Guia de Practica Sesion 04

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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA

INFORME 04 Bioquímica y
biología
molecular
B2P2

Autores:

Torres Chero, Carla


Velasquez, Samuel
Velasquez, Sebastian
Villafana Jhoner
Zamora Rivas, Tamara

Docente de práctica:
Plasencia Alvarez Jorge Omar

Trujillo-Perú

2022
PRÁCTICA N° 4.
DIGESTIÓN DE LAS PROTEÍNAS E INHIBICIÓN DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS

I. INTRODUCCIÓN:

La digestión de las proteínas, o degradación hasta aminoácidos se inicia en la boca, en mínima


cantidad, se continua en el estómago con la pepsina; pero es el páncreas que produce enzimas que
cumplen un rol principal en este proceso conociéndose como enzimas proteolíticas. Entre estas
se tiene a: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa; y las de origen intestinal:
aminopeptidasas, peptidasas. Estas mismas enzimas se pueden clasificar a su vez como
endopeptidasas: pepsina, tripsina,quimotripsina, elastasas y exopeptidasas: carboxipeptidasa y
aminopeptidasa. La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es específica de los
enlaces peptídicos sobre el lado carboxílico de residuos de aminoácidos básicos: lisina y arginina
solamente. La quimotripsina es específica para los enlaces peptídicos de los aminoácidos sin carga
como los aromáticos: tirosina, triptófano y fenilalanina. Laelastasa tiene una especificidad
amplia, ataca a los residuos de aminoácidos alifáticos neutros pequeños, como la glicina, alanina y
serina. Las exopeptidasas catalizan la hidrólisis de enlaces peptídicos, uno a la vez, desde los extremos
de péptidos. Las Carboxipeptidasas, secretadas en el jugo pancreático, hidrolizan el enlace
peptídico carboxiterminal en las cadenas polipeptídicas. Todas ellas son sintetizadas como
zimógenos y son activadas al ser liberadas a la luz del intestino para que actúen sobre las proteínas.
La falta de enzimas proteolíticas produce creatorrea (presencia de fibras musculares identificables
en las heces, que provienen de la carne de los alimentos), y acarrea(gran cantidad de productos
nitrogenados en las heces). En el lactante con ausencia congénita de tripsinógeno y por
consiguiente por falta de activación de quimotripsinógeno y procarboxipeptidasa, existe
hipoproteinemia, con retardo marcado en el crecimiento.

II. OBJETIVOS
● Demostrar la acción de las enzimas digestivas proteolíticas del páncreas sobre la caseína
de la leche, determinado los productos (aminoácidos) con ninhidrina.
● Demostrar el efecto inhibidor del extracto de soya cruda sobre el efecto proteolítico de
la tripsina.

III. MATERIALES
● Buffer fosfato 0,1 M pH 8
Material de vidrio:
● Solución de extracto
● Tubos de ensayo pancreático
● Pipetas milimetradas ● Solución acuosa de
ninhidrina al 0,25% saturada
Equipos:
con butanol
● Baño maría ● Ácido tricloroacético al 10%
● Olla para baño de agua ● Solución de tripsina 20 mg%
hirviendo ● Proteína de soya cruda 30%
Reactivos: ● Proteína de soya hervida
30%
● Caseína al 1% en buffer ● Etanol absoluto.
fosfato 0,1 M pH 81
IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Acción de enzimas digestivas pancreáticas sobre la caseína
Armar el siguiente Incubado:
COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III
Caseina al 1% 1.0 1.0 ‐‐
Buffer fosfato 0.1M pH 8.0 1.0 1.0 1.0

Solución de extracto pancreático 1.0 ‐‐ 1.0


Agua Destilada ‐‐ 1.0 1.0
Mezclar y colocar en baño maría a 37 ºC por 30 minutos.
Transcurrido el tiempo, armar un nuevo sistema y colocar:

Armar un segundo sistema de incubado:


COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III
Incubado anterior 0.5 0.5 0.5
Ninhidrina 1.0 1.0 1.0
Mezclar y llevar a un baño de agua hirviendo (franca ebullición), durante 3
a 5 minutos.
Observa los cambios de color de cada tubo.

No Trabajar con lo que resta del incubado:


COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III
Incubado anterior 0.5 0.5 0.5
Ácido tricloroacético al 10% (gota a gota) 1.0 1.0 1.0
Agitar continuamente.
Observa las variaciones que se produce en cada tubo.

IV. RESULTADOS:
Los aminoácidos que se obtienen al degradar la caseína en su mayoría son la serina, prolina, leucina y treonina.
Es necesario el movimiento continuo para simular el movimiento peristáltico y someter a baño maría a 37°C
para dar un ambiente óptimo simulando la temperatura corporal

Cuando se le agrega 1.0 ml de Ninhidrina:

● En el tubo I: La ninhidrina evidencia la formación de aminoácidos, debido a esto el tubo I se va a teñir más
oscuro, por la presencia de enzima y sustrato.
● En el tubo II: En este tubo sólo hay sustrato, así que la proteína no se degrada,la ninhidrina lo reconoce con
menor intensidad, haciendo que se tiña de un color rojo pardo medio.
● En el tubo III: Ausencia de sustrato. No hay reacción alguna. La tinción es casi transparente.

Cuando le agregamos 1.0 ml de Ácido tricloroacético:


● En el tubo I: Vemos la presencia de sustrato y enzima. La proteólisis se dio por completo, no quedaron residuos
de péptidos por lo que la solución al entrar encontacto con el ácido tricloroacético no revela precipitado.
● En el tubo II: Aquí observamos la precipitación de proteína no degradada ya queno hubo enzima que actuara
sobre el sustrato.
● En el tubo III: Ausencia de sustrato. El ácido tricloroacético no tiene proteínas queprecipita

Acción de la soya hervida y cruda sobre el efecto proteolítico de la tripsina


Se arma el siguiente sistema, colocando:
COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III IV
Buffer fosfato 0.1M pH 8.0 2.5 2.5 2.5 2.5
Proteína de soya cruda al 30% 0.5 0.5 ‐‐ ‐‐
Proteína de soya hervida al 30% ‐‐ ‐‐ 0.5 0.5
Solución de tripsina al 20% 0.2 ‐‐ 0.2 ‐‐

Se mezclan y colocan todos los tubos en baño maría a 37 ºC, durante 60 minutos.
Transcurrido el tiempo, se agrega:
Etanol absoluto (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0
Se mezclaron y todos los tubos se centrifugaron a 2500 rpm, durante 10 minutos.
Observe los resultados.

Se arma un segundo sistema, colocando:


COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III IV
Sobrenadante anterior 1.0 1.0 1.0 1.0
Ninhidrina al 0.25% 1.0 1.0 1.0 1.0
Se somete a todos los tubos a baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
Observe los resultados.
RESULTADOS:
● TUBO I: Este tubo presentó coloración trasparenteEn este tubo se evidenció una coloración
transparente debido a que la soja cruda inhibió la acción endopeptidasa de la tripsina, al ser
inhibida esta enzima la proteína de soja quedó intacta causando así que la ninhidrina, no
encontrara a aminoácidos con los cuales reaccionar y por ende no virara de color.
● TUBO II: Este tubo presenta coloración transparente. En este tubo no se evidencio coloración
alguna debido a que no contenían enzimas tripsina y por ende no hubo digestión de la proteína
cruda de soya. La ninhidrina no encontró aminoácidos libres con los cuales reaccionar.
● TUBO III: Se evidencia con la coloración que toma el tubo, vino oscuro.La soya hervida pierde su
función inhibidora, al agregar ninhidrina pone en manifiesto la acción de la tripsina.
● TUBO IV: Este tubo presentó coloración marrón claro. El hidrato de tricetohidrindeno (ninhidrina)
es el reactivo más usado para la identificación y cuantificación de aminoácidos; la proteína de soya
cocida, se desnaturaliza a su estructura primaria, quedando aminoácidos, de tal manera que la
ninhidrina identifica estos aminoácidos, generando una coloración violeta, pero no es tan oscura
porque el tubo 4 no tiene tripsina.

1. ¿Cuáles fueron los objetivos de la práctica?


● Demostrar la acción de las enzimas digestivas proteolíticas del páncreas sobre la caseína de la
leche, determinado los productos (aminoácidos) con ninhidrina.
● Demostrar el efecto inhibidor del extracto de soya cruda sobre el efecto proteolítico de la tripsina.

2. Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.

Variables en el experimento N°01:

● Enzima proteolítica (extracto pancreático)


● Proteína (Caseína)
● Cuantificación de todos los aminoácidos (Ninhidrina)
● pH óptimo (Buffer fosfato 8.0)
● Desnaturalizante (Ácido tricloroacético)

Variables en el experimento N°02:

● Enzima (Solución de tripsina)


● Proteína (Soya cruda) (Inhibidor antitripsina)
● Proteína (Soya hervida)
● Desnaturalizante (Etanol) 3
3. Explique el sitio de producción y la acción de las hormonas que intervienen en el proceso de
digestión y absorción de los aminoácidos.
En el intestino delgado tiene lugar la mayor parte de los procesos de digestión y absorción. El
alimento se mezcla con la bilis, el jugo pancreático y los jugos intestinales. Durante la fase química
de la digestión diferentes enzimas rompen las moléculas complejas en unidades más sencillas que
ya pueden ser absorbidas y utilizadas. Algunas de las enzimas más importantes son la lipasa (que
rompe las grasas en ácidos grasos), la amilasa (que hidroliza el almidón) y las proteasas (tripsina y
quimotripsina, que convierten las proteínas en aminoácidos).

4. Elabore un esquema con la digestión y absorción de proteínas y aminoácidos.

5. Elabore un esquema mostrando dos ejemplos de transaminación e identifique los componentes


que intervienen.

Cuando predomina la degradación, la mayoría de los aminoácidos ceden su grupo amino al


αcetoglutarato que se transforma en glutamato (GLU), pasando ellos al α-cetoácido
correspondiente. Hay dos transaminasas, GOT y GPT , cuyos niveles en suero tienen un importante
significado en el diagnóstico clínico.
6. Elabore un esquema mostrando dos ejemplos de desaminación e identifique los componentes
que intervienen.

DESAMINACIÓN OXIDATIVA DEL GLUTAMATO

COMPONENTES: GDH:
- Glutamato - Localización intracelular: matriz mitocondrial
- Glutamato deshidrogenasa - Es abundante en la mayoría de tejidos
- Alfa-cetoglutarato - Interviene en la síntesis y degradación del
glutamato
- ADP
- GDP
- ATP
- GTP
DESAMINACIÓN NO OXIDATIVA DE LA SERINA - TREONINA

COMPONENTES:
- Serrina
- Treonina
- H2O
- Piruvato
-Alfa-cetobutirato

7. ¿Cuál es la acción de la soya sobre la digestión de la proteína?

La soya cruda tiene propiedades inhibitorias para la tripsina, impidiendo la proteolisis de las proteínas
y la formación de aminoácidos en los tubos 1 y 2 , no ocurrió proteólisis , lo que se demostró que con
la ninhidrina.

8. ¿Cuál es la razón de utilizar ninhidrina en el experimento de la digestión de las proteínas?

La ninhidrina se usa en el experimento de la digestión de las proteínas porque nos ayuda a identificar
los aminoácidos presentes en los distintos tubos, cuando la ninhidrina identifica presencia de
aminoácidos, torna la solución a un color violeta característico. Por lo tanto, en los tubos de la práctica
podemos ver que en el tubo 3 está coloreado de violeta y el tubo 4 menos, debido a que en un tubo
hay mayorconcentración de aminoácidos que en el otro, y los tubos 1 y 2 que están de color
transparente es porque no hay presencia de aminoácidos, puede que haya proteínas, pero
la ninhidrina solo identifica aminoácidos.

9. ¿Qué ocurre si se trata con el calor de la soya?

El inhibidor de la tripsina de la soya, es termolábil así que en la soja hervida pierde su capacidad de
inhibir a la tripsina, pasando por un proceso de desnaturalización, alcanzando la soya una aportación
de aminoácidos esenciales.
10. ¿Por qué el ovomucoide de la clara de huevo inhibe la acción de la tripsina?

El ovomucoide es un glicoproteina el cual tiene un inhibidor de tripsina de una alta estabilidad térmica
posee una serie de enlaces azufrados, asimismo, actúa como Ovoinhibidor, siendo la principal
enzima antiproteasa de la clara de huevo, que bloquea tripsina y quimiotripsina, y así impide que
se asimile los aminoácidos ingeridos y se desactive a 70 grados, así mismo es un inhibidor de tipo
kazal, siendo su sitio activo en el residuo de la lisina para la mayoría de las aves, pero en las gallinas se
encuentra en la arginina.

V. CONCLUSIONES:

● La ninhidrina nos ayudó a identificar aminoácidos presentes en la digestión de las proteínas,


dando como resultado una coloración violeta en los tubos de ensayo.

● La soya cruda tiene propiedades inhibitorias para la tripsina, impidiendo la proteólisis de las
proteínas y la formación de aminoácidos.

● En los tubos de ensayo (1,2) no observamos que ocurrió la proteólisis, no hubo aminoácidos
libres, y se demostró con la ninhidrina.

● La soya al ser hervida recibe un alto valor proteico y entra en el rango de alimentos de origen
animal con alto valor biológico por su cantidad y su contenido en aminoácidos esenciales.

● La actividad anti tripsina es inhibida al hervir la soya, lo que permite la acción de la tripsina y la
formación de aminoácidos libres, la ninhidrina tiñe la solución de color violeta oscuro,lo que se
observó con más acentuación en el tubo 3.

● La soya hervida logra alcanzar un alto contenido proteico, no llega a superar a las proteínas de
origen animal; pero como una alternativa es una buena opción para conseguir las proteínas
necesarias , aun así debería estar acompañada de otros alimentos para cumplir con el valor
nutricional.

● Al juntar la enzima pancreática con la caseína, dicha proteína se va a hidrolizar formando


aminoácidos y la ninhidrina agregada va a ser capaz de reaccionar a los aminoácidos volviéndo
de un color violeta o morado.

VI. BIBLIOGRAFÍA
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011

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