MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA
“GUIA DE PRÁCTICA N° 5”
Autores:
Custodio Neciosup Mayra
Rosales Castillo Maity
Villanueva Huertas Karen
Paísig Fernández Norma Dhayana
Tirado Espino Solange
Gonzales Cueva Sandra
Vásquez Sánchez Zeleny
Blanca Campos Chavez
Docente:
M. Sc. Sánchez Mendoza Henry William

Pimentel–Perú
2024

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 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

PRÁCTICA N°
05
PRINCIPIOS DE INMUNOLOGÍA

Competencias:
Reconoce la reacción de aglutinación
Identifica la presencia de anticuerpos mediante la utilización de los antígenos.
Explicar el fundamento inmunológico de la prueba de inmunocromatografía

Materiales:
- Muestra de sangre
- Antisueros Anti – A, Anti – B y Anti – D.
- Antisueros Tífico O, Tífico H, Paratífico A, Paratífico B y Brucella
- Suero Control positivo paciente con tifoidea , suero negativo
- Láminas portaobjetos
- Micropipetas Vol de 5-50 µL.
- Palillos mondadientes o mezcladores de plástico
- Lancetas
- Colorante Wright

Procedimiento:

1. Formula Leucocitaria:
Extensión de sangre capilar en tinción de Wright, observaremos la morfología de los
glóbulos blancos en sangre periférica y calcularemos la fórmula leucocitaria.

- Hacer una extensión de sangre bien mezclada con sangre con anticoagulante EDTA o
capilar con el método de atraer y arrastrar.
- Seque rápidamente al aire o en una corriente de aire tibio.
- Tiña el frotis con la técnica indicada en el apartado de tinciones soluciones.
- Formas incorrectas de extendido de frotis:

Examen microscópico
- En 10x examinar calidad global del frotis, color y distribución de células, la
formación de rodillos por los eritrocitos o la aglutinación de los mismos, debe

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revisarse con rapidez en busca de cualquier célula anormal grande o

incluso parásitos inesperados.
- En 40x se selecciona la zona correcta del extendido donde se debe
iniciar el recuento y evaluar la morfología celular. Para ello se
selecciona el área en la que los eritrocitos estén superpuestos de 2 a 3
pero que la mayoría estén separados entre sí.
- En 100x se coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca con
este objetivo, se cuentan y clasifican 100 leucocitos y se informan
como porcentajes de leucocitos (valores relativos). La morfología de
eritrocitos y plaquetas así como la estimación de estas últimas se
hacen también con este.

2. Prueba de Aglutinación:

Grupos Sanguíneos:
Sistema ABO:
 GRUPO A. Son las personas cuyos glóbulos rojos poseen antígenos del tipo A y carecen de cualquier
otro tipo. En suero anticuerpo B
 GRUPO B. Son las personas cuyos glóbulos rojos poseen antígenos del tipo B y carecen de cualquier
otro tipo. En suero anticuerpo A
 GRUPO AB. Son las personas que poseen al mismo tiempo antígenos del tipo A y del tipo B. NO
ANTICUERPOS
 GRUPO 0. Son las personas cuyos glóbulos rojos carecen de antígenos de tipo A y B. En suero
anticuerpo A Y anticuerpo B
SISTEMA Rh
Esta clasificación se basa en la existencia en la membrana de los glóbulos rojos de un antígeno
denominado D.

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Procedimiento:
1. Desinfecte la pulpa del dedo índice con un algodón empapado de alcohol yodado e inmediatamente haga
una punción con la lanceta.
2. Coloque de manera inmediata, tres gotas en cada uno de los tres depósitos cóncavos de la lámina de
aglutinación.
3. Adicione una gota del suero anti A sobre la primera gota de sangre, una gota del suero anti B a la
segunda gota de sangre y una gota de suero anti D (anti Rh) a la tercera gota.
4. Rápidamente homogenice, moviendo de manera circular, cada gota con su respectivo anticuerpo,
empleando para ello diferentes palitos mondadientes.
5. Dejar reposar brevemente (aproximadamente 1 a 2 minutos).
6. Observe los resultados y determine a qué grupo sanguíneo corresponde su muestra, por medio de la
aglutinación o no ocurrida.
7. Anote los resultados obtenidos de los integrantes de su mesa en la siguiente tabla, esquematizando lo
observado.

REACCION DE
AGLUTINACION GRUPO SANGUINEO
Sistema Facto
ALUMNO Anti A Anti B Anti D ABO Rh

Zuley Villanueva X O +

Dhayana Paísig X A +

Antígenos Séricos:
Método de Prueba Rápida en Placa
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando.
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura
ambiente paracomenzar la prueba.
- Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar:

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0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO
DEBE ESTARTOTALMENTE CLARO).
- Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
- Añadir 30 mL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes
cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero
incluido proporciona una gota de 30-40 mL).
- Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de
lascantidades de suero.
- Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm)
durante 2minutos.
- Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación
macroscópica.
- Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
Interpretación de los resultados
El grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de
los organismos3+ Aglutinación
del 75% de los organismos 2+
Aglutinación del 50% de los
organismos 1+ Aglutinación del
25% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos

El título del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una
aglutinacióndel 50% de microorganismos (2+)
Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente
equivalentes a lasdiluciones para prueba en tubo como se muestra a
continuación.
Volumen del suero titulo
(80 µL) 0.08 mL 1 : 20
(40 µL) 0.04 mL 1 : 40
(20 µL) 0.02 mL 1 : 80
(10 µL) 0.01 mL 1 : 160
(5 µL) 0.005 mL 1 : 320

3. Inmunocromatografía
- Anotar cada una de las pruebas a realizar
- Colocar una gota de muestra de suero de paciente en cada una de las
pruebas rápidasque se le proporcionan.
- Dejar que la muestra fluja a lo largo de la prueba de inmunocromatografía
- Anotar los resultados positivos y negativos.

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Cuestionario:
- ¿Cuál es la base inmunológica del rechazo del trasplante?
La base inmunológica del rechazo en un trasplante relacionado con los tipos de sangre se
debe a la respuesta del sistema inmunológico contra los antígenos del grupo ABO que
son diferentes entre el donante y el receptor. Los antígenos A y B están presentes en la
superficie de los glóbulos rojos, y el cuerpo produce anticuerpos naturales contra los
antígenos que no tiene.
Mecanismo inmunológico:
 Antígenos ABO: Las personas con sangre tipo A tienen antígenos A en sus
células y anticuerpos contra el antígeno B. Las personas con sangre tipo B tienen
antígenos B y anticuerpos contra A. Las personas con sangre O no tienen
antígenos A ni B, pero poseen anticuerpos contra ambos (A y B). Las personas
con sangre AB tienen ambos antígenos y no generan anticuerpos contra A o B.
 Si un receptor de trasplante tiene anticuerpos contra los antígenos ABO presentes
en el injerto del donante (por ejemplo, un receptor tipo O recibiendo un órgano
de un donante tipo A o B), estos anticuerpos reconocen los antígenos del donante
como extraños y atacan las células del injerto.
 Rechazo hiperagudo: En este tipo de rechazo, los anticuerpos preformados del
receptor (contra A o B) se unen rápidamente a los antígenos ABO del injerto,
activando el sistema del complemento. Esto lleva a la destrucción inmediata
del tejido del injerto, trombosis y necrosis, causando un fallo inmediato del
trasplante.

- ¿Cuál es la función del interferón gamma?

El interferón gamma (IFN-γ) es una citocina crucial en la respuesta inmunitaria. Su
función principal incluye:
 Activación de macrófagos: Potencia la capacidad de los macrófagos
para eliminar patógenos y células tumorales.
 Regulación de la respuesta inmune: Promueve la diferenciación de células
T hacia el perfil Th1, favoreciendo la respuesta inmune celular.
 Aumento de la presentación de antígenos: Estimula la expresión de moléculas
del complejo principal de histocompatibilidad (MHC), lo que mejora la
presentación de antígenos a las células T.
 Efecto antiviral: Ayuda a inhibir la replicación viral en células infectadas.
El IFN-γ es clave para coordinar y potenciar la respuesta inmunitaria frente a
infecciones y tumores.(1)

- ¿Cuál es la función de los linfocitos T y linfocitos B?

Las interleucinas son proteínas que actúan como mensajeros dentro del sistema
inmunológico, facilitando la comunicación entre las células inmunitarias. Estas
moléculas, también conocidas como citocinas, son esenciales para una
respuesta
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inmunitaria coordinada contra infecciones y otras amenazas. Su función principal es
regular la inflamación y guiar el desarrollo de las células inmunitarias. (2)
 Interleucina 1 (IL-1): Esta interleucina actúa como una señal de alarma,
activando la respuesta inflamatoria y reclutando células inmunitarias como
macrófagos y linfocitos T para combatir infecciones. También es responsable de
la fiebre, un mecanismo de defensa del cuerpo.
 Interleucina 2 (IL-2): Esta interleucina fomenta el crecimiento de los linfocitos T
y B, estimulando su multiplicación y fortaleciendo la respuesta inmunitaria tanto
celular como humoral.
 Interleucina 4 (IL-4): Esta interleucina dirige la diferenciación de los linfocitos
T hacia células Th2, que son importantes en las respuestas alérgicas y contra
parásitos. También estimula la producción de anticuerpos por las células B.
 Interleucina 6 (IL-6): Esta interleucina es un potente mediador de la
inflamación, estimulando la producción hepática de proteínas de fase aguda, que
ayudan a combatir infecciones. También participa en la activación de los
linfocitos T y B.
 Interleucina 8 (IL-8): Esta interleucina atrae a los neutrófilos,
células inmunitarias que combaten las bacterias.
 Interleucina 10 (IL-10): Esta interleucina tiene un efecto calmante, controlando la
inflamación y evitando que se descontrole. Lo hace inhibiendo la producción de
otras citocinas inflamatorias. (3)

- ¿A qué tipos de células se les denominas células presentadoras

de antígenos?
Las células presentadoras de antígenos (CPA) son un tipo de células inmunitarias que
muestran fragmentos de antígenos a los linfocitos T.
Las CPA más importantes son:
 Células dendríticas: Son las CPA más potentes y se encuentran en la piel, los
ganglios linfáticos y otros tejidos. Captan antígenos de su entorno y los presentan
a los linfocitos T en los ganglios linfáticos.
 Macrófagos: Se encuentran en varios tejidos y fagocitan patógenos y
células muertas. También presentan antígenos a los linfocitos
 T.Células B: Son las únicas células que pueden presentar antígenos a
los linfocitos T a través del receptor de células B (BCR).

Otras células que pueden presentar antígenos en menor medida son:

 Células epiteliales: Se encuentran en las superficies del cuerpo y pueden presentar
antígenos a los linfocitos T.
 Células endoteliales: Se encuentran en los vasos sanguíneos y pueden presentar antígenos
a los linfocitos T.

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- ¿En qué se basa la técnica de aglutinación directa?

La técnica de aglutinación directa es un método serológico que se usa para identificar la
presencia de antígenos o anticuerpos en una muestra. La capacidad de los anticuerpos
específicos se basa en unir antígenos presentes en partículas grandes, como células,
bacterias o eritrocitos, lo que resulta en la formación de "aglutinados" visibles a simple
vista.
Si un antígeno particular se encuentra en la muestra, los anticuerpos se unirán a él en esta
técnica, lo que llevará a la aglutinación.
Se utiliza en procedimientos diagnósticos como la determinación de tipos sanguíneos, la
identificación de bacterias y virus, y el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Es un
procedimiento rápido, sencillo y barato, aunque su eficacia depende de la cantidad de
antígenos y anticuerpos que haya presentes.

- ¿Por qué una vez extraída la sangre se debe proceder con rapidez?
 Prevención de la coagulación: La sangre contiene factores de coagulación que, con
el tiempo, harán que la sangre se convierta en un coágulo sólido. Esto dificulta el
análisis de la sangre, ya que las células y los componentes ya no estarán en su
estado original.
 Mantenimiento de la integridad de las células: Las células sanguíneas, como los
glóbulos rojos y blancos, son delicadas y pueden dañarse o descomponerse si se
dejan a temperatura ambiente durante mucho tiempo. Esto puede afectar los
resultados de los análisis de sangre que requieren un conteo preciso de células.
 Preservación de los componentes sanguíneos: Algunos componentes sanguíneos,
como las proteínas y los electrolitos, pueden degradarse o volverse inestables con
el tiempo. La manipulación rápida ayuda a mantener la integridad de estos
componentes para obtener resultados precisos.
 Minimización del crecimiento bacteriano: La sangre es un medio ideal para el
crecimiento de bacterias. La manipulación rápida y el almacenamiento adecuado
pueden minimizar el riesgo de contaminación bacteriana, lo que podría alterar los
resultados de los análisis.
La manipulación rápida de la sangre extraída es esencial para garantizar la precisión y la
fiabilidad de los análisis de sangre. Los procedimientos específicos pueden variar según
el tipo de análisis que se realice, pero en general, la sangre debe procesarse lo antes
posible para obtener resultados óptimos.

- ¿Cuál es la diferencia entre “Suero” y “Plasma” sanguíneos?

La diferencia fundamental entre el plasma y el suero sanguíneo radica en su composición
y en el proceso mediante el cual se obtienen. El plasma es el componente líquido de la
sangre que se mantiene cuando no se ha coagulado, mientras que el suero es el líquido
que queda después de que la sangre ha coagulado y se han eliminado los factores de
coagulación (4).

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El plasma sanguíneo constituye aproximadamente el 55% del volumen total de la sangre
y está compuesto principalmente por agua (alrededor del 90%), pero también contiene
proteínas, hormonas, electrolitos, gases, nutrientes y desechos. Entre sus proteínas más
importantes se encuentran la albúmina, las globulinas y el fibrinógeno. El fibrinógeno es
crucial porque participa en la coagulación sanguínea. El plasma es esencial para el
transporte de sustancias a través del cuerpo y juega un rol en la regulación del pH, la
temperatura y el volumen sanguíneo.
Por otro lado, el suero es lo que queda cuando se retiran los factores de coagulación,
como el fibrinógeno, del plasma. Para obtener el suero, se deja que la sangre coagule y
luego se separa el líquido resultante de la parte sólida (el coágulo). Dado que el suero no
contiene fibrinógeno, es útil en análisis clínicos y diagnósticos, especialmente en pruebas
que no requieren coagulación. Además, el suero contiene anticuerpos y otras proteínas,
por lo que también es valioso en estudios inmunológicos (5).
Ambos componentes tienen aplicaciones clínicas importantes. El plasma se usa en
transfusiones para pacientes con trastornos de la coagulación o deficiencias de factores
específicos, mientras que el suero se emplea en una amplia variedad de pruebas
diagnósticas, incluyendo la medición de electrolitos, enzimas y marcadores de
enfermedades.

- Sabiendo que son los eritrocitos del dador, los que se aglutinan por las
aglutininas del receptor, complete el siguiente esquema indicando con
una flecha la dirección, en relación a que individuos de un determinado
grupo del sistema ABO, pueden donarles sangre.
La compatibilidad de donación de sangre se basa en la presencia de antígenos en los
eritrocitos del donante y anticuerpos (aglutininas) en el plasma del receptor. Esto es
clave para evitar la aglutinación, que ocurre cuando las aglutininas del receptor atacan
los antígenos de los eritrocitos del donante.
Aquí está la compatibilidad entre grupos sanguíneos:
 Grupo O (sin antígenos A ni B, con aglutininas anti-A y anti-B):
Puede donar a: Todos los grupos (O, A, B y AB). Se le llama "donante universal"
porque no tiene antígenos que puedan ser atacados por las aglutininas del receptor.
Puede recibir de:
Solo del grupo O (debido a la presencia de ambas aglutininas anti-A y anti-B en su
plasma).
 Grupo A (con antígenos A, con aglutininas anti-B):
Puede donar a: Grupo A y AB (ya que el receptor no tiene aglutininas anti-A).
Puede recibir de: Grupo A y O (no tiene aglutininas anti-O).
 Grupo B (con antígenos B, con aglutininas anti-A):
Puede donar a: Grupo B y AB.
Puede recibir de: Grupo B y O.
 Grupo AB (con antígenos A y B, sin aglutininas):
Puede donar a: Solo al grupo AB.

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Puede recibir de: Todos los grupos (O, A, B y AB). Se le llama "receptor universal"
porque no tiene aglutininas que ataquen los antígenos de otros grupos

REFERENCIAS:
1. Karp CL, et al. Interferon-γ and the immune response to infections. Clinical Microbiology Reviews.
2001;14(1):142-161
2. Gazzinelli RT, et al. The role of IFN-γ in the immune response to infectious agents. Nature
Immunology. 2004;5(2):121-128.
3. Oliveira CMB de, Sakata RK, Issy AM, Gerola LR, Salomão R. Citocinas e dor. Rev Bras Anestesiol.
abril de 2011;61(2):260-5.
4. Castellanos-Segura, C., & Fernández-Medina, C. (2019). Fisiología del plasma sanguíneo y sus
funciones esenciales en la homeostasis. Revista de Ciencias Biomédicas, 15(2), 67-75.
5. González-Muñoz, M., & Herrera-Ramírez, R. (2021). Composición y diferencias entre plasma y
suero en el análisis clínico. Bioquímica Clínica Aplicada, 18(4), 102-110.

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