FORMATO DE GUÍA PARA LAS ACTIVIDADES PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE SIMULACIÓN CLÍNICA DE LA

UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO

(LSC-UAN)

1. IDENTIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA

NOMBRE DE LA
FACULTAD PROGRAMA SEMESTRE
ASIGNATURA
MEDICINA III FISIOLOGÍA
MEDICINA
FECHA DE ELABORACIÓN
NOMBRE DE LA PRÁCTICA NUMERO DE LA PRÁCTICA ELABORADO POR
DE LA GUÍA
RH 1 FEBRERO 2018 JUAN PABLO GUTIERREZ B

2. TÍTULO
IDENTIFICACION DE AGLUTININAS. PRUEBA SERICA, INVERSA O DE
SIMONIN-MICHON- TIPIFICACION SANGUINEA Rh

3. INTRODUCCIÓN
 La correcta identificación del grupo sanguíneo y su factor rh es imprescindible para evitar reacciones
transfusionales que puede poner en riesgo la vida de los pacientes.

4. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
 Determinar el grupo sanguíneo, con relación al sistema ABH, mediante la identificación de los aglutinógenos y
las aglutininas principales que se encuentran en una muestra de sangre y suero, utilizando antisueros y
glóbulos rojos conocidos según lo indicado en cada caso.
 Determinar la clasificación sanguínea, en relación al sistema Rh, segundo Sistema sanguíneo en importancia
después del ABO, efectuando pruebas que identifiquen los principales antígenos del sistema que se
encuentran presentes en una muestra de sangre dada.

5. RESULTADOS DE APRENDIZAJE
Una vez termine la práctica el estudiante estará en capacidad de reconocer y aplicar las pruebas más utilizadas en el
laboratorio clínico para la identificación del grupo sanguíneo y rh.

6. PRERREQUISITOS TEÓRICOS

Previo al ingreso al laboratorio el estudiante deberá:

1. Haber leído y entendido la práctica completamente.
2. Resaltar la importancia de la hemoclasificacion sanguínea.
3. Repaso de normas de bioseguridad universal

7. MATERIAL REQUERIDO EN EL LABORATORIO

1. Láminas porta-objeto. Tubos de 10 o 12 x 75 m y tubos de 13 x 10 mm. provistos de tapones de caucho
o en su defecto plástico adherente. Pipetas Pasteur (plásticas), palillos, Tubos de sistema al vacío, para
recolección de las muestras, tapa roja y tapa lila, con sus respectivas agujas y guías, o sistemas de
jeringa hipodérmica, lupa para lectura, fuente de luz blanca.

Revisado por: Aprobado por:

 2. Solución salina isotónica

3. Sueros anti-A, anti-B, anti-A, B.

Láminas portaobjetos, palillos, sangre total, suero anti-D y reactivo control Rh, lámpara con visor de
aglutinación, lupa, pipetas Pasteur.

Tomado de internet

PARA RH:

1. Láminas portaobjetos, palillos, sangre total, suero anti-D y reactivo control Rh, lámpara con visor de
aglutinación, lupa, pipetas Pasteur.

8. IMPLEMENTOS Y MATERIALES QUE DEBE INGRESAR EL ESTUDIANTE AL LABORATORIO

Para la práctica el estudiante debe ingresar al laboratorio:
1. Guia de laboratorio.
2. Guantes de latex
3. jeringas de 10 cc g21
4. torniquete
5. camisa
6. jeringa de extraccion sanguinea

9. PROCEDIMIENTO
1. Marcar cuatro tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm (con marcador de vidrio) con el No. de la muestra y
el nombre del antisuero correspondiente al antígeno que se va a investigar y un tubo para el control con S.S
al 0.85 %.
2. Tomar 2 a 3 gotas de los glóbulos rojos en estudio y lavarlos una vez con solución salina fisiológica (SSF);
centrifugando a 3.400 r.p.m. x 1 minuto.
3. Decantar completamente para eliminar el sobrenadante y preparar una suspensión del 3-al 5% en SSF de los
hematíes previamente lavados.
4. Seleccionar 4 tubos de, 12 x 75 mm e identificarlos con marcador como A, B, AB, Control, respectivamente.

Nota: Leer y seguir las instrucciones del fabricante.

Continuar como sigue:

2
 Anti-A Anti-B Anti A,B S.S 0.85 %

5. Antisuero correspondiente 1 gota (50ul) 1 gota (50ul) 1 gota (50ul) 1 gota (50ul)

6. G.R del paciente lavados y 1 gota (50ul) 1 gota (50ul) 1 gota (50ul) 1 gota (50ul)
suspendidos del 2 al 5 %

7. Mezclar suavemente

8. Centrifugar a 3.400 r.p.m. x 15” o a 1.000 r.p.m. x 1 minuto.

9. Desprender el botón de células del fondo del tubo agitándolo suavemente; inclinarlo hasta la posición
horizontal para apreciar completamente la aglutinación y cuantificar las cruces. Se debe usar siempre
ayuda visual.

10. Anotar inmediatamente, tubo en mano, los resultados obtenidos de la aglutinación o hemólisis.

tomado de internet

INTERPRETACIÓN

POSITIVO: Aglutinados de Glóbulos rojos (GR) de diferentes grados de reacción según tabla.
NEGATIVO: Presencia de una suspensión uniforme de los Glóbulos rojos.

TABLA 1. GRADOS DE REACCIONES EN HEMAGLUTINACIÓN Y SCORE. (Marsh)

La siguiente tabla debe tenerse en cuenta para graduar todas las reacciones de hemoaglutinación de pruebas
realizadas por el método en tubo.

4 ++++ Un agregado sólido compacto. No se detectan glóbulos rojos libres.

3 +++ Varios agregados grandes

2 ++ Agregados grandes en un mar de grumos más pequeños, sin glóbulos rojos libres.

3
 1+ Agregados pequeños, sobrenadante rojizo por glóbulos rojos libres.

W o Granularidad débil en la suspensión de glóbulos rojos. Pocos aglutinados

débil macroscópicos pero muchos microscópicos.

0 Suspensión de glóbulos rojos uniforme. No se detectan aglutinados. Negativo.

H Sobrenadante rojo brillante. Hemólisis

SCORE
Es la puntuación que corresponde según el grado de aglutinación. Es de gran importancia en pruebas de titulación
de anticuerpos.

4 ++++ 12

3 +++ 10

2 ++ 8

1+ 5

W o débil 2

0 0

H Hemolisis

2 Método en portaobjetos.

4
 REACTIVOS
1- Anti-A mono o policlonal
2- Anti-B mono o policlonal
3- Anti-A,B (opcional)
Nota: Todos los reactivos deben utilizarse de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
4- Solución Salina Fisiológica (0.85 %)

2.1 MUESTRAS
Antes de realizar pruebas en lámina portaobjetos, es preciso consultar las instrucciones del fabricante de los reactivos,
algunos recomiendan efectuarlas con sangre entera y otros con suspensiones de glóbulos rojos poco concentradas,
preparadas en solución salina, suero o plasma.

2.2: PROCEDIMIENTO

1. Marcar apropiadamente la lámina con A, B, AB y control.

2. Agregar una gota de anti-A, anti-B, anti-AB y solución salina en el sitio correspondiente.
3. Colocar las cuatro gotas de sangre con la pipeta de transferencia o Pasteur y mezclar con un palillo limpio y diferente
para cada antisuero, extendiendo la mezcla en un área de aproximadamente dos centímetros por cuatro
centímetros.
4. Inclinar el portaobjetos con suavidad por 2 minutos. No colocar en superficie caliente. Rotar constantemente y
observar por aglutinación.
5. Leer e interpretar frente a una buena fuente de luz blanca antes de dos minutos, (lámpara lectora)
6. Anotar los resultados de acuerdo al siguiente formato.

2.3: INTERPRETACION

POSITIVO: Aglutinados de GR máximo después de 2 minutos de la mezcla.

NEGATIVO: Presencia de una suspensión uniforme de los Glóbulos rojos.

TABLA DE REGISTRO DE RESULTADOS

Nombre Paciente:_______________________No. Identificación Muestra: _____________

Prueba Directa en Lámina

Rechequeó

Anti-A Anti-B Anti A,B Control

5
Nombre Paciente: _________________________________________

Prueba Directa en Tubo Prueba Inversa Interpretación

Anti-A Anti-B Anti-A,B Control Gr A1 Gr A2 Gr B Gr O Grupo ABO

Grupo: _____________ Fecha: ____________________ Firma: ________________

Lote de Reactivos. Anti-A:___________ Anti-B:____________ Anti-A,B:____________

Fecha de Expiración: ___________ ___________ ____________

Tomado de Dia-Med

ACTIVIDAD 3 RH:

3.1 INTRODUCCIÓN
6
El sistema del grupo sanguíneo Rhesus es de gran importancia en biología humana. Es el más importante después del
Sistema ABO. Su conocimiento permitió lograr transfusiones exitosas después de la segunda guerra mundial. Su
descubrimiento permitió comprender el mecanismo de la enfermedad hemolítica del recién nacido por inmunización feto
- materna. Dado que la mayor parte de la población es Rh positivo, es indispensable que en el laboratorio de
Inmunohematología se utilicen los procedimientos adecuados para establecer la correcta clasificación para el antígeno
D, incluyendo las variantes débiles y el fenotipo Rh, para lograr disminuir la sensibilización eritrocitaria por transfusión o
embarazo asociada con este sistema.

Los antígenos Rhesus fueron identificados por anticuerpos descubiertos en el suero de sujetos transfundidos o mujeres
embarazadas. Estos anticuerpos en su mayoría anticuerpos inmunes, que pertenecen a la IgG y son incapaces de
aglutinar in-vitro los hematíes portadores del antígeno correspondiente, se les denominó anticuerpos bloqueadores o
incompletos.

Por esta razón se utilizan corrientemente técnicas de aglutinación “in vitro” para comprobar la fijación del anticuerpo al
antígeno específico mediante modificación del medio de suspensión de los hematíes mediante macromoléculas o altas
concentraciones de proteínas (albúmina bovina) o utilización de hematíes tratados con enzimas; bromelina, papaina,
ficina.

El antígeno D es el más importante en transfusión e incompatibilidad feto-materna, dada su gran inmunogenicidad, los
restantes antígenos del Sistema pueden también ser causa de inmunización.

La rutina en el laboratorio de Inmunohematología incluye la determinación del antígeno D y la detección del antígeno D
débil, confirmación del antígeno D negativo en todos aquellos individuos susceptibles de recibir transfusiones repetidas o
en posibles futuras embarazadas a quienes también deben identificárseles los 5 antígenos principales del sistema
Rhesus.

Para la determinación del antígeno D se utilizan variedades de antisueros cada una de ellas tiene modificaciones o
indicaciones específicas para sus uso, para lo pertinente se revisarán algunos aspectos de comportamiento y actividad de
dichos antisueros y la utilidad práctica de cada uno de ellos.

3.2 PRE- LABORATORIO

1. Teniendo en cuenta las variedades de antisueros anti-D que existen comercialmente; lea la literatura del producto.
2. En relación a la variante débil del D analice el comportamiento variable frente a los anticuerpos anti-D (Rh).
3. Destaque las condiciones de reacción indispensables para detectar antígenos Rh.
4. Explique porque se deben emplear en las pruebas de tipificación Rh controles con sueros inertes.
5. Qué tipo de antisuero debe de usarse en la determinación del antígeno D en caso de pruebas en tubo con resultado
positivo en el control de prueba.
6. Revise y analice a fondo las expresiones D débil y D parcial y explique en un cuadro las diferencias.
7. Investigue los diferentes tipos de suero de de Coombs existente y los métodos de obtención.
8. Revise el fundamento de las pruebas de Coombs, su aplicación para la detección de antígenos débiles y la aplicación
en la determinación de la variante D débil. Explique el fundamento de la prueba.
9. Comprenda la historia natural de las enfermedades, incompatibilidad RH, eritroblastosis fetal.

3.3 DETERMINACION DEL FACTOR Rh(D)

a. Método en Lámina

3.4 MATERIALES Y REACTIVOS

Láminas portaobjetos, palillos, sangre total, suero anti-D y reactivo control Rh, lámpara con visor de
aglutinación, lupa, pipetas Pasteur.

7
3.5 PROCEDIMIENTO

Leer siempre las instrucciones del fabricante sobre el uso de los reactivos para pruebas en tubo o lámina

Colocar sobre una lámina de vidrio previamente calentada a 4°C, una gota de suero anti-D, en otra lámina una gota de
control Rh o en su defecto albúmina bovina al 22%, agregar a cada lámina una gota de sangre ó una suspensión de
hematíes en su propio suero al 50%. Mezclar circularmente y extender sobre una superficie de 22 mm x 40 mm
utilizando un palillo de madera, dentro de los 2 minutos siguientes oscilando la lámina observar presencia o ausencia de
aglutinación
Nota: Siempre debe usarse un control con el fin de que GR sensibilizados con anticuerpos de tipo IgG(incompletos) o
procedentes de pacientes cuyo suero posea globulinas sericas anormales, anticuerpos autoinmunes, aglutininas frías o
proteínas que causen rouleaux, y que pueden agregarse espontáneamente sean detectados.

3.6 INTERPRETACION
POSITIVO: Aglutinación de los glóbulos rojos.
NEGATIVO: Suspensión uniforme de glóbulos rojos.

Observaciones:
Si la preparación de glóbulos rojos en el tubo control presenta aglutinación; la prueba no se logra interpretar (Esto
puede suceder con antisueros de alta concentración proteica caso en el cual se usa un antisuero salino)

Se debe tener cuidado en no leer pasado el tiempo indicado ya que la desecación en los bordes de la preparación se
puede confundir con aglutinación.

b. Método En Tubo

3.7 MATERIALES
Tubos de 12 x 75 mm, suspensión de glóbulos rojos 3 - 5%, baño serológico, anti-D, reactivo control Rh, Pipetas Pasteur.

3.8 PROCEDIMIENTO
1. Lavar los glóbulos rojos del paciente con solución salina fisiológica (SSF) 0.85 % y preparar una suspensión de
glóbulos rojos a examinar al 3 - 5 % en SSF.
2. Identificar apropiadamente dos tubos de 12 x 75 mm (para la prueba y su control) y el número de identificación de
la muestra.

Continuar con el siguiente procedimiento:

Anti-D Control-Rh

3. Dispensar 1 gota o 50 ul ____

4. Agregar ____ 1 gota o 50 ul

5. GR en estudio lavados y
1 gota o 50 ul 1 gota o 50 ul
suspendidos del 2 al 5 %

6. Mezclar y Centrifugar a 3.400 r.p.m. (serófuga) por 15”, o a 1.000 r.p.m. por 1 minuto.

7 .Resuspender suavemente el botón de las células del fondo del tubo y leer la aglutinación en cruces

8. Si no se observa aglutinación incubar 15 a 30 minutos a 37°C.

8
 9 .Centrifugar, leer y registrar.

3.9 INTERPRETACION

POSITIVO: Aglutinación superior a 2+ antes o después de incubación.

NEGATIVO: Suspensión uniforme de GR o aglutinación débil o dudosa. En este caso continuar con procedimiento para
variante débil.

10. RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES DEL MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS

Tener cuidado con la manipulación de los diferentes materiales del laboratorio.
Se debe tener especial cuidado en las normas de bioseguridad universales.

11. ACTIVIDADES POSTERIORES A LA PRACTICA

Quiz post practica

12. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

- Guyton y Hall. Tratado de Fisiología Médica Edición 13 (2016). Editorial: ElsevierMasson. [Español]
- Ira Fox, Stuart. Fisiología Humana 10ª Edición (2008). Editorial: McGraw Hill (e-libro)
th
- Barrett, Boitano, Barman, Brooks. Ganong's Review of Medical Physiology, 24 Edition (2012). Editorial: McGraw Hill
(Access Medicine)
- Yuly Elien Bernal - Carlos Bejarano - Marisol Rodríguez †. facultad de ciencias basicas, laboratorio de ciencias
básicas biologicas y quimicas uan- manual de bioseguridad.

13. EVALUACION

Al finalizar la practica se realizara un quiz, para la respectiva evaluación, solo podrán presentarlo los asistentes en la
práctica.