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Guía de trabajos prácticos de Embriología. 1. Gametogénesis

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Ernestina S. Teisaire Adriana Roldán

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Ana G. Moreno
Complutense University of Madrid
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 Reduca (Biología). Serie Embriología. 3 (1): 1-13, 2010.
ISSN: 1989-3620

Guía de trabajos prácticos de Embriología

1. Gametogénesis

Ernestina Susana Teisaire1. Olga Lucrecia Nieto1. Isabel Adriana Roldán1.

Zandra Ulloa Kreisel1. María López Aragón1. Ana García Moreno2.
1
Cátedra de Embriología y Anatomía Comparadas. Facultad de Ciencias Naturales e I.M.L. Universidad
Nacional de Tucumán. Miguel Lillo 205 – 4000. S.M. de Tucumán. Argentina.
eteisaire@csnat.unt.edu.ar
2
Departamento de Zoología y Antropología Física. Facultad de Ciencias Biológicas.
Universidad Complutense de Madrid. c/ José Antonio Novais, 2. 28040 Madrid. España.
agmoreno@bio.ucm.es

Resumen: En esta práctica se estudiarán los procesos de formación de las líneas

germinales masculina y femenina, tomando como ejemplos dos grupos de
Vertebrados: Anfibios y Mamíferos.

Palabras clave: Ovogénesis. Ovocito. Vitelogénesis. Envolturas. Espermatogénesis.

Espermiogénesis. Espermatozoide. Determinación de la viabilidad espermática.

OBJETIVOS

Reconocer los elementos celulares de la línea germinal femenina y de los

diferentes tipos de envolturas.

Reconocer los elementos celulares de la línea germinal masculina y determinar

la viabilidad espermática.

MATERIAL BIOLÓGICO

Ovarios y testículos de anfibios (anuros) y mamíferos (ratas), fijados en formol.

Preparaciones histológicas. Ovocitos de anfibios anuros en diferentes estadios de
maduración. Sapos y ratas.

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ISSN: 1989-3620

MATERIAL DE LABORATORIO

Cajas de Petri. Cajas de Petri con base de parafina negra. Ansas de cabello. Aguja
para desmedular. Soluciones fisiológicas (Holtfreter 10% y Tyrode). Instrumental y
bandejas de disección. Guantes de látex. Hilo de algodón. Algodón. Éter o cloroformo.
Varillas y portaobjetos de vidrio. Colorante: eosina amarillenta. Equipo óptico para
realizar las observaciones.

TÉCNICAS

Técnicas de inmovilización

Anestésicos

Todas las experiencias traumáticas realizadas sobre los animales deben

efectuarse previa anestesia de los mismos, con el objeto de evitar el dolor hasta
el final del experimento". Los anestésicos y vías de administración son diversos,
su elección depende del animal, ya que varía la sensibilidad ante una misma
droga. También depende del tipo de experiencia, puesto que cada anestésico
ejerce una acción diferente sobre los distintos sistemas orgánicos al influir de
manera variable en las distintas regiones del sistema nervioso, deprimiendo en
mayor o menor grado las funciones orgánicas, ocasionando alteraciones o el
enmascaramiento de los resultados del experimento.

Anestésicos volátiles. Éter,cloroformo, etc.

Materiales. Ratas de laboratorio (material biológico). Campana o recipiente de

vidrio. Algodón. Éter etílico o sulfúrico o cloroformo. Pinza Kocher.

Procedimiento

 Colocar el animal bajo una campana de vidrio e introducir simultáneamente

un algodón embebido en éter etílico o cloroformo. El animal está
completamente anestesiado cuando al pinzar la musculatura abdominal no
reacciona.

 Observar el comportamiento de una rata constatando: inquietud,

respiración, actividad cardiaca, reflejos, etc.

 Compare el comportamiento en el animal anestesiado con el normal.

Inmovilización por destrucción medular en anfibios

Materiales. Material biológico: sapo. Aguja para desmedular.

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Procedimiento

Se toma un sapo teniendo la precaución de no tocar las glándulas parótidas.

Con la otra mano se imprime movimientos de flexión a la cabeza del animal con
el objeto de encontrar la interlínea occipito-atloidea, ya que el eje sobre el cual
se efectúa este movimiento coincide con la misma.

Una vez ubicada ésta, se introduce en la línea media dorsal la aguja de

desmedular penetrando unos pocos milímetros de manera perpendicular, hasta
alcanzar el canal medular (se manifiesta porque el animal presenta
movimientos convulsivos). Se impulsa la aguja en sentido caudal. Si se introduce
con facilidad significa que la aguja está correctamente ubicada en el canal; a
continuación se efectúan movimientos en sentido posterior varias veces con el
objeto de obtener una buena destrucción medular.

Cuando la maniobra se realiza constantemente la aguja se desliza con facilidad,

puede haber evacuación de orina y el signo más importante es que el animal
queda completamente flácido y sin tono muscular.

Hipofisectomía

Se puede realizar en Anfibios (sapo) o en Mamíferos (rata) con un procedimiento

diferente para cada caso.

Durante el procedimiento tratar de observar la ubicación. Forma y vascularización

de la glándula hipófisis.

Procedimiento en Anfibios

En primer término se procede a desmedular el animal. Luego se coloca sobre

una planchuela en posición cúbito-dorsal. Se fija la cabeza con alfileres y se abre
la boca cortando las comisuras con tijeras para ampliar el campo de disección
(Fig. 1). A continuación se separa la capa mucosa que recubre los huesos del
techo de la boca, se secciona con cizalla en cuatro puntos dispuestos en cruz
que corresponden a las láminas óseas del esfenoides, la denominada silla turca,
lugar de ubicación de la hipófisis.

En un siguiente paso se trata de levantar con pinzas y con sumo cuidado el

hueso seccionado, inmediatamente por debajo se observa la glándula que se
diferencia del tejido circundante por su forma arriñonada definida y de color
rosado por la intensa vascularización. Estas características pueden observarse
con más detalle bajo la lupa (Fig. 2).

Una vez extraída la hipófisis, colocarla en una solución salina si es utilizada en el

momento, o bien conservarla en vaselina líquida o glicerina a 4º C (en
heladera).

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Figura 1. Exposición del paladar y extracción de la hipófisis.

Figura 2. Sección de silla turca con la hipófisis adherida.

Preparación de soluciónes fisiológicas

Para anfibios

Para anfibios es utilizada la solución de Holtfreter

ClNa ...................................5,5 g
ClK ...................................0,05 g
Cl2Ca .................................0.1 g
H2O bidestilada ............1000 ml

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Se diluye 1: 9 con agua bidestilada. Hacer hervir dos veces y luego agregar en
frío 0,2 g de NaHCO3 por litro (esta sustancia deberá ser esterilizada con estufa
a seco).

Para mamíferos

Para mamíferos se utiliza la solución Tyrode gr/ml

ClNa ...................................8 g
ClK ...................................0,2 g
ClCa .................................0,2 g
MgSO4 ...........................0,15 g
NaHCO3 ......................1000 ml

Cantidad suficiente para 1.000 cc de agua destilada. El agua destilada debe

airearse antes de preparar la solución.

DESARROLLO DEL TRABAJO PRÁCTICO

Estudio de los ovarios

Colocar en una cubeta o caja de Petri con una solución de Holtfreter al 10%, un
ovario de una hembra de anfibio anuro adulta y observar sin colorantes las siguientes
estructuras: gránulos de pigmento, membranas ováricas, vasos sanguíneos y ovocitos.

A continuación observar el grado de diferenciación (crecimiento) en que se

encuentran los ovocitos y completar en la foto de la figura 3 las estructuras señaladas.

Figura 3. Corte histológico en ovario de sapo (Rinella arenarum).

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Luego en este mismo material (ovario fijado), observar en la lupa y clasificar los
ovocitos de acuerdo a los diferentes momentos de la vitelogénesis. Para ello emplear
por comparación el trabajo de Valdez Toledo (1978), que se le facilitará en el trabajo
práctico.

Observar cortes de ovario en preparaciones histológicas, preferentemente de

Anfibios y Mamíferos a fin de:

Destacar las diferencias estructurales de las gónadas.

Reconocer los diferentes tipos celulares de la línea germinal.

Estudio de los testículos

Observar preparados histológicos de testículos de Anfibios y Mamíferos (sapo y

conejo).

Diferenciar y señalar en la foto de la figura 4 los tipos celulares de la línea

germinal: espermatogonia, espermatocitos I y II, espermátide y espermatozoide.

Figura 4. Corte histológico de testículo de conejo (Oryctolagus cuniculus).

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Determinación de la viabilidad espermática (aplicable a espermatozoides de

Vertebrados)

Obtención de las gametos masculinas de sapo (Rinella arenarum) por

macerado testicular

Procedimiento

Desmedular un macho adulto.

Hipofisectomizar.
Realizar la disección como se indica en la figura 5 y localizar los testículos.
Extraer los testículos, colocar en solución salina de Holtfreter al 10% y macerar.
En un portaobjeto recoger con pipeta una gota de la suspensión espermática y
llevarla al microscopio a fin de verificar la motilidad.

Figura 5. Disección de sapo (Rinella arenarum).

Obtención de gametos masculinas en rata blanca de laboratorio

Procedimiento

Anestesiar el animal con el éter o cloroformo.

Realizar un corte ventral siguiendo las líneas punteadas y observar la anatomía
interna del animal, (Fig. 6). Luego cortar con tijeras finas y separar la piel que
cubre el escroto, situado en posición abdominal posterior, (Fig. 7).

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Figura 6. Líneas de disección de rata blanca de laboratorio.

Figura 7. Segundo paso de la disección de rata blanca de laboratorio.

Proceder de la misma forma con la membrana transparente que rodea a cada

testículo que se encuentra acompañado por el epidídimo (Fig. 8).

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Figura 8. Tercer paso de la disección de rata blanca de laboratorio.

Ligar los extremos del conducto del epidídimo con hilo de algodón y luego
extraerlo para colocarlo en una caja de Petri conteniendo solución fisiológica de
Tyrode (Fig. 9).

Figura 9. Testículo y epidídimo extraídos durante la disección.

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Reconocer las tres regiones del epidídimo (cabeza, cuerpo y cola); y separarlas
por medio de ligaduras con hilos de algodón.

Aislar cada región en cajas de Petri. En cada una realizar cortes con tijera a fin
de liberar los espermatozoides de los túbulos seminíferos. Extraerlos con
pipetas Pasteur, jeringas o agujas de tuberculina.

El material extraído se emplea para la observación en portaobjetos con una

gota del colorante Eosina (Eosina amarillenta al 0.5%).

Observaciones

Como el objetivo del experimento es analizar la viabilidad espermática en cada

una de las regiones del epidídimo, se recomienda no mezclar el material
biológico ni el instrumental cuando se manipule cada región.

Observación del material en microscopio óptico

Procedimiento

Preparar una solución de Eosina al 0.5% en la solución fisiológica para

mamíferos.

Colocar y mezclar en un portaobjeto una gota de material a observar y una gota

de la solución de Eosina. Dejar de 2 a 3 minutos y observar (esta coloración
permite observaciones de hasta 3-4 horas).

Interpretación de los resultados

Espermatozoides coloreados e inmóviles: muertos.

Espermatozoides no coloreados e inmóviles: vivos.
Espermatozoides no coloreados y móviles: vivos y aptos para capacitar.

Nota: Cuando el porcentaje de espermatozoides muertos es igual o mayor al 5%

la fertilización será nula.

BIBLIOGRAFÍA

Valdez Toledo, C. L. 1978 La Maduración ovocitaria de Bufo arenarum adulto en función

del período estacional. Tesis Doctoral. Facultad de Ciencias Naturales. Universidad
Nacional de Tucumán.73 pp.

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Recibido: 1 julio 2009.

Aceptado: 2 enero 2010.

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