de la muestra era el hidróxido de
sodio 0.05N añadido a esta última, por lo que se pensó que el butilparabeno sufrió un
proceso de hidrólisis explicando así la ausencia de éste en la muestra, por lo que se decidió
cambiar las condiciones experimentales nuevamente, descartando la cuantificación por el
método de estándar interno debido a la inexistencia de éste, y utilizando una curva de
calibración para este fin.
Finalmente nuestra muestra sólo presentó metilparabeno, pero asumiendo esto tampoco
era posible la cuantificación por patrón interno ya que a la muestra no se le agregó el
estándar de propilparabeno.
Teniendo así la fase móvil y el flujo de esta adecuados se procedió a la construcción de la

curva de calibración, por medio de la cual se cuantifican los parabenos presentes en
nuestra muestra
Si observamos en la gráfica No. 1 la curva de calibración de metilparabeno en función de
sus concentracion nos proporciona los valores suficientes para llevar a cabo la
cuantificación de la siguiente forma:
y = 54721x - 70569
y +70569 / 54721= x
129696 + 70569 / 54721 = 3.6597 ppm de metilparabeno
3.6597 mg/L (0.01L ) = 0.036597 mg de metil parabeno en la muestra

de metilparabeno en la muestra de crema.
La principal preocupación con respecto al uso de parabenos en cosméticos es el potencial

de algunos de ellos para actuar como hormonas en el cuerpo, más concretamente como
estrógenos, la hormona sexual femenina. En los sistemas de prueba de laboratorio y en
animales, se han observado en los parabenos ciertos comportamientos propios de las
hormonas, pero estos son entre miles y millones de veces más débiles que la actividad de
las hormonas naturales. Estas propiedades similares a las de las hormonas parecen
aumentar con el tamaño de las moléculas de parabenos.
La legislación de la UE permite el uso de parabenos en cosméticos, pudiendo un mismo
producto contener uno o varios de ellos. La máxima concentración total permitida en los
productos de consumo es de 8 g de parabenos por kg de producto cosmético, siempre que
ningún parabeno individual esté presente en una concentración superior a 4 g/kg.
En México la normatividad sobre este tema no es tan rigurosa, aunque debería serlo debido
al riesgo que los parabenos presentan.
CONCLUSIONES
Se llevó a cabo el análisis de la muestra de crema corporal vasenol mediante el uso de la

técnica instrumental de HPLC ( cromatografía de líquidos de alta eficiencia) , debido a esto
se conocieron los componentes básicos del cromatógrafo de líquidos de alta resolución, así
como su manejo y cuidados necesarios.
Para la cuantificación de parabenos en una muestra comercial de crema corporal a las
condiciones instrumentales óptimas,se llevó a cabo la variación de la proporción de la fase
móvil y el flujo, obteniendo como mejores condiciones una fase móvil de metanol-agua
70:30 y un flujo de 1.2. La cuantificación se obtuvo por medio de una curva de calibración
del estándar metilparabeno, graficando su área en función de la concentración.Obteniendo
0.018 % de metilparabeno en la muestra.
REFERENCIAS
● http://iso22716.com/wp-content/uploads/2014/01/citizens_parabens_es.pdf
● http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografa-de-
lquidos-hplc
● http://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02-gases%20l%C3%ADquidos.pdf
● https://www.ocu.org/salud/cuidado-piel/noticias/parabenos-cosmeticos

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líquidos de alta eficiencia.”

A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento

La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales

materiales reactivos equipo

➔ matraces ➔ metilparabeno ➔ Cromatógrafo de

Tabla 1. Comparación de resultados a diferentes flujos de la F.M

Flujo Tiempo de Area Tiempo de Area

1.5 1.536 2173693 2.422 1287422

1.2 1.917 2678609 3.018 1569945

1.0 2.308 3170218 3.637 1817159

0.7 3.299 4566484 5.164 2649081

Tabla 2. Factor de capacidad, resolución y eficiencia a diferentes flujos de la F.M

1.5 5.85 0.3161 2549 1.075 2859

1.2 6.44 0.3130 3179 1.0671 3444

1.0 6.42 0.4021 3052 1.2095 3483

0.7 6.73 0.3978 3306 1.1881 4047

Tabla 3. Sistemas para la curva de calibración

Concentración Tiempo de Area Tiempo de Area

5 1.851 167896 2.903 150457

10 1.912 508466 3.008 295799

30 1.908 1662499 2.989 977556

40 1.905 2042379 2.977 1200281

50 1.917 2678609 3.018 1569945

Muestra 1.914 129696 - -

Gráfico 1. Área de metilparabeno en función de su concentración

Se determinó la concentración de parabenos en una muestra comercial de crema corporal

Para la primera parte de la experimentación se seleccionó la fase móvil óptima, esto

Wb= 1.70 (W 1/2)

En un principio se modificó la práctica originalmente planteada en el manual, ya que en este

Teniendo así la fase móvil y el flujo de esta adecuados se procedió a la construcción de la

3.6597 mg/L (0.01L ) = 0.036597 mg de metil parabeno en la muestra

La principal preocupación con respecto al uso de parabenos en cosméticos es el potencial

Se llevó a cabo el análisis de la muestra de crema corporal vasenol mediante el uso de la

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