BIORREACTOR

Es
Es un
un recipiente
recipiente oo sistema
sistema que
que mantiene
mantiene un
un ambiente
ambiente biológicamente
biológicamente activo
activo

Comúnmente
Comúnmente cilíndricos,
cilíndricos, variando
variando en
en tamaño
tamaño desde
desde algunos
algunos mililitros
mililitros hasta
hasta metros
metros cúbicos
cúbicos
yy son usualmente fabricados en acero inoxidable.
son usualmente fabricados en acero inoxidable.

Este proceso puede ser

Aeróbico Anaerobio

Condiciones ambientales de un biorreactor

Flujo de gases (por Temperatura

ejemplo, oxígeno,
nitrógeno, dióxido de Oxígeno Velocidad de agitación
disuelto pH o circulación
carbono, etc.)
Control del proceso de fermentación

Sistema de aireación
Sistema de agitación
Sistema de control del pH
Sistema de control de la temperatura
 Sistema de control de la espuma
 Sistema de toma de muestras
Deflectores
 Otros sistemas de control
 ESTERILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EN LAS
FERMENTACIONES INDUSTRIALES
Consiste en la eliminación o destrucción de todos los microorganismos presentes capaces
de competir con el organismo deseado.

Esterilización por calor seco Esterilización por filtración

Esterilización por calor seco

Aire caliente Esterilización por calor húmedo Esterilización por
radiaciones
Por ebullición ultravioletas
Flameo o llama directa
Vapor de agua sin presión
Por vapor de agua con presión
(autocalve)
Por tindalización
Pasteurización
 FORMAS DE ESTERILIZACIÓN
Esterilización
Esterilización por
por calor
calor seco
seco Esterilización
Esterilización por
por calor
calor húmedo
húmedo
a) Flameo o llama directa a) Por ebullición c) Por vapor de agua
Exponer por breves instantes el Colocar el material a con presión
objeto a esterilizar a fuego en un esterilizarse en agua hirviendo
El material a esterilizarse
mechero; con el fin de eliminar (100º C) por unos 15 a 35
se somete a 15 libras de
rápidamente los microorganismos minutos. presión por espacio de 15
con los cuales se trabaja.
b) Vapor de agua sin presión minutos (121º C). Para la
b) Aire caliente Colocar el material a esterilización de medios
Se realiza usando un horno esterilizarse a la acción del vapor de cultivo y otros
bacteriológico u horno Pasteur. de agua y a temperatura no materiales que no se
Graduar la temperatura del horno mayor de 100ºC. Sustancias que pueden esterilizar con
a 170º y mantener el material por se alteran a elevadas calor seco.
especio de dos horas. temperaturas. Ejemplo: leche,
medios de cultivo azucarados,
etc.
d) Por tindalización Esterilización
Esterilización por
por filtración
filtración
Calentar el material a 100º C por 30 Pasar las sustancias líquidas o gaseosas a
minutos durante tres días esterilizar a una través de membranas porosas que
consecutivamente, con incubación de los retienen a los microorganismos. Se esterilizan por
intervalos. Para esterilizar medios de este método, sustancias termolábiles, ejemplo:
cultivo y otras sustancias que no pueden ser suero animal, preparaciones enzimáticas, líquidos
calentadas a temperaturas superiores a 100º ascíticos, extractos de tejidos, soluciones de
C. hidratos de carbono, etc.

e) Pasteurización
Esterilización
Esterilización por
por radiaciones
radiaciones ultravioletas
ultravioletas
Cuando es lenta, consiste en someter el
líquido a esterilizar a una temperatura que Estas ejercen efectos letales y mutagenéticas
fluctúa alrededor de los 63º C durante 20 en las bacterias, presentando su mayor
minutos y cuando es rápida, alrededor de 73º efectividad como agente bactericida .Este
C durante 20 minutos aunque no destruye la método presenta muchas dificultades técnicas.
totalizada de organismos. Se usa para la
conservación de la leche, de bebidas
alcohólicas, como vinos, cervezas, etc.
 Escalado
Una industria de bioproducción tiene varios reactores en serie (desde 10 - 20 L a 250 m 3 o mayores). El
proceso de operación se inicia con el cultivo de los microorganismos en el fermentador mas pequeño.
Luego el contenido de este reactor se pasa a uno mas grande y este proceso se repite hasta que se alcanza el
fermentador de producción (el reactor mas grande de la cadena).

El diseño del fermentador debe ser similar en todos los tanques:

Escala laboratorio = Planta semipiloto =Planta piloto = Planta industrial
Control
Control del
del coste
coste
El tanque versátil para la aplicación en diversos procesos.
Consumo de energía debe ser tan bajo como sea posible.
Emplearse materiales más baratos -resultados
satisfactorios.
Existir un servicio adecuado de repuestos para el
fermentador.
 Agitación Efectos de la Agitación en
la Fermentación
La agitación es la operación que crea o que
acelera el contacto entre dos o varias fases. 1. Dispersión del aire en la solución de
Una fermentación microbiana puede ser nutrientes
considerada como un sistema de tres fases: 2. Homogeneización de la temperatura,
1. Fase Líquida: sales disueltas, sustratos y pH y concentración de nutrientes en el
metabolitos. fermentador
2. Fase Sólida: células individuales, agregados 3. Suspensión de los microorganismos y
celulares sustratos insolubles o productos del de los nutrientes sólidos
metabolismo que precipitan 4. Dispersión de los líquidos inmiscibles
3. Fase Gaseosa: proporciona un reservorio
para el suministro de oxígeno, para la
eliminación del CO2 o para el ajuste del pH
con amonio gaseoso.
 Clasificación de los biorreactores
Tipos mas comunes de biorreactores utilizados en procesos industriales.
1.Tanque agitado 2. Columnas de burbujeo 3. Air lif
1.
1. REACTOR
REACTOR DE
DE TANQUE
TANQUE AGITADO
AGITADO Discontinuo
Discontinuo
Continuo
Continuo
Características generales:
Recipientes cilíndricos alargados con una relación altura: diámetro de 2:1 o
mayor.
Este diseño permite un mayor tiempo de contacto de las burbujas de aire con
el líquido conforme ascienden.
La base del tanque se redondea para evitar zonas estancadas.
Se mantienen homogéneos mediante agitación mecánica. Poseen un eje
central movido por un motor que soporta uno o mas agitadores. Este eje puede
estar soportado por la parte superior o desde el fondo del reactor.
Con deflectores para mantener la turbulencia y favorecer el mezclado e
impedir la formación de vórtex.
Con agitadores en la parte superior que rompen la espuma (separador de
espuma).
Ventajas tanque agitado: Bajo costo de capital y de operación.
Versátiles: pueden funcionar como cultivo batch, continuo o batch alimentado.
Usos:
Usos: Producción
Producción de
de levadura
levadura de
de panadería,
panadería, producción
producción de
de antibióticos
antibióticos yy ácidos
ácidos orgánicos.
orgánicos.

Una
Una característica
característica del
del reactor
reactor de
de tanque
tanque
agitado
agitado continuo
continuo reside
reside en
en la
la utilización
utilización de
de
reactores
reactores en
en serie.
serie.

Usos: en los procesos en los que es preciso variar las condiciones ambientales durante el
curso de la reacción. Esto equivale a proporcionar condiciones ambientales diferentes en
las distintas etapas.
2.
2. REACTOR
REACTOR DE
DE COLUMNA
COLUMNA DE
DE BURBUJEO
BURBUJEO
Reactores
Reactores sin
sin agitación
agitación mecánica.
mecánica.
Se inyecta el gas por el fondo, mediante un disco perforado que hace las veces de difusor. Las burbujas
de gas ascienden a través del líquido. Se colocan placas horizontales perforadas a lo largo de la
columna (a intervalos) para mejorar la transferencia de oxigeno
El mezclado lo proporciona el movimiento del gas a través del líquido.
Recipiente cilíndrico con relación altura:
diámetro de 6:1 o mayor (para lograr una
transferencia de oxígeno eficaz).
La temperatura se mantiene constante con
camisas refrigerantes o serpentines colocados en
el interior del recipiente.

Las propiedades reológicas del fluido afectan la

transferencia de oxigeno y el mezclado.
En los procesos aeróbicos, el gaseo del líquido con aire proporciona el oxígeno necesario para el
proceso, además de la agitación. En los procesos anaeróbicos los propios gases (CO2) liberados
en la fermentación proporcionan la agitación.

Ventajas:
Estructura sencilla.
Bajo costo.
La ausencia de un agitador elimina el riesgo de
contaminación.
Bajo shear (esfuerzo de corte). Las fuerza de cizalla que
sufren los organismos es mínima.
Adecuado transferencia de materia y calor.

Usos:
Usos: Producción
Producción dede cerveza
cerveza yy otras
otras fermentaciones
fermentaciones
aerobias Fermentadores cilindro cónicos
aerobias poco
poco viscosas.
viscosas.
3.
3. REACTOR
REACTOR DE
DE TIPO
TIPO AIR
AIR LIFT
LIFT Sin agitación mecánica.


Consiste
Consiste en
en dos
dos cilindros
cilindros concéntricos.
concéntricos.

 Agitación por inyección de aire.
Agitación por inyección de aire.

El
El gas
gas (aire)
(aire) es
es inyectado
inyectado enen la
la columna
columna interior
interior yy circula
circula aa través
través del
del tubo
tubo concéntrico
concéntrico interno
interno en
en
forma
forma ascendente
ascendente (al
(al igual
igual que
que el
el líquido).
líquido).

El
El gas
gas sale
sale por
por la
la parte
parte superior,
superior, dejando
dejando el
el líquido
líquido mas
mas pesado,
pesado, libre
libre de
de burbujas,
burbujas, que
que recircula
recircula en
en
forma
forma descendente
descendente porpor el
el espacio
espacio exterior.
exterior.

La densidad del fluido es menor en la zona ascendente, la que

recibe el gas, respecto a la zona descendente.
Esta diferencia de densidad del líquido en las dos columnas,
genera una circulación de líquido ascendente en el
compartimento interno y descendente en el externo.

Usos:
Usos: Por
Por el
el bajo
bajo esfuerzo
esfuerzo de
de corte
corte (shear)
(shear) se
se usa
usa para
para cultivo
cultivo de
de células
células animales
animales (frágiles),
(frágiles), para
para la
la
producción
producción de
de proteínas
proteínas biofarmacéuticas,
biofarmacéuticas, con
con catalizadores
catalizadores inmovilizados,
inmovilizados, etc.
etc.
Reactores de enzimas o células 1. Adsorción: resinas de intercambio iónico.
inmovilizadas 2. Covalente: glutaraldehido, tolueno,
iodoacetilcelulosa, di-isocianato.
3. Atrapamiento: colágeno, gelatina, agar,
Sistema de producción continua.
alginatos, poliacrilamida, poliestireno.
Consiste en pasar el medio fresco a
través de un biorreactor en el que
hemos inmovilizado células (o
enzimas).
Positivo. Con este sistema se
eliminan los problemas de
desequilibrio (estabilidad del
sistema). También se eliminan los
problemas de estabilidad genética del
sistema continuo clásico y además el
producto resultante está libre de
células.
Negativo. Presenta el inconveniente
de que no todos los microorganismos
pueden inmovilizarse.
Discontinuo (batch): Son sistemas cerrados que Semicontinuo (feed batch): Estos sistemas operan
se caracterizan por cambiar las condiciones adicionando medio fresco, pero sin remoción del
fisiológicas y ambientales. existente. Son muy útiles cuando se requiere una
No hay entrada ni salida de medio de cultivo. elevada densidad celular en la etapa de iniciación
11 del proceso que implica un alto consumo de
nutrientes, especialmente de fuente hidrocarbonada
que suele funcionar como sustrato limitante.
2
2

Existen
Existen tres
tres modos
modos de
de cultivo
cultivo aunados
aunados aa tres
tres modos
modos básicos
básicos de
de operación
operación

MODO DE OPERACIÓN Y SISTEMAS DE CULTIVO

 Continuo (continuos): por quimioestato, el caudal de entrada de medio fresco es 3
3
igual al de salida de medio utilizado. Son utilizados en cultivos donde la velocidad
de crecimiento celular es constante por lo que existe un suministro constante de
nutrientes o para la remoción permanente de producto sobre todo en sistemas
inmovilizados.

Existen
Existen tres
tres modos
modos de
de cultivo
cultivo aunados
aunados aa tres
tres modos
modos básicos
básicos de
de operación
operación

MODO DE OPERACIÓN Y SISTEMAS DE CULTIVO

 PREPARACIÓN Y PROPAGACIÓN DE INÓCULOS
El tamaño del inóculo generalmente es del orden del 1-10% del volumen total del medio. Si es
inferior a esta proporción puede existir un excesivamente prolongado período de latencia.
Para evitar estos problemas, el proceso de
fermentación se lleva a cabo en cuatro etapas:

I. Preservación del inóculo

II. Multiplicación del inóculo
III. Cultivo de prefermentación
IV. Fermentación de producción

I. Preservación del inóculo

El objetivo es mantener las cepas durante tanto tiempo como sea posible sin división celular. Hay que
obtener precultivos para que la fase de adaptación sea más corta.
Siempre tenemos que conservar las cepas maestras. A partir de estas cepas obtenemos las cepas de
trabajo, que son las que vamos a utilizar cada vez que inoculemos un fermentador.
Cepas de trabajo. Las tenemos conservadas para que no haya metabolismo (congeladas, liofilizadas)
por lo que hay que revivirlas.
Etapa II: Crecimiento del inóculo Etapa III: Precultivo en fermentador
El cultivo preservado se reaviva hay dos Realizarse precultivos en fermentadores más
posibilidades, en medio sólido (esporas) o en pequeños. Si un fermentador de producción se
cultivo líquido. Las condiciones utilizadas en inicia con demasiado poco inóculo, el
el cultivo inicial(composición del medio, crecimiento se retrasa y la velocidad de
temperatura de incubación, etc.) dependerán formación del producto puede ser insatisfactoria.
del proceso específico. La concentración óptima del inóculo para el
fermentador de producción determina el número
de etapas del precultivo de fermentación que son
necesarias. En general se requieren las siguientes
concentraciones de inóculo:

IV. Fermentación de producción

Tamaño del fermentador según el producto.
La selección de las técnicas a emplear RECUPERACIÓN DE
depende de:
1. Naturaleza del producto PRODUCTOS
a. Localización del producto
b. Características físicas y químicas del
Recuperación
producto de productos
c. Características biológicas
2. Concentración en la que se
encuentra
Separación Cristalización Desecación
3. Destino del producto
4. Precio del producto
Existen una serie de etapas en el proceso
de recuperación del producto, una vez ha Floculación y Sistemas de Centrifugació
concluido la fermentación. flotación filtros n

♦ Separación de los sólidos en

suspensión
♦ Extracción, concentración y
purificación
Ejemplo: producción de acido láctico
Serie de métodos, basados en el tamaño. Estos métodos están ordenados en función de tamaño, de
manera que los primero sirven para partículas más grandes que los últimos.

a. Sedimentación: es el método más fácil y barato

b. Centrifugación
c. Floculación
d. Filtración
e. Filtración perpendicular
f. Filtración tangencial
g. Diálisis

Existen otras técnicas de separación, que cada día son más importantes a nivel biotecnológico.

h. Cromatografía de adsorción
i. Cromatografía de intercambio iónico
j. Cromatografía de exclusión molecular:
k. Cromatografía de afinidad
 Equipo de fermentación con
Unidad básica Unidad de control para agitación magnética
de fermentación fermentador
con agitación
mecánica

Con este biorreactor puede hacer

crecimiento de células o tejidos, el
proceso puede ser aeróbico o Es posible hacer crecimiento de
anaeróbico. Esta unidad cuenta con células o tejidos, el proceso puede
Cuenta con control de ser aeróbico o anaeróbico. Esta
jarra de vidrio borosilicato
PH, control de oxígeno unidad cuenta con jarra de vidrio
esterilizable, se pueden fabricar
disuelto, antiespuma y borosilicato esterilizable. Se
jarras desde 1lt. hasta 15 Lts. y éstas
control de velocidad y pueden fabricar jarras desde 1lt
pueden ser enchaquetadas para
puede ser utilizada con hasta 15lt y éstas pueden ser
controlar la temperatura con un baño
los fermentadores enchaquetadas para controlar la
recirculador o sin chaqueta para
FAM de 1 a 15 litros. temperatura con un baño
controlar la temperatura con manta
de silicón. recirculador o sin chaqueta para

FERMENTADORES controlar la temperatura con manta

de silicón.
Fermentador agitado por aire
tipo AIR-LIFT Medidor de volumen de gas
Este equipo se utiliza para la medición de biogas
de fermentación en biorreactores. Cuenta con
una probeta en U de 10 ml. que puede ser
ajustada de 0 a 100% para detectar eventos. Un
evento es la medición del volumen programado

Es ideal para organismos que

Fermentador planta piloto bioreactor
requieren un alto nivel de
transferencia de oxígeno. Este Equipos fermentadores para planta piloto en
fermentador induce la acero inoxidable esterilizados in situ con
circulación del líquido y gases control de PH, oxígeno disuelto, sistema de
logrando con ello una excelente agitación o bombeo, bombas peristálticas,
mezcla. Esta jarra puede medidores de flujo, etc.
ocuparse tanto para productos
aeróbicos como para productos
anaeróbicos, como en el estudio
de aguas residuales.
FERMENTADORES
REFERENCIAS
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