“Año de la lucha contra la corrupción e impunidad”

Práctica de laboratorio Nº2:

LIMPIEZA Y ESTERILIZACIÓN

GRUPO: 90G

SEMESTRE: 2019B

ASIGNATURA: Microbiología General

DOCENTE: Barzola Choque Pedro

INTEGRANTES:

 Choque Sutta María 1714110022

 Echevarria Rojas Thalia 1714130015
 Feliciano Racacha Romina 1714120259
 Gómez Bazán Flor 1714110039
 Gutierres Gonzales Miguel 1714110075

LIMA – BELLAVISTA
 1. INTRODUCIÓN

En el trabajo del laboratorio de Microbiología tienen importantísima aplicación los

procedimientos, técnicas y productos que suprimen o disminuyen la vitalidad de los

microorganismos patógenos. No existe un procedimiento de esterilización y desinfección

aplicable a todos los casos. El método de esterilización será seleccionado para cada caso

teniendo en cuenta la naturaleza física del objeto y la naturaleza biológica del contaminante.

Como rara vez se conoce la población de microorganismos sobre un objeto que debe ser

tratado, debemos presuponer que se encuentran presentes las formas microbianas más

resistentes: las endosporas. El método de esterilización a emplearse debe ser previamente

valorado. Actualmente existen valores tabulados de tiempo de exposición, temperatura y

concentración de principios activos para los métodos de esterilización más usados que nos

permiten elegir el más adecuado para cada caso. En la elección debe tenerse en cuenta

también el uso posterior que le será dado (o no) al objeto a esterilizar. Para asegurar el éxito

de un proceso esterilizante es necesario considerar las siguientes pautas:

1. Esterilización previa: Será necesaria cuando el material y/ o equipos hayan sido utilizados

con material infeccioso o presunto infeccioso, por ejemplo, placas de Petri inoculadas, tubos

conteniendo cultivos de microorganismos, frascos empleados en el cepario, etc. Serán

esterilizados en autoclave a 1 atm. de presión durante 15 – 30 minutos.

2. Limpieza previa: Se realizará para eliminar las partes gruesas de suciedad o residuos no

infecciosos (gratitud, resto de pegamento, cinta adhesiva, carbono, tinta de rotulado, etc.). Se

empleará el raspado con espátulas, cepillo, esponjas metálicas, paños, etc. Se enjuagará

repetidas veces bajo el chorro de agua corriente a presión (conectando a la canilla un tapón

perforado o tapando parcialmente con un dedo). Se aconseja un último enjuague con agua

destilada. Se dejará secar en canasto o rejilla de alambre boca abajo a temperatura ambiente o
estufa a 60 – 80 °C. El material de vidrio que luego de este tratamiento aún quedase

manchado será sumergido en una solución sulfocrómica durante 24 hs (Este procedimiento lo

realiza personal especializado del Droguero).

3. Preparación del material de vidrio: Este acondicionamiento debe realizarse de manera tal

de asegurar la perfecta esterilización del mismo en todos sus puntos y evitar la posterior

contaminación.

a. Placas de Petri: se envuelven en papel madera según la técnica indicada por el instructor

(se esterilizan en estufa a 160- 180ºC durante dos o una hora respectivamente).

b. Tubos de ensayos, tubos de hemólisis y tubos de Khan: se confecciona en tapón de algodón

y se cubre con un capuchón de papel aluminio. (se esterilizan en estufa).

c. Pipetas: se obtura el extremo superior con un filtro de algodón y luego se envuelven con

tiras de 4 a 5 cm. de ancho de papel madera comenzando por la punta de la misma. Debe

rotularse cada una con la capacidad y graduación correspondiente (se esterilizan en estufa).

ESTERILIZACIÓN La esterilización es la muerte y/ o eliminación de todo microorganismo.

No existen grados de esterilidad, un objeto es estéril o no lo es. La dinámica de la

esterilización dice que la proporción de microorganismos muertos en iguales periodos de

tiempo es constante. A mayor temperatura, mayor acción y menos tiempo necesario para

esterilizar. Esto es válido para cualquier procedimiento químico o físico excepto filtración.

Los métodos de esterilización se clasifican en:

 FÍSICOS:

A) CALOR: Actúa por desnaturalización de proteínas y contribuye a la fusión de lípidos de

membranas.

 CALOR HÚMEDO: Esterilizar exclusivamente en calor húmedo: medios de cultivos,

recipientes contaminados, material de goma, y todo elemento que no resista las altas
 temperaturas del calor seco. La autoclave utiliza vapor a presión superior a la normal.

Así, la temperatura del vapor de agua asciende a 121ºC. El vapor saturado penetra en los

recipientes tomando contacto con los microorganismos a destruir, allí se condensa

liberando calor. El calentamiento es rápido por la gran cantidad de calor latente del vapor

de agua, que libera al condensarse sobre la superficie del objeto.

 CALOR SECO: Deshidrata las bacterias, virus, etc. y facilita la coagulación o

desnaturalización de las proteínas. Se requieren mayores temperaturas para producir

daño irreversible (muerte). Se acepta que el calor seco actúe oxidando los constituyentes

intracelulares. Esterilizar exclusivamente a calor seco: Cera, vaselina, talco, recipientes

cerrados herméticos de vidrio o metálicos sin filo.

B) RADIACIONES Luz ultravioleta: solamente para aire o para superficie o capas muy

delgadas de líquidos pues no penetra. Se usa para consultorios, salas, laboratorios, cámaras,

quirófanos. No atraviesan el vidrio. Las ondas UV tienen suficiente energía para causar

roturas en el ADN, produciendo la muerte del organismo expuesto. Las cámaras de siembra

vienen equipadas con una lámpara de luz UV para mantener el área estéril, la cual se debe

apagar cuando se ingresa a la cabina por la peligrosidad a la exposición de las radiaciones

(quemaduras, eritemas, cáncer de piel)

C) MECÁNICOS: Filtración: para medios de cultivo, sueros y soluciones que se alteren con

el calor. En la mayoría de los filtros hay tres factores principales que intervienen en la

retención de partículas (bacterias, virus, proteínas, etc.): a) Efecto mecánico de filtro, según el

tamaño del poro. b) Repulsión o atracción eléctrica. c) Absorción y adsorción

Ultrafiltración: para separación y medición de virus. Membranas de ésteres de celulosa

biológicamente inertes que no retienen partículas por adsorción por lo tanto la retención de

partículas depende principalmente del tamaño de los poros

 QUÍMICOS:

 Desinfectantes: son agentes antimicrobianos capaces de matar los microorganismos

patógenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar

efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre materiales

inertes.

 Esterilización por gas plasma: Tiene la ventaja de no dejar ningún residuo tóxico ya que se

convierte en agua y oxígeno al final del proceso. El material no precisa aireación. El ciclo

de esterilización es corto, dura entre 54 y 75 minutos.

 Esterilización con óxido de etileno: Este método se aplica a materiales termo sensibles,

sondas, instrumental vario. Este gas se administra mediante una autoclave especial. Para

ejercer su efecto necesita humedad y una temperatura moderada (60ºC). La desventaja es

que genera residuos contaminantes que deben recibir tratamiento antes de ser desechados.
 2. OBJETIVOS

Aprender a limpiar y esterilizar los materiales empleados en el laboratorio de

Microbiología.

3. LISTA DE MATERIALES

• Papel craft

• Gasa, algodón

• Pabilo

• Un matraz Erlenmeyer

• Un vaso precipitado

• Tres tubos de ensayo

• Dos placa petri

• Dos pipetas

• Una probeta

4. PROCEDIMIENTO

 Limpieza:

El material de vidrio se lava con detergente adecuado, con ayuda de escobillas o

esponjas y frotar las superficies internas y externas de los tubos y frascos.

Enjuagar con abundante agua hasta eliminar todo el detergente.

Continuar el enjuague con agua destilada y dejar escurrir.

 Preparación para la esterilización:

1. Una vez seco utilizaremos el papel craft para la empaquetadura.

2. Para todos los materiales primero pondremos dos gotas de agua destilada.

3. Cortaremos dos cuadrados de papel craft y envolveremos la placa petri

completamente tal que no pueda entrar el aire y lo amarraremos con un

pedazo de pabilo haciéndole al final un nudo suave

4. Para los tubos de ensayo y al igual que el matraz se hace un tapón hecho

de algodón y gasa, esto para tapar la boquilla de modo que al presionar

ligeramente se pueda retirar y poner fácilmente el tapón, luego con un

poco de papel craft se envuelve la parte superior tapando el tampón y se

ajusta con un poco de pabilo.

5. Cortamos un pedazo largo de papel craft y envolvemos la pipeta

deslizando en forma de espiral desde la superficie hasta la boquilla y lo

ajustamos de igual manera con el pabilo haciendo un nudo suave.

6. Para el vaso precipitado se necesita solo un recuadro de papel y se

envuelve solo en la parte superior y se ajusta con el pabilo.

 5. CONCLUSIONES

Se logró el aprendizaje de:

 La fabricación de tampones hechos a base de algodón y gaza para el proceso

de esterilización.

 La forma correcta del empaquetado de materiales de vidrio como tubos de

ensayo, placas Petri, pipetas entre otras para ser sometida a la estufa.

6. BIBLIOGRAFÍA

Bastida, J. (s.f.). Práctica 1. Preparación y esterilización del material de laboratorio.

Obtenido de
https://www.academia.edu/12162615/Pr%C3%A1ctica_1._Preparaci%C3%B3n_y_es
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C3%B3n

Lopez L. & Torres. C.Preparacion del Material para el trabajo en Microbiologia. Facultad de
Agroindustrias. 2006. Universidad Nacional del Nordeste.

Rodriguez, J. (2014). Manual de Bioseguridad de Microbiología. Hospital General

Universitario de Alicante. Obtenido de http://microbiologia-
alicante.umh.es/files/2014/10/MANUAL-DE-BIOSEGURIDAD-1.pdf
 7. ANEXOS

ANEXO N°1:

CUESTIONARIO

1. Describa brevemente los siguientes conceptos:

Esterilización: es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas

de vida microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente

resistentes, hongos y sus esporos, y virus. Se entiende por muerte, la pérdida

irreversible de la capacidad reproductiva del microorganismo.

Contaminación: alteración del estado (inicial) de pureza de un medio o cultivo por el

desarrollo en él de microorganismos indeseados. Puede significar tanto la pérdida de

la esterilidad de un medio, como el crecimiento en él de un tipo de microorganismo

no deseado.

Desinfección: proceso en el cual se eliminan los agentes patógenos reconocidos, pero

no necesariamente todas las formas de vida microbianas.

Bacteriostático: agente que inhibe el desarrollo de las bacterias y se basa en los

mecanismos de defensa del huésped para la erradicación final de la infección.

Antiséptico: sustancia que actúa contra los gérmenes infecciosos destruyéndolos.

Pasteurización: es un proceso térmico que tiene como objetivo eliminar los agentes

patógenos que provocan ciertas enfermedades en algunos alimentos y líquidos.

Sanitización: significa aplicar calor o químicos necesarios para matar la mayoría de

los gérmenes en una superficie hasta el punto de que no signifiquen un riesgo a la

salud.
2 ¿Qué es un BIO indicador y como se emplea? ¿Qué otros indicadores existen y cuál

sería el más indicado a emplear en calor seco, calor húmedo y filtración?

Un bioindicador es un indicador consistente en una especie vegetal, hongo o animal; o

formado por un grupo de especies (grupo eco-sociológico) o agrupación vegetal cuya

presencia (o estado) nos da información sobre ciertas características ecológicas, es decir,

(físico-químicas, micro-climáticas, biológicas y funcionales), del medio ambiente, o sobre el

impacto de ciertas prácticas en el medio.

Se utilizan sobre todo para la evaluación ambiental (seguimiento del estado del medio

ambiente, o de la eficacia de las medidas compensatorias, o restauradoras).

Se trata de organismos o sistemas biológicos sensibles a las variaciones en la calidad

ambientales (en nuestro caso, de la calidad del aire).

En cuanto se produce una alteración en su entorno, algunos seres vivos desarrollan una

determinada respuesta, cambiando sus funciones vitales o su composición química o genética

y pueden llegar a almacenar el agente que he causado ese cambio.

Cuando hablamos de bioindicadores nos referimos a especies que nos permiten deducir

alguna característica del medio en el que está. Por lo general, se utilizan como indicadores de

la calidad del hábitat; como detectores de presencia, concentración o efecto de la

contaminación; como detector de cambios o alteraciones en el medio… Un ejemplo clásico

de bioindicador era el canario en las minas. Cuando el canario se moría, se entendía que había

aumentado la concentración de los gases tóxicos que componen el grisú.

Tipos de bioindicadores:

 Bioindicadores de la calidad del suelo

 Bioindicadores de la calidad del aire

 Bioindicadores de la calidad de aguas

3. ¿Qué función tienen los tapones de algodón y el papel craft?

Los tapones de algodón funcionan como filtro, es decir, el algodón permite que no penetren

microorganismos contaminantes al material ya estéril.

Envolver el material en papel facilita su manejo dentro del autoclave o del horno, además de

que permite su almacenaje cuando ya está estéril, de manera que el papel funciona como

barrera para la contaminación por nuevos microorganismos que pueden estar en el ambiente y

generar la contaminación del material luego de manipularlas para la esterilización.

4. ¿Cómo limpiaría, desinfectarías y esterilizarías el siguiente material de laboratorio?

 Mesa de trabajo

Limpieza: Trapo con agua y solución de extrán al 20%.

Desinfección: Papel humedecido con solución desinfectante (alcohol etílico al 70%,

desinfectante fenólico, diluido, etc.)

Esterilización: Lámpara germicida, luz UV.

 Antibiótico para medio de cultivo

Esterilización: Rayos gamma o filtración con una membrana.

 Material de vidrio

Limpieza: Lavar con agua y solución de extrán al 20%. Posteriormente, enjuagar con

agua destilada.

Desinfección: Enjuagar con solución de alcohol etílico al 70%.

Esterilización: Envolver y esterilizar con calor húmedo o seco.

  Solución isotónica

Esterilización: Filtración con membrana.

 Mandil de laboratorio

Limpieza: Dejarla remojar en 25 gramos de detergente en polvo (por cada 5L de agua)

menos un día, luego enjuagar con bastante agua.

Desinfección: Remojar en 25 mL de CLOROX comercial al 5.65%

 Agar bacteriológico

Esterilización: En autoclave a 121°C, 15 lbs de presión, 10-20 min.

 Campana de flujo laminar

Limpieza: Se puede lavar con agua y solución de extrán al 20% antes de desinfectar.

Desinfección: Empapar gasa estéril en abundante alcohol etílico al 70%.

Esterilización: Lámpara germicida, luz UV.

5. ¿Por qué es importante conocer los métodos de esterilización?

La esterilización del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar la carga

microbiana patógena y no patógena, incluidas las esporas, de productos e instrumentos que lo

requieran como el instrumental médico o los medios de cultivo. Para que sea eficaz debe

realizarse sobre materiales limpios y respetando los parámetros y procedimientos definidos

para cada método.