Práctica 2 PURIFICACIÓN DE CAFEÍNA CONTENIDA EN BEBIDAS, Equipo 3

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Michelle Itzuri Torres Avitia 348895 Jesus Raul Mata Morales 348907

INTRODUCCIÓN

La cafeína es un compuesto orgánico natural, que está presente en alrededor de 60 especies

de plantas (Minig, 2014), su nombre sistemático es 1,3,7–trimetilxantina, derivada del grupo
de las xantinas. es una molécula destinada para fines farmacológicos, aunque, también es
empleada en la industria alimentaria en algunos tipos de refrescos derivados de la cola o en
bebidas energizantes.

Fig 1. Estructura molecular de la cafeína recuperada de (PubChem, 2022)

La cafeína es una metilxantina, como se ha explicado, es un componente de muchas especies

de plantas, pero la particularidad de estos compuestos es que presenta los siguientes grupos
funcionales: alqueno, amida y amina. La cafeína, siendo un alcaloide, puede ser producida
por medio de la adenosina, aunque también se puede encontrar teobromina (Aznar. 2011), lo
cual, en algunos análisis puede hacer una cuantificación variable y que no sea tan pura y
confiable (aclarando que en esté experimento se puede mezclar otra sustancia), pero el punto
es entender que la técnica que vamos a utilizar es de mayor carácter cualitativo, no es una
técnica recomendada para análisis cuantitativo, pero para fines educativos es la que sienta las
nociones de una extracción formal.

La cafeína tiene un mecanismo de acción es similar al de una “droga psicoactiva y

estimulante debido a su acción antagonista no selectiva de receptores de adenosina” (Sánchez
Maroto, 2015), la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA, por sus siglas en
inglés), “Ha mencionado 400 miligramos al día —que son de cuatro a cinco tazas de café—
como una cantidad que en general no se relaciona con efectos negativos peligrosos. Sin
embargo, hay un amplio grado de variación en los sensibles que son las personas a los efectos
de la cafeína y qué tan rápido la metabolizan (asimilan)” (Office of the Commissioner, 2018),

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mientras que, la Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda un límite de 300 mg

de cafeína/día, considerando una ingesta de 500 mg como tóxica y peligrosa (Minig. 2014).
Por lo tanto, el responsable consumo de alimentos, bebidas y fármacos debe ser bastante
regulado, es por esto que las empresas se ven obligadas a reportar las cantidades que
contienen los productos.

En este caso, se realizó un proceso de extracción líquido-líquido, el cual se describe como

una técnica de separación en la cual se deben tener dos fases líquidas que sean inmiscibles
entre sí, debido a la diferencia de solubilidades se va a realizar una especie de reparto en la
cual se va a transferir la sustancia (encuentra en la fase acuosa) hacía donde sea más soluble
(fase orgánica) por la adición del disolvente (diclorometano), para posteriormente poder
obtenerla de forma más sencilla y así obtener el analito (Minig, 2014).

Se realizó el análisis en una bebida energizante de la empresa: Monster Energy®, modelo de

bebida: Zero Ultra Watermelon, la cual reporta la siguiente información: “Consumir
Responsablemente: Alto Contenido en Cafeína. No recomendado para niños, mujeres
embarazadas o lactantes, o personas sensibles a la cafeína (32 mg/100 ml). Consumir
responsablemente como parte de una dieta equilibrada y un estilo de vida saludable”
(Monster energy. 2022). Como podemos ver se reporta una cantidad de 32 mg/100 ml, se
esperaría que en la alícuota que se tomó se logren extraer, por lo menos, 16 mg/50 ml, así que
para saber si se logró extraer una cantidad considerable, para tener certeza que se logró hacer
la extracción correctamente podría ser tomado el valor que nos dé la diferencia de pesos.

OBJETIVOS.-

● Aislar cafeína de una bebida energizante, empleando carbonato de sodio para llevar a
pH básico la bebida y después, con el diclorometano realizar la extracción y
posteriormente destilar para finalmente cristalizar la cafeína y comparar la
información nutrimental reportada con la obtenida en el experimento.
● Identificar y aislar cafeína en bebidas energizantes.

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MATERIALES Y EQUIPO.-

● Vasos de precipitado de 250 mL ● Vidrio de reloj

● Equipo de destilación ● Probeta 25 mL
● Parrilla de calentamiento ● Termómetro
● Matraz de Destilación ● Agitador
● Embudo de Separación

REACTIVOS.-

● Peróxido de hidrógeno

Biopack 30% p/v (100 vol) puro. CAS[7722-84-1]. Code: 9820-08

● Ácido clorhídrico

2,5l Macrow 38.0% Lot: 22002. CASNO: 7647-01-0

● Carbonato de sodio

Na2CO3 500g lote 91654 CAD: 30/09/2024 CAS: 497-19-8 Almacenar: 5-30C

● Hidróxido de amonio

NH4OH CAS[1336-21-6] . Biopsck 1000ml Cod. 1671.08

● Diclorometano

CH2Cl2. 4 litros. Lote: 91835. CAD: 30/10/2021. CAS: 75-09-2 CTR 203040

P.M. Cafeína - 194.19 g/mol

● Bebida carbonatada adicionada con cafeína y baja en calorías. (Monster
Energy Ultra Paradise).

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METODOLOGÍA.-

Fig 2. Proceso de extracción, cristalización e identificación de cafeína en una muestra obtenida de una bebida
energizante

En vaso precipitado de 250 mL, se colocan 50 mL de la bebida energética y se desgasifica

con la varilla de vidrio; ya que este desgasificada se mide el pH (debe de estar entre 10-12) se
le agrega carbonato de sodio para lograr el pH indicado, la disolución neutra se transfiere al
embudo de separación y añadir el diclorometano tiene que ser el mismo volumen que la
solución, después se procede a agitar varias veces el embudo de separación para mezclar las
fases y despresurizarlo, después se pondrá en el anillo metálico para dejar que las fases se
separen. La solución acuosa es extraída dos veces. Las extracciones de diclorometano se
combinan y el disolvente se destila; la cafeína se cristaliza en forma de agujas, después se
procedió a agregar un poco de acetona y se calentó a 300 grados centígrados, se le añadieron
5 gotas de peróxido de sodio y ácido clorhídrico que va dar un color rojo sangre, después se
le añade una gota de hidróxido de amonio y si hay presente cafeína se dará el color
violeta/morado.

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RESULTADOS.-

● Contenido aproximado de cafeína en bebida: 32 g/100 m

Por diferencia de los pesos del vidrio de reloj, se obtuvo un peso de 14.6 mg. Tomando en
cuenta éste valor se puede calcular un porcentaje aproximado de extracción. Si en el
experimento se tomaron 50 mL de bebida energética, el valor teórico sería de 16 g/50 mL.

Imagen 1.- Cristales de cafeína obtenidos de la extracción.

Imagen 2.- Se muestra un cambio en la coloración de los cristales, esto debido a que se le agregaron 5 gotas de
HCl y de H2O2

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Cuando la cafeina es expuesta a un medio ácido por acción del HCl, esta es protonada en el

nitrogeno que se encuentra en forma de alqueno, por ende se estabilizan sus cargas, esto se

observa en el cambio de color rojo (Imagen 2). Al agregar una gota de hidróxido de amonio el

-OH actúa como nucleófilo lo que hace que el nitrogeno en forma de alqueno pierda un hidrógeno,

dejando la molécula como un alcaloide libre, el par de electrones libres en la molécula fomentan

su basicidad, por lo que se observa un cambio de color que va del rojo a violeta (Imagen 3).

(Arango, 2008)

Imagen 3.- Se le agrega 1 gota de NH₄OH y se aprecia una tonalidad violeta, lo que indica que existe presencia
de cristales de cafeína

DISCUSIÓN DE RESULTADOS.-

El método electo, una extracción líquido-líquido con posterior cristalización por evaporación
del disolvente, resulta ventajoso para la identificación de cafeína en bebidas energizantes,
dicho método, aprovecha las aminas presentes en la estructura de esta molécula para
favorecer su precipitación, esto se logra alcalinizando el pH de la solución por medio de
carbonato de sodio con anterior desgasificación de la bebida para evitar que la formación de
ácido carbónico acidifique la solución, está precipitación permite la formación de cristales de
cafeína durante la evaporación del solvente.

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El disolvente orgánico utilizado en el proceso de extracción líquido-líquido fue el

diclorometano, un excelente solvente para la extracción de cafeína debido a sus
características polares, punto de ebullición y costo. Es un compuesto polar que disuelve la
cafeína mejor que el agua, su bajo punto de ebullición permite la evaporación rápida del
solvente conservando el analito en forma cristalina (Calle Aznar, S., & Rojo Riós, A., 2011)
así como también es barato, se utilizó un aproximado de 48 mL en la extracción, lo que
equivale en costo a una cantidad de 18 MXN.

Finalmente se confirmó la presencia de cafeína por medio de la obtención de una coloración

violeta en los cristales obtenidos, prueba fundamentada en el mecanismo de reacción descrito
en la sección de resultados.

Sin embargo, este método no se recomienda para análisis de carácter cuantitativo, debido que
a la presencia de otros componentes apolares en la bebida resultan en una extracción con
impurezas, por lo que la cantidad recuperada sería errónea.

Si se desea una determinación cuantitativa sensible, precisa y exacta es recomendada la

realización de una cromatografía líquida de alta eficacia. (Gerald, I., Arthur, D., & Adedayo,
A., 2014).

DISPOSICIÓN DE REACTIVOS.-

Carbonato de Sodio AR (Anhidro) “CTR Scientific”

● El Carbonato de sodio debe almacenarse en el envase original, se deben mantener los
contenedores debidamente rotulados y cerrar el envase herméticamente para evitar la
formación de nubes de polvo. Para la disposición de este reactivo, se va a tomar como
desecho “no peligroso”, el material puede ser desechado en un relleno sanitario de
acuerdo con los reglamentos gubernamentales.

Cloruro de Metileno AR “CTR Scientific”

● Para el almacenamiento de Diclorometano se debe mantener el envase cerrado
herméticamente. Consérvese únicamente en el recipiente de origen, en lugar fresco y
ventilado. Almacenar alejado de materiales inflamables, ácidos o productos que

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promuevan una reacción exotérmica. Para su disposición NO desechar por la tarja ni

alcantarillado, la eliminación del producto sobrante y no reciclable debe realizarse a
través del confinamiento de los residuos para su eliminación.

HCl “Macron Chemicals”

● Para el almacenamiento del Ácido clorhídrico se debe colocar en un recipiente
cerrado herméticamente de preferencia de vidrio con coloración ámbar, evitar el uso
de recipientes de metal para su contención. Se debe mantener en un lugar con bastante
ventilación. Para la contención y disposición del reactivo es necesario neutralizar con
Carbonato de Sodio y medir el pH para después colocarlo en un contenedor exclusivo
para residuos químicos.

Hidróxido de Amonio “Fisher Chemical”

● El hidróxido de amonio reacciona con muchos metales pesados, por lo que se deberá
mantener alejado de estos metales (Plata, Cobre, Plomo y Cinc) ya que se puede
generar una violenta explosión. Almacenar en un lugar fresco y seco, en un envase
cerrado herméticamente y mantenerse en posición vertical para evitar pérdidas. Para
su disposición se deberá empapar con un material absorbente e inerte y eliminar como
“desecho especial”.

Peròxido de Hidrógeno “Biopack”

● El Peróxido de hidrógeno deberá ser almacenado solamente en contenedores
ventilados y transferidos solamente en forma autorizada. Los contenedores se deberán
mantener en áreas frescas fuera de luz solar directa y lejos de combustibles. Para su
disposición se deberá emplear un absorbente inerte, tal como arena o vermiculita.
Colóquelo en un recipiente adecuadamente rotulado y cerrado. El material derramado
puede ser recogido y recuperarse, o diluirse con abundante agua y desecharse según la
normatividad.

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CONCLUSIÓN.-

Se aisló cafeína de una bebida energizante, mediante un proceso de extracción líquido-líquido

con posterior cristalización por evaporación del disolvente, su presencia fue identificada por
medio de una coloración violeta al agregar hidróxido de amonio.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.-

● Arango Acosta, G. J. (2008). ALCALOIDES Y COMPUESTOS NITROGENADOS.

Facultad de Química Farmacéutica. Recuperado el 30 de septiembre de 2022, de
http://dica.minec.gob.sv/inventa/attachments/article/856/alcaloides.pdf
● Aznar, S. C. (2011). Determinación analítica de la cafeína en diferentes productos
comerciales. Universidad Politécnica de Catalunya (UPC) Barcelona España.
● Calle, S. (2011). Determinación analítica de la cafeína en diferentes productos
comerciales. Barcelona: Universitat Politècnica de Catalunya (UPC).
● Espinoza-Tapia, J. C., Rivera-Becerril, E., Hernández-Martínez, I., Rodríguez-López,
M., Cruz-Rangel, R. C., Vigueras-Ramírez, J. G. (2018). Extracción y cuantificación
de cafeína en diferentes bebidas empleando HPLC.
● Gerald, I., Arthur, D. & Adedayo, A. (2014). Determination of CaffeineIn Beverages:
A Review. American Journal of Engineering Research (AJER), 3(8).
● Melgar Meza, M. (2015). Determinación de cafeína en bebidas energizantes
comercializadas en el distrito de Miraflores-Lima.
● Minig, H. (2014). Determinación de cafeína en muestras de consumo masivo
mediante cromatografía HPLC.
● Monsterenergy. (2022). Recuperado el 29 de septiembre de 2022, de
https://www.monsterenergy.com/es/es/products/monster-ultra/zero-ultra-watermelon
● National Center for Biotechnology Information (2022). PubChem Compound
Summary for CID 2519, Caffeine.
● Office of the Commissioner. (2018, 12 diciembre). Al grano: ¿cuánta cafeína es
demasiada? U.S. Food and Drug Administration.
● Sánchez Maroto, M. (2015). El café, la cafeína y su relación con la salud y ciertas
patologías.