Biotekk

Unduh sebagai docx, pdf, atau txt
Unduh sebagai docx, pdf, atau txt
Anda di halaman 1dari 38

1. Yang bukan cakupan bioteknologi tanaman adalah ...

in vitro culture application

teknik transfer gen

aplikasi marka molekuler

teknik okulasi

2. LacZ pada plasmid bermanfaat untuk ...

skrining ada tidaknya plasmid yang bereplikasi

skrining ada tidaknya insert DNA atau gen

skrining ada tidaknya tanaman transgeniknya

skrining ada tidaknya koloni yang tahan antibiotik

3. Tujuan dari transformasi plasmid (yang sudah memiliki gen yang kita
inginkan) ke dalam bakteri inang (E. coli) adalah

memperbanyak E.coli untuk ditransfer

memperbanyak plasmid

menyambung DNA

memotong DNA

Marka yang berbasis untai DNA dengan pola tertentu yang berulang dan
merupakan hasil amplifikasi PCR adalah

Microarray

Microsatelit

RFLP

SNPs
Aplikasi marka molekuler, sebagian besar menggunakan PCR yang
didalamnya menggunakan enzim

DNA polymerase

DNAse

RNA polymerase

ligase

Bagian tanaman yang dapat digunakan sebagai eksplan adalah

daun saja

akar saja

batang saja

seluruh bagian tanaman

Plasmid mampu melakukan self-replication karena memiliki gen ...

Selectable marker gene (Amp r)

Ori (ori gene)

Hgr resistant gene (Hgr r)

LacZ

Dalam cloning gene, umumnya menggunakan Plasmid, yang memiliki DNA

Single-stranded, linier

Double-stranded, linier

Double stranded, circular

Single stranded, circular


Berikut ini merupakan construct gene pada perakitan golden rice. Gen yang
disisipkan yang mengatur sintesis beta karoten berasal dari jagung adalah

Psy

glu

Pmi

tpSSU:Crtl

Beberapa prasyarat utama dalam melakukan transfer gen, diantaranya,


kecuali

tersedianya RNA

tersedianya gen yang akan ditransfer

tersedianya metode transfer gen yang efisien

tersedianya metode regenerasi tanaman yang efisien

Bila kita bermaksud membuat DNA library suatu organisme untuk beragam
keperluan (untuk cloning, analisis marka molekuler, dll), diperlukan upaya

Isolasi DNA

Isolasi cDNA

Isolasi protein

Isolasi RNA
Berdasarkan gambar construct gene pada perakitan golden rice, promotor
yang meregulasikan ekspresi gen diendosperm padi digunakan pada peta
tersebut adalah

LB

nos

Ubi1

Glu

EcoRI, BamHI, SalI, dan HindIII merupakan contoh ...

enzim RNAse

enzim polymerase

enzim restriksi

enzim ligase

Diantara contoh screenable genes adalah

Hyg r

Amp r

Ori

GFP

Berdasarkan gambar construct gene pada perakitan golden rice, terdapat nos
yang berfungsi sebagai
Terminator

Promotor

Isolator

Regulator

Yang bukan tujuan melakukan gene (DNA) cloning adalah ....:

untuk membuat pustaka cDNA

untuk mengisolasi control/regulatory sequence

untuk melakukan studi pola pewarisan

untuk mengetahui fungsi suatu protein/RNA

Competent cells suatu bakteri (umumnya E. coli) mengandung arti bahwa


bakteri tersebut mampu

memperbanyak dirinya sendiri

menelan (take up) plasmid yang ada di sekitarnya

bertahan hidup walau pada media mengandung antimikroba

bertahan hidup pada temperatur ekstrim

Metode-metode berikut ini dapat digunakan untuk mendeteksi apakah gen


target sudah terintegrasi dengan genom tanaman, kecuali :

Southern blot

Microarray
Spectrophotometer

PCR

Kita bisa melakukan isolasi untuk memperoleh DNA genomik suatu tanaman,
yang merupakan:

totalitas DNA yang dimiliki oleh suatu tanaman, terdiri dari DNA double stranded dan
cDNA

totalitas DNA yang dimiliki oleh suatu tanaman, terdiri dari DNA inti dan DNA luar inti

totalitas cDNA yang dimiliki oleh suatu tanaman

totalitas DNA yang dimiliki oleh suatu tanaman, terdiri dari DNA single-strande dan
double standed

Dalam genetic transformation, dikenal istilah transient, yang berarti:

Transgen belum terintegrasi ke dalam mitokondria

Transgen terintegrasi ke dalam genom tanaman

Transgen terintegrasi ke dalam plastid

Transgen belum terintegrasi ke dalam genom tanaman

Setelah proses transfer gen melalui Agrobacterium atau gene-gun, materi


genetik berupa kalus atau lainnya akan ditumbuhkan dalam media yang
mengandung selectable marker, mengapa demikian?

Untuk menyeleksi sel-sel transgenik dengan yang non-transgenik

Untuk meregenerasikan sel tanaman menjadi tanaman transgenik utuh

Untuk meniadakan efek lingkungan sehingga yang tumbuh merupakan sel-sel transgenik
saja

Untuk memperoleh true to type transgeniknya

Pada plasmid yang digunakan untuk kloning umumnya memiliki MCS, yang
berguna untuk
Self-replikasi

Tahan terhadap antibiotik

Menyisipkan DNA atau gen asing

Menyisipkan protein asing

Dalam perakitan golden rice (GR) terdapat dapat beberapa generasi. Pada
generasi pertama gen Psy yang disisipkan berasal dari bunga daffodil,
sedangkan GR 2 gen yang diinsersikan yang mengekspresikan beta karoten
lebih kuat adalah

Psy maize & lcy rice

Psy maize & Crt1 Erwinia uredovora

Psy maize & glu rice

Psy maize & Pmi E. coli

Cloning gene (DNA), merupakan upaya

perbanyakan RNA yang identik dengan menitipkannya pada sel amuba

perbanyakan gen (DNA) yang identik dengan menitipkannya pada sel inang

perbanyakan gen (DNA) yang tidak identik dengan menitipkannya pada sel inang

perbanyakan gen (DNA) yang identik dengan menitipkannya pada sel amuba

Yang bukan tujuan bioteknologi tanaman diantaranya ....

meningkatkan kualitas tanaman

manipulasi lingkungan tumbuh tanaman agar optimum

untuk mempercepat proses perbaikan/pengembangan kultivar

sebagai sumber variasi genetik yang baru


Perbedaan utama antara genetic engineering dengan conventional breeding
adalah pada

kemampuannya mentransfer semua gen di luar inti yang bermanfaat.

kemampuannya mentransfer satu set genome lengkap yang bermanfaat

mentransfer satu set kromosom lengkap yang bermanfaat

kemampuannya mentransfer satu gen atau beberapa gen yang bermanfaat

Tanaman transgenik adalah tanaman yang memiliki

transgen yang diintroduksikan dengan cara persilangan

transgen yang diintroduksikan dengan cara transfer gen

transgen yang diintroduksikan dengan cara mutasi

transgen yang diintroduksikan dengan cara classical breeding

Dibawah ini merupakan teknik transfer gen, kecuali

microinjection

desicator

electroporation

particle bombardment

Tahapan yang termasuk ke dalam pembuatan tanaman transgenik di bawah


ini adalah benar, kecuali

pembuatan gene construct

melakukan transformasi dengan Agrobacterium

menyediakan materi (kalus, protoplas) untuk transformasi

membuat DNA library


Tahapan pertama dalam melakukan gene cloning (DNA) adalah

memotong DNA target dan vector dengan enzim restriksi

menyambung DNA dengan enzim ligase.

mengisolasi DNA dari tanaman target

mentransformasi ke dalam host (E. coli);

Yang bukan merupakan syarat ideal dari suatu marka molekuler adalah

Monomorfik

Co-dominant

Polimorfik

Marka tersebar di dalam genom suatu individu

Gen LacZ pada plasmid, tidak terekspresi apabila tersisipi oleh gen asing.
Mengapa demikian

Sisipan gen asing menyebabkan ekspresi gen terdisrupsi atau tidak berfungsi

Sisipan gen asing menyebabkan pola pewarisan gen terkendala

Sisipan gen asing menyebabkan gen tidak mengekespresikan promoter

Sisipan gen asing menyebabkan DAN tidak bisa disambung

Berikut ini adalah gambar dari plasmid. Jika kita akan menginsersikan gen
target pada plasmid tersebut bagian yang tepat adalah
ORF frame 3

ORF frame 2

pBR322_origin

MSI-1-S2

Perlakuan yang tidak mampu menginduksi terjadinya variasi baru pada kultur
jaringan (in vitro) adalah

perlakuan konsentrasi media agar

perlakuan pemberian mutagen

perlakuan jenis sterilan

perlakuan zat pengatur tumbuh

Sekues DNA yang mengatur kapan, dimana dan seberapa besar produk
gennya diekspresikan dan merupakan sekuens yang menginisiasi terjadinya
proses transkripsi melalui pengikatan dengan RNA polymerase

Primer

Enhancer

Promoter
Terminator

Suatu marka molekuler memiliki sifat Codominant, yang berarti

dapat membedakan antara heterosigot dan homosigot

dapat membedakan antara gen dominan dan resesif

hanya mampu mengidentifikasi yang dominan saja

hanya mampu mengidentifikasi yang resesif saja

Dalam upaya mengklon DNA, diperlukan tahapan skrining, yang umumnya


dilakukan dengan cara:

menumbuhkan koloni bakteri (E.coli) ke dalam media yang mengandung antibiotik

menumbuhkannya pada media cair yang sesuai

tidak perlu menumbuhkan di media tertentu

menumbuhkan koloni bakteri (E. coli) ke dalam media yang mengandung antivirus

Agrobacterium tumifaciens memiliki kemampuan untuk menyisipkan DNA/gen


asing ke dalam genom tanaman karena memiliki

Ti plasmid yang di dalamnya memiliki T-DNA

Plasmid sirkuler khusus

Plasmid rekombinan

Plasmid T-DNA

Setelah penyambungan DNA (DNA insertion dengan plasmid-vector),


selanjutnya dilakukan

mengisolasi DNA dari tanaman target

pemotongan DNA dengan enzim restriksi


proses PCR.

transformasi ke dalam host (E. coli);

Menjodohkan
Pilihlah pasangan KATA/TERMINOLOGI yang tepat untuk pernyataan tersebut

Marka molekuler yang berbasis sekuensing basa nukleotida

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant
Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Jenis marka yang menghasilkan multialel seperti RAPD

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi
Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Teknik atau proses penanaman sel atau jaringan pada media tumbuh secara
aseptik

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro
RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Primer yang dapat membedakan alel homozigot dan heterozigot

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal
Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Zat pewarna dan pemberat DNA pada elektroforesis


dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE
Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Sekuen DNA tempat replikasi dimulai pada DNA plasmid atau virus.

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan
Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Gen yang digunakan sebagai penanda pada tanaman transgenik

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site


Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Menumbuhkan tanaman secara alami dengan menggunakan organ vegetatif


tanaman sehingga menjadi individu baru

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid
Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Vektor yang digunakan sebagai pembawa DNA target pada teknik transfer
gen yang dimediasi dengan Agrobacterium

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin
Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Oligonukleotida sederhana yang menginisiasi amplifikasi DNA template


secara in vitro
dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE
Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Vektor yang umumnya digunakan untuk kloning segmen DNA kurang dari 5
kb

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant
Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Kemampuan sel untuk tumbuh dan berkembang menjadi individu baru

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi
Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Segmen DNA pada vektor/plasmid yang dapat disisipi DNA

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse
Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Antibiotik yang bisa digunakan sebagai gen penanda ketahanan terhadap


herbisida pada tanaman trangenik

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal
Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Variasi tanaman yang disebabkan oleh perlakuan selama kultur jaringan


dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE
Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Proses ini menghasilkan sel somatis yang memiliki struktur embrio


terorganisir secara morfologis mirip dengan embrio zigotik

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant
Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Proses perubahan dari sel-sel yang belum berdiferensiasi menjadi


shoot/tunas hijau

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA

Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker
Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Menumbuhkan tanaman menggunakan sel atau jaringan tanaman menjadi


individu baru

dNTPs

Loading dye

Micropropagasi

Somaklonal

Amphisilin

Propagasi

Presipitasi DNA
Kultur in vitro

RNAse

Plasmid

Origin of replication

Selectabel marker

Totipotensi

Ti-plasmid

Restriction site/cloning site

Primer

Marka co-dominant

Marka Dominan

Ethidium bromide (Etbr)

SNPs

Menghancurkan dinding sel

PAGE

Polymerase

Somatic regeneration

Somatic embryogenesis

Pernyataan Benar atau Salah


Pilihlah pernyataan dibawah ini BENAR atau SALAH berdasarkan prinsip-prinsip bioteknologi yang
sudah dikaji
Golden rice merupakan salah satu contoh produk transgenik yang
menimbulkan banyak masalah bagi konsumennya karena introgresi gennya
berasal dari amoeba.

Semua peralatan yang sudah dipergunakan dalam proses genetic


engineering bisa dipergunakan kembali tanpa perlu di sterilkan terlebih
dahulu.

Teknik kultur jaringan hanya diperuntukan untuk kegiatan perbanyakan


tanaman karena teknik ini tidak cocok untuk kegiatan pemuliaan tanaman.

Proses PCR secara invitro pada dasarnya adalah meniru proses replikasi
DNA yang terjadi secara alami dalam pembelahan sel. Dimana sekuen DNA
akan berduplikasi sejalan dengan pembelahan sel.

Seleksi tanaman transgenik mengunakan marka molekuler, maka primer yang


digunakan untuk mendeteksi apakah gen target sudah terinsersi atau belum
lebih baik menggunakan primer dominan yang didesain dari sekuen gen
tersebut.

S
Saat ini teknologi DNA rekombinan baru bisa memanfaatkan plasmid untuk
merekonstruksi DNA rekombinan.

Seleksi tanaman transgenik mengunakan marka molekuler, maka primer yang


digunakan untuk mendeteksi apakah gen target sudah terinsersi atau belum
lebih baik menggunakan primer dominan yang didesain dari sekuen gen
tersebut.

Kecepatan perbanyakan suatu tanaman secara kultur jaringan secara umum


berbanding terbalik dengan kecepatan perbanyakan tanaman tersebut secara
alami.

Perakitan golden rice ditujukan untuk menanggulangi kekurangan konsumsi


vitamin B1 pada balita

Selectable marker yang digunakan pada pembuatan tanaman transgenik padi


Golden Rice generasi kedua adalah phosphomannose-isomerase (pmi) gene.

Pemilihan sumber eksplan dan media yang tepat merupakan dasar dari
pengaplikasian tissue culture
B

Suatu perusahaan besar yang bergerak di bidang pertanian bisa melakukan


penanaman tanaman transgenik di suatu lahan berdampingan dengan
tanaman non transgenik asal spesies tanaman tersebut sama.

Kecepatan multiplikasi tanaman cocor bebek dalam kultur in vitro akan


melebihi kecepatan multiplikasi tanaman pisang

Teknik rekayasa genetika sebaiknya diaplikasikan jika gen target yang akan
di introgresikan ke suatu tanaman berasal dari spesies yang sama.

Dalam perakitan transgenik, seleksi dapat dilakukan pada dua tahap yaitu
seleksi media dan seleksi tanaman. Pada seleksi media menggunakan
selektabel marker protein GUS, tanaman transgenik akan tampak berwarna
biru, karena menghasilkan β-glucuronidase.

Hygromycin digunakan sebagai selectable marker yang digunakan untuk


seleksi kalus secara in vitro pada pengembangan prototipe Golden Rice.

B
S

Salah satu partikel yang digunakan dalam metode particle bombardment


adalah partikel emas.

Setiap orang atau pusat penelitian berhak melakukan penelitian tentang


tanaman transgenik jika orang atau pusat penelitian tersebut sudah memiliki
keahlian dan fasilitas yang memadai tanpa meregistrasikan terlebih dahulu
orang/kegiatan penelitian tersebut.

Golden rice generasi pertama memperoleh transfer gen yang berasal dari
bunga daffodil.

Variasi somaklonal pada kultur in vitro bisa diinduksi dengan melakukan


subkultur secara berulang dengan frekuensi tinggi.

Gen crtI dari bakteri Erwinia uredovora harus diinsersikan untuk


menghasilkan tanaman padi Golden Rice karena gen tersebut dibutuhkan
untuk Phytoene synthase.

S
Teknologi DNA rekombinan bisa menjadi pesaing bagi teknologi rekayasa
genetika.

Marka codominan lebih baik digunakan dalam kegiatan seleksi tanaman


terutama pada populasi bersegregasi, karena dapat membedakan alel
homozigot dan heterozigot.

Anda mungkin juga menyukai

pFad - Phonifier reborn

Pfad - The Proxy pFad of © 2024 Garber Painting. All rights reserved.

Note: This service is not intended for secure transactions such as banking, social media, email, or purchasing. Use at your own risk. We assume no liability whatsoever for broken pages.


Alternative Proxies:

Alternative Proxy

pFad Proxy

pFad v3 Proxy

pFad v4 Proxy