Enfermedades del tracto respiratorio superior

Laboratorio de bacteriología médica

Reporte 3

Equipo 1:

María Fernanda Pantoja Trujillo

Cynthia Itzel Arredondo Desiderio
Ximena Valdés Sánchez

Universidad de Guanajuato
Licenciatura en químico farmacéutico biólogo
Ago-Dic 2024
Anexo 1. Exudado faríngeo
Fundamento

Las infecciones del tracto respiratorio superior son las más frecuentes en la especie humana.
El tracto respiratorio superior está formado por diversas áreas anatómicas conectadas entre
sí. Estas áreas las cubre el mismo tipo de tejido epitelial y tienen mecanismos de defensa
similares, por lo que las infecciones en esta zona se causan en su mayoría por los mismos
microorganismos. La boca, las fosas nasales y la faringe son cavidades donde habita una
gran cantidad de microorganismos, ya que están colonizadas por una flora abundante, lo que
las convierte en zonas sépticas.

Más del 70% de las infecciones del tracto respiratorio superior son causadas por virus, entre
los que se incluyen rinovirus, adenovirus, coronavirus, virus parainfluenza A y B, virus de la
gripe, virus coxsackie A, así como otros como los enterovirus, el virus de Epstein-Barr, el virus
del herpes simple tipo I y II, y el citomegalovirus.

En el caso de los niños de entre 5 y 10 años, entre el 10% y el 20% de las faringitis agudas
son causadas por la bacteria Streptococcus pyogenes. Sin embargo, en niños menores de 3
años, la mayoría de las faringitis agudas son originadas por virus.

Un cultivo de exudado faríngeo, también conocido como prueba estreptocócica, consiste en

tomar una muestra de la garganta usando un hisopo para buscar bacterias del grupo A de
Streptococcus, que son la causa más común de la faringitis estreptocócica. Estas bacterias
también pueden causar otras enfermedades, como la escarlatina, abscesos y neumonía.

La muestra recolectada frotando la parte posterior de la garganta con un hisopo se coloca en

un medio especial que facilita el crecimiento de bacterias en el laboratorio. A través de
pruebas químicas, se identifica el tipo de infección. Si no crecen bacterias, el resultado es
negativo, lo que significa que no hay una infección por estreptococos.

La faringitis estreptocócica es una infección causada por bacterias que inflama la garganta y
las amígdalas, lo que provoca dolor al tragar. Además, pueden aparecer manchas o una capa
amarillenta en la garganta y las amígdalas, y los ganglios del cuello pueden hincharse.

Antes de una prueba de exudado faríngeo se le indica al paciente:

• No tomar antibióticos ni aplicar medicación local durante 48 horas previo al estudio,

salvo indicación médica.
• No ingerir alimentos o agua como mínimo en las 3 horas previas a la toma de muestra.
• Asistir al Laboratorio sin aseo bucal.

Técnica

1. Se sujeta la lengua del paciente con el abatelenguas y se frota con firmeza la pared
posterior de la garganta (orofaringe) con el hisopo de algodón seco y estéril. Tener
cuidado de no tocar la epiglotis para no provocar el vómito en el paciente.
 2. El hisopo se introduce en el tubo de ensayo (que contiene solución salina estéril), la
parte del hisopo que contiene la muestra se mantiene dentro del tubo, el resto se corta
y se desecha, el tubo se cierra perfectamente y se mantiene a 4ºC.
3. Cada tubo se marca colocando el nombre del paciente y la fecha de la toma.

Reactivos
• Abatelenguas
• Hisopo estéril
• Tubo de ensayo con solución salina estéril

Resultados esperados
No aplica

Interpretación
No aplica

Anexo 2. Exudado nasal Comentado [MT1]: .

Fundamento Comentado [MT2R1]: @XIMENA VALDES SANCHEZ

El exudado nasal es una técnica que permite la recolección del
moco de la nariz. Permite recolectar en microbiota de la nariz, virus y bacterias asociados a
un proceso infeccioso. El hisopado nasal es una técnica que permite la recolección del moco
de la nariz. Permite recolectar en microbiota de la nariz, virus y bacterias asociados a un
proceso infeccioso.

Técnica
1. Sentar al paciente en un asiento de toma de muestra, o en su defecto, un lugar que
se encuentre cómodo. Posteriormente, acomodar su cabeza contra la pared, en donde
las fosas nasales queden viendo hacia el personal de salud.
2. Posteriormente, con el dedo índice y el pulgar de la mano no dominante, apoyarse y
levantar la punta de la nariz para visualizar el interior de las fosas nasales.
3. Introducir el hisopo aproximadamente 3 cm posterior a la fosa nasal. Rotar
suavemente el hisopo dentro de la cavidad.
4. Retirar el hisopo sin que toque otra superficie y repetir el mismo procedimiento en la
otra nariz.
5. Por último, almacenar el hisopo en un medio de transporte, o en su defecto, en un
medio estéril.

Reactivos
• Hisopo de nylon estéril.
• Tubo de ensayo con solución salina estéril

Resultados esperados
No aplica

Interpretación
No aplica
Anexo 3. Observación microscópica en fresco.

Fundamento
Existen diversos tipos de infecciones que pueden afectar el sistema respiratorio. El hisopado
nasal ayuda a los profesionales de la salud a identificar qué tipo de infección tiene una
persona, permitiéndoles así decidir el tratamiento adecuado. Esta prueba se realiza
recolectando una muestra de células del interior de las fosas nasales o de la nasofaringe, que
es la parte superior de la nariz y la garganta. Con la metodología, se identifican los virus y
bacterias que causan síntomas de las vías respiratorias altas; por ejemplo:

• Bordetella pertussis
• Neisseria meningitidis
• Staphyloccus aureus
• Staphyloccus aureus
• Infecciones virales como la influenza o el virus sincitial respiratorio o SARS-CoV-2

La presencia de cualquier virus, bacteria u hongo que causa enfermedades significa que estos
microorganismos pueden estar causando la infección. Algunas veces, microorganismos como
el Staphylococcus aureus pueden estar presentes sin causar enfermedad.

La alteración de los eosinófilos en una muestra de moco nasal, generalmente se utiliza para
detectar inflamación de las vías respiratorias, provocada por ciertas afecciones, como rinitis
alérgica, pólipos, sinusitis, infecciones o afectaciones por algunos medicamentos.

El moco nasal se encuentra constituido en 95 % por agua, 3 % de material orgánico y 2 %

de minerales, formando una barrera entre la mucosa y el aire que se inspira.

Técnica
1. A partir del hisopo usado en la toma de la muestra, se prepara una extensión de la
muestra sobre un portaobjetos.
2. Se deja secar a temperatura ambiente.
3. Se observa al microscopio a 100X.

Reactivos
No aplica

Resultados esperados
Células epiteliales 1-5 células por campo.
Leucocitos 0-5 células por campo.
Bacilos o cocos 1-5 por campo.

Interpretación
-Alto número de células epiteliales: contaminación de la muestra con células de la cavidad
bucal.
-Leucocitos:
 • 5-10eucocitos por campo: Puede indicar una inflamación leve o crónica.
• 10-20 leucocitos por campo: Puede sugerir una infección moderada.
• >20 leucocitos por campo: Indica una fuerte respuesta inflamatoria, generalmente
asociada a una infección bacteriana aguda.

-Bacilos o cocos:

• Infección bacteriana leve: Entre 5 y 10 bacterias por campo.

• Infección bacteriana moderada: Entre 10 y 20 bacterias por campo.
• Infección bacteriana severa: Más de 20 bacterias por campo, lo que sugiere una
infección activa, como faringitis estreptocócica o por Staphylococcus.

Anexo 4. Inoculación en agar de exudado nasal y faríngeo.

Fundamento
Tanto para el exudado nasal como para el faríngeo debe utilizarse como medio de cultivo
agar sangre de carnero, ya que la misma no permite el crecimiento de Haemophilus
hemolíticos. Este medio tiene la característica de permitir el crecimiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis. Las reacciones
de hemolisis se distinguen en tres:
• Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso
alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a
metahemoglobina, compuesto de color verdoso por el peróxido de hidrógeno
generado por los microorganismos.
• Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante
alrededor de la colonia en estudio.
• Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no
presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia.
Streptococcus pyogenes o estreptococo beta hemolítico del grupo A puede causar numerosos
procesos infecciosos que abarcan desde faringitis o infecciones cutáneas hasta
enfermedades invasivas como bacteriemia, artritis séptica, neumonía, síndrome del shock
tóxico o sepsis puerperal.

Técnica
1. Se debe colocar el hisopo sobre una sexta parte de la placa, rotando el mismo, para
que toda la superficie del hisopo entre en contacto con el agar.
2. Se estría la superficie de la placa con un asa esterilizada en un tercio de la placa.
3. Se esteriliza el asa nuevamente y la estría realizada anteriormente es el inoculo para
realizar la estría en un la siguiente Re tercera parte de la placa.
4. Por último, se realiza la última estría usando como inoculo la segunda estría que se
realizó en el punto 3.

Reactivos
Cultivo agar sangre de carnero.

Resultados esperados
Colonias beta hemolíticas.
Interpretación

• Los estreptococos beta-hemolíticos producen zonas de hemólisis claras alrededor de

cada colonia.
• Los estreptococos alfa-hemolíticos (comúnmente llamados estreptococos del grupo
viridans) quedan rodeados por una zona con anomalía de coloración verdosa debida
a la hemólisis incompleta.
• Los estreptococos gamma-hemolíticos son no hemolíticos.

Anexo 5. Tinción de Gram

Fundamento
La tinción de Gram es el procedimiento más habitual de tinción en microbiología, y
normalmente se usa como primer paso para la caracterización de bacterias recién aisladas.
Es una tinción diferencial debido a que tiñe de coloraciones diferentes a los distintos tipos de
células. Según el resultado de esta tinción las bacterias se pueden dividir en dos grupos, las
bacterias grampositivas que adquieren una coloración morada y las gramnegativas que
poseen una coloración rosada (Figura 10). Los dos colores diferentes por esta tinción se
deben a las diferencias en la estructura de la pared celular de las bacterias.

En la tinción de Gram se forma un complejo insoluble entre el cristal violeta y el yodo en el

interior de la célula. En las bacterias gramnegativas, este complejo se extrae con alcohol,
pero no en las grampositivas, ya que estas tienen una pared muy gruesa formada
fundamentalmente por peptidoglicano. Durante la tinción, la pared celular grampositiva es
deshidratada por el alcohol, que hace que los poros de las paredes se cierren e impide así́
que se escape el complejo insoluble de cristal violeta y yodo. En las bacterias gramnegativas,
por el contrario, el alcohol penetra rápidamente a través de la membrana externa rica en
lípidos y extrae el complejo cristal violeta-yodo de la célula. Después del tratamiento con
alcohol, las células gramnegativas se vuelven a teñir con safranina con el que adquieren
coloración rosa.

Técnica

4. Preparar un frotis extendiendo una capa fina del cultivo sobre el portaobjetos
considerando añadir una cantidad apropiada. El frotis debe secarse completamente
para fijar con calor en el mechero.
5. Verter cristal violeta durante un minuto en el frotis fijado, cubrir la totalidad de la zona
que abarca la muestra. Enjuagar con agua.
6. Anadir Lugol o solución de yodo por un minuto y enjuagar con agua.
7. Decolorar con alcohol-cetona hasta la desaparición de hilos de color y
enjuagar nuevamente con agua.
8. Realizar una tinción de contraste con safranina igualmente por un minuto,
enjuagar con agua y esperar a que el frotis seque para realizar las observaciones
microscópicas.

Reactivos
 • Cristal violeta
• Lugol
• Alcohol-cetona (decolorante)
• Safranina

Resultados esperados
Gram negativo: color rojo.

Interpretación

• Gram positivo: morado

• Gram negativo: rojo

Anexo 6. Prueba de catalasa Comentado [MT3]: .

Fundamento
La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayoría de los microorganismos que
contienen citocromos. Las bacterias que producen catalasa descomponen el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso, el cual se libera en forma de burbujas. El propósito
principal de esta prueba es diferenciar las Micrococacceae (que son positivas) de los
Streptococcus spp. y Enterococcus spp. (que son negativas).

Técnica
1. Depositar de 1 a 2 gotas de agua oxigenada en un portaobjetos.
2. Utilizar un palillo de madera para tomar una colonia bacteriana pura y aislada.
3. Poner en contacto la colonia bacteriana con las gotas de agua oxigenada.
4. El resultado es inmediatamente visible
5. Al finalizar la prueba, desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante (por
ejemplo, agua con cloro).
NOTA: Si se altera el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada),
pueden aparecer falsos positivos. Al utilizar cultivos de agar sangre para esta prueba,
es importante asegurarse de no llevarse algo de agar con el asa al retirar la colonia,
ya que los eritrocitos presentes en el medio contienen catalasa y su inclusión podría
generar un resultado positivo erróneo. Asimismo, se debe evitar el uso de un asa
metálica para prevenir falsos positivos.

Reactivos
- Peróxido de hidrógeno

Resultados esperados
Staphylococcus aureus: catalasa positiva
Streptococcus pyogenes: catalasa negativa

Interpretación
La aparición rápida de efervescencia con la liberación de burbujas indica un resultado
positivo. Por otro lado, la falta de burbujas se considera un resultado negativo.

Anexo 7. Prueba de bacitracina Comentado [MT4]: .

Fundamento
La bacitracina es un antibiótico que bloquea la síntesis de la pared celular bacteriana. A la
concentración presente en los discos (0.04 U), inhibe el crecimiento de los estreptococos beta
hemolíticos del grupo A de Lancefield, pero no afecta a otras especies de estreptococos beta
hemolíticos. Además, la bacitracina también inhibe a los Micrococcus y Stomatococcus,
mientras que los estafilococos coagulasa negativa son resistentes a este antibiótico. Un
resultado sensible a la bacitracina (0.04 U) sugiere la presencia de estreptococo del grupo A,
y el diagnóstico puede ser reforzado utilizando discos de PYR-A para identificar enterococos.

Técnica
1. En un agar sangre, dibujar un cuadrado de 2 cm x 2 cm en la mitad de la placa.
2. Utilizar un asa de metal para tomar una colonia bacteriana de un cultivo puro.
3. Inocular el cultivo llenando el área delimitada previamente.
4. Colocar un disco de bacitracina para evaluar la susceptibilidad a este antibiótico.
5. Interpretar el resultado después de 18-24 horas de incubación a 37 °C.

Reactivos
- Agar sangre (AST)
- Discos de bacitracina

Resultados esperados
Staphylococcus aureus: Resistente a bacitracina

Interpretación
Los estreptococos beta hemolíticos grupo A mostrarán una zona de inhibición en el
crecimiento, alrededor del disco; otros beta hemolíticos no mostraban zona de inhibición

Anexo 8. Prueba de coagulasa Comentado [MT5]: .

Fundamento
El plasma de coagulasa se utiliza en la prueba de coagulasa, un análisis bioquímico que
evalúa si un microorganismo produce la enzima coagulasa, la cual es responsable de la
aglutinación o coagulación. Esta prueba es valiosa para distinguir entre diferentes especies
de bacterias del género Staphylococcus.Se emplea para identificar y diferenciar especies
dentro del género Staphylococcus, así como para confirmar la presencia de Staphylococcus
aureus. Este microorganismo tiene la capacidad de coagular gracias a esta enzima. La
coagulasa actúa como un factor de agregación y es una prueba muy sensible y específica
para esta bacteria. Además, esta proteína es un factor clave de virulencia, ya que puede
unirse al fibrinógeno y transformarlo en fibrina insoluble, lo que facilita la formación de
depósitos donde los estafilococos pueden agruparse.La prueba se lleva a cabo extrayendo
sangre humana mediante flebotomía y centrifugando para separar y obtener el plasma
sanguíneo.

Técnica
1. Colocar una gota de solución salina en un portaobjetos.
2. Usar un asa bacteriológica estéril y fría para tomar una colonia pura aislada de la placa
y añadirla a la gota de solución salina.
 3. Asegurarse de homogeneizar completamente la bacteria en la solución salina para
evitar falsos positivos.
4. Colocar una gota de plasma a 0.5 a 1 cm al lado de la gota de solución salina.
5. Mezclar ambas gotas utilizando un palillo de madera.

Reactivos
- Plasma humano
- Solución salina

Resultados esperados
- Staphylococcus aureus: coagulasa positiva
- Streptococcus pyogenes: coaguasa negativa

Interpretación
Las muestras que muestren grumos o aglutinación se considerarán positivas; en cambio, si
se homogeneizan completamente, se clasificarán como coagulasa negativa.

Anexo 9. Inoculación para antibiograma

Fundamento
El término antibiograma se refiere a los resultados obtenidos en las pruebas de
susceptibilidad a antibióticos realizadas en bacterias aisladas de un paciente. Estos
resultados constituyen el principal criterio para seleccionar el antibiótico más adecuado para
el tratamiento. Sin embargo, al elegir el tratamiento también deben considerarse otros
factores, como la función renal del paciente y posibles reacciones de hipersensibilidad.

Concentración inhibitoria mínima

Los resultados de las pruebas de sensibilidad son cruciales para decidir el antibiótico
adecuado en muchas infecciones. Un método común es la difusión en disco, que consiste en
colocar discos impregnados con distintos antibióticos sobre una placa de agar inoculada con
el microorganismo del paciente. Tan pronto el disco impregnado de antibiótico se pone en
contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibiótico difunde al
agar. El antibiótico difunde radialmente a través del espesor del agar a partir del disco
formándose un gradiente de concentración.
Tras una incubación a 35 °C durante 18 horas, el antibiótico se difunde desde el disco, y se
mide el diámetro de la zona de inhibición. El tamaño de esta zona se compara con estándares
establecidos para determinar si el microorganismo es sensible al fármaco.
El tamaño de la zona de inhibición del crecimiento alrededor del disco puede usarse como
una medida indirecta de la MIC del microorganismo. Los diámetros de las zonas de inhibición
obtenidos con los diversos antibióticos son interpretados como “sensible”, “intermedia” o
“resistente” con base en un cuadro interpretativo. Este método es conveniente y flexible para
bacterias aeróbicas y facultativas que crecen con rapidez, como las Enterobacteriaceas,
Pseudomonas y Staphylococcus.

Técnica
Preparación del inóculo
1. A partir de un cultivo en placa de entre 18 a 24 horas, seleccionar varias colonias utilizando
un asa bacteriológica.
2. Ajustar el inóculo en suero fisiológico a una turbidez equivalente a 0.5 en la escala de
McFarland.

3. Agitar la suspensión en un agitador "vortex" durante 15-20 segundos para homogeneizar

la muestra.

Inoculación de las placas

4. En un plazo no mayor a 15 minutos después de ajustar el inóculo, introducir un escobillón
estéril en la suspensión.

5. Al retirar el escobillón, girarlo varias veces contra la pared del tubo, por
encima del nivel del líquido, para eliminar el exceso de inóculo.

6. Inocular uniformemente las placas de agar Mueller-Hinton, cubriendo toda la

superficie del agar:
• Deslizar el escobillón sobre la superficie del agar tres veces, girando la placa
aproximadamente 60° en cada pasada.
• Finalmente, pasar el escobillón por la periferia de la placa para garantizar una siembra
homogénea.

Reactivos
- Tubos con suero fisiológico (0,85 g de NaCl en 100 ml de agua destilada estéril).
- Escobillones estériles.
- Medio de cultivo. Generalmente se utiliza agar Mueller-Hinton
- Discos de antibióticos. Se deben guardar a 4 ºC y dejarlos a temperatura ambiente 1 hora
antes de utilizarlos.

Resultados esperados
Después de 18 horas de incubación leer el diámetro de las zonas de completa inhibición con
un vernier. Comparando el diámetro del halo de inhibición con las CMIs, y estableciendo las
correspondientes rectas de regresión, se han fijado unos criterios para clasificar las cepas
estudiadas. De esta forma se han fijado tres categorías: sensible (S), intermedia (I) y
resistentes (R).

El termino sensible indica que la infección ocasionada por la cepa para la que se ha
determinado la CMI o su correspondiente halo de inhibición puede tratarse de forma
adecuada empleando las dosis habituales de antimicrobiano, en función del tipo de infección
y de la especie considerada.

El termino intermedio indica que el halo de inhibición traducido en valores de CMI

se aproxima a las concentraciones de antimicrobiano alcanzables en sangre o tejidos y que
puede esperarse eficacia clínica en aquellas localizaciones en las que se alcanzan altas
concentraciones de antimicrobiano (p. ej. orina) o cuando se emplean dosis más elevadas de
lo habitual.
El termino resistente se refiere a aquellos microorganismos que no se inhiben por las
concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos del correspondiente
antimicrobiano, o a aquellos microorganismos en los que existen mecanismos de resistencias
específicos para el agente estudiado en los que no ha habido una adecuada respuesta clínica
cuando se ha usado como tratamiento el correspondiente antimicrobiano.

Interpretación

Anexo 10. Prueba de bacitracina + SXT Comentado [MT6]: .

Fundamento Comentado [MT7R6]: @XIMENA VALDES SANCHEZ
La prueba de bacitracina – SXT es una técnica que nos permite evaluar las resistencias de
las bacterias a ciertos antibióticos. La bacitracina (TA) es un antibiótico que inhibe la síntesis
de la pared celular mientras que la trimetoprima – sulfametoxazol (SXT) es un antibiótico que
inhibe la producción de tetrahidrofolato y su unión. La metodología para llevar a cabo esta
técnica consiste en:

Técnica
1. Toma una cantidad considerable de colonias de la bacteria de interés y realizar un
estriado apilado en forma de rectángulo en un agar sangre. Esto provocara que se
forme una capa uniforme de la bacteria al momento de la incubación.
2. Posteriormente, con el uso de unas pinzas de acero esterilizadas, colocar un disco de
bacía racima y SXT en cada extremo del rectángulo formado.
3. Incubar a 37°C por 24 horas.

Reactivos
• Bacitracina 0.04 U

Resultados esperados
Resistente

Interpretación
La interpretación de los resultados es más simple que en un antibiograma, un resultado
positivo es cuando hay un halo de inhibición de cualquier diámetro alrededor del disco,
mientras que un resultado negativo es cuando no se da la formación del halo. Esta
metodología permite clasificar a las bacterias en sensibles al antibiótico (+) y resistentes al
antibiótico.

Anexo 11. Prueba de Lancefield Comentado [MT8]: .