UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA

E INMUNOLOGÍA - CÁTEDRA I

SEMINARIO Nº 8

Mecanismos de invasión, establecimiento y patogenia de

infecciones causadas por los Apicomplexa:
Toxoplasma gondii y Plasmodium spp.
 OBJETIVOS
•Reconocer las características biológicas de los Apicomplexa.

•Estudiar su proceso de invasión y establecimiento en la célula huésped.

•Conocer el ciclo de vida, la epidemiología e importancia clínica de los

Apicomplexa: Toxoplasma gondii y Plasmodium spp.

•Estudiar algunos mecanismos de patogenia de estos protozoarios.

CONTENIDOS
1.Ubicación taxónomica de los Apicomplexa.
2.Características morfológicas y de multiplicación.
3.Mecanismos de invasión y establecimiento en la célula huésped.
4.Generalidades y ciclo de vida de Toxoplasma gondii y Plasmodium spp.
5.Mecanismos de infección, respuesta inmune y su relación con la patogenia
de ambas parasitosis.
 UBICACIÓN TAXONÓMICA
Reino: PROTISTA

Subreino: PROTOZOA

Phylum: APICOMPLEXA

Subclase: COCCIDIA

Suborden: EIMERIINA

Género: Toxoplasma

Especie: T. gondii

Suborden: HAEMOSPORINA

Género: Plasmodium

Especie: P.vivax
P.ovale
P.falciparum
P.malariae
P. knowlesi (zoonótica-macacos)
 APICOMPLEXA: Generalidades
Complejo apical
Taquizoito de Merozoito de •Todos los miembros
Toxoplasma gondii Conoide Plasmodium falciparum
Anillo apical polar del phylum son
parásitos
Micronemas
Roptrias
Gránulos densos •Diferentes estadíos
Microtúbulos infectantes
subpeliculares
Complejo interno de
membrana

Mitocondria
•Únicamente se
Apicoplasto
replican
Nucleo intracelularmente
Réticulo
endoplásmico
Membraba plasmática
•Dentro de la células
huésped se desarrolla y
multiplica dentro de una
Polo posterior vacuola parasitófora.

Nature Review-Microbiology 2006

 APICOMPLEXA TISULARES
PARASITOS HETEROXENOS CON CICLOS DE VIDA
COMPLEJOS QUE INVOLUCRAN MAS DE UN HOSPEDADOR

Sexual
Gametas
Gamogonia Zigoto

Gametogonia Esporogonia

Merozoitos Esporozoitos
Merogonia
 Multiplicación Asexual en los APICOMPLEXA
ESQUIZOGONIA ENDODIOGENIA
(en merogonia y en esporogonia de Plasmodium sp.) (sólo en T. gondii en ciclo tisular en H.D. y H.I.)

Fisión múltiple de núcleos seguida de citocinesis Formación de dos células hijas dentro de la
dando como resultado múltiples células hijas célula madre

merozoitos

Nucleo esquizonte
ME

Mitosis múltiples citocinesis

Merogonia de Plasmodium spp durante de la fase

eritrocítica.

Meronte (Esquizonte)
de Plasmodium
falciparum

Striepen y col, 2008.

Fisión binaria longitudinal
En verde complejo interno
GIEMSA
de membrana
En rojo ADN nuclear
 Apicomplexa e invasión celular I
GLIDING Sebastion Håkansson TRAP/ MIC2:
•Es un proceso activo •familia de proteínas conservada en los
de penetración del Apicomplexa
parásito
•Conecta el motor de actina/miosina del
no fagocitosis parásito con la superficie de la célula
huésped mediante un ligando aún no
Movilidad por deslizamiento
(gliding) sobre substrato
determinado
Schmitz y col. 2008

Polo
apical
GLIDEOSOMA
. Compuesto por Complejo interno
CIM
de membranas
proteínas del parasito,
Incluidas moléculas
de actina
. Permite el avance por Actina/
tracción mediante miosina
polimerización y
despolimerización Membrana
unidireccional de la parasitaria
actina, el impulso de TRAP
motores de miosina e
superficie
interacciones ligando cel. Sibley y col, 2004
(TRAP/MIC)-receptor Dirección de motilidad huésped
(Ácido Siálico)
 Apicomplexa e invasión Membrana Externa

Roptrias
celular II
Micronemas

Complejo de
Proceso que se inicia con el membrana interno

reconocimiento de la célula a invadir

Adhesión Reorientación Invasión

Plasmodium sp. Toxoplasma gondii

TIPO CELULAR Hepatocitos (Esporozoitos) Enterocitos (Esporozoitos)

Glóbulos rojos (Merozoitos ) Todas las células nucleadas (Taquizoitos)

Mecanismo de •Unión de adhesinas a proteínas ubicuas (p.ej.
Uniones receptor -ligando específicas
reconocimiento Proteínas de superficie SAG1 y SAG3)
•CSP  proteoglicanos del hepatocito
•MSP
MSP--1 banda 3 del eritrocito •Inserción de proteínas del parásito en la
membrana de célula huésped?
Proteínas secretadas localmente
a través del polo apical (p.ej. RON 2, 4 y 5)
•EBA 175 (P. falciparum
falciparum))  glicoforina A
•DBP (P. vivax
vivax)) proteína Duffy
•RBP (de unión al reticulocito en P. vivax
vivax)) y
sus homólogos PfRh en P. falciparum
 Cinética de la Secreción en Toxoplasma
Apicomplexa: invasión y establecimiento
en la vacuola parasitófora
Interviene la secreción secuencial de proteínas de
tres organelas del complejo apical:
Micronemas Roptrias Gránulos densos

1.Micronemas 2. Roptrias 3.Gránulos densos

adhesión y Formación de la modificación de la vacuola parasitofora y
motilidad vacuola parasitófora entorno de la célula huésped
no-fusogénica y de
. uniónes móviles Red tubular y
trofozoito poros en la
Capping y exclusión vacuola
selectiva de proteínas parasitófora
de membrana del que permiten
hospedero el paso de
célula huésped
nutrientes

Reclutamiento
de RE y
mitocondrías
de la célula
huésped
alrededor de la
vacuola
Actualizado: Frénal M et al. 2017 Dos trofozoitos de T.gondi dentro de la vacuola parasitófora. C:Conoide;
HC célula huésped; M:mitocondria; N:Núcleo; R:roptrias
 TOXOPLASMOSIS

Zoonosis parasitaria Hospedero definitivo : felino

felino..
de distribució
distribución mundial Alta especificidad

Hospedero intermediario:
intermediario: Aves y mamíferos.
mamíferos.
Baja especificidad
Ciclo de vida de Toxoplasma gondii

Quistes tisulares

Fecalismo

Los gatos eliminan ooquistes únicamente durante su primoinfección

Elementos infectantes

• Contaminación de alimentos y agua por

ooquistes presentes en deyecciones del gato.
Elementos infectantes

• Ingesta de carne cruda o mal cocida.

Más relevante

• Trasplantes de órganos
Elementos infectantes

•Transmisión congénita: cuando la primoinfección

de la madre ocurre durante la gestación.
Transmisión humana de la Toxoplasmosis
Tejidos conteniendo bradizoitos
en las presas

ooquistes

Ooquistes Ooquistes ingeridos por

contaminan la Ooquistes animales
litera del gato. fecales
Suelo, agua y pastos
contaminandos con
ooquistes

> I ó 2 días de
maduración
Ooquistes
sobre Ooquistes
vegetales ingeridos
y frutas por animales
no
lavados

ooquistes

Tejidos conteniendo
ooquistes bradizoitos en carne
poco cocida o cruda

Taquizoitos
transmitidos
transplacen-
tariamente al Organos conteniendo
feto bradizoitos o sangre
con taquizoitos (muy
poco relevante!!!)
 El parásito atraviesa diferentes barreras biológicas
Atraviesa transversalmente epitelios y/o co-opta monocitos

Barrera hemato-encefálica Barrera sangre- retina

Placenta Mucosa intestinal

 IMPORTANCIA CLíNICA DE LA TOXOPLASMOSIS
• Se estima que el 13% de la población humana mundial esta infectada
por T. gondii (25% vacas, 30% cerdos).
•En una persona sana, sólo provoca síntomas leves.

•Enfermedad congénita:
Primoinfección de la madre durante la gestación
El 50% de madres transmiten la infección de no
ser tratadas.
Puede causar retardo mental, ceguera, parálisis
cerebral muerte intrauterina y aborto espontáneo.

•Individuos inmunocomprometidos (SNC)

Reactivación de infección latente (>95% casos)
Primoinfección

• Toxoplasmosis ocular
Tanto inmunocompetentes como
inmunocomprometidos

http://www.anlis.gov.ar/inp/, Instituto Nacional de Parasitología `Fatala Chabén´, 2017

 Mecanismos de control del huésped
Respuesta inmune innata.

Astrocitos
iNOS
R NO
IDO
W Kinurenina Deprivación de triptófano

IFN--
IFN
NK

Epitelio alveolar
IDO
W Kinurenina IDO: Indolamina 2,3-
2,3-dioxigenasa
W: Triptófano
R: Arginina
NO: óxido nítrico

Esquematizado a partir de Fujigaki y col., 2003 y Heseler y col., 2008

 Mecanismos de control del huésped
Respuesta inmune adaptativa

Respuesta inmune celular Respuesta inmune humoral:

principal brazo efector: Anticuerpos opsonizantes: Lisis medida
por complemento solo Ac contra antígenos
•Lisis de células infectadas estadío específicos (presentes en Taquizoitos no
•Inducir la formación de quistes tisulares. en bradizoitos)

Toxo aguda: IgA, IgE, IgM, IgG.

Toxo crónica: La IgG se detecta aún en

cronicidad  liberación ocasional de
taquizoitos?

Deprivación de
triptofano
IgM
IgG

Ac
IgA
IgE

Macrófago

0 0.5 1 2 4 6 12 18 24

citotoxicidad meses

Luder y col, 2006

 Evasión Respuesta Inmune innata

•Reclusión intracelular:
La invasión celular ocurre en menos
de 30 segundos, lo que disminuye
drásticamente el tiempo de
exposición con los Ac y el
sistema de complemento.

•Formación de una vacuola que no se fusiona

completamente con la célula huésped:
Le permite resistir la fusión fago-lisosomal típica. No hay acidificación

•Modificación de la membrana de la vacuola.

Inserta proteínas derivadas del parásito, para ganar nutrientes y manipular la
fisiología de la célula huésped

•Inhibe la producción de NO por MQ.

Inhibiendo la trascripción de iNOS.
 Evasión Respuesta Inmune celular
•Estimula la producción de citoquinas antiinflamatorias como IL-10, TGF-β
e IFN-α/β.

•Inhibe la producción de citoquinas inflamatorias como TNF-α e IFN- γ.

Inhibición mediada por HSP70 de la translocación de NF-κB .

•Inhibición de la expresión de
MHCII vía JakSTAT en MQ.

•Disminuye la producción de IL-12 por

células dendríticas

•Estimula la apoptosis de LT CD4+ e Inhibe la apoptosis de cél. infectadas

por el parásito.
Regulación positiva de moléculas antiapoptóticas, interferencia en la activación de caspasas
 T. gondii: de la invasión a la formación de quistes tisulares
y viceversa
PRIMOINFECCION
Taquizoíto
Respuesta inmune Bradizoíto
multiplicación rápida +/- 2 semanas
quistes tisulares
(multiplicación lenta; persisten por años))

•Cambios en el pH
•Proteínas de choque térmico
•Inhibición de actividad mitocondrial
•Presencia de óxido nítrico
•Inmunidad celular (IFN-gamma)

óxido nítrico
IFN-γ
TNF-alfa
IL-12
Linfocitos T

REACTIVACIÓN
Disminución de la respuesta inmune
La interconversión taqui  bradizoito es central en la patogénesis de la enfermedad
Medidas Preventivas
•No comer carne cruda o mal cocida.

•Lavarse las manos luego de manipular carne cruda.

•Lavar con abundante agua las frutas y verduras antes de consumirlas crudas.

•Lavar los utensilios y superficies que han estado en contacto con carne cruda o
vegetales sin lavar.

•Utilizar guantes y lavarse bien las manos luego de realizar trabajos de jardinería.

•Evitar contacto con sustancias que pueden estar contaminadas con heces de gato
( tierra, arena, etc).

•No alimentar a su gato con carne cruda.

•Monitorear serológicamente a las embarazadas

•Tratar embarazadas con infección aguda

•Hacer serología en donantes y receptores de órganos

 MALARIA
•Riesgo global: la mitad
de la población mundial
habita en zona de riesgo.

•Afecta especialmente
personas que viven en
los países más pobres.

•Entre el 90-92% de los

fallecimientos ocurren
en Africa

• 212 millones de casos

de paludismo
ocasionaron la muerte
de 429 000 personas
(2015).

•Más del 70% de las

muertes son en niños
menores de 5 años.
Hembra de Anopheles sp
Roll Back Malaria 2011; OMS, 2016.
 Distribución Mundial de la Malaria

Países o áreas donde existe transmisión de malaria

Países o áreas de riesgo con riesgo limitado de transmisión de malaria,

Países o áreas de riesgo de transmisión de Malaria, 2012

http://www.who.int/malaria/travellers/es/index.html
Distribución de la Malaria en Argentina
Actualmente NO se detectan casos autóctonos
Epidemiológicamente relevante: migraciones
desde países con alta endemicidad

Nivel 1: Máxima vulnerabilidad, presencia

vector y población migrante

Nivel 2: Presencia vector, afluencia

esporádica de población migrante.

Nivel 3: Presencia vector, ausencia de

casos autóctonos en 40 años.

Nivel 4: Sin antecedentes de transmisión

Vías de Transmisión:
- VECTORIAL
- Transfusional
- Con-natal
CICLO BIOLÓGICO DE PLASMODIUM SPP

merozoitos

esporozoitos
 Paroxismo malárico
y fase eritrocítica

• Malaria terciana maligna

fiebre alta e irregular (P. falciparum)

• Malaria terciana benigna

48h entre picos febriles (P. vivax y P. ovale)

• Malaria cuartana
72h entre picos febriles (P. malariae)

Modificado de Neva y Brown, 1994.

Paroxismo malárico

Adaptada de Karunaweera y col., 2003

 Patogenia de Malaria- Anemia
1. Destrucción intravascular de eritrocitos

2. Aumento de la eritrofagocitosis esplénica

3. Desvío de hierro y toxicidad de la hemozoina

4. Anemia hemolítica inmune

5. Diseritropoyesis

6. Modificación de la citoadherencia del eritrocito

sólo por Plasmodium falciparum

Pigmento malárico
 Fagocitosis de

Anemia Inmune /
parásitos libres

Fagocitosis de
GR parasitados

Fagocitosis de
GR noparasitados

Formación de
Diseritropoyesis
Hemólisis inmune

vesículas
Complemento

HEMÓLISIS

Promovida por:

• Expresión de Ag parasitarios
en la membrana celular de
eritrocitos infectados
Deseritropoyesis

• Fagocitosis
EPO

Citoquinas pro-inflamatorias • Lisis mediada por

Eritrofagocitosis Complemento
CLAVE

GR Parasitados IgG
• Modulación de la
GR no parasitados Eritrocito hemolizado
eritropoyetina
Precursor eritroide Antígeno parasitario

Linfocito T activado Trofozoíto de P. falciparum

Macrófago Médula ósea

 Modificación de la citoadherencia del eritrocito y su
relación con la patogenia
Formación de “knobs” por P. falciparum
“clumps”

citoadherencia

Rosetas

Extraído de Moreno y col., 2008

Citoadherencia y patogenia de P. falciparum
Proteínas parasitarias asociadas a la formación de “Knobs”

Glóbulo rojo con Glóbulo rojo sin

knobs knobs

Proteínas del
Banda 3
eritrocito
Proteínas
Glicoforina
parasitarias Banda 3
Glicoforina

Proteínas del
citoesqueleto

• PfEMP1 (P. falciparum erytrocite membrane protein)

• KAHRP (knob associated histidine rich protein)
Adaptada de Wiser y col., 2005
 Estructura y características de PfEMP-1
- PfEMP-1 es miembro de la Familia de genes var (altamente variable, 40-50
genes)

• Evasión del sistema inmune

• Citoadherencia diferencial

Región interdominio rica Dominio Duffy Dominio

en cisteína (CIDR) binding-like (DBL) transmembrana
Unión a CD36

DBL a

Dominio Dominio intracelular

Dominio formación Extracelular de unión a
de rosetas (variable) citoesqueleto y
KAHRP (conservado)

Adaptada de Wiser y col., 2005

Receptores de PfEMP-1 en el huésped
Condritín sulfato A E-selectina
Ácido hialurónico Trombospondina
ICAM-1

Cerebro Microvasculatura

Malaria Malaria Adhesión

Placentaria Cerebral microvascular

Malaria grave por P. falciparum

FALLA DE MÚLTIPLES
ÓRGANOS
Inmunopatogenia por Plasmodium falciparum

Malaria cerebral

vasodilatación

sinapsis

Malaria
Isquemia
Endotelio (cerebro) Efectos metabólicos cerebral

BEC: células endoteliales de cerebro

NO: óxido nítrico

Adaptada de Wiser y col., 2005

 Inmunopatogenia de Plasmodium spp.

Glomerulopatías

P. falciparum P. malariae
- Hemólisis - Complejos inmunes
- Hipoperfusión (citoadherencia) (Daño en la estructura
- Complejos inmunes del glomérulo)
 Evasión de la Respuesta Inmune I
1. Reclusión intracelular
2. Respuesta Inmune policlonal no protectiva
3. Variación antigénica
Variantes antigénicas de PfEMP1

Diferentes olas de parasitemia

PfEMP1 (P. falciparum erythrocyte membrane protein) es miembro de la

familia de genes var, exhiben un gran grado de variabilidad y tienen
expresión regulada
 MALARIA - PROFILAXIS
Atacar el parásito en el hospedero humano
-Tratamiento parasiticida del hospedero efectivo (resistencia)
-Quimioprofilaxis del viajero

Reducir el contacto con el vector

-Usar repelentes, ropa adecuada y mosquiteros embebidos en
repelentes
-Fumigación de la vivienda e implementación de mosquiteros en
las ventanas

Reducir la población del insecto vector

- Identificación y eliminación de los sitios de cría
- Adecuada aplicación de insecticidas para el control de estadíos
larvales y adultos
- Control biológico
Ejercicio 1. Identificar el protozoario involucrado en cada enunciado.
Cada afirmación puede corresponder a mas de un organismo o puede
que no se corresponda con ninguno de los microorganismos mencio
nados.

A- Toxoplasma gondii B- Plasmodium spp. C- Plasmodium falciparum

----- El ser humano es el hospedero intermediario.
----- Es una zoonosis.
----- Posee ciclo de vida directo.
----- Varios estadios parasitarios son elementos infectantes involucrados
en la transmisión.
----- Puede causar falla multiorgánica y fenómenos obstructivos en capilares
sanguíneos.
----- Transmisión por vía fecal-oral por contacto de persona-persona.
----- Puede existir transmisión congénita.
----- Posee reproducción asexual de tipo esquizogonia.
----- La reproducción sexual ocurre en el hospedero definitivo.
----- Uno de los mecanismos de transmisión de la infección es el fecalismo.
----- Posee alta especificidad de hospedero intermediario.
----- Posee una fase de su ciclo con localización intestinal.
Ejercicio 2. Completar el crucigrama utilizando los conceptos
aprendidos en clase.

10

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Ejercicio 3. Analizar las medidas profilácticas para cada infección.
Qué medidas tomar en cada caso? Porque?