Serie Normas Tecnicas Nro 37 PDF

Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO PARA EL
DIAGNSTICO DE LOS PARSITOS
INTESTINALES DEL HOMBRE
Serie de Normas Tcnicas 37
Lima - 2014
MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

MINISTERIO DE SALUD DEL PER
MINISTRA
Midori Musme de Habich Rospigliosi
VICEMINISTRO
Anbal Velsquez Valdivia
VICEMINISTRA DE PRESTACIONES Y
ASEGURAMIENTO EN SALUD
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INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

ALTA DIRECCIN
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Centro Nacional de Salud Pblica INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Director general
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PRESIDENTE
RGANOS DE ASESORAMIENTO Alfonso Zavaleta Martnez-Vargas
Oficina General de Asesora Tcnica MIEMBROS

Director general (e) Zuo Burstein Alva
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Director general Oswaldo Salaverry Garca
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Juan Cossio Brazzan
RGANOS DE APOYO
Oficina General de Administracin Secretara Tcnica

Director general Bertha Huarez Sosa
Oswaldo Mostacero Len
Oficina General de Informacin y Sistemas

Director general
Jos Luis Segovia Jurez

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

PARA EL DIAGNSTICO DE LOS PARSITOS
INTESTINALES DEL HOMBRE
ELABORADO POR:
Mara Beltrn Fabin de Estrada

Jannet Otrola Mayhua
Kathia Tarqui Terrones

Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin e Informacin del INS
Beltrn Fabin de Estrada, Mara

Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre /
elaborado por Mara Beltrn Fabin de Estrada ; Jannet Otrola Mayhua ; Kathia Tarqui Terrones --
Lima: Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2014.
96 p : il., graf., tab., 21 x 29.5 cm (Serie de Normas Tcnicas; 37)
1. PARASITOSIS INTESTINALES /diagnstico 2. TCNICAS Y PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

/normas 3. PER
I. Otrola Mayhua, Jannet

II. Tarqui Terrones, Kathia
II. Per. Ministerio de Salud
IV. Instituto Nacional de Salud (Per)
ISBN 978612310040-7
Hecho el Depsito Legal en la Biblioteca Nacional del Per N. 2014-13312
2da. edicin (septiembre, 2014)
Tiraje 1000 ejemplares
Ministerio de Salud, 2014

Av. Salaverry cuadra 8 s/n, Jess Mara, Lima, Per
Telf.: (511) 315-6600
Pgina web: www.minsa.gob.pe
Instituto Nacional de Salud, 2014

Cpac Yupanqui 1400, Jess Mara, Lima, Per
Telf.: (511) 4781111
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CONTENIDO
Introduccin ........................................................................................................................................................... V
Seccin 1. Generalidades ..................................................................................................................................... 1

1.1 Objetivo ........................................................................................................................................................ 1
1.2 Campo de aplicacin .................................................................................................................................... 1
1.3 Responsabilidades ....................................................................................................................................... 1
1.4 Documentos de referencia ........................................................................................................................... 1
1.5 Definiciones y abreviaturas .......................................................................................................................... 2
Seccin 2. Medidas de bioseguridad. .................................................................................................................. 4

2.1 Responsabilidades ....................................................................................................................................... 4
2.2 Campo de aplicacin. ................................................................................................................................... 4
Seccin 3. Obtencin de muestras ...................................................................................................................... 5

3.1 Condiciones generales ................................................................................................................................. 5
3.2 Muestra para el examen parasitolgico ........................................................................................................ 6
Seccin 4. Envo y transporte de muestras ........................................................................................................ 7

4.1 Objetivo ........................................................................................................................................................ 7
4.2 Condiciones especiales ............................................................................................................................... 7
4.3 Procedimiento............................................................................................................................................... 8
4.4 Rechazo de una muestra ............................................................................................................................. 8
Seccin 5. Procedimientos de laboratorio para el diagnstico - heces ........................................................... 9

5.1 Examen microscpico y macroscpico......................................................................................................... 9
5.2 Examen directo microscpico ..................................................................................................................... 10
5.3 Mtodo de concentracin ........................................................................................................................... 11
5.4 Mtodo cuantitativo de Kato Katz (anlisis cuantitativo = hgh) .................................................................. 22
5.5 Mtodos de coloracin para protozoarios................................................................................................... 25
5.6 Mtodos de coloracin para helmintos ....................................................................................................... 31
5.7 Fijadores y conservadores ......................................................................................................................... 35
Seccin 6. Cultivos parasitolgicos .................................................................................................................. 40

6.1 Medios de cultivo para protozoos ............................................................................................................... 40
6.2 Mtodos de desarrollo para helmintos........................................................................................................ 41
Seccin 7. Examen de secreciones y fluidos .................................................................................................... 46

7.1 Esputo ........................................................................................................................................................ 46
7.2 Aspirado, secreciones o jugo duodenal ...................................................................................................... 47
7.3 Secrecin, fluido y contenido intestinal....................................................................................................... 48
Seccin 8. Diagnstico de Enterobius vermicularis por el mtodo de Graham

(cinta adhesiva transparente) .................................................................................................................. 49
8.1 Fundamento ............................................................................................................................................... 49
8.2 Materiales ................................................................................................................................................... 49
8.3 Procedimiento............................................................................................................................................. 49
8.4 Observacin ............................................................................................................................................... 50
8.5 Resultado ................................................................................................................................................... 50

Seccin 9. Examen de biopsias.......................................................................................................................... 51

9.1 Biopsias del tubo digestivo ......................................................................................................................... 51
9.2 Recomendaciones ...................................................................................................................................... 51
Seccin 10. Resultados. ...................................................................................................................................... 52

10.1 Generalidades ............................................................................................................................................ 52
10.2 Resultado positivo ...................................................................................................................................... 52
10.3 Resultado negativo ..................................................................................................................................... 52
10.4 Formato para entrega de resultados .......................................................................................................... 53
Seccin 11. Examen de muestras de agua superficiales ................................................................................. 54

11.1 Generalidades ............................................................................................................................................ 54
11.2 Uso y elaboracin del hisopo de gasa ........................................................................................................ 54
11.3 Obtencin de muestras de agua en hisopo de gasa .................................................................................. 54
11.4 Obtencin de muestras de agua en botella o frasco .................................................................................. 54
11.5 Procesamiento de muestras de agua en hisopo de agua .......................................................................... 55
11.6 Procesamiento de muestras de agua en botella o frasco ........................................................................... 55
Bibliografa ........................................................................................................................................................... 56
Anexos
Anexo A. Principales parsitos intestinales del hombre ........................................................................................ 57

Anexo B. Algoritmo para el examen parasitolgico ............................................................................................... 66
Anexo C. Preparacin de reactivos y colorantes ................................................................................................... 71
Anexo D. Claves de identificacin de los protozoarios (amebas y flagelados) y helmintos ................................... 78
Anexo E. Elementos que pueden confundirse con los parsitos intestinales ........................................................ 83
Anexo F. Registro de los parsitos intestinales en el laboratorio por mes y por ao............................................. 87
Anexo G. Ficha para el estudio del cultivo de Entamoeba histolytica (cpa) .......................................................... 90
Anexo H. Parsitos no intestinales: Paragonimus y Fasciola (distomatosis pulmonar y heptica) ....................... 91
Anexo I. Micrometra.............................................................................................................................................. 92

INTRODUCCIN
Dentro de los problemas de salud pblica que el pas debe enfrentar, uno en especial, ha elevado su tasa de
prevalencia y se ha convertido en una grave dificultad entre sectores de menos recursos, se trata del parasitismo
intestinal, problema que agrava ms la ya deteriorada salud de la poblacin.
La presencia de factores desfavorables para la salud de la comunidad, como el fecalismo, el deficiente saneamiento
ambiental, la pobreza, el bajo nivel educativo y los hbitos de higiene inadecuados, permiten la presencia y
expansin del parasitismo intestinal, preferentemente en el grupo de menor edad.
Los parsitos intestinales son protozoos y helmintos que en sus estadios evolutivos pueden observarse en las
heces, secreciones, fluidos y frotis perianal de las personas. Estos parsitos afectan el desarrollo intelectual y
nutricional de la poblacin y se convierte en otro factor que afecta la economa.
Para el estudio de las parasitosis intestinales existe la necesidad de contar con un manual para el diagnstico
oportuno y preciso de estas infecciones, el cual nos permita tomar las acciones correctivas inmediatas y mediatas,
ya sea de tratamiento con medicacin, diagnstico y capacitacin adecuada en prevencin de los parsitos.
El Manual de procedimientos para el diagnstico de laboratorio de los parsitos intestinales del hombre" elaborado
en el Laboratorio de Enteroparsitos del Centro Nacional de Salud Pblica, es una compilacin de los mtodos
evaluados ms usados y tiles para el diagnstico de las enteroparasitosis, que pueden realizarse en la Red
Nacional de Laboratorios en Salud Pblica del pas, as como en aquellos laboratorios con infraestructura, equipos
e instrumental mnimos.
Se detalla los procedimientos ms apropiados para el diagnstico de los parsitos intestinales, Fasciola y
Paragonimus (fase crnica) descritos en nuestro medio; asimismo, se considera la deteccin de los parsitos en
muestras de agua superficiales mediante el uso del hisopo de gasa.
Este manual ser de ayuda inmediata y sencilla para el personal tcnico y profesional de los laboratorios locales,
intermedios y regionales de la Red Nacional de Laboratorios en Salud Pblica del pas.
Las autoras

SECCIN 1
GENERALIDADES
1.1 Objetivo
Establecer los procedimientos normativos para realizar el diagnstico parasitolgico de las infecciones y
enfermedades producidas por los parsitos intestinales y otros que se encuentran en las muestras coprolgicas
(Fasciola, Paragonimus, Clonorchis, Macracanthorhynchus, Linguatula,Capillaria, etc.).
1.2 Campo de aplicacin
Se aplica en laboratorios de establecimientos de salud del sistema de la Red Nacional de Laboratorios en Salud
Pblica, Fuerzas Armadas y Policiales y EsSalud.
1.3 Responsabilidades
1.3.1 El Centro Nacional de Salud Pblica (CNSP), a travs de su Direccin Ejecutiva de Enfermedades
Transmisibles, es responsable de autorizar el diseo, elaboracin, revisin y actualizacin del presente manual, de
acuerdo con los procedimientos aprobados por el Instituto Nacional de Salud.
1.3.2 Los directores de los establecimientos de salud son responsables de autorizar, proporcionar los recursos
necesarios y designar al personal responsable para la aplicacin de las disposiciones contenidas en el presente
manual.
1.3.3 El personal de los establecimientos de salud es responsable de planificar, organizar, ejecutar, capacitar y
controlar sus acciones, de acuerdo con las disposiciones contenidas en este manual.
1.3.4 Los jefes o responsables de los laboratorios deben asegurar el control de calidad interno, la idoneidad del
personal, equipos, materiales y reactivos, la mejor utilizacin del recurso humano y la distribucin de los ambientes
e instalaciones.
1.3.5 El personal profesional, tcnico / operativo y auxiliar es responsable de seguir las especificaciones
contenidas en el presente manual y aplicar los procedimientos indicados.
1.3.6 Culminados los procedimientos de laboratorio, el personal encargado del manejo de muestras biolgicas,
as como el director del establecimiento, son responsables de la neutralizacin y eliminacin de los desechos en
lugares apropiados.
1.4 Documentos de referencia
1.4.1 Instituto Nacional de Salud. Gua de procedimientos diagnsticos de las parasitosis intestinales. Lima:
INS; 1998.
1.4.2 Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio para la Obtencin y Envo de
Muestras (I). Segunda Edicin. Lima: INS, 1997. Serie de Normas Tcnicas N. 15.
1.4.3 Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos Bioseguridad en los Laboratorios de Ensayo,
Biomdicos y Clnicos. Serie de Normas Tcnicas INS 2005. Norma Tcnica N. 18.

1.4.4 Instituto Nacional de Salud. Manual de laboratorio del nivel local. Lima: INS; 1993.
1.4.5. Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio para el Diagnstico de los
Parsitos Intestinales del Hombre. Lima INS 2003. Serie de Normas tcnicas N. 37.
1.5 Definiciones y abreviaturas
1.5.1 AFA: fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico.
1.5.2 Antgeno: sustancia generalmente de naturaleza proteica, capaz de provocar una respuesta del sistema
inmunitario.
1.5.3 Anticuerpo: inmunoglobulina que es capaz de reaccionar con antgenos y provocar su neutralizacin o
modificacin.
1.5.4 Aplicador: trozo de madera tipo bajalenguas, til en aplicacin de mtodos de diagnstico parasitolgico.
1.5.5 Bioseguridad: conjunto de medidas de proteccin contra cualquier tipo de accin que ponga en peligro la
salud del ser humano.
1.5.6 CI: clasificacin internacional.
1.5.7 Cpsula ovgera: vescula que contiene huevos.
1.5.8 Cstode: gusano o helminto platelminto de forma acintada.
1.5.9 Centrifugacin: sedimentacin del contenido de una suspensin mediante la fuerza centrfuga.
1.5.10 Colorante vital: colorante en solucin salina que permite ver la estructura interna del parsito vivo.
1.5.11 Coproantgeno: antgeno presente en las heces.
1.5.12 Cristal de Charcot - Leyden: cristales de protenas provenientes de los grnulos de eosinfilos, que se
destruyen en el intestino.
1.5.13 Diafanizar: aclarar para facilitar la visualizacin microscpica.
1.5.14 Diagnstico parasitolgico: demostracin directa o indirecta de alguna forma o estadio evolutivo del
parsito.
1.5.15 Enteroparsito: parsito que tiene por hbitat el tubo digestivo, especialmente el intestino.
1.5.16 Espora: esporoquiste aislado. Estadio o elemento infectante de los microsporidios.
1.5.17 Esporoquiste: quiste con cubierta definida que contiene esporozotos.
1.5.18 Estrbila: porcin del cuerpo de las tenias o cstodes formadas por una cadena de progltidos.
1.5.19 Fijacin: conservacin de la estructura del parsito.
1.5.20 Heces: mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por el intestino.
1.5.21 Helminto: ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de apndices y con movimientos reptantes.

1.5.22 hgh: nmero de huevos por gramo de heces.
1.5.23 Huevo: producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un nuevo ser.
1.5.24 Herida: prdida de piel y potencial puerta de entrada de agentes patgenos.
1.5.25 Invasivo(a): agente infectante que tiene capacidad de invadir tejidos.
1.5.26 Larva: estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los artrpodos en quienes an no se
han desarrollado el aparato genital.
1.5.27 MIF: fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
1.5.28 montar: colocar el espcimen entre lmina y laminilla con blsamo de Canad para su conservacin
permanente.
1.5.29 Nemtode: gusano o helminto de forma cilndrica.
1.5.30 Neutralizar: incorporacin de un agente qumico a la muestra biolgica, es capaz de eliminar todo agente
vivo.
1.5.31 Ooquiste: quiste que contiene el huevo o cigote.
1.5.32 Organolptico: caractersticas orgnicas de una sustancia (consistencia, color, olor, etc.).
1.5.33 PAF: fijador o conservador (contiene fenol, alcohol y formol) para muestras con parsitos, sobre todo
protozoarios.
1.5.34 PVA: alcohol polivinlico, fijador para conservar los parsitos en muestras fecales.
1.5.35 Parsito: ser vivo de escala zoolgica inferior que vive a expensas de otro de escala superior.
1.5.36 Patogenicidad: capacidad de producir dao.
1.5.37 Protozoario: ser unicelular.
1.5.38 PMNS: polimorfonucleares
1.5.39 Progltide -o: segmento o anillo de la estrbila de las tenias o cstodes que puede ser inmaduro, maduro
o grvido, segn el estadio de desarrollo de sus aparatos genitales.
1.5.40 Quiste: forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una membrana dura e
impermeable.
1.5.41 Solucin sobresaturada: solucin en la cual el soluto est en su mxima concentracin.
1.5.42 SAF: fijador que contiene acetato de sodio, cido actico glacial y formol.
1.5.43 Trofozoto: forma vegetativa de los protozoos libres y en movimiento.
1.5.44 Tremtode-o: gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo indivisible.

SECCIN 2
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
2.1 Responsabilidades
El personal involucrado en los diferentes procesos para el diagnstico parasitolgico de las infecciones o
enfermedades deben cumplir los requisitos y aplicar las medidas establecidas en el Manual de Normas de
Bioseguridad (Serie de Normas Tcnicas N 18), editado por el Instituto Nacional de Salud.
2.2 Campo de aplicacin
Se deben cumplir y controlar las medidas necesarias, en especial las siguientes:
2.2.1 Del personal
2.2.1.1 Manipular con guantes la obtencin, recepcin y tratamiento de las muestras frescas.
2.2.1.2 Descartar rpidamente el material fresco, o fijar en caso de conservacin.
2.2.2 Tipos de agentes
2.2.2.1 Considerar como material de alto peligro las muestras de pacientes con VIH o hepatitis B.
2.2.3 La vestimenta
2.2.3.1 Vestir siempre mandil dentro del laboratorio y quitrselo para transitar por otras reas.
2.2.4 rea de examen de las muestras
2.2.4.1 Debe ser una sola dentro del laboratorio.
2.2.5 Envo de muestras al laboratorio
2.2.5.1 El nico material fresco que se puede enviar de un laboratorio a otro laboratorio es el cultivo, el resto debe
fijarse para su envo.
2.2.6 En casos de accidentes

2.2.6.1 Cubrir con papel peridico donde hay derrame de la muestra biolgica e incorporar sobre este hipoclorito
de sodio o formol al 10 % por aproximadamente 45 a 60 minutos, salir del rea donde ocurri el incidente.
2.2.7 El laboratorio
2.2.7.1 Debe salir el personal para evitar los productos qumicos colocados por el accidente
2.2.7.2 Registrar el incidente o accidente ocurrido
2.2.8 Neutralizacin y eliminacin del material biolgico
2.2.8.1 La descontaminacin debe ser en cada laboratorio y el material sucio debe eliminarse o lavarse.

SECCIN 3
OBTENCIN DE LA MUESTRA
3.1 Condiciones generales
3.1.1 Los parsitos intestinales del hombre son protozoarios o helmintos llamados comnmente gusanos
intestinales (Anexo A). Estos helmintos o gusanos pueden ser cilndricos (nemtodes), anillados o
segmentados (cstodes) y acantocfalos, los cuales poseen ganchos en la parte anterior.
3.1.2 Para observar los trofozotos, quistes u ooquistes de los protozoarios, as como las larvas y huevos de
helmintos, se debe usar un microscopio; en cambio, la mayor parte de los gusanos o helmintos adultos son
macroscpicos y su morfologa puede estudiarse directamente con ayuda de un estereoscopio o una lupa.
3.1.3 Los protozoarios y helmintos intestinales son eliminados con las heces en sus formas evolutivas
(trofozoto, quiste, ooquiste, espora, huevos, larvas y adultos) segn la especie involucrada.
3.1.4 Los helmintos intestinales adultos (progltidos de Taenia sp., Enterobius vermicularis y Ascaris
lumbricoides) pueden salir al exterior espontneamente o despus del tratamiento.
Los mtodos de diagnstico de los parsitos intestinales pueden ser: directo, concentracin, coloracin de
los elementos parasitarios que se eliminan con las heces.
3.1.6 En las heces podemos encontrar formas adultas y microscpicas (huevos, larvas, trofozotos, quistes,
ooquistes, esporas) y adultos de los parsitos intestinales; por ello, es importante obtener una buena
muestra fecal, as como la coleccin y conservacin ptima del espcimen o gusano.
3.1.7 La muestra debe ser obtenida (entre 3 y 8 g) lo ms fresca posible (mximo 240 min, si se busca
Entamoeba histolytica), y depositada en un frasco de boca ancha con tapa rosca y rotulada correctamente
con los datos de identificacin.
3.1.8 La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o hasta 2 a 5 das despus
de su administracin.
3.1.9 Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el diagnstico debido a que pueden
contaminarse con formas biolgicas, como por ejemplo: larvas similares a los enteroparsitos del hombre,
larvas de nemtodes, huevos de caros o de insectos, etc.
3.1.10 Si el paciente no es regular en la evacuacin de sus deposiciones y ha evacuado en la noche anterior al

examen, se recomienda guardar la muestra en una refrigeradora o en un lugar fresco no expuesto a la luz
solar, para que no se alteren las formas parasitarias. Cuando la muestra va a demorar en llegar al
laboratorio varias horas o das, se recomienda adicionarle lquido fijador o conservador (PAF, PVA,
formalina 10%, SAF, acetato de sodio, etc.).
3.1.12 En algunas parasitosis intestinales, es necesario realizar los exmenes en muestras de bilis, esputo,
secrecin / fluido, contenido duodenal, biopsia, tejido de necropsia o frotis perianal; as como realizar la
diferenciacin de espcimen adulto o fragmento de este.

3.2 Muestra para examen parasitolgico
Comprende las siguientes muestras: heces, bilis o fluido duodenal, esputo, secrecin, biopsia o preparaciones
histolgicas, espcimen o gusano. Las muestras de heces son las ms frecuentes.
3.2.1 Heces
3.2.1.1 Caractersticas de la muestra
a. Recipiente o contenedor: boca ancha con tapa rosca.
b. Cantidad: 3 - 8 g
c. Condiciones ptimas: no estar mezclado con orina, que no exista el antecedente de haber ingerido bario u
otros productos de contraste. Se debe llevar la muestra al laboratorio en corto tiempo (de 2 - 4 h despus
de su obtencin).
3.2.1.2 Datos de la muestra
Se debe consignar la siguiente informacin: nombre, edad, sexo, ocupacin, sntomas y signos, fecha de inicio de
sntomas, diagnstico presuntivo, ingesta de ensaladas, viajes, los ltimos 3 meses.
El recipiente o contenedor que contiene la muestra debe estar bien cerrado y colocado dentro de una bolsa de
plstico y donde no le llegue la luz directa. En caso que demore en llegar al laboratorio ver seccin 4.
3.2.1.3 Procesamiento de la muestra
a. Debe realizarse lo antes posible y en un lugar apropiado (cerca al cao de agua). Las muestras
diarreicas y las que contienen sangre, deben examinarse en forma macroscpica y microscpica apenas
lleguen al laboratorio.
b. Se aplicar la metodologa correspondiente (Anexo B).
c. Los reactivos y colorantes empleados en el procesamiento deben estar en envases adecuados,

mantenerse fuera de los rayos del sol o luz, etiquetados (con nombre y fecha de preparacin),
sometidos a un control peridico y con una preparacin proporcional a la demanda (Anexo C).
3.2.1.4 Reporte de resultados
Se debe escribir el nombre completo de los parsitos, gnero y especie indicando el estadio evolutivo y su densidad
en la muestra (Seccin 10).

SECCIN 4
OBTENCION, ENVO, TRANSPORTE, FIJACIN Y CONSERVACIN DE LAS MUESTRAS
4.1 Objetivo
Describir el procedimiento, condiciones de obtencin, envo, transporte, fijacin y conservacin de las muestras
para el laboratorio.
4.2 Condiciones especficas
Las muestras deben estar en frascos o contenedores rotulados con soluciones conservadoras (Tabla 1); deben
mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar, evitar las temperaturas extremas o el desecamiento;
asimismo, se debe considerar cantidades ptimas y.
Tabla 1. Condiciones de conservacin, envo y transporte de muestras para el diagnstico parasitolgico
TIPO DE TIEMPO QUE DEMORA EN AGENTES

MUESTRA LLEGAR AL LABORATORIO PARASITARIOS
< 24 h 24 h
Esputo, secrecin biliar T ambiente PAF, SAF, Paragonimus, Fasciola,

formalina 10% Giardia.
Giardia, Strongyloides,
Contenido duodenal T ambiente Fasciola, Paragonimus,
PAF, formalina 10% Ancylostoma duodenale
Necator americanusr,
Microsporidia y otros.
Frots perianal T ambiente T ambiente Enterobius, Ascaris,

Trichuris, Taenia y
otros.
Secrecin vaginal T ambiente Frotis en lmina E.vermicularis, T.vaginalis.
Tejidos 4 C E. histolytica, otros

Formol 10% (segn el tejido)
Nemtodes en alcohol 70%, Ascaris, Trichuris,
Helmintos T ambiente cstodes y tremtodes en Diphyllobothrium, Taenia,
formol 10% Paragonimus y Fasciola, etc.
Suero 4 C E. histolytica, Giardia,

Hielo seco o congelador Paragonimus, Fasciola
y otros
.
PAF, PVA,
Heces
T ambiente E. histolytica, Giardia,
Cary blair, Cryptosporidium,
Bicromato de Enterocytozoon,
potasio al 2,5%, Encephalitozoon y otros.
MIF
Figura 1. Requisitos para la remisin de la muestra de heces
Para la conservacin emplee formalina al 10%,

Cierre el frasco hermticamente.
Coloque los datos del paciente.
Seale a qu temperatura se debe mantener la muestra
Coloque la fecha
Escriba: FRGIL, MATERIAL BIOLGICO

4.3 Procedimiento
4.3.1 Coloque la muestra elegida en un envase apropiado, rotulado correctamente y luego, este en un recipiente
secundario (podra ser de plstico u otro material resistente a roturas) (Figura 1).
4.3.2 Enviar la muestra al laboratorio lo antes posible; en caso fuera fresca, dentro de las 2 a 4 h de obtenida.
4.3.3 Si el envo de la muestra va a demorar ms de un da en llegar al laboratorio, debe guardarla en un fijador

conservador, aplicando las medidas de bioseguridad correspondientes (Tabla 1).
4.3.4 Si la muestra se enva a otro laboratorio, el responsable del envo debe elegir la forma apropiada para la
ptima conservacin de esta.
4.3.5 Cuando la muestra no rene las condiciones o cantidades ptimas para los anlisis, as como los datos, se
recomienda establecer contacto con la persona responsable para efectuar las correcciones respectivas.
4.4 Rechazo de una muestra
4.4.1 Es importante controlar cada hoja de pedido y verificar si tiene toda la informacin (etiquetado). De no
cumplirse, se debe establecer contacto con la persona responsable para efectuar las correcciones
necesarias.
4.4.2 Los criterios para rechazar una muestra son los siguientes:
4.4.2.1 No indicar el tipo de muestra o procedencia.
4.4.2.2 No indicar el examen requerido.
4.4.2.3 Demora en el envo al laboratorio.
4.4.2.4 Muestra sin rotular o mal rotulada.
4.4.2.5 Muestra que presente evidencia de haber sido derramada.
4.4.2.6 Recipiente o contenedor inapropiado.
4.4.2.7 Muestra contaminada.
4.4.2.8 Muestra escasa o seca en el contenedor.
4.4.2.9 Presencia de una sola muestra, a pesar de la presencia de varias rdenes.
4.4.2.10 Volumen o cantidad inadecuada.
4.4.3 En caso de rechazar una muestra, el personal de laboratorio debe explicar al solicitante las observaciones
y motivos en la ficha de solicitud de diagnstico. Si no fuera posible la obtencin de otra muestra, revise
nuevamente los exmenes realizados.
4.4.4 Tenga en cuenta el examen parasitolgico por macroscopa.

SECCIN 5
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO PARASITOLGICO - HECES
5.1 Examen directo macroscpico
5.1.1 Fundamento
Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos adultos, enteros o fraccionados, as
como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (color, presencia de sangre o
moco, consistencia, etc.).
5.1.2 Materiales
5.1.2.1 Suero fisiolgico (Anexo C).
5.1.2.2 Aplicador (bajalengua).
5.1.2.3 Pinza de metal.
5.1.2.4 Coladera de plstico o malla metlica.
5.1.3 Procedimiento
5.1.3.1 Agregue suero fisiolgico en cantidad suficiente para homogeneizar la muestra.
5.1.3.2 En caso de presencia de parsitos adultos extraerlos y tamizar o colar la muestra.
5.1.4 Observacin
Observe las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para la ayuda diagnstica (consistencia, color,
presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de gusanos cilndricos, anillados o
aplanados (enteros o parte de ellos) (Figura 2).
Figura 2. Ascaris lumbricoides macho adulto (der.) y progltido grvido de Taenia solium (4X) (izq.), coloracin: Tionina

5.1.5 Resultado
En caso que la muestra contenga informacin til para el diagnstico (ejemplo: presencia de glbulos rojos, fibras
musculares no digeridas, mucus, etc.), se debe adicionar al informe del examen parasitolgico las caractersticas
macroscpicas de las heces.
5.2 Examen directo microscpico
5.2.1. Fundamento
Observe, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles o quistes, ooquistes, larvas
o huevos de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia
lamblia, Balantidium coli, Isospora, Cryptosporidium, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides
stercoralis, Ancylostoma o Necator, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola hepatica, etc.).
5.2.2 Materiales (Figura 3)
5.2.2.1 Lminas portaobjetos.
5.2.2.2 Laminillas cubreobjetos.
5.2.2.3 Aplicador de vidrio o madera.
5.2.2.4 Microscopio ptico.
5.2.2.5 Marcador de vidrio.
5.2.2.6 Suero fisiolgico (Anexo C).
5.2.2.7 Solucin de lugol (Anexo C).
5.2.2.8 Verde brillante (Anexo C).
5.2.2.9 Rojo neutro (Anexo C).
Figura 3. Materiales para la aplicacin del mtodo directo: lminas, laminillas, aplicador, solucin salina y lugol

5.2.3 Procedimiento
5.2.3.1 Coloque en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y, con ayuda de un
aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal; emulsionarla y cubrirla con una laminilla cubreobjetos.
5.2.3.2 Coloque en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y proceda a la aplicacin de la
muestra fecal como en el prrafo anterior.
5.2.3.3 Con el suero fisiolgico los trofozotos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural; con
lugol se observan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
5.2.3.4 En algunos casos se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a que no alteran la actividad del
trofozoto. Los ms usados son verde brillante 0,2% y rojo neutro 0,01%, as como fucsina 0,01%.
5.2.4 Observacin (Figura 4)
5.2.4.1 Observe con el microscopio a 10X o 40X. No es aconsejable usar objetivo de inmersin (100X), puesto
que se puede contaminar el microscopio.
5.2.4.2 Recorra la lmina siguiendo un sentido direccional, por ejemplo, de derecha a izquierda, o de arriba hacia
abajo.
5.2.5 Resultado
En un formato y en el cuaderno de registro correspondiente, se anotar el nombre de la especie del parsito y su

estadio evolutivo, indicando la densidad (nmero de formas parasitarias por campo microscpico) expresado en
cruces (Seccin 10).
Figura 4. Trofozoito de Giardia lamblia con solucin lugol (200X)
5.3 Mtodos de concentracin
Los trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y huevos, pueden concentrarse por diversos procedimientos, ello permite
corroborar lo hallado en el mtodo directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo. Estos procedimientos de
concentracin pueden ser: flotacin, sedimentacin, o por combinacin de ambos mtodos. La eleccin de cada
procedimiento depender de las facilidades del laboratorio, el adiestramiento del personal, la procedencia de la
muestra (zona geogrfica), el conocimiento de la prevalencia de los parsitos (zona costea, andina y selvtica o

rea rural o urbana), y la especie del parsito que se desea investigar.
5.3.1 Mtodos de concentracin por sedimentacin
5.3.1.1 Tcnica de la sedimentacin espontnea en tubo TSET (tcnica de concentracin por

sedimentacin, sin centrifugacin)
a. Fundamento
Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontneamente en un medio
menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. En este mtodo es posible la deteccin de quistes,
ooquistes, trofozotos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos.
b. Materiales
- Tubos de vidrio o plstico de 13 x 100, 16 x 150, o tubos de 50 mL de capacidad que terminen en forma
cnica.
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas de celofn recortadas adecuadamente (22 x 22 mm o 22 x 30 mm).
- Solucin fisiolgica (Anexo C).
- Pipetas de vidrio o plstico.
- Agua destilada, hervida o de lluvia.
- Gasa recortada en piezas de 9 x 9 cm.
c. Procedimiento
- Colocar una porcin de heces (1 - 2 g) en un tubo limpio y homogenizar con suero fisiolgico o en el mismo
recipiente en que se encuentra la muestra.
- Coloque una gasa, hundindola en la abertura del tubo y sujetndola con una liga alrededor de ella.
- Filtre el homogenizado a travs de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su contenido.
- Agregue suero fisiolgico hasta 1 cm por debajo del borde del tubo.
- Ocluya la abertura del tubo con una tapa, parafilm o celofn.
- Agite enrgicamente el tubo por 15 segundos, aproximadamente.
- Deje en reposo de 30 a 45 min. En caso que el sobrenadante est muy turbio, eliminarlo y repetir la misma
operacin con solucin fisiolgica o agua filtrada.
- Aspire la parte media del sedimento en el tubo con una pipeta y colocar 1 o 2 gotas en una lmina portaobjeto.
- Agregue 1 o 2 gotas de solucin lugol a una de las preparaciones.

- Cubra ambas preparaciones con las laminillas de celofn y observar al microscopio
d. Observacin
Examine primero la preparacin con solucin fisiolgica para observar formas mviles y de menor peso especfico
(trofozotos, quistes) y luego la preparacin con lugol para observar sus estructuras internas, de estos y de otros
parsitos de mayor peso especfico (huevos, larvas).
e. Resultado
Informe la presencia de las formas evolutivas de los parsitos (Seccin 10).
5.3.1.2 Mtodo de sedimentacin rpida (TSR, MSR) (concentracin por sedimentacin) (Lumbreras et al.
1962)
Figura 5. Materiales para la aplicacin de la tcnica / mtodo de sedimentacin rpida: (TSR) vasos, gasa, pipeta de transferencia,
desinfectante, etc.
a. Fundamento
Se basa en la gravidez de los huevos que, por su tamao y peso, sedimentan rpidamente cuando se suspenden
en agua.
b. Materiales
- Copa o vaso de vidrio o plstico, cnico de 150 a 200 mL.
- Coladera de malla metlica o de plstico.
- Placas Petri o lunas de reloj.
- Aplicador de madera (1/3 de bajalengua).
- Pipetas de transferencia.
- Gasa.
- Agua corriente filtrada.

- Microscopio.
c. Procedimiento
- Homogenice 3 a 8 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua filtrada.
- Coloque la coladera y dos capas de gasa en la abertura del vaso y, a travs de ella, filtre la muestra.
- Retire la coladera y llenar la copa con agua filtrada hasta 1 cm debajo del borde, esto es 15 a 20 veces el
volumen de la muestra.
- Deje sedimentar la muestra durante 30 minutos.
- Decante las 2/3 partes del contenido del vaso y nuevamente agregue agua.
- Repita los pasos anteriores cada 5 a 10 min por 3 a 4 veces, hasta que el sobrenadante quede limpio.
- Transfiera el sedimento a una placa Petri o luna de reloj, por incorporacin o con ayuda de una pipeta Pasteur.
- Observe al estereoscopio o microscopio, a menor aumento.
d. Observacin
Observe la presencia de huevos. Este mtodo es especialmente til para la deteccin tremtodes como: Fasciola
hepatica, Paragonimus sp. y nemtodes como Ascaris lumbricoides (huevo fecundado o no fecundado), Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Diphyllobothrium pacificum, etc. (Anexo A).
Figura 6. Huevos operculados de Paragonimus peruvianus (izq.) y Fasciola hepatica (der.) en muestra fresca
e. Resultado
Informe de la presencia de huevos o larvas de parsitos (Seccin 10).
5.3.1.3. Tcnica de Faust: Mtodo de sedimentacin y flotacin por centrifugacin con sulfato de zinc al
33% y densidad 1180.
a. Fundamento

Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el
sulfato de zinc al 33,3%, cuya densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistes y/o huevos de parsitos y,
excepcionalmente, se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada
para el lavado previo de la muestra.
b. Materiales
- Gradilla para tubos de ensayo.
- Tubos de prueba 15 x 150.
- Tubos de prueba 13 x 100.

- Laminillas cubreobjetos.
- Embudo pequeo de vidrio.
- Bajalengua o bagueta.
- Gasa.
- Sulfato de zinc 33,3%, densidad 1180 (Anexo C).
- Solucin de lugol (Anexo C).
c. Procedimiento.
- Coloque 1 a 2 g de la muestra de heces en el tubo de prueba 13 x 100 o 15 x 150 mm y agregue de 7 a 10 mL

de agua filtrada o destilada. Realice una buena homogenizacin con ayuda del bajalengua.
- Coloque en el tubo la muestra homogenizada hasta alcanzar 1 cm por debajo del borde del tubo
- Centrifugue entre 2000 a 2500 r.p.m. durante 2 a 3 minutos.
- Decante el sobrenadante, adicione agua al sedimento, homogenice y repita la centrifugacin 1 o 2 veces, hasta
que el sobrenadante se observe limpio.
- Elimine el sobrenadante y agregue la solucin de sulfato de zinc (3-4 mL), homogenice y complete con
la misma solucin hasta 1 cm del borde del tubo.
- Centrifugue de 1 a 2 minutos entre 2000 a 2500 r.p.m.
- Coloque el tubo en la gradilla y agregue, con ayuda de un gotero, la solucin de sulfato de zinc hasta formar un
menisco en la boca del tubo.
- Coloque una laminilla cubreobjeto sobre el menisco y deje en reposo durante 5 a 6 min.
- Deposite una gota de solucin lugol en la lmina portaobjeto.
- Retire la laminilla cubreobjeto, colocarla sobre la lmina con lugol, o con asa de Kolle colocar 3 o 4 asadas en la
lmina y cubrir con una laminilla cubreobjeto luego observar al microscopio.
d. Observacin
Se observan principalmente quistes y huevos de parsitos.

e. Resultado
Informe el nombre y estadio evolutivo encontrado, as como la cantidad de elementos observados por campo
(Seccin 10).
5.3.2 Mtodos de concentracin por flotacin
5.3.2.1 Sheather Sugar: mtodo de concentracin por flotacin con centrifugacin en una solucin de
azcar
a. Fundamento
Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor
densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de
helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios: Cryptosporidium, Cyclospora,
Isospora, etc.
b. Materiales
- Tubos de ensayo 13 x 100.
- Laminilla cubreobjetos.
- Aplicador.
- Solucin de azcar (Anexo C).
- Asa de platino.
- Gradilla para tubos de ensayo.
- Suero fisiolgico (Anexo C).
- Embudo de vidrio.
- Gasa.
c. Procedimiento
- Homogenice 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico en un tubo 13 x 100mm.
- Centrifugue el tubo con el material homogeneizado a 2500 r.p.m. durante 2 a 5 min.
- Elimine el sobrenadante, y agregue la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del tubo; agite hasta disolver el
sedimento, centrifugue como en el paso anterior, complete con la solucin de azcar hasta el borde y espere de
2 a 5 minutos la formacin de un menisco.
- Con la ayuda del asa de platino, tome una muestra de la superficie del menisco y colquela en una lmina
portaobjeto; agregue lugol, cubra con una laminilla y observe al microscopio. En caso de observar coccidios, de
la superficie del preparado tomar, con la asa de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un
frotis para teir por el mtodo de Ziehl-Neelsen modificado.
d. Observacin

Esta tcnica es apropiada para la observacin y registro de ooquistes de Isospora, Cryptosporidium, Cyclospora y
Sarcocystis.
e. Resultado
Informe la presencia de las formas evolutivas de los parsitos encontrados y su cantidad, expresado en cruces
(Seccin 10).
5.3.2.2. Mtodo de Parodi Alcaraz (mtodos de concentracin por flotacin sin centrifugacin, en solucin
sobresaturada de azcar):
a. Fundamento
Se basa en la propiedad que tienen los quistes y/o huevos de flotar en la superficie de una solucin saturada de
azcar, debido a su menor densidad. El mtodo es til para la deteccin de quistes de protozoarios y huevos de
helmintos.
b. Materiales
- Tubos de 13 x 100 o 15 x 150.
- Solucin saturada de azcar (azcar rubia) (Anexo C).
- Formol.
- Aplicador de madera (1/3 de baja lengua).
- Solucin de lugol (Anexo C).
c. Procedimiento.
- Coloque 1 a 2 g de heces en el tubo de ensayo.
- Agregue 3 a 5 mL de la solucin sobresaturada de azcar y homogenice con un aplicador.
- Complete el contenido del tubo con la misma solucin de azcar hasta formar un menisco.
- Deje en reposo por 30 minutos.
- Coloque en contacto con el menisco, una laminilla cubreobjeto que permitir la adherencia por viscosidad de los
quistes y huevos.
- Coloque en la lmina portaobjeto una gota de solucin de lugol.
- Retire la laminilla con sumo cuidado, colocarla sobre la lmina portaobjeto y examine al microscopio.
d. Observacin
Es conveniente la observacin inmediata a 10X y 40X, pues los quistes y/o huevos suelen deformarse si la

densidad de la solucin es demasiado alta.
e. Resultado
Informe los nombres y estadios evolutivos de los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.3.3 Mtodo de Ritchie o de sedimentacin por centrifugacin y flotacin (mixto, con fijador)
5.3.3.1 Fundamento
Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por sedimentacin mediante la centrifugacin, con la ayuda de
formol y ter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
5.3.3.2 Materiales.
- Gradilla de tubos de ensayo.
- Tubos de ensayo 13 x 100.
- Pipetas Pasteur o de transferencia.
- Lmina portaobjetos.
- Hisopos
- Solucin de formol 10%

- ter etlico.
- Lugol.
- Bajalengua o bagueta.
- Microscopio binocular.
5.3.3.3 Procedimiento (Figura 7)
- Coloque en el tubo de ensayo 1 a 2 g de muestra de heces, agregue 8 mL de solucin salina, homogenice y

centrifugue a 2000 rpm por 2 a 3 minutos.
- Decante el sobrenadante y repita 1-2 veces el paso anterior hasta que se observe el sobrenadante limpio.
- Decante el sobrenadante, agregue al sedimento 6 mL de solucin de formol al 10%, homogenice y deje reposar
5 min, luego agregue 3 mL de ter.
- Coloque el parafilm sobre el tubo y agite cuidadosamente para evitar la salida del material.
- Elimine las capas formadas de sobrenadante, de ser necesario, con ayuda de un hisopo.
- Retire la tapa, centrifugue el tubo de 2000 a 3000 r.p.m por 3 min.

- Deposite una gota de lugol en la lmina portaobjeto y con ayuda de una pipeta Pasteur, tome una porcin del
sedimento para mezclarlo con la solucin de lugol.
- Cubra con una laminilla cubreobjeto y observe al microscopio.
ter
Detritus
Formalina
Sedimento
Figura 7. Aplicacin del mtodo de Ritchie (sedimentacin y flotacin)
5.3.3.4 Observacin
Se pueden observar quistes, ooquistes y huevos de los parsitos. Es poco til para observar trofozotos y larvas.
5.3.3.5 Resultado
Informe el nombre, estadio evolutivo del parsito y la presencia de cristales de Charcot-Leyden (Seccin 10).
5.3.4 Mtodo de Baermann (mtodo de concentracin por migracin)
5.3.4.1 Fundamento
Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e hidrotropismo de los trofozotos de protozoos y
larvas de helmintos. Es til principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercoralis.
5.3.4.2 Materiales
- Copas cnicas de 200 a 300 mL.
- Coladera metlica o rejilla.
- Pipetas de transferencia.
- Gasa.
- Lminas cavadas.
- Suero fisiolgico (Anexo C).

Figura 8. Materiales del mtodo de Baermann: copa de vidrio, pipetas de transferencia, coladera, lminas y laminillas
Para una mejor diferenciacin de las larvas de los parsitos, realizar el mtodo de Harada-Mori
5.3.4.3 Procedimiento
- Coloque la coladera o rejilla metlica con la gasa doblada (2 a 3 capas) dentro de la copa (Figura 8).
- Coloque sobre la gasa de 3 a 8 g de la muestra de heces en fresco.
- Vierta solucin salina a 37 C o a temperatura ambiente, en cantidad suficiente, por el borde de la copa.
- Deje a temperatura ambiente o en estufa entre 28 37 C por 30 a 50 min.
- Retire la coladera o rejilla y, con ayuda de una pipeta de transferencia, obtenga 1 mL de sedimento.
- Coloque el sedimento en una luna de reloj o una lmina cavada y observe al microscopio o esteroscopio.
5.3.4.4 Observacin
Observa trofozotos y larvas en movimiento. En algunas ocasiones se pueden observar formas adultas de E.
vermicularis macho.

Figura 9. Strongyloides stercoralis L-1. Larva rabditiforme de (izq) (200x) y huevos (der) (200x)
5.3.4.5 Resultado
5.3.5 Mtodo cualitativo: tcnica de Kato o mtodo de concentracin por tamizado
5.3.5.1 Fundamento
Mtodo que consiste en la diafanizacin o aclaracin de las heces con el uso de glicerina, que permite preparar una
capa transparente y observar las formas parasitarias.
5.3.5.2 Materiales
- Lminas portaobjeto.
- Aplicador.
- Papel celofn (humectante especial), de 2 x 3 cm y sumergido en una solucin de glicerina por un perodo no
menor de 24 h.
- Nylon u organza blanca.
- Solucin glicerinada con verde de malaquita (Anexo C).
- Tamice 0,5 g de la muestra de heces a travs de organza o nylon fino.
- Extienda el tamizado sobre la lmina portaobjeto y cubra con una laminilla impregnada en glicerina.
- Comprima la muestra con el tapn de jebe sobre la laminilla, quite el exceso de glicerina, deje en una bandeja a
temperatura ambiente por 30 a 45 minutos luego observe al microscopio.
5.3.5.4 Observacin
Es una tcnica apropiada para la observacin de huevos de helmintos como Trichuris y algunos protozoarios como
Isospora belli (Figura 10).
Figura 10. Trichuris trichiura e Isospora belli con colorante temporal eosina (400x)

5.3.5.5 Resultado
5.4 Mtodo cuantitativo de Kato Katz (anlisis cuantitativo = hgh)
5.4.1 Fundamento
Se basa en la tcnica de Kato Katz que permite cuantificar la presencia de huevos de helmintos. Se expresa en
nmero de huevos por gramo de heces (hgh).
5.4.2 Materiales (Figura 11)
5.4.2.1 Lminas portaobjetos 2,5 x 7,5 cm.
5.4.2.2 Papel absorbente (toalla o peridico).
5.4.2.3 Aplicador.
5.4.2.4 Papel de celofn impregnado con glicerina y verde de malaquita (Anexo C).
5.4.2.5 Molde de plstico con perforacin central de 6 mm de diamtro.
5.4.2.6 Nylon u organza de color blanco de 0,09 mm.
Figura 11. Materiales del mtodo de Kato - Katz: lmina perforada, aplicador, nylon u organza y verde de malaquita
5.4.3 Procedimiento
5.4.3.1 Con un aplicador (bajalengua) transfiera la muestra fecal (0,5-1g) sobre el papel absorbente.
5.4.3.2 Coloque un nylon de 2 x 3 cm sobre la muestra.

5.4.3.3 Con el aplicador del kit comprima la malla para tamizar la muestra.
5.4.3.4 Coloque el molde de plstico sobre la lmina portaobjeto y rellene la perforacin con la muestra tamizada.
5.4.3.5 Levante el molde dejando el cilindro de la muestra en la lmina portaobjeto.
5.4.3.6 Coloque la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y, con ayuda de un tapn de jebe,
presione sobre la laminilla, buscando extender la muestra.
5.4.3.7 Deje para la diafanizacin a temperatura ambiente durante 30 a 45 min.
5.4.4 Observacin
5.4.4.1 Observe los huevos de helmintos, tal como se muestra en la Figura 12.
5.4.5 Resultado
5.4.5.1 El nmero de huevos encontrados en la lmina se multiplica por k (k= 24), el resultado es el nmero de
huevos por gramo de heces (hgh) (Tabla 2).
5.4.5.2 Deben contarse todos los huevos del preparado.
Figura 12. Huevos Ancylostoma / Necator y Trichuris trichiura por el mtodo de Kato Katz (400X)

Tabla 2. Clculo del nmero de huevos por gramo de heces (hgh). Mtodo de Kato - Katz
Nmero de huevos observados Nmero de huevos por gramo Nmero de huevos observados Nmero de huevos por gramo
en la lmina de heces (hgh) en la lmina de heces (hgh)
1 24 38 912
2 48 39 936
3 72 40 960
4 96 41 984
5 120 42 1008
6 144 43 1032
7 168 44 1056
8 192 45 1080
9 216 46 1104
10 240 47 1128
11 264 48 1152
12 288 49 1176
13 312 50 1200
14 336 51 1224
15 360 52 1248
16 384 53 1272
17 408 54 1296
18 432 55 1320
19 456 56 1344
20 480 57 1368
21 504 58 1392
22 528 59 1416
23 552 60 1440
24 576 61 1464
25 600 62 1488
26 624 63 1512
27 648 64 1536
28 672 65 1560
29 696 66 1584
30 720 67 1608
31 744 68 1632
32 768 69 1656
33 792 70 1680
34 816 71 1704
35 840 72 1728
36 864 73 1752
37 888 74 1776
5.4.5.3 En caso de heces lquidas o pastosas, usar los factores de correccin que se incluyen en el kit k/2 para
heces blandas y K/3 para heces diarricas.
5.4.6 Intensidad de la infeccin (hgh)
5.4.6.1 El Comit de Expertos de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) clasifica la intensidad de la infeccin
por helmintos segn los rangos indicados en la Tabla 3.
Tabla 3. Intensidad de las infecciones

AGENTES LEVE MODERADA SEVERA
A. lumbricoides 1 - 4999 5000 49 999 50 000

T. trichiura 1 - 999 1000 - 9999 10 000
A. duodenale
1 -1999 2000 - 3999 4000
N. americanus
Fasciola hepatica Paragonimus peruvianus 1 - 99 100 - 399 400

Nota: los nmeros indican el nmero de huevos por gramo de heces (hgh)
5.5 Mtodos de coloracin para protozoarios
5.5.1 Mtodo de Ziehl-Neelsen (modificado para observacin de coccidio: Cryptosporidium y otros)
5.5.1.1 Fundamento
Se basa en el comportamiento cido-resistente de la cubierta de estos parsitos, cuyos ooquistes se tien de rojo y
destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del colorante de contraste usado.
5.5.1.2 Materiales
- Soporte de varillas de vidrio para coloracin de lminas portaobjetos.
- Estiletes o pinzas punta curva.
- Fuscina fenicada (Anexo C).
- Verde de malaquita o azul de metileno acuoso (Anexo C).
- Metanol.
- Hidrxido de sodio al 4%.
- Alcohol cido (Anexo C).
- Coloque las lminas portaobjetos sobre el soporte o las varillas de vidrio.
- Con el estilete o pinza curva haga un frotis de heces en la lmina portaobjeto y deje secar.
- Fije la lmina con alcohol metlico de 2 a 5 minutos y deje secar.
- Agregue hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, elimine el exceso y lave con agua.
- Cubra la lmina con la fucsina fenicada (previa agitacin del frasco) por 5 minutos, diluida en agua al
tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua).
- Lave suavemente la lmina portaobjeto con agua corriente.
- Decolore con alcohol-cido (alcohol de 96de 1-3% con cido clorhdrico), cubriendo el portaobjeto por unos
segundos hasta quitar el colorante.
- Lave suavemente el portaobjeto con agua.
- Coloque como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5 min,
diluidos previamente al tercio.
- Lave la lmina suavemente con agua corriente y deje secar a temperatura ambiente.

- Realice el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, use una laminilla cubreobjeto y observe
en el microscopio.
5.5.1.4 Observacin
Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora aparecen de un color rojo fucsia sobre un fondo verdoso
(con verde de malaquita) o azul (con azul de metileno). En algunos casos no se colorean bien, pero la refringencia
caracterstica permite diferenciarlos (Figura 13).
Figura 13. Isospora belli coloreado por Ziehl - Neelsen modificado (400X)
5.5.1.5 Resultado
Informar los nombres y estadios evolutivos de los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.5.2 Coloracin Gram y coloracin tricrmica (para microsporidios)

5.5.2.1 Fundamento
Se basa en la identificacin de esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, etc. por la combinacin de las

coloraciones Gram y tricrmica.
5.5.2.2 Materiales
- Colorante chromotrope (Anexo C).
- Coloracin Gram (Anexo C).
- Cristal violeta (Anexo C).
- Yodo de Gram (Anexo C).
- Solucin decolorante (Anexo C)

- Pinza o estilete punta curva.
- Alcoholes 85% y 95% y xilol.
- Mechero de alcohol.
- Placas Petri 10 x 150 mm.

- Prepare el set de placas Petri 10 x 150 mm.
- Realice un frotis fino en una lmina o laminilla y deje secar.
- Fije el frotis pasndolo tres veces por una llama, un segundo de tiempo por vez (opcional).
- Agregue el colorante cristal violeta y espere 1 min.
- Enjuague en agua corriente y elimine totalmente el agua.
- Adicione el yodo de Gram por 30 segundos, remueva el exceso con el decolorante y enjuague con agua.
- Agregue el colorante Chromotrope por 5 min de 50 C a 55 C.

- Pase por el decolorante (alcohol 90% y cido actico 1%) de 1 a 3 segundos.
- Pase por alcohol 95% y por alcohol etlico absoluto por 1 min.
- Pase 1 min por xilol buscando que la coloracin sea adecuada para visualizar el parsito.
- Realice el montaje y observe al microscopio.
5.2.4 Observacin
Observe al microscopio a 10X y 40X. Para observar al microscopio a 100X, cubra con aceite de inmersin.
Se observan las esporas de los microsporidios, etc., que aparecen de un color rosado o rojo tenue o fucsia sobre el
fondo verde o azul.
5.2.5 Resultado
Informe los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.5.3 Coloracin Trichrome (Gomori Wheatley)
5.5.3.1 Fundamento
Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Esta tcnica utiliza muestras de
heces frescas, preservadas con PVA o fijadas con Schaudinn. Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de
Entamoeba, Giardia, Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
5.5.3.2 Materiales (Figura 14)
- Asa de platino.
- Estilete curvo o pinza curva.
- Agua destilada.
- Tintura de yodo (Anexo C).
- Cytoseal o blsamo de Canad.
- Alcoholes 85%, 90% y 95% y absoluto.
- Xilol.
- Colorante chromotrope (Anexo C).

- cido actico.
- Solucin Schaudinn (Anexo C).
- Frascos coplin o placas Petri.
Figura 14. Materiales para la coloracin tricrmica: colorante, pinza, porta laminillas (tapn de jebe), laminillas y placas Petri
- Prepare un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos correspondientes, sujete la laminilla con el
portalaminillas y con el estilete o pinza curva haga el frotis fino de la muestra sobre la laminilla.
- Fije la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos.
- Pase por alcohol 70% con 2 o 3 gotas de tintura de yodo.
- Pase por un minuto por alcohol 70%.
- Pase por el colorante Chromotrope de 8 a 15 minutos.
- Pase por solucin decolorante (alcohol 90% con cido actico al 1%) de 10 a 15 segundos y vea al
microscopio el tono de coloracin.
- Pase por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 min.
- Pase por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco.
- Realice el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount.
5.5.3.4 Observacin
Observe con objetivo de inmersin 100X. El citoplasma de los parsitos se tie de color verde y el ncleo de color
rosado (Figura 15).

Figura 15. Trofozotos de Balantidium coli con macroncleo, coloracin tricrmica (200X). Observar los macroncleos caracterstico
5.5.3.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Seccin 10).
5.5.4 Coloracin de May Grnwald
5.5.4.1 Utilidad
Colorea protozoarios, principalmente flagelados.
5.5.4.2 Materiales
- Estilete o pinza curva.
- Colorante May Grnwald (Anexo C).
- Alcohol metlico.
- Blsamo de Canad.
- Con la ayuda de un estilete o una pinza curva, realice el frotis de la muestra fresca en la lmina o laminilla
y deje secar.
- Fije el frotis con unas gotas de alcohol metlico, cubriendo la muestra por 5 minutos.
- Cubra el frotis con el colorante (diluido al 1/2 o 1/3 con agua destilada) durante 15 minutos.
- Lave con agua corriente y deje secar.
- Realice el montaje con cytoseal o blsamo de Canad y observe al microscopio.
5.5.4.4 Observacin

Observe la lmina con objetivo de inmersin. Los protozoos se observan con su citoplasma de color azul claro y los
ncleos de color prpura (Figura 16).
Figura 16. Trofozoto de Giardia lamblia coloreado con May Grnwald (400X)
5.5.4.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y el estadio evolutivo (Seccin 10).
5.5.5 Coloracin de hematoxilina frrica de Heidenhain
5.5.5.1 Utilidad
Colorea protozoarios, principalmente amebas y flagelados.
5.5.5.2 Materiales (Figura 17)
- Frasco coplin o placas Petri.
- Estilete o pinza curva.
- Colorante de hematoxilina (Anexo C).
- Alcohol etlico al 50%, 70%, 85%, 95% y absoluto en placas Petri.
- Solucin Schaudinn (Anexo C).
- Solucin mordiente de sulfato de fierro y amonio (Anexo C).
- Tintura de yodo (Anexo C).


Figura 17. Materiales para la coloracin hematoxilina frrica de Heidenhain: colorante,

bicloruro de mercurio, porta-laminillas (tapn de jebe), pinza punta curva y placas Petri
- Prepare un set de placas Petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los reactivos correspondientes, con
ayuda de un estilete o pinza curva haga un frotis fino en la lmina o la laminilla, esta ltima sujeta al
portalaminilla.
- Si la muestra es dura, haga una emulsin previa en solucin fisiolgica, realice el frotis y pase en solucin
Schaudinn por 3 a 5 minutos.
- Pase por alcohol 70% ms 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 min.
- Pase por alcohol 70% y 50% por 5 a 10 min cada vez.
- Pase por agua corriente por 5 a 10 min.
- Pase por la solucin mordiente 2% de 5 a 10 min y enjuague con agua corriente.
- Pase por colorante por 5 a 10 min (1 mL de solucin colorante hematoxilina y 9 mL de agua).
- Lave con agua y pase por una segunda solucin de mordiente al 2% para decolorar, observando la
intensidad de la coloracin.
- Lave con agua corriente a un pequeo chorro continuo de 10 a 15 min.
- Deshidrate pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 min cada uno.
- Aclare con xilol agitando el frotis, monte con cytoseal o blsamo de Canad y observe al microscopio.
5.5.5.4 Observacin
Observe con objetivo de inmersin 1000x. El citoplasma de los parsitos se observan de color azul oscuro y los
ncleos de color morado intenso a negruzco (Figura 18).

Figura 18. Trofozotos de Giardia lamblia y Chilomastix mesnili, coloreados con hematoxilina frrica de Heidenhain (1000X)
5.5.5.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y el estadio evolutivo (Seccin 10).
5.6 Mtodos de coloracin para helmintos
5.6.1 Coloracin Carmn clorhdrico
5.6.1.1 Utilidad
Coloracin de estructuras internas de especmenes adultos o segmentos de este. Se usa de preferencia para el
estudio de cstodes y tremtodes, ya que los nemtodes suelen deformarse con el montaje. La muestra debe ser lo
ms fresca posible.
5.6.1.2 Materiales (Figura 19).
- Pinza de punta fina.
- Alcohol etlico 70%, 85%, 95% y absoluto.
- Creosota de la Haya o xilol.
- Colorante Carmn (Anexo C).
- cido clorhdrico.
- Agua destilada.
- Pabilo.
- Placas Petri conteniendo colorante, decolorante, alcoholes de 70%, 85%, 95% y absoluto.

Figura 19. Materiales para la coloracin Carmn clorhdrico: colorante, especmenes aplanados, placas Petri y pinza
- Los progltidos de cstodes y los adultos de tremtodes deben lavarse y aplanarse, luego colocarlos entre
dos lminas, sujetndolos con pabilo o usando pesas para sumergirlos en formol al 10%.
- En caso de estar fijados en formol 10%, se lavan con agua corriente durante 10 a 30 minutos y luego se
realiza el aplanamiento del helminto o gusano.
- Coloque el gusano en alcohol 70% durante 10 a 20 min.
- Pase por el colorante carmn durante 5 a 10 min.
- Pase por alcohol cido controlando la coloracin observando con el estereoscopio.

- Deshidrate el helminto pasando por alcohol 85%, 95% y absoluto, durante 10 min en cada uno.
- Pase por la creosota o xilol, controlando al estereoscopio o microscopio la deshidratacin apropiada.
- Seque el exceso de creosota con papel filtro y realice el montaje con blsamo de Canad.
5.6.1.4 Observacin
La observacin y estudio de la morfologa del ejemplar se realiza macroscpicamente e incluso solo usando el
estereoscopio (Figura 20).
Figura 20. Huevos de Dipylidium caninum en cpsula ovgera coloreados con carmn clorhdrico (40X)
5.6.1.5 Resultados
5.6.2 Coloracin de Bonilla, Naar y Beloy
5.6.2.1 Utilidad
Las larvas de los nemtodes absorben el colorante, permitiendo diferenciar sus estructuras internas.

5.6.2.2 Materiales
- Alcohol 25%, 30%, 70%, 85% y 95%.
- Solucin rojo de Congo (Anexo C).
- Solucin de salicilato de metilo (Anexo C).
- Lminas excavadas.
- Blsamo de Canad o cytoseal.
- Pipeta.

- Prepare un set de placas Petri 60 x 90 mm con los reactivos correspondientes y coloque las larvas en
alcohol 25- 30% con unas gotas de solucin de rojo de Congo por 20 a 30 min.
- Controle por la observacin microscpica el color de las larvas.
- Deshidrate la muestra, pasndola por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, por 20 a 30 min en cada uno.
- Coloque la muestra en solucin de salicilato de metilo durante 3 min.
- Coloque los especmenes en cytoseal, blsamo de Canad o Permount y observar al microscopio.
5.6.2.4 Observacin
Los especmenes y sus estructuras internas se tien de color rojo.
5.6.2.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y su estadio evolutivo (ver Seccin 10).
5.6.3 Coloracin hematoxilina frrica de Delafield
5.6.3.1 Utilidad
Se usa en casos de cstodes y tremtodes. Permiten colorear estructuras internas de especmenes adultas o
fragmentadas del mismo.
5.6.3.2 Materiales
- Alcohol de 25%, 30%, 70%, 85% y 96%.
- Hematoxilina frrica.

- Blsamo de Canad o cytoseal.
- Pipeta.
- Prepare un set de placas Petri 60 x 90 mm o 100 x 150 mm con los reactivos correspondientes,
dependiendo de los especmenes a colorear.
- Los tremtodes y cstodes fijados con formol 10% se lavan en agua corriente.
- Diluya el colorante stock de 8 a 10 gotas en agua destilada y coloque los especmenes (35 mL por placa) por
12 h.
- Lave con agua corriente y pase por agua (segundos), dependiendo del espcimen.
- Pase por alcohol 50%, 30% y 10% por 10 min en cada uno, luego por agua corriente el tiempo necesario
para sacar el exceso de colorante.
- Deshidrate en alcohol 10%, 30%, 50%, 70%, 85%, 95% y 100% cada uno por 10 min.
- Pase dos veces por xilol, monte con blsamo de Canad y observe al microscopio.
5.6.3.4 Observacin
La observacin de los especmenes se realiza en el microscopio o en el estereoscopio.
5.6.3.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y su estadio evolutivo.
5. 6.4. Aclarante para helmintos
5.6.4.1. Aclarante para nemtodes
Si los especmenes estn en alcohol colocarlos en el aclarante por 10-15 min, en caso contrario requieren mayor
tiempo (C4.12.3).
5.6.4.2 Otros aclarantes: xilol, tergitol, salicilato de metilo (C4.12.2.)
- Elija uno de los aclarantes (cuando an estn en alcohol absoluto) y coloque en partes iguales en alcohol
absoluto por 5-15 min.
- Observe la diafanizacin
- Monte en blsamo de Canad o cytoseal.
5.7 Fijadores y/o conservadores
Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las estructuras internas, sobre todo cuando
las muestras no pueden ser procesadas inmediatamente
PAF (phenol-alcohol-formol) = FAF (fenol alcohol formol)

5.7.1.1 Utilidad
Conserva las estructuras de los parsitos (trofozotos, quistes, huevos y larvas), pudiendo incluso observarse en
semanas o meses (6) sin que exista deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en frascos
color caramelo. Adems, permite observar el material al microscopio.
5.7.1.2 Materiales
- Fijador PAF o FAF (Anexo C).
- Tionina o azure A (Omethilene azure A) (Anexo C).
- Agua destilada.
- Hisopo.
- Tubos de centrfuga de 15 mL.
- Aplicadores.
- Tritn NE.
- ter.
- Embudo de vidrio.
- La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la proporcin 1:1 o v/v. para la observacin
microscpica:
- Mezcle bien la muestra fijada en PAF y con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubo de 15 mL,
cuele de 3 a 4 mL del material fijado.
- Agregue solucin salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugue a 1800 r.p.m. por 3 min.
- Decante el sobrenadante para obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor, agregue de la muestra filtrada
una cantidad suficiente y vuelva a centrifugar para obtener el volumen del sedimento deseado.
- Decante el sobrenadante y complete 12 mL con solucin fisiolgica, emulsione con el aplicador y centrifugue a
1800 r.p.m. por 3 min.
- Repita el centrifugado y lave de 2 a 3 veces ms.
- Agregue 2 mL de solucin fisiolgica al sedimento final, emulsione y obtenga una gota del sedimento con una
pipeta Pasteur y luego colquela en una lmina portaobjetos.
- Agregue una gota del colorante tionina o azure A, cubra con una laminilla cubreobjetos y examine al
microscopio.
Tambin puede obtenerse una muestra para la observacin microscpica, mediante el siguiente procedimiento:
- Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregue 10 mL de solucin fisiolgica y una
gota de tritn NE.

- Agregue 2 mL de ter, tape con un tapn de jebe o de corcho, agite suavemente y destape.
- Centrifugue a 2000 r.p.m. por 3 min, decante y elimine los detritus de las paredes del tubo mediante un
aplicador cubierto de algodn.
- Agregue al sedimento 1 o 2 gotas de solucin fisiolgica, mezcle y obtenga del fondo del tubo con una pipeta
Pasteur una gota que se colocar en una lmina portaobjeto.
- Agregue una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y observe al microscopio
5.7.1.4 Observacin
Observe los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de color azul y el ncleo azul oscuro.
5.7.1.5 Resultado
5.7.2 PVA (Polivinil alcohol = alcohol polivinlico)
5.7.2.1 Utilidad
Fija y preserva, principalmente los trofozotos y quistes de protozoarios, por tiempo muy prolongado sin
modificacin importante de su morfologa.
5.7.2.2 Materiales
- Solucin fijadora - conservadora de PVA (Anexo C).
- Aplicador.
- Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
- Coloque en una lmina portaobjetos 1 o 2 mg de muestra, seque el frotis, agregue 2 o 3 gotas de PVA y
seque o guarde hasta por 3 meses para colorearlos, o
- Agregue al frasco que contiene la muestra 1:3. Generalmente se puede preservar por meses y cuando se
considere conveniente se realizar la coloracin con Trichrome Gomori Wheatley.
5.7.3 MIF (merthiolate - yodo - formol)
5.7.3.1 Utilidad
Fija y colorea simultneamente los quistes y huevos de parsitos, lo que permite la observacin inmediata de la
muestra.
5.7.3.2 Materiales
- Solucin MIF (Anexo C).
- Viales de vidrio de 3 a 4 mL.

- Aplicador.
- Coloque 1 o 2 mL de la solucin MIF en el vial con ayuda de una pipeta.
- Para la observacin microscpica, coloque 1 o 2 mL, o su equivalente de la muestra fresca de heces, mezclar
y observar al microscopio.
5.7.3.4 Observacin
Observe los parsitos teidos de color amarillo oro.
5.7.3.5 Resultado
5.7.4 Fijadores para preservar, conservar y enviar helmintos adultos
5.7.4.1 Utilidad
Conserva ejemplares adultos para su estudio morfolgico, su preservacin en museos o para contar con muestras
de referencia. Los ms usados suelen ser formol al 10%, AFA (cido actico formol - alcohol) o SAF (acetato
sodio - cido actico - formol).
5.7.4.2 Materiales necesarios
- Formol 10% (Anexo C).
- Solucin AFA (Anexo C).
- Alcohol 70%.
- Glicerina 5%.
- Pabilo o pesas de metal segn modelo.
- Frascos boca ancha 150 200 mL.
- Placas Petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
a. Coleccin y lavado de los helmintos
- Todo espcimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o suero fisiolgico) en un frasco con
tapa.
- Los adultos colectados son lavados varias veces con solucin fisiolgica para eliminar la mucosidad y otras
sustancias adheridas al cuerpo del helminto.
- Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parsito

- Caliente a 55 C, alcohol de 70%, formol 10% o AFA, para la fijacin y que los ejemplares queden estirados y
se pueda observar sus estructuras internas.
b. Fijacin
- Para una conservacin apropiada usar formol al 10%, para cstodes y tremtodes, o una mezcla de alcohol
70% para nemtodes, ambos con glicerina 5%.
- Todos los frascos deben ser rotulados en papel bond y escrito con lpiz, indicando el nombre o grupo del
parsito, hospedador, localizacin, procedencia y fecha de coleccin.
- Para la identificacin, en ocasiones, se requiere hacer el aclaramiento con lactofenol (Anexo C) o la mezcla de
alcohol y fenol 1:1.
c. Aplanamiento
- til para cstodes y tremtodes.
- Se les coloca entre lminas portaobjetos y se las ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento.
- Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 das, luego del cual se puede colorear o conservar como pieza de
museo en formol 10% y glicerina 5%.
- Los tremtodes como Fasciola o Paragonimus pueden prepararse y conservarse siguiendo los pasos dados
para los cstodes (Figura 21).
Figura 21. Fasciola hepatica adulto y Diphyllobothrium pacificum despus del aplanamiento

SECCIN 6
CULTIVOS PARASITOLGICOS
Algunos protozoos intestinales del hombre pueden ser cultivados en medios artificiales. Estos cultivos pueden
servir como complemento de otros mtodos diagnsticos, con fines de enseanza, para proveer organismos en
mayor cantidad para trabajos de investigacin y para preparar los antgenos.
Los protozoos cuyo cultivos han demostrado ser tiles para su identificacin son Entamoeba histolytica, Giardia
lamblia y Balantidium coli, en tanto, los helmintos que pueden desarrollar parte de su ciclo evolutivo en medios
artificiales y sirven como ayuda diagnstica son Ancylostoma o Necator, Strongyloides stercoralis y
Trichostrongylus sp.
6.1 Medios de cultivo para protozoos
Los medios de cultivo para protozoos ms usados son: medio Pavlova, medio Diamond y, medio de Tanabe y Chiba
modificado para Entamoeba histolytica.
6.1.1 Medio Pavlova
6.1.1.1 Constituyentes
Fosfato cido de sodio 12 H20 8,95 g

Fosfato de potasio 1,15 g
Cloruro de sodio 20,00 g
Extracto de levadura 4,00 g
Agua destilada 2750,00 mL
Adicionar:
1. 37,5 mL de suero de caballo, inactivado a 56 C por 30 min.

2. 2,75 g de almidn de arroz estril.
3. 1 000 UI/mL de penicilina G sdica.
4. 50-100 ug/mL de estreptomicina.
6.1.2 Medio Diamond

Trypticase BBL 2,00 g

Extracto de levadura DIFCO 1,00 g
Maltosa 0,50 g
Clorhidrato de L-cistena 0,10 g
cido ascrbico 0,02 g
Agar 0,05 g
- Ajuste el pH con hidrxido de sodio 1N a 6,8 7,0, distribuya en cada tubo 9 mL, autoclave a 120 C por 15 min
y almacene a 4 C hasta su uso (mximo un mes).
- Agregue a cada tubo en el momento de la siembra, 1 mL de suero sanguneo estril, penicilina G potsica 1 000
UI/mL y sulfato de estreptomicina 1 mg/mL.
- Lleve el registro en una ficha (Anexo G).
6.1.3 Medio de Tanabe y Chiba modificado para Entamoeba histolytica.
Agar 2,00 g
Asparagine 2,00 g
Solucin Ringer 100,00 mL
- Junte los constituyentes y disuelva en bao Mara.
- Reparta 3 mL en tubos de 15 x 150 mm, autoclave a 100 C por 30 minutos y deje solidificar en plano
inclinado.
- Agregue a cada tubo 0,5 a 1 mL de solucin Ringer al que se le ha aadido previamente suero de caballo 1%.
6.1.3.3 Solucin Ringer

Cloruro de potasio 0,42 g
Bicloruro de mercurio 0,034 g
Bicarbonato de sodio 0,01 / 0,038 g
Glucosa 0,10 o 0,26 g
Agua destilada 100 mL
Autoclave a 15 libras de presin por 15 min y almacene a 4 C hasta el momento de su uso.
6.2 Mtodos de desarrollo para helmintos
6.2.1 Placas de agar
Este mtodo permite incrementar la sensibilidad diagnstica hasta 2,5 veces ms que el mtodo de Baermann.
Agar 2,00 g

- Mezcle los reactivos, disuelva y autoclave.
- Reparta en placas Petri (o en lminas portaobjetos), dependiendo de la densidad parasitaria, agregue la muestra
en el centro de la placa, incube a 37 C de 1 a 9 das y controle diariamente el desarrollo de larvas.
6.2.2 Agar carbn
Agar 2,00 g
Carbn 0,50 g
- Homogenice o licue y reparta en tubos de 13 x 100 mm o placas Petri 10 x 150 mm, inocule la muestra y siga el
procedimiento anterior (podra utilizar el microcultivo usando el agar en lmina portaobjeto).
6.2.2.3 Mtodo de Harada-Mori
6.2.3.1 Utilidad
Esta tcnica permite el desarrollo de huevos a estadios larvales de los nemtodes lo cual posibilita su
diferenciacin morfolgica. Es til, principalmente, para la obtencin de larvas rabditiformes y filariformes de
anquilostomdeos y estrongiloideos.
6.2.3.2 Materiales
- Tubos 13 x 100, 16 x 150 o 16 x 180 mm.
- Papel filtro.
- Agua estril o agua de cao filtrada.
- Pinza curva
- Aplicador.
- Tapn de goma o corcho.
- Parafilm o cinta adhesiva.
- Alcohol 30%.
- Formalina 5%.

a. Preparacin del tubo
- Agregue al tubo 1 o 2 mL de agua destilada o solucin salina (Figura 22:1).
- Corte una tira de papel filtro de 12-15 x 1,5-2 cm, dependiendo del dimetro y tamao del tubo (Figura 22:2).
- Haga una muesca en el extremo inferior del papel filtro (Figura 22:3).
b. Extendido de la muestra
- Con el aplicador, extienda la muestra de heces (0,5 a 1 g) sobre la superficie del papel, dejando libre los
extremos.
- Coloque cuidadosamente el papel filtro dentro del tubo, evitando el contacto de las heces con el lquido (Figura
22:4).
- Tape el tubo y rotule con los datos del paciente (Figura 22:5).
- Incube a 27 C 37 C por 4 a 10 das (o a temperatura ambiente).
Figura 22. Material del mtodo de Harada Mori tubo con tapa y papel
filtro con extendido para el desarrollo de las larvas
6.2.3 Observacin
- Durante la incubacin, con ayuda de una lupa o con el microscopio (estereoscopio), se puede observar el
desarrollo de larvas en el medio lquido.
- Para estudiar las larvas se elimina el papel filtro, se toma una gota del lquido del fondo del tubo, se coloca en una
lmina portaobjeto o lmina excavada y se observa al microscopio.
- La diferenciacin morfolgica se har siguiendo la clave (Anexo D y Figuras 23-25).

- Las larvas pueden conservarse fijndolas en alcohol 25 a 30% o formalina 5%.
Figura 23. Larvas en Ancylostoma duodenale y Necator americanus (100X) en movimiento con colorante
temporal azul de metileno
Ancylostoma/Necator S. stercoralis Trichostrongylus sp. Rhabditis sp.

C C C C
E E E E
P P P P
A A A
A
E: Esfago, I: Intestino; P: Primordio Genital y A: Ano
Figura 24. Diferenciacin de las larvas rabditiformes: Strongyloides stercoralis,

Necator/Ancylostoma, Trichostrongylus y Rhabditis sp
Strongyloides Necator Ancylostoma

stercoralis americanus duodenale

N. americanus A. duodenale
Figura 25. Diferenciacin de las larvas filariformes: cutcula radiada, forma ovoide de la parte anterior de Necator americanus y
Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis con cola caracterstica
6.2.4 Mtodo de Harada - Mori modificado por Mara Beltrn Fabin
- La preparacin del tubo es similar al item 6.2.3.3; pero, adems de la solucin salina o agua, se le adiciona al
tubo el colorante vital tionina o verde de malaquita 0,001%.
- El extendido de la muestra tambin es similar al tem 6.2.3.3.
6.2.4.2 Observacin
Las larvas se extraen del fondo del tubo con una pipeta de transferencia y se observan coloreadas y en movimiento
(Figura 26).

Figura 26. Larvas filariformes de Necator americanus (izq ) coloreado con tionina ; S. stercoralis verde de malaquita y (der) 100X).
Desarrollo en el mtodo de Harada - Mori modificado
SECCIN 7
EXAMEN DE SECRECIONES Y FLUIDOS
7.1. Esputo
7.1.1. Utilidad
Los helmintos que realizan el ciclo de Loos suelen ocasionar sintomatologa pulmonar, y pueden encontrarse en
una muestra de esputo. Las larvas de S. stercoralis son las ms frecuentemente observadas en esputo y en las
heces.
Por la posibilidad de encontrar estos elementos parasitarios en el esputo, es necesario conocer los principales
mtodos diagnsticos.
7.1.2 Materiales
7.1.2.1 Lminas portaobjetos.
7.1.2.2 Laminillas cubreobjetos.
7.1.2.3 Vaso cnico o de vidrio de 150 a 200 mL.

7.1.2.4 Coladera o rejilla metlica.
7.1.2.5 Pipetas de transferencia
7.1.2.6 Solucin de hidrxido de sodio 2 al 4%.
7.1.2.7 Gasa.
7.1.2.8 Microscopio ptico.
7.1.3 Obtencin de la muestra
Se obtiene por expectoracin en un frasco limpio de boca ancha.
7.1.4 Strongyloides stercoralis
- Use el mtodo de Baermann, 5.3.4 reemplazando nicamente la muestra de heces por la de esputo.
- Con ayuda de una pipeta Pasteur, obtenga el sedimento, colquela en una luna de reloj o en una placa
Petri y observe con el estereoscopio o el microscopio.
7.1.4.2 Observacin
Observe las larvas en movimiento.
7.1.5 Paragonimus spp
7.1.5.1 Procedimiento: tcnica AMS III modificada (AMS = American modified service).
- Agregue al frasco con la muestra (4 a 8 mL) 20 a 30 mL de hidrxido de sodio al 2 - 4%, o cido clorhdrico
1% y, a travs de una gasa, vierta a un tubo cnico de 50 mL.
- Centrifugue a 2500 r.p.m. por 5 a 10 minutos, elimine el sobrenadante, agregue hidrxido de sodio 2% o cido
clorhdrico del 3% C.3.8, al sedimento hasta llenar el tubo y deje en reposo durante 45 a 60 minutos.
- Con ayuda de una pipeta obtenga 1 o 2 gotas de sedimento, colquelo en una luna de reloj o placa Petri y
observe con estereoscopio o microscopio.
7.1.5.2. Observacin
Observe huevos operculados caracterizados por presentar una cubierta externa ondulada (Figura 6).
7.2 Aspirados, secreciones o jugo duodenal
7.2.1 Utilidad
7.2.1.1 Los parsitos intestinales que tiene por hbitat el duodeno, pueden encontrarse en muestras biliares,
obtenidas ya sea por sonda duodenal, por el mtodo de la cuerda encapsulada (Enterotest) o por la
cpsula de Beal.
7.2.1.2 Los parsitos intestinales que tienen por hbitat el intestino grueso o delgado, tambin pueden obtenerse
a partir de endoscopas gastrointestinales, proctoscopas o colonoscopas.
7.2.1.3 La obtencin del contenido duodenal ha mostrado ser til en la bsqueda de Giardia lamblia, Isospora belli,

Strongyloides stercoralis, Ancylostoma o Necator y Fasciola hepatica, cuyos adultos se localizan en el
intestino y las vas biliares respectivamente.
7.2.1.4 La obtencin de material a travs de endoscopa gastrointestinal es til en la bsqueda de coccidios

intestinales, en tanto que las proctoscopas y colonoscopas sirven para la bsqueda de Entamoeba
histolytica.
7.2.2 Materiales
Para realizar el mtodo de la cuerda encapsulada es necesario:
- Cuerda encapsulada.
- Guantes.
- Vaso de bebida.
- Papel pH.
- Placas Petri o lunas de reloj.
- Lminas de vidrio excavadas.
- Microscopio binocular
Nota: la obtencin del contenido duodenal o muestra biliar por sonda, requiere la intervencin de personal mdico
para la introduccin y retiro de la sonda duodenal.
7.2.3 Procedimiento
7.2.3.1 El mtodo de la cuerda encapsulada o Enterotest requiere que el paciente est en ayunas.
7.2.3.2 Un extremo de la cuerda se fija con una cinta adhesiva en la mejilla del paciente y se le hace deglutir la
cpsula, en cuyo interior est enrollada una cuerda de nylon, la que se va desenrollando a medida que
desciende por el estmago y el duodeno.
7.2.3.3 A las 4 o 5 horas se retira la cuerda, se puede observar que el extremo que lleg al duodeno est de color
amarillo
7.2.3.4 Se exprime el extremo en una lmina excavada o lmina portaobjeto.
7.2.3.5 El material obtenido por la sonda duodenal se deposita en un tubo de centrfuga. Una pequea porcin se
deposita en una lmina excavada o portaobjeto.
7.2.4 Examen microscpico
7.2.4.1 Las gotas de bilis o contenido duodenal depositadas en las lminas excavadas o lminas portaobjetos se
observan directamente al estereoscopio o al microscopio y luego con tincin de lugol.
7.2.4.2 Al resto del contenido duodenal obtenido con sonda se le agrega una solucin de hidrxido de sodio 2%,
se trasvasa a un tubo de 13 x 100 o 15 x 150 mm, dependiendo de la cantidad, se mezcla tapando el tubo
y, por agitacin se liberan las formas parasitarias del mucus duodenal.

7.2.4.3 Deje reposar durante 30 a 45 min, elimine el sobrenadante y observe el sedimento directamente o con
tincin de lugol.
7.2.5 Observacin
Se observa con estereoscopio o microscopio.
7.2.6 Resultado
7.3 Secrecin, fluido y contenido intestinal
El aspirado del contenido de lesiones intestinales a travs de exmenes endoscpicos (gastrointestinal,

proctoscopa o colonoscopa), ciruga y otros, pueden examinarse inmediatamente despus de obtenido mediante
observacin directa y en ocasiones en cmara de Foot o en microscopios de platina caliente, como es el caso de
las muestras obtenidas por proctoscopa realizadas para la bsqueda de los trofozotos de Entamoeba histolytica.
SECCIN 8
DIAGNSTICO DE Enterobius vermicularis POR EL MTODO DE GRAHAM (CINTA ADHESIVA

TRANSPARENTE)
8.1 Fundamento
La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del ano durante la noche. La tcnica
de Graham tiene por objeto adherir estos huevos a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se
extender posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica.
8.2 Materiales
8.2.1 Lminas portaobjetos desengrasadas.
8.2.2 Cinta adhesiva transparente o cinta scotch de 1 pulgada de ancho.
8.2.3 Solucin salina o tolueno.
8.2.4 Aplicador (bajalengua).
8.3 Procedimiento

8.3.1 Extienda la cinta adhesiva transparente sobre la superficie de la lmina portaobjeto, adhiera una porcin
pequea a ambos extremos, dejando una lengeta separar la cinta de la lmina portaobjeto cuando se va
a tomar la muestra (Figura 27).
b.
a.
c.
Figura 27. Preparacin de la lmina con cinta adhesiva transparente (a); bajalenguas (b), envuelto con papel kraft (c)
8.3.2 La obtencin de la muestra se realiza de preferencia en la noche, 2 a 3 horas despus que el paciente
(generalmente los nios) est dormido, o a la maana siguiente y sin que se haya realizado el aseo de la
regin perianal.
8.3.3 El paciente debe estar inclinado exponiendo la regin gltea, se despega la cinta adhesiva levantando la
lengeta hasta que quede expuesta la parte adherente y, con ayuda de un bajalengua, se aplica el lado
adhesivo (Figura 28 A).
8.3.4 Se adhiere la cinta haciendo toques en la regin perianal en sentido horario o antihorario (Figura 28 B).
(A) (B) (C)

Figura 28. Procedimiento de recoleccin de la muestra: A-C
8.3.5 Terminada la aplicacin, extienda la cinta adhesiva (Figura 28C) y vuelva a pgala en la lmina
portaobjeto, luego envulvala con el papel y escriba el nombre del paciente.
8.3.6 Microscopa de las lminas
8.3.6.1 En el laboratorio, desprenda la cinta engomada del frotis perianal por un extremo, agregue solucin de
tolueno, hidrxido de sodio al 2% o solucin salina (1 o 2 gotas de la sustancia elegida) ello clarificar la
muestra y permitir una mejor observacin de los huevos o adultos de E. vermicularis. Es necesario
observar la lmina en su totalidad.
8.3.6.2 En ocasiones, se pueden observar al microscopio, huevos de otros helmintos, principalmente huevos de
Taenia sp, Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura entre otros.

8.4 Observacin
Observe los huevos embrionados o hembra adulta de E. vermicularis.
8.5 Resultado
Informe el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Figura 29).
Figura 29. Adultos y huevos de Enterobius vermicularis (izq. y medio) y Ascaris lumbricoides (derecha.). Mtodo de Graham (100X)
Figura 30. Enterobius vermicularis (huevos larvas) recientemente liberados, aislados del mtodo de Graham (100X)
SECCIN 9
EXAMEN DE BIOPSIAS
9.1 Biopsias del tubo digestivo
9.1.1 Las biopsias que son tiles para la bsqueda de parsitos son las obtenidas del antro pilrico, duodeno y
recto, mediante endoscopas.
9.1.2 Los parsitos diagnosticados frecuentemente en biopsias del antro pilrico y del duodeno son: Necator
americanus, Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis y Giardia lamblia, menos frecuente es la
observacin de coccidios intestinales como Cryptosporidium y Cyclospora.
9.1.3 Las biopsias de ulceraciones del intestino grueso muestran Entamoeba histolytica o Balantidium coli.
9.1.4 Las piezas operatorias que son objeto de examen histolgico pueden demostrar la presencia de parsitos
intestinales, por ejemplo: Enterobius vermicularis adultos en la luz del apndice o Ascaris lumbricoides en
una obstruccin mecnica de intestino, vas biliares o conducto pancretico.
9.2 Recomendaciones
9.2.1 La bsqueda de parsitos intestinales en cortes histolgicos obtenidos por biopsia o necropsia no requiere,
en general, de tcnicas de coloracin especiales.

9.2.2 La coloracin de hematoxilina-eosina es til, aunque generalmente no es posible reconocer la morfologa
del parsito, pues el corte microscpico afecta su integridad.
9.2.3 Las piezas anatmicas pueden conservarse en formol al 10% para ser usadas como piezas de museo o
muestras de referencia.

SECCIN 10
RESULTADOS
10.1 Generalidades
10.1.1 Los resultados indicarn el(los) mtodo(s) empleado(s), el gnero o la especie del parsito observado y su
estadio evolutivo. La densidad parasitaria puede expresarse como el nmero de formas parasitarias
observadas por campo de microscopio con objetivo de 10X y 40X.
10.1.2 Todo formato de respuesta de resultados debe contener los datos de identificacin: nombre, edad, sexo,
fecha, las caractersticas organolpticas de las heces (consistencia, color, presencia de sangre y moco),
datos de la observacin microscpica (presencia de leucocitos, eritrocitos, levaduras, fibras musculares no
digeridas y parnquima de clulas vegetales en cantidad considerable), ya que esta informacin facilitar
un mejor diagnstico clnico.
10.1.3 Los resultados obtenidos deben registrarse en un cuaderno de registros del laboratorio. En el caso de los
laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, siguiendo las normas de control de
calidad, el 10% de las muestras deben conservarse en el fijador, siendo mensual, trimestral y anualmente
remitidas al laboratorio inmediato en jerarqua para establecer la concordancia de los resultados (Anexo F).
10.1.4 Para la vigilancia de las infecciones parasitarias establecida por el Instituto Nacional de Salud llene las
fichas correspondientes (Anexo F).
10.2 Resultado positivo
10.2.1 El informe debe contener el nombre del paciente, los agentes observados y su estadio o forma evolutiva:
quistes (q), ooquistes (o), trofozotos (t), esporas (e), huevos (h) o larvas (l) y adultos (a).
10.2.2 La intensidad parasitaria puede expresarse cualitativa o semicuantitativamente:
10.2.2.1 Cualitativamente
Escaso, regular o buena cantidad, segn sea el grado de facilidad o dificultad para ubicarlos.
10.2.2.2 Semicuantitativamente
Contando las formas parasitarias:
Si se observan 1 o 2 elementos en toda la lmina, escribir el nombre del agente y su estadio evolutivo.
(+) si se observan de 2 a 5 elementos por campo microscpico 10X o 40X; (++) si se observan de 6 a 10 elementos
por campo microscpico 10X o 40X; (+++) si se observan >10 elementos por campo microscpico 10X o 40X.
10.3 Resultado negativo
10.3.1 Se informa que no se observ quistes, trofozotos, ni huevos de parsitos.

10.4 Formato para entrega de resultados

SECCIN 11
EXAMEN DE MUESTRAS DE AGUA SUPERFICIALES PARA LA DETECCIN DE PARSITOS
11.1 Generalidades
El anlisis parasitolgico de las muestras de aguas superficiales (ros, canales o bocatomas, pozos) se realiza a
partir de botellas / frascos de agua, y mediante el uso del hisopo de gasa (Moore modificado).
11.2 Uso y elaboracin del hisopo de gasa
El hisopo de gasa es utilizado para el estudio de los parsitos en muestras de aguas superficiales (agua y desage)
por la facilidad en la obtencin, manejo y transporte; adems por su sensibilidad para captar los protozoarios y
helmintos, incluyendo amebas de vida libre (AVL) y Paragonimus sp.
El hisopo se elabora con gasa de 75 x 90 cm, con un peso seco de 20 g aprox. Se dobla la gasa en forma de
abanico, se coloca los extremos tratando de no quedar visibles y se sujeta a una cuerda (pabilo o nylon) de 2 m de
longitud (Fig. 31).
Figura 30. Hisopo de gasa
11. 3 Obtencin de las muestras de agua con hisopo de gasa
11.3.1 Seleccionada el rea de muestreo, se procede a la toma de muestra por arrastre o se deja por 24 horas, el
hisopo siempre debe permanecer sumergido en el agua tratando que no quede visible, se sujeta a un
tronco para evitar su prdida.
11.3.2 El hisopo con la muestra de agua se coloca en una bolsa de polietileno y dentro de cajas, preferentemente
de poliestireno, para conservarlas a bajas temperaturas, de tal manera que la muestra extrada sea similar
a la composicin del agua por investigar, por un mayor tiempo sin que se altere.
11.4 Obtencin de las muestras de agua en botella o frasco
11.4.1 La obtencin de las muestras de agua consiste en la captacin de un volumen determinado (2-4 L) de
agua para su anlisis de parsitos, estas pueden ser de pozo, ro, canales, bocatomas o desages.

11.4.2 Para la obtencin
- Las botellas o frascos de recoleccin de volumen de 2-4 L, deben estar limpios.
- Para la extraccin requiere de otro recipiente, balde o jarra limpia por dentro y por fuera, este se colocar
con una soga y se sumergir rpidamente en el agua y regresarlo a la superficie para llenar la botella o
frasco de recoleccin.
- Rotule la muestra y haga su respectiva una ficha con los siguientes datos: lugar de muestreo, fecha, hora,
nmero de muestra, temperatura y cantidad.
11.5 Procesamiento de muestras de agua en hisopos de gasa
- Pese cada hisopo muestreado, sumrjalo en un beacker con 100-250 mL de solucin salina durante 1-1
h, agite cada 15- 20 min para desprender todos los elementos parasitarios que estuvieran en el hisopo.
- Retire el hisopo, deje reposar por 20-30 min, elimine el sobrenadante, conserve el sedimento.
- Extraiga 20-30 mL de la muestra, colquelo en una placa Petri, lave el sedimento 3-4 veces hasta que est
claro, vierta en una placa ese sobrenadante luego observe con estereoscopio.
- Resuspenda en dos tubos (A y B), 3-5 mL de sedimento y lave el tubo A con solucin de azcar (sheather
sugar) y el tubo B con dicromato de potasio 1,5-2,5%, (mtodo modificado de Cadwell y Cadwell) se
centrifuga durante 3-5 min para detectar protozoos y helmintos, coloque el sedimento en una lmina
portaobjetos y observe al microscopio.
11.6 Procesamiento de muestras de agua en botella / frasco
- Mida el volumen de la muestra, registre el pH y deje en reposo.
- Filtre partes del volumen de muestra en papel filtro y cuele el restante a travs de una gasa doblada,
se sujeta a una coladera en una copa cnica de 200-300 mL y deje sedimentar.
- Enjuague el papel filtro utilizado en una placa para recuperar las formas parasitarias, elimine el lquido
filtrado y analice el sedimento.
- Resuspenda 3-5 mL de sedimento en tubos (A y B) de 15 x 150 mm, a un tubo A se agrega solucin de

azcar y al tubo B se le incorpora dicromato de potasio 2,5% luego centrifugar.
- Se elimina el sobrenadante y se repite esta operacin una a dos veces. Coloque 1 a 2 gotas en ambos
lados extremos y observe con microscopio. Algoritmo B4.

BIBLIOGRAFA
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Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para la obtencin y envo de muestras (I) 2 Ed. Lima: INS,
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Bryan Frank L. Hazard Analytical Critical Control Point evaluations. A quide Identifying Hazards and Assessing Ricks Associated with
Food preparation and Storage. 1- 70 WHO 1992

ANEXO A
PRINCIPALES PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE
Tabla A1. Protozoarios: formas evolutivas de diagnstico, tipo de muestra y patogenicidad
PROTOZOARIOS
Formas evolutivas para el
Parsitos Tipo de muestra Patogenicidad
diagnstico
Clase Lobosea
Entamoeba histolytica Trofozotos, quistes Heces s
Entamoeba dispar Trofozotos, quistes Heces no
Entamoeba coli Trofozotos, quistes Heces no
Entamoeba hartmanni Trofozotos, quistes Heces no
Entamoeba polecki Trofozotos, quistes Heces no
Endolimax nana Trofozotos, quistes Heces no
Iodamoeba btschlii Trofozotos, quistes Heces no
Blastocystis hominis Trofozotos Heces s
Clase Zoomastigophorea
Giardia lamblia Trofozotos, quistes Heces, contenido duodenal s
Trichomonas hominis Trofozotos Heces no
Enteromonas hominis Trofozotos, quistes Heces no
Retortamonas intestinalis Trofozotos, quistes Heces no
Chilomastix mesnili Trofozotos, quistes Heces no
Dientamoeba fragilis Trofozotos, Heces s
Lophomonas sp Trofozotos Fludos si
Clase Ciliata secrecin
Balantidium coli Trofozotos, quistes Heces s
Phylum Apicomplexa
Clase Sporozoa
Isospora belli Ooquistes Heces, contenido duodenal s

Cryptosporidium sp. Ooquistes Heces, secreciones s
Cyclospora cayetanensis Ooquistes Heces, contenido duodenal s
Sarcocystis (bovis-hominis,
bovis-canis, suis Esporoquiste Heces s
hominis=Isospora hominis)
Phylum Microspora
Microsporidios
Enterocytozoon bieneusi Esporas Heces s
Encephalitozoon spp. Esporas Heces s
Pleistophora Esporas Heces, fluidos s

Protozoarios intestinales: amebas
Figura A1.1. Entamoeba histolytica con 1, Figura A1.2. Trofozoto de Entamoeba Figura A1.3. Trofozoto de Entamoeba
2 y 4 ncleos, coloracin lugol (400X) histolytica con glbulos rojos (1000X) histolytica, coloracin lugol (400X)
Figura A1.4. Trofozoto de Entamoeba Figura A1.5. Entamoeba coli con Figura A1.6. Quiste de Endolimax
histolytica con coloracin tricrmica solucin de lugol (1000X) nana con 4 ncleos. Coloracin
(1000X) lugol (izq.), Coloracin MIF (der.)
Figura A1.7 Quiste de Endolimax nana Figura A1.8. Iodamoeba btschlii Figura. A1.9. Trofozoto de
con 4 ncleos con coloracin con coloracin tricrmica y en Blastocystis hominis, Coloracin:
hematoxilina frrica coloracin hematoxilina frrica Azul de metileno
(1000X) (1000X) (400X).
(1000X)
Fuente: Lminas WHO 1994, Figuras A1.4, A1.7 y A1.8, fotografas originales

Protozoarios intestinales: Flagelados, ciliados y coccidios
Figura A1.10. Quistes de Giardia Figura A1.11. Trofozoto de Giardia Figura A1.12. Trofozoto de Gamblia
lamblia, (lugol) (400X). (1000X) lamblia, concoloracin tricrmica y (200x), Lophomonas sp 400x
hematoxilina frrica (1000x)
Figura A1.13. Trichomonas hominis Figura A1.14. Quistes y trofozotos Figura A1.15. Dientamoeba fragilis,
con Colorac. tricrmica y Hem.frrica de Chilomastix mesnili, Solucin Hematoxilina frrica (1000X)
(1000x) salina (200x) y Hematoxilina frrica
(1000X)
Figura. A1.16. Quistes y trofozotos de Figura. A1.17. Isospora belli en Figura A1.18. Cryptosporidium
Balantidium coli, coloracin tricrmica coloracin Ziehl Neelsen (400X) parvum, coloracin: Ziehl-Neelsen
(100x) (1000X)
FiguraA1.19. Cyclospora cayetanensis

la A2. Helmintos: forma
Figura A1.20. Sarcocystis hominis Figura A1.21. Enterocytozoon bieneusi,
s evolutivas de en
con coloracin Ziehl-Neelsen diagnstico, tipo de muestra y patogenicidad
formalina 10% coloracin Gram-chromotrope
Fuente: Lminas WHO 1994, Figuras A1.11, A1.20 y A1.21, fotografas originales.

HELMINTOS
Formas evolutivas para el
Parsitos Tipo de muestra Patogenicidad
diagnstico
Phylum Nematoda
Clase Aphasmidea
Ascaris lumbricoides Adultos, juveniles, huevos Heces s
Anquilostomdeos
Ancylostoma duodenale Larvas, huevos Heces s
Necator americanus Larvas, huevos Heces s
Trichuris trichiura Huevos Heces s
Capillaria philippinensis. Huevos, larvas, adultos Heces s
Clase Phasmidea
Adultos, huevos, larva Heces, contenido duodenal,

Strongyloides stercoralis s
rabditiforme esputo
Frotis perianal, hisopado anal,
Enterobius vermicularis Adulto hembra, huevos s
heces
Trichostrongylus sp. Huevos, larvas Heces s
Phylum Platyhelminthes
Clase Cestoda
Fragmentos de estrbila,
Taenia solium Heces, frotis perianal s
progtidos, huevos
Fragmentos de estrbila,
Taenia saginata Heces, frotis perianal s
progtidos, huevos
Adulto, estrbila, progltidos,
Diphyllobothrium pacificum Heces s
huevos
Estrbila, progltidos, cpsulas
Dipylidium caninum Heces s
ovgeras
Hymenolepis nana Huevos Heces s
Hymenolepis diminuta Huevos Heces s
Clase Trematoda
Heces, contenido duodenal,
Fasciola heptica Huevos s
secrecin biliar
Paragonimus peruvianus = P.
Huevos Esputo, heces s
mexicanus
Clonorchis sp Huevos Heces s
Schistosoma mansoni Huevos Heces s
Echinostoma sp. Huevos Heces s
Cotylophorum sp Huevos Heces si
Phylum Acanthocephala
Macracanthorhynchus Heces, cirugas o autopsias s
Huevos, adultos Huevos
Hirudinaceus Linguatula sp. Huevos s
Fitoparsitos
Meloidogyne sp. Huevos, larvas Heces si
Heterodera sp. Huevos, larvas Heces ?
Rhabditis sp Larvas, adultos Heces ?

Helmintos: nemtodes
Figura A2.1. Huevo fertilizado de Figura A2.2. Huevo frtil corticado Figura A2.3.Huevo infrtil de
Ascaris lumbricoides de Ascarislumbricoides en Ascaris lumbricoides con lugol
coloracin temporal de eosina (400X)
(400X)
Figura A2.4. Ascaris lumbricoides Figura A2.5. Ascaris Figura A2.6. Meloidogyne sp.
Huevo larvado, (solucin salina) lumbricoides, Trichuris (arriba) y Enterobius vermicularis
trichiura y Ancylotoma o (abajo) en solucin salina (400X)
Necator en solucin salina
Figura A2.7 Enterobius Figura A2.8. Enterobius Figura A2.9. E. vermicularis

vermicularis Huevos con lugol, vermicularis larva en azul se Larva de emergiendo en
fucsina y solucin salina del aprecia la forma de D (400X) tionina(400X)
mtodo de Graham (400X) ) salina (400X)
Fuente: fotografas originales.

Helmintos: nemtodes
Figura A2.1. Trichostrongylus sp. Figura A2.2. Ancylostoma Figura A2.3. Ancylostoma
Huevo en solucin salina (400X) /Necator Huevo embrionado con /Necator Huevo larvado de con
lugol) lugol
a b b
Figura A2.4. Trichuris trichiura izq, Figura A2.5. Ancylostoma duodenale,

Capillaria philippinensis en lugol Figura A2.6. Trichostongylus sp(a) y
en solucin salina (400x) Strongyloides stercoralis (b) (400x)
(400x)
Figura A2.7. Necator americanus Figura A2.8. Ancylostoma duodenale Figura A2.9. S.fuelleborni huevos en cadena y
(N) y Ancylostoma duodenale (A) (l) extremo anterior en solucin y extremo anterior larva en sol salina
larvas filariformes (200 X) salina
Fuente: Fotos originales

Helmintos: platelmintos (cstodes)
Figura A2.10. Huevo de Taenia Figura A2.11. Huevo de Taenia sp. Figura A2.12. Hymenolepisnana.
sp., coloracin lugol (200X) Solucion salinal (400X) Huevo de en solucin salina
(400X)
Figura A2.13. Huevo de Figura A2.14. Huevo de Figura A2.15. Huevo de

Hymenolepis nana con solucin Hymenolepis diminuta con Hymenolepis nana con solucin
lugol (200X) solucin salina (400X)) de lugol (400X)
Figura A2.16. Diphyllobothrium Figura A. 2.17. Diphyllobothrium Figura A2.18. Fasciola (izq),-
pacificum Huevo en coloracin latum. Huevos en coloracin Paramphistomum (der) con
lugol 55 x42.5 m (400X) lugol 55 x 67 m (400X). solucin salina) note el
color(400X)

Helmintos: platelmintos (trematodos y acantocfalos)
Figura A2.10. Huevo de F. Figura A2.11. Huevo de Fasciola Figura A2.12. Huevo
hepatica. Solucin salina (200X) hepatica con miracidium (200X) Cotylophorum sp en solucin
salina (400X)
Figura A2.15. Huevos de

Figura A2.13. Huevo de Figura A2.14. Huevo de
Paragonimus sp en muestra de
Paragonimus peruvianus con Clonorchis sinensis con solucin
esputo (400X)
solucin salina (400X) salina (400X)
Figura A2.16. Linguatula sp Huevo Figura A2.17. Macracanthorhynchus Figura A2.18. Macracanthorhynchus
con solucin salina (400X) hirudinaceus. Huevo, acantor por hirudinaceus. Huevo con 3 capas y
liberarse (400X) un acantor libre

TAMAO RELATIVO DE HUEVOS DE HELMINTOS

ANEXO B
ALGORITMOS PARA EL EXAMEN PARASITOLGICO

ALGORITMO B2
MUESTRAS FRESCAS DE HECES
DIARREICAS LQUIDAS
Sin moco Con moco Sin moco Con moco
Solucin salina
y lugol
Positivo Negativo Concentracin

por sedimentacin
G. lamblia
Cryptosporidium sp Frotis del sedimento
E. histolytica
I. belli
B. hominis
Cyclospora
S. stercoralis
Baermann Ziehl - Neelsen Hematoxilina frrica Gram-Trichrome
S. stercoralis Cryptosporidium E.histolytica Microsporidios

B. coli

ALGORITMO B3
MUESTRAS FIJADAS
PAF MIF FORMALINA 10% SAF, SCHAUDINN, PVA
MTODO
DIRECTO
MTODO DE
CONCENTRACIN
- Trofozotos
- Quistes
- Ooquistes
- Huevos
- Larvas
- Esporas Hematoxilina frrica
COLORACIN - Trofozotos
E. hystoltica, G. lamblia
- Quistes y trofozotos de protozoarios

ALGORITMO B4
FLUXOGRAMA DE CONFIRMACIN Y DIAGNSTICO DE LOS PARSITOS

ALGORITMO B5
Anlisis de los parsitos en muestras de agua superficiales
MUESTRAS DE AGUA SUPERFICIALES (filtro)
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
Botella /Frasco con Hisopo de gasa

agua 2-4 litros de agua Muestra
Filtrar muestra Sumergir en sol. Salina en

Colar de muestra beacker
Transvasar la muestra en copas cnicas de vidrio, sedimentar 30-45

min. Lavar 2-3 veces con solucin salina cada 5 a 10 min.
Resuspender 3-5mL de sed en 2 tubos 15 x150 mL
TUBO A TUBO B
Dicromato de potasio Solucin de azcar
1,5-2,5% Lavar 2-3 veces c/5
min
Agitar y centrifugar Agitar y centrifugar
Estereoscopio
en placa
Microscopa Microscopa Microscopa
Puede observar huevos, quistes, ooquistes as como huevos /larvas
MPR-CNSP-015 78 Instituto Nacional de Salud

ANEXO C
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES
C1 COLORANTES
C1.1 Para Protozoarios
C1.1.1 Chromotrope
Chromotrope 2R....................................................0,60 g
Verde Brillante.......................................................0,30 g
cido fosfotngstico..............................................0,70 g
cido actico........................................................1,00 mL
Agua destilada..................................................100,00 mL
C1.1.2 May Grunwald
May Grnwald .......................................................0,24 g

Alcohol absoluto ...............................................100,00 mL
C1.1. 3. Hematoxilina frrica (solucin stock)
Hematoxilina frrica...............................................5,00 g
Alcohol 95%......................................................100,00 mL
Al momento de colorear, mezclar 1 mL de la solucin stock con 9 mL de agua destilada.
C1.1.4. Fucsina fenicada (Ziehl Neelsen modificado)
Fucsina..................................................................4,00 g
Feno......................................................................8,00 g
Alcohol 95%........................................................20,00 mL
Tween 80 o tergitol........................................... ..1,00 mL
Agua destilada.................................................. 80,00 mL
Disolver la fucsina con alcohol, mezclar con fenol y adicionar agua destilada.
C1.1.5 Verde de malaquita para Cryptosporidium
Verde de malaquita..............................................1,00 g
Alcohol 95%.....................................................100,00 mL
C1.1.6 Azul de metileno
Azul de metileno............................................1,00-1,40 g
Agua destilada................................................100,00 mL

C1.2 Para microsporidios
C1.2.1 Coloracin Gram
1. Cristal violeta..............................................................1%
Cristal violeta o violeta de genciana......................1,00 g
Agua destilada...................................................100,00 mL
2. Solucin de lugol (Yodo de Gram)

Yodo......................................................................1,00 g
Yoduro de potasio..................................................2,00 g
Agua destilada...................................................300,00 mL
Colocar 100 mL de agua y disolver yoduro de potasio en 30 mL de agua, agregar yodo y mezclar
hasta que se disuelva, aadir el resto de agua y almacenar en un frasco oscuro.
C1.2.2 Chromotrope 2R
Chromotrope 2R......................................................6,00 g
Verde brillante.........................................................0,15 g
cido fosfotngstico.............................................. 0,70 g
cido actico glacial................................................3,00 g
Agua destilada....................................................100,00 mL
Mezclar los ingredientes cristales con cido actico glacial, reposar por 30 minutos y agregar el
agua destilada. Tamponar con cido clorhdrico 1N pH 2,5.
C1.3 Para helmintos
C1.3.1 Carmn clorhdrico

Carmn...................................................................5,00 g
Acido clorhdrico.................................................5,00 mL
Alcohol 95%....................................................200,00 mL
Triturar el carmn en un mortero y aadir cido, alcohol de 95% y agua, dejar en reposo por una
hora y colocar la mezcla en bao Mara por una hora. En caso de evaporacin, completar con
alcohol de 95%, dejar enfriar y filtrar.
C1.3.2 Hematoxilina Delafield
1. Solucin acuosa saturada de alumbre de amonio

Solucin de alumbre de amonio.........................20,00 g
2. Hematoxilina..........................................................1,00 g
Alcohol absoluto.................................................10,00 mL

Preparar ambas soluciones (1 y 2), aadir gota a gota la solucin 1 a la solucin 2, dejar madurar
de 15 das a un mes, filtrar y aadir 25 mL de glicerina y 25 mL de alcohol metlico.
C1.3.3 Rojo de Congo 1%
Rojo de Congo.......................................................1,00 g
C1.3.4 Tionina
Tionina..............................................................10,00 mg
C1.3.5 Azure A
Azure A (Omethylene azure)...........................10,00 mg

C1.3.6 Verde de malaquita con solucin glicerinada (mtodo de Kato Katz)
Glicerina comercial.........................................100,00 mL
Verde de Malaquita 0.3%...................................1,00 mL
C1.3.7 Eosina 1%
1. Eosina Y................................................................1,00 g
Alcohol 95%......................................................80,00 mL
Disolver la eosina Y en agua destilada y adicionar el alcohol.
2. Solucin colorante stock de eosina

Solucin de eosina...........................................10,00 mL
Alcohol 80% ......................................................70,00 mL
C2. COLORANTES VITALES C2.1
Para protozoarios
Rojo neutro ............................................................. 0,1%

Verde brillante ......................................................... 0,1%
Azul de cresil brillante ............................................. 0,2%
Diluir en solucin salina cada uno en forma separada.
C2.2 Para helmintos

Azul de cresil brillante ............................................ 0,02%
Azul de metileno .................................................... 0,02%
Rojo neutro ................................................0,02%
Diluir en solucin salina cada uno en forma separada.

C3 FIJADORES O CONSERVADORES
C3.1 PAF o FAF
Fenol.................................................20,00 g o 23,00 mL
Suero fisiolgico.............................................825,00 mL
Alcohol 95%....................................................125,00 mL
Formaldehdo...................................................50,00 mL
Mezclar los ingredientes y repartir en frascos con tapa de 10 a 20 mL.
C3.2 PVA
Alcohol polivinlico................................................5,00 gr
Solucin 1:
cido actico glacial...........................................5,00 mL
Glicerol...............................................................1,50 mL
Solucin Schaudinn..........................................93,50 mL
Solucin 2 (Solucin Schaudinn):

Bicloruro de mercurio 6%.................................20,00 mL
cido actico glacial 5%.....................................1,50 mL
Alcohol etlico 95%...........................................10,00 mL
C3.3 MIF
Solucin A:
Glicerol...............................................................5,00 mL
Merthiolate N. 99 Lilly 1:100...........................200,00 mL
Formaldehido....................................................25,00 mL
Solucin B:
Yodo......................................................................5,00 g
Ioduro de potasio.................................................10,00 g
Agregar a cada gramo de heces 9,40 mL de solucin A y 0,60 mL de solucin B
C3.4 AFA
Formaldehdo 37 / 40%....................................10,00 mL
Alcohol 95%......................................................50,00 mL
C3.5 SAF
Acetato de sodio..................................................15,00 g
cido actico glacial.........................................20,00 mL
Formol..............................................................40,00 mL
C3.6 Formol al 10%
1. Formaldehdo (40%).......................................100,00 mL
2. Formalina 10%
Formaldehdo...................................................10,0 mL
Solucin salina 0,85%......................................90,00 mL
PBS 0,01 M pH 7,2
C3.7 Solucin Schaudinn igual que solucin 2 C 3.2
Bicloruro de mercurio 6% o 2 vol...................20,00 mL

Alcohol 96%.o 1 vol.......................................10,00 mL
cido actico glacial 5%..................................1,50 mL
C3.8 American modified service (AMS III) para muestras de secreciones o fluidos
Solucin A (cido clorhdrico).............................3,00 mL

Solucin B (hidrxido de sodio)...................2 o.4 ,00 g
Mezclar la solucin A y B v/v y agregar e mL de ter.
Podra usar tambin en forma separada.
C3.9 Otros fijadores para larvas de Strongyloides, Ancylostoma o Necator
C3.9.1 Solucin de picromato. Bouin
Solucin acuosa saturada de cido pcrico......30,00 mL

Formaldehdo (37%).........................................10,00 mL
C3.9.2 Formaldehdo...............................................5,00 mL
Solucin salina 0,85%......................................93,00 mL
C4 SOLUCIONES
C4.1 Suero fisiolgico
Cloruro de sodio.................................................8,50 g
Agua destilada..............................................1000,00 mL
C4.2 Solucin de sulfato de zinc
Sulfato de zinc....................................................333,30 g
Agua destilada..............................................1000,00 mL
Mezclar hasta la completa dilucin del sulfato de Zinc y medir la densidad de la solucin, la que
debe ser 1,180.
C4.3 Solucin de lugol
Yodo metlico........................................................1,00 g
Yoduro de potasio..................................................2,00 g
Triturar juntos el yodo y yoduro en un mortero, aadir agua poco a poco y mover lentamente hasta
su disolucin, aadir el resto de agua y conservar en un frasco color mbar.
C4.4 Solucin de Sheather Sugar
Sacarosa o azcar blanca.................................500,00 g

Formol (o fenol)................................10,00 mL (6,00 mL)
C4.5 Solucin saturada de azcar
Sacarosa (azcar rubia)....................................500,00 g

Formaldehdo 40% ...........................................10,00 mL
C4.6 Solucin mordiente
Sulfato de fierro y amonio......................................4,00 g

C4.7 Solucin de salicilato de metilo
C4.8 Solucin de alcohol-cido 1 3%
cido clorhdrico concentrado \ etanol al 96%.......................1ml\ 99 mL o

cido clorhdrico concentrado \ etanol al 96%.......................3 ml\ 97 mL
C4.9 Solucin de hidrxido de sodio
Hidrxido de sodio.................................................4,00 g
C4.10 Tintura de yodo (solucin madre)
Yodo......................................................................5,00 g
Yoduro de potasio....................................3,00 g o 7,00 mL
Alcohol 95%......................................................20,00 mL
Diluir el yoduro de potasio en 10mL de alcohol, aadir agua a los cristales restantes.
C4.11 Buffer fosfato (PBS) 0.01 M pH 7.2
Na2HP0412 H20......................................................2,60 g
Na Na2P04 H20.......................................................0,38 g
NaCl ....................................................................... 8,38 g
Completar el agua a........................................1000,00 mL
C4.12 Solucin para aclarar helmintos
C4.12.1 Lactofenol de Aman
cido fnico (qp)....................................................1,00 g

cido lctico.......................................................1,00 mL
Glicerina.............................................................2,00 mL
C4.12.2 Aclarantes: xilol, tergitol, salicilato de metilo

Elegido el aclarante, diluirlo v/v en alcohol absoluto 10-15 min, montar.
C.4.12.3 Aclarante para nemtodes

Fenol 1 vol
Alcohol 50 o 70% 1 vol
Si los especmenes estn en alcohol, caso contrario requiere ms de 15 min.
C4.13 Solucin decolorante (coloracin tricrmica)
cido actico glacial al 1%.................................1,00 mL

Alcohol 90%......................................................99,00 mL
C4.14 Soluciones desinfectantes
C4.14.1 Solucin sulfocrmica
Bicromato de potasio.........................................100,00 g
cido sulfrico................................................100,00 mL
Agua destilada............................................1000,00 mL
Disolver el bicromato de potasio en agua destilada sobre un recipiente conteniendo agua de cao
para enfriar, aadir el cido poco a poco y agitar continuamente. Nunca aadir agua al cido.
C4.14.2 Hipoclorito de sodio
Cojn de leja.................................................1,00 unidad

Agua.............................................................1000,00 mL
C4.14.3 Fenol 3-5% (diluido en agua)
Fenol...........................................................3,00 o 5,00 g
Agua....................................................................100 mL
C5. MEDICAMENTOS O PRODUCTOS QUE NO DEBEN INGERIRSE PREVIO AL EXAMEN

PARASITOLGICO
C5.1 Antibiticos.
C5.2 Sulfas.
C5.3 Sales de bario (sustancias radioactivas).
C5.4 Sal de bismuto.
C5.5 Kaoln, pectina o kaopectate.
C5.6 Laxantes.





D5. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE HUEVOS DE HELMINTOS
a. Huevo no operculado, esfrico, con 6 ganchos, embrionados ............................................................................................. b

Huevo semejante al de .......................................................................................................................................................... e
b. Huevos separados ................................................................................................................................................................. c
Huevos en paquetes 12 o ms ................................................................................................................ Dipylidium caninum
c. Huevo de membrana gruesa con radiaciones conteniendo embrin con ganchos.............................................. Taenia spp
Huevo de membrana fina, separado del embriforo por una matriz gelatinosa ................................................................... d
d. Filamentos ocupa el espacio entre el embriforo y la membrana externa ...............................................Hymenolepis nana
Sin filamentos entre el embriforo y la membrana externa ................................................................................. H. diminuta
e. Huevo operculado ................................................................................................................................................................... f
Huevo no operculado .............................................................................................................................................................. j
f. Huevo < 35mm Clonorchis, Opistorchis, Heterophyes, Metagonimus ...................................................................................
Huevo > 38mm ....................................................................................................................................................................... g
g. Huevo 38-45 mm................................................................................................................................................. Dicrocoelium
Huevo > 60mm ....................................................................................................................................................................... h
h. Huevo con oprculo sobresaliente .................................................................................................................... Paragonimus
Huevo sin oprculo sobresaliente .......................................................................................................................................... i
i. Huevo > 85 mm ............................................................................................................. Fasciola, Fasciolopsis, Echinostoma
Huevo < 75 mm ............................................................................................................................................. Diphyllobothrium
j. Huevo > 75 con espina .......................................................................................................................................................... k
Huevo < 75 sin espina .......................................................................................................................................................... m
k. Espina terminal ............................................................................................................................ Schistosoma haematobium
Espina posterminal ................................................................................................................................................................. l
l. Espina lateral inconspicua o ausente ................................................................................................................. S. japonicum
Espina lateral prominente ....................................................................................................................................... S.mansoni
m. Huevo con gruesa membrana y mamelonada ............................................................................................... A. lumbricoides
Huevo sin la membrana mamelonada ................................................................................................................................... n
n. Huevo con apariencia de barril con dos tapones operculares .............................................................................................. o
Huevo sin la apariencia de barril, sin oprculos .................................................................................................................... p
o. Membrana no estriada ................................................................................................................................. Trichuris trichiura
Membrana frecuentemente estriada.................................................................................................................... Capillaria sp
p. Huevo plano en un lado ..................................................................................................................... Enterobius vermicularis
Huevo simtrico ..................................................................................................................................................................... q
q. Huevo grande con aire en extremos .............................................................................................. Heterodera, Meloidogyne
Huevo sin glbulos polares (aire) ........................................................................................................................................... r
r. Huevo con blastmeros, de extremos redondeados 56-76 ......................................................... Ancylostoma o Necator
Huevo con numerosos blastmeros, un extremo ms o menos afilado
de 73-95 m .............................................................................................................................................. Trichostrongylus sp
D6. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE LARVAS INFECTANTES DESARROLLADAS A PARTIR

DE MATERIA FECAL HUMANA
1.a Esfago casi igual a la longitud total del cuerpo. Cuerpo corto y delgado, mide cerca de 0,5 mm de longitud, cola de
extremo romo y a veces bifurcado .................................................................................................. Strongyloides stercoralis
1.b Esfago cerca de la longitud total del cuerpo, ms grande o ms extendido ...................................................................... 2
2.a El cuerpo ms grande entre las 4 especies, cerca de 0,75 mm, la luz intestinal no es recta, sino en zig- zag; extremo de
la cola (no de la envoltura) redondeado y como una perilla ........................................................ Trichostrongylus orientalis
2.b Cuerpo ms corto y luz intestinal recta, cola con extremos afilados .................................................................................... 3
3.a Cuerpo corto y extendido, en forma de huso; mide cerca de 0,59 mm y la envoltura cerca de 0,66 mm de longitud,
cabeza redondeada, los estiletes de igual grosor y ms apreciable, la porcin anterior del intestino ms o menos tan
ancha como el bulbo esofgico, el primordio genital situado por delante de la mitad del intestino, la terminacin de la
cola forma un ngulo ms ancho con extremo afilado; envoltura claramente estriada ................................. N. americanus
3.b Cuerpo largo y delgado, ms o menos de forma cilndrica mide cerca de 660 mm y la envoltura cerca de 720 mm de
longitud, cabeza aplanada, estiletes de desigual grosor y poco apreciables, intestino de menor dimetro que el esfago,
el primordio genital situado detrs de la porcin media del intestino, extremo terminal de la cola estrecho y alargado,
con punta menos redondeada, la envoltura no tan claramente estriada .......................................................... A. duodenale

ANEXO E
ELEMENTOS QUE SE PUEDEN CONFUNDIR CON LOS PARSITOS INTESTINALES
En el examen microscpico, adems de encontrarse formas parasitarias en los fluidos, secreciones o material fecal,
se pueden encontrar elementos no parasitarios que pueden confundirse con parsitos.
E1. ELEMENTOS O CLULAS HUMANAS
E1.1 Macrfagos
Los macrfagos son clulas grandes, mononucleares y fagocticas, que se parecen a trofozotos de
E. histolytica. Se deben considerar las siguientes diferencias:
E1.2. Neutrfilos polimorfonucleares (PMNS)
Generalmente son encontrados en casos de disentera bacteriana o amebiosis. Sus diferencias son:

E1.3 Eosinfilos
Estas clulas, generalmente redondeadas, tienen un dimetro similar al de los PMNS, y se caracterizan en
las tinciones por la presencia de grandes grnulos rojo prpura, adems que suelen presentar su ncleo
segmentado (1-2).
E1.4 Cristales de Charcot-Leyden
Son cristales alargados con extremos en punta, que con coloracin tricrmica se tien de rojo prpura.
Ellos son producto de los eosinfilos destruidos en la mucosa intestinal, son frecuentes de observarse en
lminas que contienen Entamoeba histolytica. Tambin suelen encontrarse en muestras de esputo, como
consecuencia de la destruccin de los eosinfilos en la mucosa pulmonar.
E1.5 Glbulos rojos
Los glbulos rojos tienen un dimetro de 7,5 m. Su presencia en las heces puede indicar ulceracin en el
tracto intestinal u otro problema hemorrgico.
E1.6 Clulas epiteliales
Las clulas epiteliales o clulas escamosas pueden estar presentes en las heces, ms aun si la muestra
se obtiene por sigmoidoscopa. El tamao de estas clulas es semejante al de las amebas, la coloracin
es verde plido con apariencia uniforme no granular cuando se les colorea con Trichome- Gomori.
E2. ELEMENTOS VEGETALES O ANIMALES
E2.1 Levaduras
Clulas ovoides de 4 a 6 m y que pueden encontrarse en forma de levaduras o hifas.
E2.2 Pelos o tricomas
Los pelos de las hojas o races podran confundirse con larvas de nemtodes (Figura E1).
E2.3 Clula vegetal
Puede observarse en forma no digerida (Figuras E2-E4).
E2.4 Fibra muscular no digerida
Se reconoce por las estras (Figuras E5 y E6).
E2.5 Clula coloidal o de grasa
Se tien con yodo, pudiendo confundirse con huevos (Figura E7 y E8).
Existen otras estructuras que pueden parecerse a larvas o huevos de helmintos y que son convenientes
tenerlas en cuenta (Figuras E9-E14)

ESTRUCTURAS SEMEJANTES A LOS PARSITOS
Figura E1. Pelos de vegetales semejantes Figura E2. Parnquima de clula vegetal
a larvas. Coloracin lugol no Digerida, en solucin de lugol
Figura E3. Vaso espiralado (solucin Figura E4. Clula vegetal de vainas, ms
salina) o menos homognea, en solucin de
lugol
Figura E5. Fibra vegetal no digerida. Con Figura E6. Fibra muscular estriada con
solucin de lugol yodo (lugol)
Figura E7. Grnulo, con yodo, Figura E8. Material vegetal semejante a
deformado al calor del microscopio. Toxocara. Coloracin lugol
Coloracin lugol
Fuente: Spencer FM, Monroe LS. The Color Atlas of Intestinal Parasites; 1961, original E8.

Figura E9. Material semejante a Fasciola Figura E10. Material semejante a

hepatica, pero sin oprculos. Coloracin cstodes y estructuras larvarias.
lugol Coloracin lugol
Figura E12. Restos vegetales, filamento y grano

Figura E11. Material vegetal semejante a de polen. Coloracin lugol
cpsula ovgera
Figura E13. Material vegetal semejante a Figura E14. Material semejante a Metagonimus,
Paragonimus, marrn oscuro. Coloracin lugol marrn oscuro. Coloracin lugol
Figura E15. Material vegetal en forma de vainas Figura E16. Pelo vegetal semejante a larva.
Solucin salina Coloracin lugol
Fuente: Suzuki N. Color Atlas of Human Helminth Eggs; 1968.y fotos originals E11, E12, E15 y E16.

ANEXO F
REGISTRO DE LOS PARSITOS INTESTINALES EN EL LABORATORIO POR MES POR AO
FICHA 1
Ttulo: Registro de los parsitos intestinales en el laboratorio por mes por ao.
La identificacin del establecimiento y el ao correspondiente se escribe en la parte superior.
La ficha consta de dos partes:
Primera parte
Contiene: iniciales de los meses del ao, total anual, nmero de muestras examinadas, nmero de paciente,
nmero de casos positivos y nmero de casos negativos, con sus respectivos porcentajes.
Segunda parte
Contiene: clasificacin internacional (CI) de los agentes responsables de las enfermedades parasitarias, nombre del
agente, registro por mes y por ao.
FICHA 2
Ttulo: Registro de los parsitos intestinales en el laboratorio por mes por ao.
La identificacin del establecimiento y el ao correspondiente se escribe en la parte superior.
La ficha consta de tres partes: los grupos de parsitos, la asociacin parasitaria y los grupos etarios.
Primera parte
Contiene: grupo de parsitos por mes del ao, nmero de muestras positivas o nmero de casos positivos segn
pertenezcan a los siguientes grupos: protozoarios, helmintos y protozoarios-helmintos.
Segunda parte
Contiene: monoparasitismo y multiparasitismo o la asociacin parasitaria.
Tercera parte
Contiene: distribucin segn grupos etarios de toda la poblacin en estudio. Podra considerarse incluso por sexo.

INSTITUTO NACIONAL SALUD

CENTRO NACIONAL DE SALUD PBLICA FICHA 1
LABORATORIO REFERENCIAL DE ENTEROPARSITOS
REGISTRO Y CONTROL MENSUAL DE LOS PARSITOS

AO...........
06,1 E. histolytica
B. hominis
E.coli
07,0 Balantidium coli
07,1 Giardia lamblia
07,3 Trichomonas hominis
Lophomonas sp
07,6 Cryptosporidium sp
07,8 Cyclospora
07.2 Isospora belli
07,9 Ch. mesnili
121,1 Clonorchis sp
121,2 Paragonimus sp *
121,3 F. hepatica **
123.0 T. solium (intestinal)
123.0 Taenia sp
123,4 D.pacificum
123.6 Hymenolepis nana
123.6 H.diminuta
123.8 D.caninum
126 Ancylostoma/Necator
126,0 A. duodenale
126.1 Necator americanus
127,0 A. lumbricoides
127,2 S.stercoralis
127,3 T.trichiura
127,4 E.vermicularis
127,5 Capillaria sp
127.5 Capillaria philippinensis
127.6 Trichostrongylus sp
Rhabditis sp
Meloidogyne sp
Macracanthorhynchus
* Se localiza en el pulmn. ** Se localiza en el hgado.
CI = clasificacin internacional.

INSTITUTO NACIONAL SALUD

CENTRO NACIONAL DE SALUD PBLICA FICHA 2
LABORATORIO REFERENCIAL DE ENTEROPARSITOS
REGISTRO Y CONTROL DE MENSUAL DE LOS PARSITOS

AO........
Establecimiento Responsable
POR GRUPO ETARIO
0,2 - 04,9 aos

5,0 - 09,9 aos
10,0 - 14,9 aos
15,0 - 19,9 aos
20,0 - 24,9 aos
25,0 - 29,9 aos
30,0 - 34,9 aos
35,0 - 39,9 aos
40,0 - 44,9 aos
45,0 - 49,9 aos
50,0 - 54,9 aos
55,0 - 59,.9 aos
60 aos
El grupo etario puede agruparse de acuerdo a la poblacin en estudio

ANEXO G
FICHA PARA EL ESTUDIO DEL CULTIVO DE Entamoeba histolytica (cepa)
Paciente...............................................................................................Edad...............Sexo ....................... N..........

Institucin............................................................Direccin.......................................................Dpto............................
Muestra: heces ( ) aspirado................ ( ) tejido ( ) Otro...............................................................................
Lugar y fecha...................................................................
CULTIVO: aislamiento primario: fecha................medio.....................C.........especies..............................................
SUBCULTIVO
AISLAMIENTO
N. ..........................................Medio...........................................................................

ANEXO H
PARSITOS NO INTESTINALES: Paragonimus y Fasciola

(DISTOMATOSIS PULMONAR Y HEPTICA)
H.1 MUESTRA DE ESPUTO O SECRECIN BILIAR Y MUESTRA FECAL
H.1.1 Fundamento
Se basa en la deteccin de huevos de Paragonimus y Fasciola en las muestras de esputo,

secrecin biliar y heces, segn la especie del parsito, mediante la observacin directa al
microscopio o por la concentracin de estos por sedimentacin.
H.1.2 Materiales
H.1.2.1 Lminas portaobjetos.
H.1.2.2 Tubos 15 x 150 mm.
H.1.2.3 Pipetas de transferencia.
H.1.2.4 Vaso o copa cnica.
H.1.2.5 Placa Petri.
H.1.2.6 Solucin de hidrxido de sodio 2 al 4%.
H.1.2.7 Agua destilada.
H.1.2.8 Aplicadores o 1/3 de bajalenguas.
H.1.3 Obtencin de la muestra
H.1.3.1 Muestra de esputo
a. La muestra se obtiene del paciente con tos persistente.
b. Colectar la muestra en un frasco de boca ancha despus de un esfuerzo de tos (4 a 8 mL,

aproximadamente). Se prefiere la expectoracin de 24 horas.
H.1.3.2 Muestra de heces
Colectar la muestra en un frasco de boca ancha (3 a 8 g aproximadamente).

H.1.3.3 Muestra de secrecin biliar
Colectar la muestra en un frasco o tubo limpio.
H.1.4 Conservacin de la muestra
H.1.4.1 La muestra se conserva en un lugar con poca iluminacin hasta el momento de efectuar el examen
parasitolgico.
H.1.4.2 Si no es posible realizar el examen inmediatamente o va a demorar ms de dos das en llegar al

laboratorio, agregar el lquido fijador conservador PAF o formalina al 10% en proporcin 1:2 1:3.
H.1.5 Procedimiento
H.1.5.1 Mtodo directo
Tratar las muestras de heces o de esputo segn lo descrito en las secciones 3 y 5. La observacin
al microscopio se realizar primero a menor aumento (10X) y luego a 40X.
H.1.5.2 Mtodo de concentracin
a. Muestra de esputo o secrecin biliar
- Agregar una solucin de hidrxido de sodio 2% al frasco que contiene la muestra y

homogenizar.
- Pasar a travs de una gasa a un tubo de ensayo de 15 x 150 mm o tubo cnico de 50 mL,
centrifugar durante 10 min a 2000 r.p.m. o dejar reposar de 1 a 2 h si no se cuenta con
centrfuga.
- Eliminar el sobrenadante y adicionar hidrxido de sodio 2%, dejar en reposo de 90 a 120

minutos.
- Obtener el sedimento con ayuda de una pipeta, colocarlo en una lmina y observar al
microscopio.
b. Muestra de heces
Realizar el procedimiento segn al tem 5.3.
H.1.6 Observacin
H.1.6.1 Observar huevos operculados, de color marrn oscuro, tanto de Paragonimus peruvianus
(= Paragonimus mexicanus) como de Fasciola hepatica, siendo estos ltimos de mayor tamao y
Paramphistomum sp son incoloros..
H.1.6.2 En caso que tuviera problemas con el diagnstico, enviar la muestra al Laboratorio de
Enteroparsitos del Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud para su
confirmacin.
ANEXO I
MICROMETRA
El tamao de los parsitos es muy importante como parte de la identificacin de sus formas evolutivas, la
micrometra es el mtodo que se usa para la medicin de los parsitos microscpicos y hace uso de un ocular
micromtrico y una lmina patrn.
El ocular micromtrico, es una luna circular marcada con una lnea con divisiones de 50 a 100 unidades, con que
se mide a los parsitos, estas divisiones tendrn valores diferentes dependiendo de los objetivos a utilizar.
La lmina patrn es una lmina de vidrio del tamao de una lmina portaobjetos, que en su parte central tiene
grabada una lnea con escala conocida en divisiones de 0,1 a 0,01 mm y servir para dar valor a cada unidad del
ocular micromtrico segn el objetivo a utilizar, por lo que es necesario calcular los valores de unidades del ocular
micromtrico con cada objetivo.
Calibracin del microscopio usando un ocular micromtrico
Procedimiento de calibracin
1. Colocar el ocular micromtrico en el ocular del microscopio

2. Sobre la superficie de la mesa de platino del microscopio colocar la lmina patrn, hacer coincidir ambas
numeraciones (ocular micromtrico y la lmina patrn) primero a menor aumento (10x) y luego a mayor
aumento, (40x y 100x).
3. Enfocar el microscopio para poder ver las lneas de la lmina patrn.
4. Hacer coincidir la lnea 0 del ocular micromtrico y de la lmina patrn (figura 30).
5. Cuando estas dos lneas coinciden, determinar cuantas lneas estn coincidiendo entre s, tratando de
encontrarlas lo ms alejado hacia la derecha (vara segn el objetivo utilizado).
6. Contar el nmero de divisiones en la lnea del ocular que hay entre 0 y las lneas coincidentes, de la lmina
patrn y las divisiones de 0,1 mm que hay entre el 0 y las lneas coincidentes a la derecha.
7. Calcular la porcin del ocular micromtrico, como en la figura 30 y el nmero de milmetros.
Ejemplo: Unidades del ocular micromtrico 33 igual a 0,22
1 unidad del ocular = 0,22mm lmina patrn = 0,066 mm

33ocular micromtrico
= 0,0066 mm x 1 m/1,000 mm = 6,6 um del aumento calibrado
Resulta una unidad de ocular micromtrico es equivalente a 6,6 um
8. Cuando ya ha sido calibrado cada objetivo no se pueden cambiar ni el ocular ni los objetivos, ni intercambiar
con otros oculares u objetivos. Se debe calibrar de nuevo.
Puede preparar su tabla de calibracin para cada microscopio:

Medicin
(unidades) Objetivos
10X 40X 100X
1 6,6 2,4 1
2 13,2 4,8 2
3 19,8 7,2 3
4 26,4 9,6 4
Figura 30. Calibracin del microscopio con el ocular micromtrico (en la escala superior) y la lmina patrn
en la escala inferior. Coinciden en 33 y 0,22 mm respectivamente
GLOBAL TRADE SERVICE
De Miguel H. Ascua Gmez
Calle Luis Glvez Chipoco 350

Balconcillo
Lima 13 - Per
Telf.: 431-6994 4249548-99392-3922
Sept. 2014
Tiraje: 1000 ejemplares

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Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre

Serie de Normas Tcnicas 37

MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Centro Nacional de Alimentacin y Nutricin

Centro Nacional de Control de calidad

Centro Nacional de productos Biolgicos

Centro Nacional de Salud Intercultural

Centro Nacional de Saludo Ocupacional y

Centro Nacional de Salud Pblica INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Oficina General de Asesora Tcnica MIEMBROS

Oficina General de Administracin Secretara Tcnica

Oficina General de Informacin y Sistemas

MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

Mara Beltrn Fabin de Estrada

MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin e Informacin del INS

Beltrn Fabin de Estrada, Mara

1. PARASITOSIS INTESTINALES /diagnstico 2. TCNICAS Y PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

I. Otrola Mayhua, Jannet

Ministerio de Salud, 2014

Instituto Nacional de Salud, 2014

La versin electrnica de este documento se encuentra disponible en forma gratuita en www.ins.gob.pe

Se autoriza su reproduccin total o parcial siempre y cuando se cite la fuente.

MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

Seccin 1. Generalidades ..................................................................................................................................... 1

Seccin 2. Medidas de bioseguridad. .................................................................................................................. 4

Seccin 3. Obtencin de muestras ...................................................................................................................... 5

Seccin 4. Envo y transporte de muestras ........................................................................................................ 7

Seccin 5. Procedimientos de laboratorio para el diagnstico - heces ........................................................... 9

Seccin 6. Cultivos parasitolgicos .................................................................................................................. 40

Seccin 7. Examen de secreciones y fluidos .................................................................................................... 46

Seccin 8. Diagnstico de Enterobius vermicularis por el mtodo de Graham

MPR-CNSP-015 Instituto Nacional de Salud

Seccin 9. Examen de biopsias.......................................................................................................................... 51

Seccin 10. Resultados. ...................................................................................................................................... 52

Seccin 11. Examen de muestras de agua superficiales ................................................................................. 54

Anexo A. Principales parsitos intestinales del hombre ........................................................................................ 57

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1.2 Campo de aplicacin

1.4 Documentos de referencia

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1.5 Definiciones y abreviaturas

1.5.1 AFA: fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico.

1.5.6 CI: clasificacin internacional.

1.5.7 Cpsula ovgera: vescula que contiene huevos.

1.5.8 Cstode: gusano o helminto platelminto de forma acintada.

1.5.11 Coproantgeno: antgeno presente en las heces.

1.5.13 Diafanizar: aclarar para facilitar la visualizacin microscpica.

1.5.16 Espora: esporoquiste aislado. Estadio o elemento infectante de los microsporidios.

1.5.17 Esporoquiste: quiste con cubierta definida que contiene esporozotos.

1.5.19 Fijacin: conservacin de la estructura del parsito.

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1.5.23 Huevo: producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un nuevo ser.

1.5.24 Herida: prdida de piel y potencial puerta de entrada de agentes patgenos.

1.5.25 Invasivo(a): agente infectante que tiene capacidad de invadir tejidos.

1.5.27 MIF: fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.