Guia de Practica Sesion 04
Guia de Practica Sesion 04
Guia de Practica Sesion 04
ESCUELA DE MEDICINA
INFORME 04 Bioquímica y
biología
molecular
B2P2
Autores:
Docente de práctica:
Plasencia Alvarez Jorge Omar
Trujillo-Perú
2022
PRÁCTICA N° 4.
DIGESTIÓN DE LAS PROTEÍNAS E INHIBICIÓN DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS
I. INTRODUCCIÓN:
II. OBJETIVOS
● Demostrar la acción de las enzimas digestivas proteolíticas del páncreas sobre la caseína
de la leche, determinado los productos (aminoácidos) con ninhidrina.
● Demostrar el efecto inhibidor del extracto de soya cruda sobre el efecto proteolítico de
la tripsina.
III. MATERIALES
● Buffer fosfato 0,1 M pH 8
Material de vidrio:
● Solución de extracto
● Tubos de ensayo pancreático
● Pipetas milimetradas ● Solución acuosa de
ninhidrina al 0,25% saturada
Equipos:
con butanol
● Baño maría ● Ácido tricloroacético al 10%
● Olla para baño de agua ● Solución de tripsina 20 mg%
hirviendo ● Proteína de soya cruda 30%
Reactivos: ● Proteína de soya hervida
30%
● Caseína al 1% en buffer ● Etanol absoluto.
fosfato 0,1 M pH 81
IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Acción de enzimas digestivas pancreáticas sobre la caseína
Armar el siguiente Incubado:
COMPONENTES (ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III
Caseina al 1% 1.0 1.0 ‐‐
Buffer fosfato 0.1M pH 8.0 1.0 1.0 1.0
IV. RESULTADOS:
Los aminoácidos que se obtienen al degradar la caseína en su mayoría son la serina, prolina, leucina y treonina.
Es necesario el movimiento continuo para simular el movimiento peristáltico y someter a baño maría a 37°C
para dar un ambiente óptimo simulando la temperatura corporal
● En el tubo I: La ninhidrina evidencia la formación de aminoácidos, debido a esto el tubo I se va a teñir más
oscuro, por la presencia de enzima y sustrato.
● En el tubo II: En este tubo sólo hay sustrato, así que la proteína no se degrada,la ninhidrina lo reconoce con
menor intensidad, haciendo que se tiña de un color rojo pardo medio.
● En el tubo III: Ausencia de sustrato. No hay reacción alguna. La tinción es casi transparente.
Se mezclan y colocan todos los tubos en baño maría a 37 ºC, durante 60 minutos.
Transcurrido el tiempo, se agrega:
Etanol absoluto (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0
Se mezclaron y todos los tubos se centrifugaron a 2500 rpm, durante 10 minutos.
Observe los resultados.
COMPONENTES: GDH:
- Glutamato - Localización intracelular: matriz mitocondrial
- Glutamato deshidrogenasa - Es abundante en la mayoría de tejidos
- Alfa-cetoglutarato - Interviene en la síntesis y degradación del
glutamato
- ADP
- GDP
- ATP
- GTP
DESAMINACIÓN NO OXIDATIVA DE LA SERINA - TREONINA
COMPONENTES:
- Serrina
- Treonina
- H2O
- Piruvato
-Alfa-cetobutirato
La soya cruda tiene propiedades inhibitorias para la tripsina, impidiendo la proteolisis de las proteínas
y la formación de aminoácidos en los tubos 1 y 2 , no ocurrió proteólisis , lo que se demostró que con
la ninhidrina.
La ninhidrina se usa en el experimento de la digestión de las proteínas porque nos ayuda a identificar
los aminoácidos presentes en los distintos tubos, cuando la ninhidrina identifica presencia de
aminoácidos, torna la solución a un color violeta característico. Por lo tanto, en los tubos de la práctica
podemos ver que en el tubo 3 está coloreado de violeta y el tubo 4 menos, debido a que en un tubo
hay mayorconcentración de aminoácidos que en el otro, y los tubos 1 y 2 que están de color
transparente es porque no hay presencia de aminoácidos, puede que haya proteínas, pero
la ninhidrina solo identifica aminoácidos.
El inhibidor de la tripsina de la soya, es termolábil así que en la soja hervida pierde su capacidad de
inhibir a la tripsina, pasando por un proceso de desnaturalización, alcanzando la soya una aportación
de aminoácidos esenciales.
10. ¿Por qué el ovomucoide de la clara de huevo inhibe la acción de la tripsina?
El ovomucoide es un glicoproteina el cual tiene un inhibidor de tripsina de una alta estabilidad térmica
posee una serie de enlaces azufrados, asimismo, actúa como Ovoinhibidor, siendo la principal
enzima antiproteasa de la clara de huevo, que bloquea tripsina y quimiotripsina, y así impide que
se asimile los aminoácidos ingeridos y se desactive a 70 grados, así mismo es un inhibidor de tipo
kazal, siendo su sitio activo en el residuo de la lisina para la mayoría de las aves, pero en las gallinas se
encuentra en la arginina.
V. CONCLUSIONES:
● La soya cruda tiene propiedades inhibitorias para la tripsina, impidiendo la proteólisis de las
proteínas y la formación de aminoácidos.
● En los tubos de ensayo (1,2) no observamos que ocurrió la proteólisis, no hubo aminoácidos
libres, y se demostró con la ninhidrina.
● La soya al ser hervida recibe un alto valor proteico y entra en el rango de alimentos de origen
animal con alto valor biológico por su cantidad y su contenido en aminoácidos esenciales.
● La actividad anti tripsina es inhibida al hervir la soya, lo que permite la acción de la tripsina y la
formación de aminoácidos libres, la ninhidrina tiñe la solución de color violeta oscuro,lo que se
observó con más acentuación en el tubo 3.
● La soya hervida logra alcanzar un alto contenido proteico, no llega a superar a las proteínas de
origen animal; pero como una alternativa es una buena opción para conseguir las proteínas
necesarias , aun así debería estar acompañada de otros alimentos para cumplir con el valor
nutricional.
VI. BIBLIOGRAFÍA
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011
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