Cours Régulation Et Facteurs Influencant La Catalyse

26/10/2023
Facteurs influençant l’activité enzymatique
Qu’est ce qui influence l'activité enzymatique?
De nombreux facteurs modulent l’activité des enzymes

1. Les conditions de l'environnement
Paramètres physico-chimiques : température, pH, force ionique,
Paramètres chimiques : les métaux, agents dénaturants, modifications
covalentes, protéolyse
2. 2. Cofacteurs et Coenzymes
3. 3. Des inhibiteurs d’enzymes/ activateurs
A-Influence des agents physiques :

1- Influence de la température:
2 effets sur la réaction enzymatique:
- Elle accélère la réaction en fournissant l’énergie nécessaire au franchissement de la
barrière due à l’énergie d’activation
- Une température élevée fragilise les liaisons et rend la structure tertiaire instable,
pour dénaturer la protéine;
Il y aura diminution de l’activité catalytique
influence de la température sur l’activité enzymatique.
1
26/10/2023

Température basse: La température augmente la vitesse enzymatique puisque
l'interaction entre l'enzyme et son substrat devient plus importante à forte température.
Température élevée: A fortes températures la protéine se dénature et perd donc son
activité enzymatique.
L'activité enzymatique augmente jusqu'à une température optimale puis diminue pour
atteindre une activité nulle à de grandes températures. A la température optimale
l'activité enzymatique est la plus importante. Cette température optimale varie d'une
enzyme à une autre.
on compare l’activité de l’enzyme

pour une température t avec
AE l’activité pour une température
Dénaturation
t + 10°C Q10
Quand la T
augmente, il se
produit une
inactivation
«dénaturation»
progressive de
l’enzyme
0 10 20 30 40 50
Température / °C
Généralement, la dénaturation est négligeable en dessous de 30°C
et commence à être appréciable au-delà de 40°C. Quelques enzymes
gardent une activité importante à des températures bien supérieures à
40°C cas des enzymes des bactéries thermophiles.
2
26/10/2023

L’activité enzymatique est très sensible aux variations de
température.
La courbe vi =f(T) est une courbe en cloche.

Cette courbe est la résultante de 2 phénomènes indépendants :
* Activation thermique
* Dénaturation par la chaleur.
I- Activation thermique
Pour des températures < la température optimale, la chaleur du

milieu apporte un supplément d’énergie qui facilite la réaction
enzymatique (↗ des chocs moléculaires efficaces).
3
26/10/2023

Loi d’Arrhénius
la loi d'Arrhenius établit la dépendance de la vitesse
k = A.e(-Ea/RT) d'une réaction chimique à la température
k : constante de vitesse (k2 ou kcat),
A : constante appelée facteur de choc ou de fréquence (fréquence de

collision).
Ea : énergie d’activation en J.mol-1,

R : constante des gaz parfaits, 8,315 J.K-1mol-1
T : température absolue en Kelvin = 273°C).
II- inactivation thermique des enzymes.
La dénaturation thermique des enzymes entraîne la

rupture des liaisons faibles qui maintiennent les
structures secondaires, tertiaires et quaternaires des
protéines.
4
26/10/2023

+ chaleur
La dénaturation thermique est généralement irréversible

(sauf quelques cas).
Protéine dénaturée  précipitation

La plupart des enzymes sont inactivées vers 40°C.
Il existe quelques exceptions :
Certaines bactéries des eaux chaudes ont des enzymes

qui sont actives à 100°C : exemple : La TAQ polymérase
utilisée dans la PCR.
 La ribonucléase fonctionne aussi ≈ 100°C.
5
26/10/2023

2- Influence du pH:
Le pH joue sur l’ionisation des molécules => conformation de l’enzyme et du substrat, il a deux effets :
- Aux valeurs extrêmes : dénaturation de la protéine enzymatique en modifiant l’état d’ionisation des chaines latérales
des acides aminés
- Aux valeurs intermédiaires : modification de la conformation du site actif et celle de substrat.
- pH optimum : activité enzymatique est optimale.
influence du pH sur l’activité enzymatique

2- Influence du pH:
6
26/10/2023

2- Influence du pH:
Les enzymes sont sensibles aux variations du pH du milieu. De fait, quand le pH
change, l’état d’ionisation des groupements chargés, aussi bien dans le site actif de
l’enzyme varie.
•Exemples :
-la pepsine au niveau de l’estomac
fonctionne mieux à pH acide.
-la lipase du suc pancréatique à un pH
optimal compris entre 7 et 7.5
-les phosphatases alcalines osseuses ou
hépatiques ont un pH optimal entre 8.6 et
9.1.

2- Influence du pH:
• Courbe en cloche
• pH optimum
7
26/10/2023

3- Force ionique:
La présence d’ions dans le milieu réactionnel joue un rôle important:
- Certaines enzymes nécessitent des activateurs (ions métallique)
4- Effet de radiation:
Les émissions radioactives α, β, γ, rayons X, peuvent directement ou indirectement entrainer l’inactivation des
enzymes:
Direct: -Ionisation des molécules
Indirect: -Ionisation du milieu réactionnel
-Formation de radicaux libres qui attaquent les enzymes
B-Influence des agents Chimiques :

1-Définition:
Effecteur: Est tout corps chimique, minéral ou organique capable de modifier la cinétique des réactions
enzymatiques.
Rôle Physiologique: Régulation du métabolisme cellulaire
Rôle Biochimique: Permettre de mieux comprendre le mode d’action des enzymes.
 Les activateurs
 Les inhibiteurs
 Les régulateurs (allostériques)
8
26/10/2023
 Les activateurs
Définition:
Est tout agent chimique, qui par sa liaison avec l’enzyme accélère la vitesse de la réaction enzymatique
1- Ions métalliques:
Fixation par coordinance à des atomes d’oxygène, d’azote, des groupements COOH, NH2 des enzymes:
- Ils confèrent une grande stabilité dans le site actif de l’enzyme,
L’ion métallique favorise:
- Une bonne conformation de l’enzyme
- La fixation du substrat
- participe de manière directe à la catalyse Exemple: Kinases activées par Mg +2

 Les activateurs
2- Activation des pro-enzymes inactifs:
La plupart des enzymes protéolytiques sont synthétisés sous forme de précurseurs

inactifs,
La protéolyse limitée (Pro-enzyme): par
L’élimination d’une séquence d’acides aminés le rend actif clivage spécifique de liaisons peptidiques,
Trypsinogène Trypsine + Hexapeptide permettant l’apparition du site actif, ex : la
chymotrypsine.
3- Activation par fixation covalente d’un groupement chimique:
Par addition d’un groupement chimique, le plus souvent le phosphate
Phosphorylase b inactive Phosphorylase a active

Modifications covalentes: l’enzyme peut exister
entre deux formes inter-convertibles, l’une
active et l’autre non-active, ex :
phosphorylation et déphosphorylation.
9
26/10/2023
 Les inhibiteurs
 Les inhibiteurs
 L’inhibiteur est un ligand qui se lie à l’enzyme mais ne subit pas de transformation, il entraine une diminution de
l’activité enzymatique
 Est tout effecteur, qui par sa liaison avec l’enzyme ralentit la vitesse de la réaction enzymatique
 Des inhibiteurs enzymatiques sont des espèces qui sont capables de diminuer l'activité enzymatique. Ils
interagissent généralement avec l’enzyme elle-même, formant ainsi un complexe enzyme-inhibiteur
Intérêt:
- Mécanisme essentiel de contrôle des systèmes biologiques
- Source d’information sur le mécanisme d’action des enzymes
10
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Définition
Un inhibiteur enzymatique est une substance

capable de diminuer ou abolir l’activité enzymatique.
Il interagit avec l’enzyme, formant un complexe EI.
 Il n’est pas modifié par l’enzyme.
 Il peut être réversible ou irréversible.
 Les inhibiteurs
L’inhibition sélective d’une enzyme par des substances chimiques est

utilisée dans de nombreux domaines :
Beaucoup de médicaments, pesticides, herbicides ou insecticides sont des

inhibiteurs enzymatiques.
11
26/10/2023
 Les inhibiteurs
KI [E] [I]
k 
E+ I EI I [EI]
 KI = constante de dissociation du complexe EI en E + I

(unité : M).
 KI traduit l’affinité de l’enzyme pour l’inhibiteur.
 KI = [I] pour laquelle la moitié des sites enzymatiques

sont occupés par l’inhibiteur.
 Plus KI est petit plus l’affinité de l’inhibiteur pour

l’enzyme est grande.
 Les inhibiteurs
Les inhibiteurs sont des substances qui inactivent les enzymes
Il existe deux principaux types d’inhibition:

Inhibition réversible des enzymes: l’activité enzymatique peut être
retrouvée en enlevant l’inhibiteur .
-(activité spécifique et les paramètres de Michaelis-Menten sont affectés)
Inhibition irréversible des enzymes: l’inhibiteur lie l’enzyme
de manière covalente, inactivant ce dernier de façon irréversible.
(la concentration d’enzyme active est diminuée).
12
26/10/2023
 Les inhibiteurs
A- Inhibiteurs réversibles
Les inhibiteurs réversibles s'associent aux enzymes par des liaisons non covalentes comme des liaisons
hydrogène, des interactions hydrophobes et des liaisons ioniques.
Contrairement aux substrats et aux inhibiteurs irréversibles, ils peuvent être facilement éliminés par
dilution ou par dialyse
Les inhibiteurs réversibles:

- Perturbent la cinétique et peuvent stopper la réaction
- L’inhibition peut être levée dans des conditions réactionnelles particulières
Ont un grand intérêt puisqu’ils permettent une étude très fine des mécanismes moléculaire de la catalyse.
 Les inhibiteurs
1. Inhibiteur compétitif
Le substrat (S) et l'inhibiteur (I) entrent en compétition pour le site actif.
Un inhibiteur compétitif possède généralement une ressemblance structurale avec le substrat et tous deux entrent en
compétition pour se fixer sur le même site enzymatique (=effet isostérique).
Inhibition compétitive
13
26/10/2023
 Les inhibiteurs
1. Inhibiteur compétitif
La réaction enzymatique est bloquée, soit parce que l'inhibiteur ne possède pas le groupement chimique transformé
par l'enzyme, soit parce que la position de groupement chimique sur l'inhibiteur rend impossible sa reconnaissance par
le site actif.
La fixation de l'inhibiteur entraîne une modification de la conformation du site de liaison du substrat, empêchant la
reconnaissance entre l'enzyme et le substrat.
Inversement, la liaison du substrat sur l'enzyme empêche la fixation de l'inhibiteur : ces deux molécules s'excluent
mutuellement. Le complexe EI est inactif et ne peut pas donner un composé qui résulterait de la transformation de I.
- L’inhibiteur peut être déplacé à des concentrations élevées du

substrat.
- Les inhibiteurs compétitifs n’ont pas d’effet sur le Vmax de
l’enzyme, mais changent le Km. Le Km augmente par un
facteur de (1+ [I] /Ki)

 Les inhibiteurs
Vmax [S]
vo   [I ] 
 [ I]  K m app  K m 1  
[S]  K m 1    Ki 
 Ki 
14
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Pas d’effet sur Vmax
 [I ] 
 K m 1  
app
Affinité diminuée : kmapp> km Km
 Ki 
 1  [I] = facteur d’inhibition.

Ki
app
1 Km 1 1
 
V0 Vmax [ S ] Vmax
1 K  [I ]  1 1
 m 1   
V0 Vmax  K i  [ S ] Vmax

 Les inhibiteurs
Graphique de Lineweaver-Burk pour un IC
15
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Exemples d’inhibiteurs compétitifs
•Traitements aux antibiotiques
Certains antibiotiques agissent en inhibant le fonctionnement de

certaines enzymes essentielles à la survie des bactéries.
C'est le cas des antibiotiques de la famille des sulfamides.

 Les inhibiteurs
16
26/10/2023
 Les inhibiteurs
L’acide para aminobenzoïque est le précurseur de l’acide
folique, facteur de croissance essentiel pour plusieurs
types de bactérie.
Acide folique
Les sulfamides ont une structure chimique qui ressemble à

celle de l’acide para aminobenzoïque.
 Les inhibiteurs
• Médicament pour le traitement de la goutte
La goutte est une maladie métabolique caractérisée par une

augmentation de la concentration d’acide urique dans le
sang.
L’acide urique, peu soluble en milieu aqueux, se dépose

sous forme de cristaux, notamment au niveau des
articulations.
17
26/10/2023
 Les inhibiteurs
XO (xanthine oxydase)
xanthine + O2 + H2O  acide urique + H2O2
 L’allopurinol est un puissant IC de la (XO).
Il est utilisé dans le traitement de la goutte
 Les inhibiteurs
Ki du complexe xanthine oxydase-allopurinol est très faible
18
26/10/2023
 Les inhibiteurs
2. Inhibiteurs incompétitifs (II)
L’inhibiteur incompétitif ne se fixe jamais à l'enzyme libre mais seulement à ES et empêche la

formation des produits.
La liaison du substrat sur l'enzyme entraîne une modification de l'enzyme, révélant ainsi un site de
fixation pour l'inhibiteur. L'inhibiteur, en retour, modifie la conformation du site actif de l'enzyme, et
empêche la réaction.
L’inhibiteur incompétitif se lie UNIQUEMENT au complexe ES.
 Modification de la conformation du site actif :
pas de formation de P ni dissociation de ES en E+S
l’inhibiteur est lié par le complexe E•S [E]0 = [E] + [E•S] + [E•S•I]
k 1 , S k 2
E E • S E + P
k - 1
k - i k i , I
E • S • I
S
S p r o d u it s
Enz
Enz
E nz ne mène pas aux produits

I
Cet inhibiteur déplace l’equation, abaisse Km. Une partie de ES reste bloquée sous
forme ESI, donc Vmax est diminuée
19
26/10/2023

 Les inhibiteurs
ESI est non productif

 Les inhibiteurs
Graphique de L-B pour un IIC
20
26/10/2023

 Les inhibiteurs Vmax
. S
 [I ] 
1  
Ki  Vmax app S
Vi   Vi  app
Km
 S K m  S
 [I ] 
1  
 Ki 
app Vmax
Vmax 
Km [I ]

app
Km 1
[I ] Ki
1
Ki
1 Km 1 1  [I ] 
 .  1  
Vi Vmax [ S ] Vmax  Ki 
 Les inhibiteurs
Exemples d’inhibiteurs incompétitifs
a) La réaction catalysée par l’isocitrate lyase est inhibée

par l’itaconate :
isocitrate lyase
Isocitrate succinate + glyoxalate
L’itaconate ne se fixe que sur le complexe E-isocitrate
21
26/10/2023
 Les inhibiteurs
3. Inhibiteurs non compétitifs (INC)
Ce type d’inhibiteur ne ressemble généralement pas au substrat naturel.
L’inhibiteur peut interagir avec l’enzyme libre ou avec le complexe E-S
Un INC se lie à un site différent du site actif et conduit à une modification de la conformation spatiale de l’enzyme
en affectant la catalyse mais non la fixation du substrat.
Schéma réactionnel de l’inhibition non compétitive
 Les inhibiteurs
3. Inhibiteurs non compétitifs (INC)
On parle d’inhibiteur non-compétitif lorsque l’inhibiteur se fixe sur l’enzyme E et sur le complexe
enzyme substrat ES
L’inhibiteur non-compétitif se fixe sur un site totalement différent du site actif de l’enzyme → pas
de compétition entre le substrat et l’inhibiteur.
Il se produit une diminution de la vitesse maximale sans aucune modification du Km car

il n’y a pas de compétition entre le substrat et l’inhibiteur
pour le site actif
Substrate Inhibiteur
Non compétitif
Enzyme
Site actif
22
26/10/2023
 Les inhibiteurs
E+P
EI et ESI :
complexes inactifs.
- Se lie de façon réversible à un site autre que le site actif

- Il provoque une modification de la conformation de l’enzyme
- L’enzyme peut se lier:
- l’inhibiteur
- au substrat
- à l’inhibiteur et au substrat à la fois
- L’enzyme est inactivée quand l’inhibiteur est lié, en présence ou non du substrat.
- L’effet de l’inhibiteur n’est pas inversé par l’augmentation de la concentration en substrat, L’inhibiteur diminue
la concentration de l’enzyme active En Abaissant la vitesse maximale
Graphique de L-B pour un INC
23
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Vmax
. S V . S
app
 [ I]  Vi  max
1  
Ki  Km  S
Vi  
Km  S
app Vmax
Pas d’effet sur Km. Vmax 
[I ]
1
Ki
1 Km  [ I]  1 1  [ I] 
 1  .  1  
Vi Vmax  K i  [S] Vmax  Ki 

 Les inhibiteurs
Graphique de L-B pour un INC
24
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Exemples d’inhibiteurs non compétitifs :
 Les agents complexant les métaux :
*L’ion cyanure bloque les atomes de Fe++ et Cu++ quand ils jouent le
rôle de cofacteurs métalliques.
*L’ion fluorure bloque l’activité de Mg++. La glycolyse est bloquée

par ces ions.
 Les inhibiteurs
les différents types d’inhibiteurs réversibles
25
26/10/2023
Mécanisme d’inhibition enzymatique

I Compétitive I Non compétitive I Incompétitive
Substrat E
Modèle réactionnel
S E S
S I
E S I
I
I
Compétition S I
Inhibiteur v.s.v du Site différent
site actif
←ES → E + P
E + S→ ←
E + S →ES →E + P E + S →ES
← →E + P
Equation d’équilibre
+ + + +
I↑ ↑I ↑ I I
↓ ↑
↓ ↓ ↓
EI EI +S →EIS EIS
[I] lie [E] libre [I] lie [E]libre ou le complexe [I] lie le complexe [ES]
et entre en [ES] : pas de compétition et empêche la formation
compétition avec [S] entre le substrat et l’inhibiteur. des produits.
Représentations graphiques des inhibitions

I Compétitive I Non-compétitive I Incompétitive
Vmax Vmax Vmax
Cinétique MM
vo vo
Vmax’ Vmax’
I I I
K m K m’ [S], mM K m = K m’ [S], mM K m’ K m [S], mM

Vmax inchangée Vmax diminue
Km modifiée Km inchangée Vmax et Km diminuent
Représentatiol LB
1/vo 1/vo 1/vo

I I I
Deux lignes
Intersection
Àl’axe des Y Intersection parallèles
1/Vmax à l’axe des 1/Vmax 1/Vmax
X
-1/Km’ 1/[S] -1/Km 1/[S] -1/Km 1/[S]
26
26/10/2023
 Les inhibiteurs
4. Inhibition par excès de substrat
Il arrive que l’on observe in vitro une inhibition par

excès de substrat : pour de fortes concentrations de
S la loi de Michaelis-Menten n’est plus valable.
 Les inhibiteurs
4. Inhibition par excès de substrat
Deux molécules de S peuvent se lier à E, mais ne peuvent être transformées en P (autorégulation de
l’activité enzymatique). Cette inhibition peut être constatée dès que la concentration de substrat dépasse un
certain seuil
Schéma réactionnel de l’inhibition par excès de substrat
La vitesse initiale de la réaction en excès La vitesse variée de manière inverse par rapport à [S] montre
de substrat est donné par : un profil caractéristique aux fortes concentrations de substrat
Représentations de Michaelis et de Lineweaver Burk de l’inhibition

par excès de substrat
27
26/10/2023
 Les inhibiteurs
En général, le site de fixation du substrat est dans ce cas
de grande dimension et contient plusieurs sous-sites,
chacun fixant une partie du substrat.
E + S ←→ ES → E + P
+S
↓↑
ESS (inactif)
 Les inhibiteurs
Exemple : l’AcétylCholine Estérase :
- Enzyme qui hydrolyse l’acétylcholine, neurotransmetteur de la

synapse neuromusculaire chez les vertèbres.
- Le site de fixation du S est formé de deux sous - sites de fixation

de l’acétylcholine:
28
26/10/2023
 Les inhibiteurs
 Le sous - site anionique qui porte une charge
négative et qui interagit avec la charge positive portée
par l’ammonium quaternaire de l’acétylcholine.
 Le sous - site estérasique (contenant les résidus

catalytiques sérine et histidine) et qui interagit avec la
liaison ester du substrat.
 Les inhibiteurs
29
26/10/2023
 Les inhibiteurs
 Les inhibiteurs
B- Inhibiteurs irréversibles
Ce sont des réactifs spécifiques pouvant former des

liaisons COVALENTES avec des groupements fonctionnels
de l’enzyme et causent la perte DÉFINITIVE de son
activité.
Ki kin
E+I EI E- I *
Ils sont utilisés :
♦ Dans les applications pharmacologiques,
♦ Pour la conception des pesticides, herbicides….
30
26/10/2023
 Les inhibiteurs
Se lient de façon irréversible avec l’enzyme
Agissent brutalement en dénaturant l’enzyme
Liaison covalente stable de l’inhibiteur à l’enzyme (complexe E-I).
Inhibition ne peut pas être levée (inactivation = l’enzyme est irréversiblement inhibée).
On distingue trois types
a. Inhibiteurs ciblant un groupe chimique spécifique
b. Marqueurs du site actif
c. Inhibiteurs suicides
 Les inhibiteurs
a. Inhibiteurs ciblant un groupe chimique spécifique
Réagissent avec une chaine latérale particulière ;
Mène à l’inhibition de l’enzyme en interférant avec la catalyse
Exemple : Diisopropylfluorophosphate (DFP); Gaz neurotoxique Inhibe l’acétylcholine-estérase (et plusieurs

autres protéase possédant une Ser dans leur site actif)
31
26/10/2023
 Les inhibiteurs
b. Marqueurs du site actif
L’inhibiteur est structurellement similaire au S ;
Réagit avec une chaine latérale du site actif ;
La réaction de I avec E mène à la formation d’un lien covalent qui ne peut pas être hydrolysé.
c. Inhibiteurs suicides
Versions modifiées du substrat ;
Initialement, E réagit normalement avec I, tout comme s’ il s’agissait de S ; Cependant, un intermédiaire

covalent est formé qui ne peut pas être hydrolysé, menant à l’inhibition de E
 Les inhibiteurs
Exemple : les anti-métabolites

Le 5-fluorouracile (analogue des pyrimidines) est un composé
anticancéreux qui inhibe la thymidine synthétase (TS) responsable
de la synthèse des bases pyrimidiques.
TS
dUMP - dTMP
5-FdUMP
5-fluorouracile
32
26/10/2023
 Les inhibiteurs
5-FdUMP
Inhibition de la Incorporation Incorporation

thymidilate synthase dans le RNA dans le DNA
5-FdUMP entraine l’interruption dans la synthèse de

l’ADN et l’ARN en se substituant aux bases
pyrimidiques indispensables à cette synthèse.
 Les inhibiteurs
 L’aspirine
L’aspirine (acide acétylsalicylique) inhibe irréversiblement

la cyclooygénase par ACÉTYLATION du résidu Sérine 530
du site actif.
La cyclooxygénase initie la synthèse des prostaglandines,

médiateurs chimiques impliqués dans l’inflammation, la
douleur et la fièvre.
33
26/10/2023
 Les inhibiteurs
 Les inhibiteurs
34
26/10/2023
 Les inhibiteurs
La pénicilline (famille des ß-lactames) agit en bloquant la
synthèse de la paroi bactérienne par inhibition de la
transpeptidase (inhibition de la synthèse du peptidoglycane).
 Les inhibiteurs
 Les b lactamases (enzymes responsables de la
résistance bactérienne aux pénicillines, dégradent la
pénicilline en acide penicilloique.
Penicillins are cleaved by b-lactamase

O OH
O OH
O N b-Lactamase O
HN
O
R N S S
H H R N H
H
acide penicilloique
35
26/10/2023
 Les inhibiteurs
 Les inhibiteurs
 Le clavulonate et le sublactame sont deux inhibiteurs
des b lactamases.
36
26/10/2023
 Enzymes allostériques
Sont des enzymes assurant la régulation des chaines métaboliques. Ces enzymes font intervenir une liaison
réversible d’une molécule régulatrice appelée modulateur, ou effecteur allostérique. Les enzymes allostériques
prennent une autre conformation à la suite de la liaison du modulateur.
A voir par la suite
Régulation de l’activité enzymatique
Introduction
Dans tout organisme vivant, l’activité des enzymes est soumise à une
régulation très fine.
Les enzymes peuvent être :
- activées (stimulées) pour générer d’avantage de produit ou
- inactivées (i.e. inhibées) pour diminuer la quantité de produit formé.
37
26/10/2023
Les systèmes de régulation sont nombreux et portent :
• Soit sur le niveau de synthèse des enzymes : la

cellule peut intervenir sur la transcription, traduction et
dégradation des protéines.
• Soit sur leur niveau d’activité.
Contrôle du niveau d’activité d’une enzyme
• Plusieurs stratégies sont utilisées pour moduler (activer

ou inhiber) l’activité enzymatique :
1- Protéolyse limitée Modifications

2- Liaison/élimination d’un groupement covalentes
3- Liaison d’une sous-unité régulatrice Modifications

non covalentes
4- Régulation allostérique
38
26/10/2023
I- Régulation par modification covalente
1. Régulation par protéolyse partielle (limitée)
• Certaines enzymes (digestion et coagulation) sont

initialement synthétisées sous forme inactive (proenzymes
ou zymogènes):
• L’activation de ces enzymes est réalisée par une protéolyse

limitée : hydrolyse d’un nombre limité de liaisons
peptidiques (généralement 2-3).
a) les enzymes de la digestion
Dans le pancréas, les zymogènes sont isolés dans des

granules (granules de zymogène) protégés par des
membranes.
Le zymogène va être transporté vers le duodénum (lieu

d’action) et va subir un clivage protéolytique pour donner
une enzyme active.
39
26/10/2023
Le trypsinogène est activé par une enzyme de la muqueuse

intestinale : l’entérokinase qui va couper entre deux acides
aminés (Lys 6 et Ile 7) pour donner la trypsine active.
La trypsine assure ensuite l’activation des autres enzymes

protéolytiques pancréatiques (chymotrypsine,
carboxypeptidase, élastase).
40
26/10/2023
Activation des zymogènes en enzymes actives
L’inactivité des enzymes protéolytiques dans le pancréas

est garantie par :
• Forme inactive des enzymes
• Séquestration des enzymes dans des granules

imperméables et dont le pH est acide.
• Présence d’inhibiteur enzymatique dans les granules
 C’est un moyen de protection des cellules produisant

ces enzymes contre l’autodigestion.
41
26/10/2023
b) Les enzymes de la coagulation du sang
 Le processus de coagulation sanguine permet la

transformation du fibrinogène soluble en un gel de
fibrine insoluble (caillot sanguin).
Ce processus est la conséquence d’un enchainement de

réactions impliquant 13 facteurs de coagulation.
Ces facteurs sont synthétisés sous forme de précurseurs

inactifs.
 Il s'agit d’une cascade d’activations protéolytiques, où la forme activée

d’un facteur de coagulation catalyse l’activation du facteur suivant.
Le fibrinogène est transformé en fibrine sous l’action de la thrombine

(agent protéolytique).
42
26/10/2023
 L’hémophilie est une maladie héréditaire qui se

caractérise par un trouble de la coagulation du sang.
Elle est due à l’absence ou au déficit d’un des facteurs de

la coagulation.
Déficit en facteur VIII : hémophilie A (85%)

 Déficit en facteur IX : hémophilie B (15%)
2. Régulation par liaison/élimination d’un groupement

La fixation ou l’enlèvement d’un groupement sur l’enzyme conduit à deux
formes interconvertibles et possédant des propriétés catalytiques
différentes :
• Efficacité catalytique élevée
• Efficacité catalytique faible
Cette modification de la structure de l’enzyme accompagnée d’une

modulation de son activité est catalysée par deux systèmes antagonistes.
L’un greffe un groupement chimique sur l’enzyme, l’autre l’enlève.
43
26/10/2023
Exemple :
Régulation par phosphorylation/déphosphorylation
• L’ajout d’un groupe phosphate (phosphorylation) par

des protéines kinases et leur élimination (par des
protéines phosphatases) est une stratégie très
fréquemment utilisée pour moduler l’activité des
enzymes.
Le groupement phosphate est transféré d’un donneur

(l’ATP) à un acide aminé de l’enzyme régulée
Cette phosphorylation arrive en réponse à un

stimulateur (hormone ou facteur de croissance).
La phosphorylation conduit à l’activation ou

l’inactivation de l’enzyme par changement du Km ou du
kcat.
44
26/10/2023
a) Phosphorylation/déphosphorylation
Catalysées par des Pr kinases et Pr phosphatases= Pr convertisseurs
kinase
Enz-Ser-OH +ATP Enz-O-P + ADP
Phosphatase
Ainsi l’activité de protéines phosphorylées comme glycogène synthétase peut être inhibée
ou inversement la phosphorylation de glycogène phosphorylase entrainera son activation
45
26/10/2023
46
26/10/2023
glycogène phosphorylase b ( forme inactive déphosphorylée)
Phosphatase Kinase
glycogène phosphorylase a ( forme active phosphorylée)

(Glycogène)n + Pi (glycogène)n-1 + glucose 1-P
glycogène synthétase (forme active déphosphorylée)
Kinas Phosphatase
e
glycogène synthétase (forme inactive phosphorylée)
47
26/10/2023
II. Régulation par modification non covalente
1. Régulation par interaction protéine-protéine
L’activité de certaines enzymes est contrôlée par liaison de protéines

spécifiques activatrices ou inhibitrices.
Exemple 1 : la calmoduline, protéine régulatrice active de nombreuses

enzymes en se liant à elles lorsqu’elle a fixé des ions calcium.
Quand le calcium est fixé, la calmoduline change de

conformation et agit comme un cofacteur protéique et
stimule l’activité de certaines kinases (phosphorylase
kinase, myosine kinase….)
48
26/10/2023
Changement de conformation de la calmoduline par

fixation d’ions calcium
2. Régulation allostérique
Fréquemment utilisée pour contrôler l’activité des

enzymes métaboliques.
L’allostérie désigne un changement de conformation

de l’enzyme dû à la liaison d’un composé (= effecteur
allostérique) se traduisant par une modification de
l’activité enzymatique.
49
26/10/2023
 L’effecteur allostérique possède une structure

différente de celle du substrat ou du produit de
l’enzyme.
 Il se fixe à un site différent du site actif appelé site

régulateur ou site allostérique.
 La fixation de l’effecteur allostérique à l’enzyme

modifie la conformation 3 D de cette dernière et ainsi
module son activité catalytique.
Le contrôle allostérique est défini comme étant la fixation d'une molécule (substrat, ou
effecteur) à une sous-unité de l'enzyme, plus précisément au niveau d'un site
allostérique autre que le site catalytique, ce qui entraîne une modification de la
conformation et par la suite de l'activité de l'enzyme.
Un activateur
allostérique
stabilise la
forme active
Un inhibiteur
allostérique
stabilise la
forme inactive
50
26/10/2023
Action des effecteurs allostériques
Ce sont des substances qui agissent comme activateurs ou inhibiteurs en modifiant la
conformation des sites de liaison au substrat, ce qui change l’affinité pour le substrat
Activateurs allostériques
Augmentent l’affinité de l’enzyme
pour le substrat, lui permettant
d’agir à de faible concentration en
substrat.
Inhibiteurs allostériques
Comme les inhibiteurs compétitifs
diminuent l’affinité de l’enzyme
pour le substrat.
Sont des enzymes assurant la régulation des chaines métaboliques. Ces enzymes font
intervenir une liaison réversible d’une molécule régulatrice appelée modulateur, ou
effecteur allostérique. Les enzymes allostériques prennent une autre conformation à la
suite de la liaison du modulateur.
Ce sont des protéines complexes possédant généralement plusieurs sous-unités. Ils

possédant au moins un site actif et au moins un site régulateur. Dans certains cas, le
site régulateur et le site actif sont sur des sous unités différentes. Les modulateurs des
enzymes allostériques peuvent être des inhibiteurs ou activateurs
51
26/10/2023
Nature oligomérique des enzymes allostériques
Les enzymes allostériques ont une structure oligomérique formée par

l’assemblage d’un nombre variable de sous-unités identiques ou
protomères associées par des liaisons non covalentes.
Les protomères coopèrent entre eux en vue d’une même fonction.
 Chaque protomère possède deux types de sites
Site actif qui lie le substrat et qui catalyse la réaction

enzymatique.
Site régulateur ou site allostérique où se fixent les

effecteurs allostériques (activateur ou inhibiteur).
52
26/10/2023
 Chaque protomère peut exister sous deux

conformations différentes.
Conformation R « Relax ou relâchée »: forte affinité

pour le substrat et l’activateur et faible affinité pour
l’inhibiteur.
Conformation T «Tight ou tendue »: faible affinité

pour le substrat et l’activateur et forte affinité pour
l’inhibiteur.
 Le protomère peut passer de façon réversible d’une

conformation à l’autre (transition allostérique).
53
26/10/2023
Transition allostérique
Enzyme allostérique: structure protéique avec au moins 2 sites fonctionnels
- Site actif: Substrat
- Site allostérique: Effecteur allostérique
Lorsque l’effecteur allostérique se combine:

Modification structurale discrète réversible au niveau de l’enzyme: Transition allostérique
Conséquence:
-Modification de l’activité de l’enzyme
54
26/10/2023
Transition allostérique
La transition allostérique modifie les forces de liaisons qui associent les sous unités entre elles, mais sans aller jusqu’a
leur dissociation
La molécule apparait soit dans un état Tendu ou relâché, qui diffère par leur affinité au substrat
T: Faible affinité pour S

R: Forte affinité pour S
 La fixation des effecteurs allostériques entraîne un

changement de conformation ayant pour conséquence
soit une ↗ (effecteur positif: activateur), soit une ↘
(effecteur négatif: inhibiteur) de l’activité enzymatique.
 Les effecteurs jouent un rôle important dans le

contrôle de l’activité des enzymes dans la cellule.
55
26/10/2023
La coopérativité
L’enzyme allostérique contient:

- Plusieurs sites actifs identiques ;
- Plusieurs sites allostériques identiques.
Ces sites n’agissent pas de façon indépendante l’un par rapport à l’autre, mais au contraire ils montrent une
coopérativité. La coopérativité traduit le fait que la fixation sur l’enzyme d’un effecteur allostérique, influe sur la
fixation du substrat.
o Si le ligand est la molécule de substrat : effet allostérique homotrope ;
o Si le ligand est une molécule différente : effet allostérique hétérotrope.
o Dans une coopérativité positive, une molécule d’un effecteur entraine l’augmentation de l’affinité pour les
mêmes molécules et vice versa pour une coopérativité négative (BCM, 2505)
L’allostérie regroupe deux types de phénomènes :

- Les effets homotropes : il s’agit de changements conformationnels
induits par un substrat, cette modification de conformation étant
favorable à l’acte catalytique ; on parle de coopérativité moléculaire, ici +
par le substrat.
- Les effets hétérotropes : il s'agit de changements conformationnels

induits par des composés différents du substrat ; ces composés peuvent
apparaître activateurs (coopérativité +), ou inhibiteurs (coopérativité -).
56
26/10/2023
Principe de l’allostérie
La fixation de la molécule effectrice induit un changement de conformation spatiale de la protéine enzymatique.

Cela a pour conséquence de modifier le site de liaison et le site catalytique. Les enzymes allostériques doivent
présenter plusieurs propriétés :
- elles sont multimériques, chaque protomère (ou monomère) fixe une molécule de ligand.
- elles possèdent au moins un axe de symétrie.
- Les effecteurs allostériques Sont des ligands dont le site de fixation est différent du site de fixation du substrat ;
- elles existent sous deux conformations différentes : l'une appelée T, pour Tendue, désignant
conventionnellement la forme de faible affinité pour le substrat, l'autre R, pour Relaxée, de forte affinité pour le
substrat.
- Au sein d'une protéine, les protomères adoptent toutes les mêmes configurations, R ou T (transition concertée)
Changement conformationnel des enzymes allostériques Etats conformationnels des enzymes allostériques
Types des enzymes allostériques
Il y a deux types d’enzymes allostériques :

- Système K : la régulation se traduit par la variation de la fixation du substrat ou par la variation de l’affinité du
substrat pour l’enzyme, d’où une variation du « Km ».
- Système V : la régulation porte sur la vitesse maximale. Dans ce cas, cela correspond à une variation de la
constante k2 des enzymes michaéliennes)
Enzyme allostérique de système K (A) et de système V (B)
57
26/10/2023
2 modèles sont décrits
i. Modèle symétrique ii. Modèle séquentiel
Toutes les enzymes sont soit en conformation T (absence Il y a 2 conformations, mais les sous unités passent de la forme
du substrat), soit en conformation R (en présence du inactive à la forme active individuellement. La fixation de la
substrat). Chaque molécule effectrice qui se lie augmente molécule effectrice, induit la transition de la première sous
la probabilité de transition de la forme inactive à la unité, ce qui facilite la transition de la sous unité voisine et ainsi
forme active de suite
Modèle symétrique des enzymes allostériques Modèle non symétrique des enzymes allostériques
Cinétique des enzymes allostériques
Pour beaucoup d’enzymes allostériques, si on trace V=f ([S]), on obtient une courbe sigmoïde, reflète des interactions
coopératives entre plusieurs sous unités, et non l’hyperbole caractéristique des enzymes michaeliennes. La saturation
est tout de même obtenue pour des concentrations de substrat suffisantes. Bien qu’il existe sur la courbe sigmoïde de
saturation une concentration de S pour laquelle la vitesse est égale à la moitié de la vitesse maximale, il n’est pas
correct de l’appeler Km, puisque l’enzyme n’est pas michaelienne. On utilisera les expressions S0,5 ou K0,5 (K1/2)
pour désigner cette concentration de substrat donnant pour une enzyme allostérique une vitesse de réaction égale à
Vmax/2
58
26/10/2023
LES APPLICATION DE L’ENZYMOLOGIE
1/ Application diagnostiques,
Le dosage de l’activité de certaines enzymes a un intérêt sémiologique important :
2/ Applications industrielles
Synthèses d’hormones et de médicaments
3/ Applications thérapeutiques
Utilisation de l’aspirine pour l’inhibition de la cyclo-oxygénase (action anti-inflammatoire).
Utilisation des anti-métabolites en chimiothérapie anticancéreuse (
4/ Applications analytiques
Les enzymes entrent dans la composition de certains réactifs de laboratoires ex: kits ELISA.
5/ Application en génétique
L’utilisation des enzymes de restriction dans le diagnostic des maladies génétiques
59
26/10/2023
Les enzymes sont utilisées :
• Détection et quantification de lésions tissulaires (transaminases,

amylase,….)
• Dosage de métabolites (glycémie avec la glucose oxydase)
• Pharmacologie : les enzymes sont les cibles de nombreux médicaments

(certains antibiotiques)
• Outils industriels : lessives, agro-alimentaire, environnement, …..
Conclusion:
Les enzymes sont des protéines douées de propriétés de catalyseurs des
réactions biochimiques du métabolisme.
Pour chaque enzyme, on peut définir une réaction chimique associée et le plus
souvent un substrat caractéristique.
Ces propriétés sont la clé qui permet aux enzymes d’accomplir une grande
partie du métabolisme des organismes vivants en réalisant les réactions
60

Cours Régulation Et Facteurs Influencant La Catalyse

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Cours Régulation Et Facteurs Influencant La Catalyse

Transféré par

Informations du document

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Cours Régulation Et Facteurs Influencant La Catalyse

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

26/10/2023

Facteurs influençant l’activité enzymatique

Qu’est ce qui influence l'activité enzymatique?

De nombreux facteurs modulent l’activité des enzymes

3. 3. Des inhibiteurs d’enzymes/ activateurs

Facteurs influençant l’activité enzymatique

A-Influence des agents physiques :

influence de la température sur l’activité enzymatique.

Facteurs influençant l’activité enzymatique

A-Influence des agents physiques :

Facteurs influençant l’activité enzymatique

on compare l’activité de l’enzyme

A-Influence des agents physiques :

A-Influence des agents physiques :

Cette courbe est la résultante de 2 phénomènes indépendants :

Pour des températures < la température optimale, la chaleur du

A-Influence des agents physiques :

k : constante de vitesse (k2 ou kcat),

A : constante appelée facteur de choc ou de fréquence (fréquence de

Ea : énergie d’activation en J.mol-1,

II- inactivation thermique des enzymes.

La dénaturation thermique des enzymes entraîne la

A-Influence des agents physiques :

La dénaturation thermique est généralement irréversible

A-Influence des agents physiques :

Il existe quelques exceptions :

Certaines bactéries des eaux chaudes ont des enzymes

 La ribonucléase fonctionne aussi ≈ 100°C.

A-Influence des agents physiques :

- Aux valeurs intermédiaires : modification de la conformation du site actif et celle de substrat.

- pH optimum : activité enzymatique est optimale.

influence du pH sur l’activité enzymatique

A-Influence des agents physiques :

A-Influence des agents physiques :

A-Influence des agents physiques :

A-Influence des agents physiques :

La présence d’ions dans le milieu réactionnel joue un rôle important:

- Certaines enzymes nécessitent des activateurs (ions métallique)

Direct: -Ionisation des molécules

Indirect: -Ionisation du milieu réactionnel

-Formation de radicaux libres qui attaquent les enzymes

B-Influence des agents Chimiques :

 Les régulateurs (allostériques)

- Ils confèrent une grande stabilité dans le site actif de l’enzyme,

L’ion métallique favorise:

- Une bonne conformation de l’enzyme

- participe de manière directe à la catalyse Exemple: Kinases activées par Mg +2

B-Influence des agents Chimiques :

La plupart des enzymes protéolytiques sont synthétisés sous forme de précurseurs

3- Activation par fixation covalente d’un groupement chimique:

Par addition d’un groupement chimique, le plus souvent le phosphate

Phosphorylase b inactive Phosphorylase a active

Un inhibiteur enzymatique est une substance

Il interagit avec l’enzyme, formant un complexe EI.

 Il n’est pas modifié par l’enzyme.

 Il peut être réversible ou irréversible.

L’inhibition sélective d’une enzyme par des substances chimiques est

Beaucoup de médicaments, pesticides, herbicides ou insecticides sont des

 KI = constante de dissociation du complexe EI en E + I

 KI = [I] pour laquelle la moitié des sites enzymatiques