LINEA LIQUIDA

Bilirrubina Total
C Método DPD para la determinación de bilirrubina total
AA
en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE

La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, ALMACENAMIENTO
es captada por el hígado para su conjugación y excreción Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC)
en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido MUESTRA
es una patología provocada por incompatibilidad materno- Suero o plasma
fetal en la que se produce una destrucción excesiva de a) Recolección: obtener de la manera habitual. Proteger de
glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la la luz natural o artificial envolviendo el tubo con papel negro.
bilirrubina sérica con el consecuente riesgo de difusión del b) Aditivos: en caso de que la muestra sea plasma, debe
pigmento al sistema nervioso central produciendo toxicidad, usarse heparina o EDTA para su obtención.
por lo que la determinación de la bilirrubina en estos niños c) Sustancias interferentes conocidas: concentraciones
recién nacidos resulta sumamente importante. elevadas de globulinas pueden causar interferencia.
No se observan interferencias por hemólisis hasta una
FUNDAMENTOS DEL METODO concentración de hemoglobina de 500 mg/dl (0,5 g/dl) ni
La bilirrubina indirecta, unida a la albúmina, es liberada por lipemia hasta una concentración de 500 mg/dl (5 g/l) de
un tensioactivo. La bilirrubina total reacciona con la sal de triglicéridos. No obstante, muestras hiperlipémicas o con
diclorofenildiazonio (DPD) formando un azocompuesto de hemólisis moderada pueden conducir a resultados erróneos.
color rojo en solución ácida. Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
drogas en el presente método.
REACTIVOS PROVISTOS d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
A. Reactivo A: solución acuosa conteniendo ácido clorhí- muestra debe ser preferentemente fresca. En caso de no
drico 150 mmol/l y tensioactivo. efectuarse el ensayo en el momento, la muestra puede
B. Reactivo B: solución acuosa conteniendo sal de diclo- conservarse hasta 48 horas en refrigerador (2-10oC).
rofenildiazonio 1,5 mmol/l en ácido clorhídrico 150 mmol/l. La acción de la luz es capaz de destruir hasta un 50% de la
bilirrubina presente en la muestra, por lo que debe protegerse
REACTIVOS NO PROVISTOS cuidadosamente.
Calibrador A plus de Wiener lab.
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
INSTRUCCIONES PARA SU USO - Espectrofotómetro
Reactivos Provistos: listos para usar. Antes de utilizar, - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
mezclar por inversión. - Cronómetro
El Reactivo B puede presentar una ligera turbidez que no - Analizador automático
afecta su reactividad.
CONDICIONES DE REACCION
PRECAUCIONES - Longitud de onda: 546 nm (520 - 550 nm)
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". - Temperatura de reacción: 25oC (30oC o 37oC)
Los reactivos son corrosivos. H315 + H320: Provoca irritación - Tiempo de reacción: 5 minutos 30 segundos
cutánea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y - Volumen de muestra: 80 ul
lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la - Volumen final de reacción: 1,28 ml
piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO
CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante
varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta PROCEDIMIENTO
fácil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTAC- En 3 tubos marcados BR (Blanco de Reactivos), BM
TO CON LA PIEL: Lavar con agua y jabón abundantes. P280: (Blanco de Muestra/Calibrador/Control) y M (Muestra/
Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. Calibrador/Control), colocar:
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. BR BM M
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de Reactivo A 1 ml 1,2 ml 1 ml
acuerdo a la normativa local vigente.

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 PERFORMANCE
Agua destilada 80 ul - -
a) Reproducibilidad: se aplicó el protocolo EP15-A del CLSI.
Muestra - 80 ul 80 ul Se analizaron tres niveles de concentración, cada uno por
cuadruplicado durante 5 días. Con los datos obtenidos, se
Mezclar e incubar exactamente 30 segundos. Luego
calcularon la precisión intraensayo y total.
agregar:
Precisión intraensayo (n = 20)
Reactivo B 0,2 ml - 0,2 ml
Nivel D.S. C.V.
Mezclar e incubar 5 minutos. Inmediatamente después, 8,5 mg/l ± 0,28 mg/l 3,29%
leer en espectrofotómetro a 546 nm (520 - 550 nm), lle- 46,1 mg/l ± 0,31 mg/l 0,67%
vando a cero el aparato con el Blanco de Reactivo (BR). 164,5 mg/l ± 1,21 mg/l 0,74%
Lectura 1 (DO1): BM (Blanco de Muestra o BC (Blanco de
Precisión total (n = 20)
Calibrador). Lectura 2 (DO2): M (Muestra) o C (Calibrador).
Nivel D.S. C.V.
8,5 mg/l ± 0,30 mg/l 3,53%
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL 46,1 mg/l ± 0,77 mg/l 1,67%
El color de la reacción es estable durante 30 segundos, por 164,5 mg/l ± 3,15 mg/l 1,92%
lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese tiempo.
b) Linealidad: la reacción es lineal hasta 250 mg/l de bili-
CALCULO DE LOS RESULTADOS rrubina. Para valores superiores, repetir la determinación
Bilirrubina Total (mg/l) = (DO2 M - DO1 BM) x f empleando muestra diluida 1:2 ó 1:4 con solución fisiológica,
multiplicando el resultado obtenido por 2 ó 4 según el caso.
donde: c) Límite de detección: depende del fotómetro empleado
X* mg/l y de la longitud de onda. En espectrofotómetros con cube-
f= tas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para un ∆A de
DO2 C - DO1 BC
0,001 el mínimo cambio de concentración detectable será
concentración de bilirrubina total en el Calibrador A plus
(*)
de 0,031 mg/dl.
de Wiener lab.
PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
METODO DE CONTROL DE CALIDAD Para las instrucciones de programación consulte el manual
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad del usuario del analizador en uso. Para la calibración, debe
(Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas usarse Calibrador A plus de Wiener lab.
de bilirrubina total, con cada determinación.
PRESENTACION
VALORES DE REFERENCIA 168 ml: 4 x 35 ml Reactivo A
Bilirrubina total en suero o plasma: 4 x 7 ml Reactivo B
- Adultos: hasta 10 mg/l (Cód. 1008115)
- Recién nacidos: 240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
Nacidos a término Prematuros 2 x 20 ml Reactivo B
Sangre de cordón < 20 mg/l < 20 mg/l (Cód. 1120008)
hasta las 24 hs 14 - 87 mg/l < 80 mg/l
240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
hasta las 48 hs 34 - 115 mg/l < 120 mg/l
2 x 20 ml Reactivo B
del 3º al 5º día 15 - 120 mg/l < 160 mg/l
(Cód. 1009334)
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el
nivel promedio del adulto al mes del nacimiento. 240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
En los prematuros, los niveles tardan más en alcanzar la 2 x 20 ml Reactivo B
normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepática. (Cód. 1009244)
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia. 240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A
2 x 20 ml Reactivo B
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI (Cód. 1009605)
Bilirrubina (umol/l) = Bilirrubina (mg/l) x 1,71
BIBLIOGRAFIA
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO - Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin.
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Chem. 5th Ed.: 966, 2001.
La acción de la luz, tanto sobre las muestras como sobre - Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975).
las soluciones standard, es capaz de destruir en una hora - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
hasta el 50% de la bilirrubina presente. AACC Press, 5th ed., 2000.

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- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex- SIMBOLOS
NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004. Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de
- Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd reactivos para diagnóstico de Wiener lab.
ed. (2001). Este producto cumple con los requerimientos previstos

C por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios

para el diagnóstico "in vitro"

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

V Uso diagnóstico "in vitro"
X Contenido suficiente para <n> ensayos

Fecha de caducidad
H
l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar

Riesgo biológico
F
Volumen después de la reconstitución

Cont. Contenido

g Número de lote

M Elaborado por:

Nocivo

Corrosivo / Cáustico

Irritante

i Consultar instrucciones de uso

Calibr. Calibrador

b Control

b Control Positivo

c Control Negativo

h Número de catálogo

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 LINHA LÍQUIDA

Bilirrubina Total
C AA
Método DPD para a determinação de bilirrubina total
em soro ou plasma

SIGNIFICADO CLÍNICO ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE

A bilirrubina, composto produzido pela degradação da he- ARMAZENAMENTO
moglobina, é captado pelo fígado para sua conjugação e Reagentes Fornecidos: são estáveis sob refrigeração (2-
excreção biliar. As alterações hepatocelulares e obstruções 10oC) até a data do vencimento indicada na embalagem.
biliares podem provocar hiperbilirrubinemias.
A eritroblastose fetal ou anemia hemolítica do recém nascido é AMOSTRA
uma patologia provocada pela incompatibilidade materno-fetal. Soro ou plasma
Nestas patologias se produz a destruição massiva de glóbulos a) Coleta: obter da maneira habitual. Manter protegido da
vermelhos que resulta num considerável aumento da bilirrubina luz natural ou artificial, cobrindo o tubo com papel escuro.
sérica com o conseqüente risco de espalhar-se o pigmento ao b) Aditivos: caso de que a amostra seja plasma, deve-se
sistema nervoso central, produzindo toxicidade. Porém, a de- utilizar heparina ou EDTA para sua obtenção.
terminação de bilirrubina no recém nascido é muito importante. c) Substâncias interferentes conhecidas: altas concen-
trações de globulinas podem causar interferência.
FUNDAMENTOS DO MÉTODO Não se observam interferências por hemólise até uma
A bilirrubina indireta, unida à albumina, é liberada por um tensoati- concentração de hemoglobina de 500 mg/dl (0,5 g/dl)
vo. A bilirrubina total reage com o sal de diclorofenildiazonio (DPD) nem lipemia até una concentração de 500 mg/dl (5 g/l) de
produzindo um azo composto cor vermelho em solução ácida. triglicerídeos. No entanto, amostras hiperlipêmicas ou com
hemólise moderada podem conduzir a resultados errados.
REAGENTES FORNECIDOS Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
A. Reagente A: solução aquosa contendo ácido clorídrico neste método.
150 mmol/l e tensoativo. d) Estabilidade e instruções de armazenamento: a
B. Reagente B: solução aquosa contendo sal de diclorofe- amostra deve ser preferencialmente fresca. Caso de não
nildiazonio 1,5 mmol/l em ácido clorídrico 150 mmol/l. realizar-se o ensaio na hora, a amostra deve ser conservarda
até 48 horas sob refrigeração (2-10oC).
REAGENTES NÃO FORNECIDOS A ação da luz pode destruir em uma hora até 50% da bilirrubina
Calibrador A plus da Wiener lab. presente na amostra. Por tal motivo deve-se proteger da luz.

INSTRUÇÕES DE USO MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido)

Reagentes Fornecidos: prontos para uso. Antes de utilizar, - Espectrofotômetro
misturar por inversão. - Micropipetas ou pipetas para medir os volumes indicados
O Reagente B pode desenvolver turbidez que não afeta a - Cronômetro
sua reatividade. - Analisador automático

PRECAUÇÕES CONDIÇÕES DE REAÇÃO

Os reagentes são para uso diagnóstico "in vitro". - Comprimento de onda: 546 nm (520 - 550 nm)
Os reagentes são corrosivos. H315+H320 Provoca irritação - Temperatura de reação: 25oC (30oC ou 37oC)
cutânea e ocular. H314 Provoca queimaduras na pele e lesões - Tempo de reação: 5 minutos 30 segundos
oculares graves. P262 Não pode entrar em contacto com os - Volume de amostra: 80 ul
olhos, a pele ou a roupa. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR - Volume final de reação: 1,28 ml
EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente
com água durante vários minutos. Se usar lentes de contacto,
retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar. P302 + PROCEDIMENTO
P352 SE ENTRAR EM CONTACTO COM A PELE: lavar com Em 3 tubos marcados BR (Branco de Reagentes), BM
sabonete e água abundantes. P280 Usar luvas de protecção/ (Branco de Amostra/Calibrador/Controle), e M (Amostra/
vestuário de protecção/protecção ocular/protecção facial. Calibrador/Controle), colocar:
Utilizar os reagentes observando as precauções habituais
de trabalho no laboratório de análises clínicas. BR BM M
Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas Reagente A 1 ml 1,2 ml 1 ml
conforme à regulação local vigente.

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 DESEMPENHO
Água destilada 80 ul - -
a) Reprodutibilidade: aplicando o protocolo EP-15A do
Amostra - 80 ul 80 ul CLSI, se analisaram três níveis de concentração, cada um
por quadruplicado durante 5 dias. Com os dados obtidos,
Misturar e incubar exatamente 30 segundos. Após, calcularam-se as precisões intra-ensaio e total.
acrescentar:
Precisão intra-ensaio (n = 20)
Reagente B 0,2 ml - 0,2 ml
Nível D.P. C.V.
Misturar e incubar 5 minutos. Logo após, ler em espectro- 8,5 mg/l ± 0,28 mg/l 3,29%
fotômetro a 546 nm (520 - 550 nm), levando o aparelho 46,1 mg/l ± 0,31 mg/l 0,67%
a zero com o Branco de Reagente (BR). Leitura 1 (DO1): 164,5 mg/l ± 1,21 mg/l 0,74%
BM (Branco de Amostra) ou BC (Branco de Calibrador).
Leitura 2 (DO2): M (Amostra) ou C (Calibrador). Precisão total (n = 20)
Nível D.P. C.V.
8,5 mg/l ± 0,30 mg/l 3,53%
ESTABILIDADE DA MISTURA DE REAÇÃO FINAL 46,1 mg/l ± 0,77 mg/l 1,67%
A cor é estável 30 segundos pelo que a absorbância deve 164,5 mg/l ± 3,15 mg/l 1,92%
ser lida dentro deste tempo.
b) Linearidade: a reação é linear até 300 mg/l de bilirrubina.
CÁLCULO DOS RESULTADOS Para valores superiores repetir a determinação com amostra
Bilirrubina Total (mg/l) = (DO2 Amostra - DO1 Amostra) x f diluída 1:2 ou 1:4 com solução fisiológica e multiplicar o
resultado obtido por 2 ou 4 respectivamente.
onde: c) Limite de deteccão: depende do fotômetro empregado
X* mg/l e da comprimento de onda. Em espectrofotômetros com
f= cubetas de faces paralelas de 1 cm de espessura, para um
DO2 Calibr. - DO1 Calibr. ∆A de 0,001 a mudança mínima de concentração detectável
concentração de bilirrubina total no Calibrador A plus
(*) será de 0,031 mg/dl.
da Wiener lab.
PARÂMETROS PARA ANALISADORES AUTOMÁTICOS
MÉTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE Para a programação consultar o manual de uso do analisador
Processar 2 níveis de um material de controle de qualidade a ser utilizado.
(Standatrol S-E 2 niveles) com concentrações conhecidas Para a calibração deve-se utilizar o Calibrador A plus da
de bilirrubina total, com cada determinação. Wiener lab.

VALORES DE REFERÊNCIA APRESENTAÇÃO

Bilirrubina total em soro ou plasma: 168 ml: 4 x 35 ml Reagente A
- Adultos: até 10 mg/l 4 x 7 ml Reagente B
(Cód. 1008115)
- Recém nascidos:
Nascidos a termo Prematuros 240 ml: 4 x 50 ml Reagente A
Sangue de cordão < 20 mg/l < 20 mg/l 2 x 20 ml Reagente B
até as 24 hs 14 - 87 mg/l < 80 mg/l (Cód. 1120008)
até 48 hs 34 - 115 mg/l < 120 mg/l
do 3º ao 5º dia 15 - 120 mg/l < 160 mg/l 240 ml: 4 x 50 ml Reagente A
Os valores começam logo diminuindo para alcançar o nível 2 x 20 ml Reagente B
médio do adulto ao cumprir um mês do nascimento. Nos pre- (Cód. 1009334)
maturos, os níveis de bilirrubina se retardam mais para alcançar
a normalidade, dependendo do grau de imaturidade hepática. 240 ml: 4 x 50 ml Reagente A
Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus pró- 2 x 20 ml Reagente B
prios valores de referência. (Cód. 1009244)

CONVERSÃO DE UNIDADES AO SISTEMA SI 240 ml: 4 x 50 ml Reagente A

Bilirrubina (umol/l) = Bilirrubina (mg/l) x 1,71 2 x 20 ml Reagente B
(Cód. 1009605)
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
Vide Substâncias interferentes conhecidas em AMOSTRA. REFERÊNCIAS
A ação da luz sobre as amostras e soluções padrão, pode - Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin.
destruir em 1 hora até o 50% da bilirrubina presente. Chem. 5th Ed.: 966, 2001.

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- Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975). SÍMBOLOS
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", Os seguintes símbolos são utilizados nos kits de reagentes
AACC Press, 5th ed., 2000. para diagnóstico da Wiener lab.
- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-
NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004. Este produto preenche os requisitos da Diretiva Europeia
- Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd
ed. (2001). C 98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in
vitro"

P Representante autorizado na Comunidade Europeia

V Uso médico-diagnóstico "in vitro"
X Conteúdo suficiente para <n> testes

H Data de validade

l Limite de temperatura (conservar a)

 Não congelar

Risco biológico
F
Volume após a reconstituição

Cont. Conteúdo

g Número de lote

M Elaborado por:

Nocivo

Corrosivo / Caústico

Irritante

i Consultar as instruções de uso

Calibr. Calibrador

b Controle

b Controle Positivo

c Controle Negativo

h Número de catálogo

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 LIQUID LINE

Bilirrubina Total
C DPD method for total bilirubin determination in serum or plasma
AA

SUMMARY STABILITY AND STORAGE INSTRUCTIONS

Bilirubin, a compound produced by the degradation of he- Provided Reagents: stable in refrigerator (2-10oC) until the
moglobin, is captured by the liver for its conjugation and bile expiration date stated on the box.
excretion. Hepatocellular disorders or biliary obstructions may
lead to hyperbilirubinemia. SAMPLE
Erythroblastosis fetalis or hemolytic anemia of the newborn Serum or plasma
are pathologies due to mother-fetus blood incompatibility, a) Collection: obtain as usual. Protect from natural or arti-
in which an excessive destruction of red blood cells occurs. ficial light covering the tube with black paper.
The result is a severe increase of serum bilirubin, with the b) Additives: heparin or EDTA.
consequent risk of pigment diffusion to the central nervous c) Known interfering substances: high concentrations of
system. Therefore, bilirubin determination in these newborns globulins can cause interference.
is extremely important. No interference has been observed with hemoglobin up to
500 mg/dl (0.5 g/dl) and triglycerides up to 500 mg/dl (5 g/l).
PRINCIPLE Nonetheless, samples with moderate hemolysis or hyperli-
Indirect bilirubin, bound to albumin, is released by a surfac- pemic samples, may lead to erroneous results.
tant. Total bilirubin reacts with dichlorophenyldiazonium salt See Young, D.S. in References for effect of drugs on the
(DPD) forming a red azocompound in acid medium. present method.
d) Stability and storage instructions: sample should be
PROVIDED REAGENTS preferably fresh. If assay is not performed immediately, serum
A. Reagent A: aqueous solution containing 150 mmol/l can be stored up to 48 hours at 2-10oC.
hydrochloric acid and surfactant. The action of light is capable of destroying up to a 50% of
B. Reagent B: aqueous solution 1.5 mmol/l dichlorophenyl- the bilirubin present in the sample. Consequently, it should
diazonium salt in 150 mmol/l hydrochloric acid. be carefully protected from light.

NON-PROVIDED REAGENTS REQUIRED MATERIAL (non-provided)

Wiener lab's Calibrador A plus. - Spectrophotometer
- Micropipettes and pipettes to measuring the stated volumes
INSTRUCTIONS FOR USE - Stopwatch
Provided Reagents: ready to use. Mix by inversion before use. - Autoanalyzer
Reagent B may develop a slight turbidity which does not
affect its performance. ASSAY CONDITIONS
- Wavelength: 546 nm (520 - 550 nm)
WARNINGS - Reaction temperature: 25oC (30oC or 37oC)
Reagents are for “in vitro” diagnostic use. - Reaction time: 5 minutes 30 seconds
Reagents are corrosive. - Sample volume: 80 ul
H315+H320: Causes skin and eye irritation. H314 Causes - Final reaction volume: 1.28 ml
severe skin burns and eye damage. P262 Do not get in eyes,
on skin, or on clothing. P305 + P351 + P338 IF IN EYES:
Rinse cautiously with water for several minutes. Remove PROCEDURE
contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsing. In 3 tubes labeled RB (Reagent Blank), SB (Sample/
P302 + P352 IF ON SKIN: Wash with plenty of soap and Calibrator/Control Blank) and S (Sample/Calibrator/
water. P280 Wear protective gloves/protective clothing/eye Control), place:
protection/face protection.
Use the reagents according to the working procedures for RB SB S
clinical laboratories. Reagent A 1 ml 1.2 ml 1 ml
The reagents and samples should be discarded according Distilled water 80 ul - -
to the local regulations in force.

861270024 / 03 p. 7/12
 Three concentration levels were tested, in replicates by four,
Sample - 80 ul 80 ul during 5 days. With the obtained data, total and intra-assay
Mix and exactly incubate for 30 seconds. Then, add: precision were calculated.
Intra-assay precision (n = 20)
Reagent B 0.2 ml - 0.2 ml
Level S.D. C.V.
Mix and incubate for 5 minutes. Measure optical density at 8.5 mg/l ± 0.28 mg/l 3.29%
546 nm (520 - 550 nm), setting the instrument to zero with 46.1 mg/l ± 0.31 mg/l 0.67%
the Reagent Blank (RB). Reading 1 (OD1): SB (Sample 164.5 mg/l ± 1.21 mg/l 0.74%
Blank) or CB (Calibrator Blank). Reading 2 (OD2): S
(Sample) or C (Calibrator). Total precision (n = 20)
Level S.D. C.V.
8.5 mg/l ± 0.30 mg/l 3.53%
STABILITY OF FINAL REACTION 46.1 mg/l ± 0.77 mg/l 1.67%
Color is stable for 30 seconds, so absorbance should be 164.5 mg/l ± 3.15 mg/l 1.92%
read within that period.
b) Linearity: the reaction is linear up to 300 mg/l bilirubin.
CALCULATIONS For higher values, repeat the determination using diluted
Total Bilirubin (mg/l) = (OD2 S - OD1 SB) x f sample 1:2 or 1:4 with saline solution. Multiply the obtained
result by 2 or 4 according to the dilution performed.
where: c) Detection limit: in spectrophotometers with 1 cm optical
X* mg/l length square cuvettes, for a ∆A minimum of 0.001, the mini-
f = mum detectable concentration change will be of 0.031 mg/dl.
OD2 C - OD1 CB
total bilirubin concentration in Wiener lab.’s Calibrador
(*)
PARAMETERS FOR AUTOANALYZERS
A plus For programming instructions check the user’s manual of
the autoanalyzer in use.
QUALITY CONTROL METHOD For calibration, it must be used Wiener lab.'s Calibrador A plus.
Each time the test is running, analyze two levels of a quality
control material (Standatrol S-E 2 niveles) with known total WIENER LAB. PROVIDES
bilirubin concentration. 168 ml: 4 x 35 ml Reagent A
4 x 7 ml Reagent B
REFERENCE VALUES (Cód. 1008115)
Total bilirubin in serum or plasma
240 ml: 4 x 50 ml Reagent A
- Adults: up to 10 mg/l 2 x 20 ml Reagent B
- Newborns: (Cat. 1120008)
Term infant Preterm infant
umbilical cord blood < 20 mg/l < 20 mg/l 240 ml: 4 x 50 ml Reagent A
up to 24 hrs 14 - 87 mg/l < 80 mg/l 2 x 20 ml Reagent B
up to 48 hrs 34 - 115 mg/l < 120 mg/l (Cat. 1009334)
from 3rd to 5th day 15 - 120 mg/l < 160 mg/l
240 ml: 4 x 50 ml Reagent A
Within a month after birth, total bilirubin concentration de- 2 x 20 ml Reagent B
crease reaching the adult's average level. (Cat. 1009244)
In preterm infants, levels take longer to reach normality,
depending on the hepatic immaturity degree. 240 ml: 4 x 50 ml Reagent A
It is recommended that each laboratory establishes its own 2 x 20 ml Reagent B
reference values. (Cat. 1009605)

SI SYSTEM UNITS CONVERSION REFERENCES

Bilirubin (umol/l) = Bilirubin (mg/l) x 1.71 - Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin.
Chem. 5th Ed.: 966, 2001.
PROCEDURE LIMITATIONS - Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975).
See Known interfering substances under SAMPLE. - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory
The action of light, both on samples and on standard solutions, Tests", AACC Press, 5th ed., 2000.
is capable of destroying up to 50% of bilirubin in one hour. - CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-
NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004.
PERFORMANCE - Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd
a) Reproducibility: CLSI protocol EP15-A was applied. ed. (2001).

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 SYMBOLS
The following symbols are used in the packaging for Wiener
lab. diagnostic reagents kits.

This product fulfills the requirements of the European

C Directive 98/79 EC for "in vitro" diagnostic medical devices

P Authorized representative in the European Community

V "In vitro" diagnostic medical device
X Contains sufficient for <n> tests

H Use by

l Temperature limitation (store at)

 Do not freeze

F Biological risks

Volume after reconstitution

Cont. Contents

g Batch code

M Manufactured by:

Harmful

Corrosive / Caustic

Irritant

i Consult instructions for use

Calibr. Calibrator

b Control

b Positive Control

c Negative Control

h Catalog number

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 LINIA PŁYNNA

Bilirrubina Total
AA
Nr kat. 1120008 Nr kat. 1009605
C Test do oznaczania poziomu bilirubiny całkowitej
Nr kat. 1009244 Nr kat. 1008115 metodą DPD w surowicy krwi lub osoczu
Nr kat. 1009334

WSTĘP z procedurami dla laboratoriów klinicznych.

Bilirubina jest produktem powstającym z rozpadu hemo- Odczynniki i materiał badany powinni być odrzucone zgodnie
globiny i jest wychwytywana przez wątrobę, gdzie ulega z lokalnymi przepisami.
koniugacji a następnie wydzieleniu z żółcią. Zaburzenia
komórki wątrobowej oraz odpływu żółci mogą prowadzić do TRWAŁOŚĆ I WARUNKI PRZECHOWYWANIA
hiperbilirubinemii. Erytroblastoza płodu lub anemia hemoli- Dostarczone odczynniki: stabilne w temperaturze 2-10oC do
tyczna noworodków są chorobami związanymi z konfliktem końca daty ważności umieszczonej na opakowaniu.
serologicznym matki i płodu, w których dochodzi do nadmier-
nego rozpadu krwinek czerwonych. W wyniku tych procesów MATERIAŁ BADANY
dochodzi do dramatycznego wzrostu poziomu bilirubiny w Surowica lub osocze
surowicy krwi z następującym przenikaniem barwnika do a) Pobranie: pobrać metodą klasyczną, chronić przed
ośrodkowego układu nerwowego. Stąd oznaczenia poziomu światłem naturalnym i sztucznym zakrywając probówkę
bilirubiny u tych noworodków ma szczególne znaczenie. czarnym papierem.
b) Substancje dodatkowe: heparyna lub EDTA.
ZASADA DZIAŁANIA c) Znane interakcje: wysokie stężenia globulin mogą
Bilirubina pośrednia, związana z albuminami, jest uwalniana powodować zakłócenia.
przez surfaktant. Bilirubina całkowita reaguje z DPD - solą Nie obserwowano interakcji przy poziomie hemoglobiny do
2,5-dichlorofenylodiazonium tzw. odczynnikiem Diazo, który 500mg/dl (0,5g/dl), z trójglicerydami do poziomu 5g/l (500mg/
przechodzi w czerwony barwnik azowy w środowisku kwaśnym. dl), jakkolwiek próbki pacjentów z hemolizą czy hiperlipidemią
mogą spowodować błędne pomiary. Sprawdź źródło: Young,
DOSTARCZANE ODCZYNNIKI D.S. w sprawie wpływu leków w tej metodzie.
A. Odczynnik A: wodny roztwór zawierający 150 mmol/l d) Trwałość i instrukcja przechowywania: materiał
kwasu wodorochlorowego i surfaktantu. powinien być świeży. Jeżeli badanie nie jest wykonane
B. Odczynnik B: wodny roztwór zawierający 1,5 mmol/l natychmiast, surowicę można przechowywać do 48 godzin
soli 2,5-dichlorofenylodiazonium w 150 mmol/l kwasu w lodówce w temperaturze 2-10oC.
hydrochlorowego. Należy przechowywać materiał bez dostępu światła,
ponieważ nawet 50% bilirubiny w próbce ulega rozpadowi.
NIEDOSTARCZANE ODDCZYNNIKI
Wiener lab. Calibrador A plus. WYMAGANE MATERIAŁY I SPRZĘT (niedostarczane)
- spektrofotometr,
INSTRUKCJA UŻYCIA - mikropipety i pipety do pomiaru objętości,
Odczynnik A: gotowy do zastosowania. Zamieszać przez - stoper,
odwrócenie przed użyciem. - analizator automatyczny.
Odczynnik B: Odczynnik B może przybrać lekkie zmętnienie
jednak nie wpływa to na jego jakość. WARUNKI DLA PRZEPROWADZENIA TESTU
- Długość fali: 546 nm (520-550 nm)
OSTRZEŻENIA - Temperatura reakcji: 25oC, (30oC, lub 37oC)
Odczynniki wyłącznie do użycia "in vitro". - Czas reakcji: 5 min. 30 sek.
Odczynniki są żrące. H315+H320 Działa drażniąco na skórę - Objętość próbki: 80 ul
i oczy. H314 Powoduje poważne oparzenia skóry oraz - Objętość końcowej reakcji: 1,28 ml
uszkodzenia oczu. P262 Chronić przed kontaktem ze skórą,
oczami i odzieżą. P305 + P351 + P338 W PRZYPADKU
DOSTANIA SIĘ DO OCZU: Ostrożnie płukać wodą przez PROCEDURA
kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je W trzech probówkach oznaczonych RB (Reagent Blank -
łatwo usunąć. Nadal płukać. P302 + P352 W PRZYPADKU próba ślepa), SB (Sample/Calibrator/Control Blank - próba
KONTAKTU ZE SKÓRĄ: Umyć dużą ilością wody z mydłem. wzorcowa), S (Sample/Calibrator/Control - próba badana)
P280 Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ umieścić:
ochronę oczu/ochronę twarzy.Stosować odczynniki zgodnie

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 Zarówno w materiale jak i w roztworach standaryzowanych
RB SB S
bilirubina ulega, pod wpływem światła, rozkładowi w 50% w
Odczynnik A 1 ml 1,2 ml 1 ml ciągu godziny.
Woda destylowana 80 ul - -
CHARAKTERYSTYKA TESTU
Materiał - 80 ul 80 ul a) Powtarzalność: Powtarzalność: badania zostały wykonane
Wymieszać, inkubować 30 sek. następnie dodać: zgodnie z wytycznymi zawartymi w dokumencie EP15-A wyda-
nego przez CLSI. Analiza trzech poziomów stężeń bilirubiny
Odczynnik B 0,2 ml - 0,2 ml całkowitej została przeprowadzona czterokrotnie w ciągu 5 dni.
Zmieszać i inkubować 5 min. Dokonać pomiaru gęstości Dokładność w trakcie badania (n = 20)
optycznej przy długości fali 546 nm (520 - 550 nm),
Poziom S.D C.V.
ustawić spektrofotometr na zero przy Reagent Blank (RB).
8,5 mg/l ± 0,28 mg/l 3,29%
Odczyt 1 (OD1): SB (SampleBlank) lub CB (Calibrator
46,1 mg/l ± 0,31 mg/l 0,67%
Blank). Odczyt 2 (OD2): S (Sample) lub C (Calibrator).
164,5 mg/l ± 1,21 mg/l 0,74%
Dokładność całkowita (n = 20)
TRWAŁOŚĆ REAKCJI KOŃCOWEJ Poziom S.D. C.V.
Kolor jest trwały przez 30 sek., więc pomiar spektrofotome- 8,5 mg/l ± 0,30 mg/l 3,53%
tryczny powinien być wykonany w tym czasie. 46,1 mg/l ± 0,77 mg/l 1,67%
164,5 mg/l ± 3,15 mg/l 1,92%
OBLICZENIA b) Linijność: reakcja jest linijna do poziomu 300 mg/l bilirubiny.
Bilirubina całkowita (mg/l) = (OD2 S - OD1 SB) x f Dla wyższych stężeń należy rozcieńczyć materiał roztworem
gdzie soli fizjologicznej 1:2 lub 1:4 a następnie przeprowadzić ba-
danie, wyniki odpowiednio pomnożyć przez 2 lub 4.
X* mg/l c) Ograniczenia w wykrywaniu: zależą od fotometru i zas-
f=
OD2 C - OD1 CB tosowanej długości fali. Przy kuwecie o długości optycznej
1 cm zgodnie z wymaganą czułością dla ∆A min. 0,001,
(*) Stężenie bilirubiny całkowitej w Calibrador A plus Wiener lab. minimalna czułość wykrywania zmiany stężenia powinna
wynosić 0,031 mg/dl.
METODA KONTROLI JAKOŚCI
W trakcie przeprowadzania badania za każdym razem należy PARAMETRY DLA ANALIZATORÓW AUTOMATYCZNYCH
przeprowadzać analizę jakości na dwóch poziomach (Standa- Należy zapoznać się z instrukcją obsługi celem progra-
trol S-E 2 niveles) ze znanym stężeniem bilirubiny całkowitej. mowania analizatorów automatycznych. Dla kalibracji należy
zastosować Wiener lab. Calibrador A plus.
WARTOŚCI REFERENCYJNE
Bilirubina całkowita w surowicy i osoczu krwi: WIENER LAB. DOSTARCZA
168 ml: 4 x 35 ml Odczynnika A
- Dorośli do 10 mg/l
4 x 7 ml Odczynnika B
- Noworodki: (Nr kat.1008115)
noworodek wcześniak
240 ml: 4 x 50 ml Odczynnika A
krew pępowinowa < 20 mg/l < 20 mg/l
2 x 20 ml Odczynnika B
do 24 godzin 14 - 87 mg/l < 80 mg/l
(Nr kat. 1120008)
do 48 godzin 34 - 115 mg/l < 120 mg/l
od 3 do 5 dnia 15 - 120 mg/l < 160 mg/l 240 ml: 4 x 50 ml Odczynnika A
W ciągu miesiąca po porodzie, stężenie bilirubiny całkowitej 2 x 20 ml Odczynnika B
wzrasta stopniowo do poziomu osoby dorosłej. (Nr kat. 1009334)
U noworodków poziom bilirubiny normalizuje się nieco wolniej
240 ml: 4 x 50 ml Odczynnika A
w zależności od stopnia niedojrzałości komórek wątrobowych.
2 x 20 ml Odczynnika B
Zaleca się dla każdego laboratorium ustalenie własnych
(Nr kat. 1009244)
wartości referencyjnych.
240 ml: 4 x 50 ml Odczynnika A
KONWERSJA JEDNOSTEK SI 2 x 20 ml Odczynnika B
Bilirubina (umol/l) = Bilirubina (mg/l) x 1,71 (Nr kat. 1009605)

OGRANICZENIA PROCEDURY ŹRÓDŁA

Patrz znane interakcje z innymi substancjami w rozdziale Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin.
MATERIAŁ. Chem. 5th Ed.: 966, 2001.

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- Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975). Oznaczenia
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", Następujące symbole są zastosowane na opakowaniach ze-
AACC Press, 5th ed., 2000. stawów odczynników diagnostycznych.
- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-
NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004. Ten produkt spełnia wymagania Dyrektywy Europejskiej
- Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd
ed. (2001). C 98/79 EC dla wyrobów medycznych używanych do dia-
gnozy "in vitro"

P Autoryzowany przedstawiciel we Wspólnocie Europej-

skiej
V Wyrób do diagnostyki "in vitro"
X Zawartość wystarczająca dla <n> badań

H Użyć przed

l Ograniczenie dopuszczalnych temperatur

 Nie zamrażać

Ryzyko biologiczne
F
Objętość po rozpuszczeniu

Cont. Zawartość

g numer serii

Wytwórca
M
Substancja szkodliwa

Substancja żrące

Substancja drażniąca

Przed użyciem zapoznać się z instrukcją

i
Calibr. Kalibrator

b Próba kontrolna

b Próba kontrolna dodatnia

c Próba kontrolna ujemna

h Numer katalogowy

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

V
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Wiener lab.
PM-1102-12 2000 Rosario - Argentina
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