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    Amilasa Practica

    Cargado por

    Luís G. Moreno
    Este documento proporciona información sobre un reactivo líquido para determinar la actividad de la enzima amilasa en suero y orina. La amilasa se produce en el páncreas y las glándulas salivales y su medición tiene utilidad para diagnosticar enfermedades pancreáticas. El método descrito utiliza un sustrato que es hidrolizado por la amilasa, midiendo la velocidad de formación del producto.

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    Este documento proporciona información sobre un reactivo líquido para determinar la actividad de la enzima amilasa en suero y orina. La amilasa se produce en el páncreas y las glándulas salivales y su medición tiene utilidad para diagnosticar enfermedades pancreáticas. El método descrito utiliza un sustrato que es hidrolizado por la amilasa, midiendo la velocidad de formación del producto.

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    VALTEK S.A.

    Phone: + (562) 654 1100


    FAX: + (562) 654 1199
    Av. Marathon 1943 - Ñuñoa
    Santiago – CHILE

    AMILASA - LS
    Reactivo líquido para la determinación de la actividad de Amilasa en suero y orina
    Para uso en el diagnóstico in vitro.

    SIGNIFICANCIA CLINICA EQUIPO REQUERIDO

    La enzima amilasa es producida por el páncreas exocrino y las Autoanalizador, espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros
    glándulas salivales. Esta enzima pertenece a las del grupo con cubeta termo estabilizada, capaz de leer absorbancia a 405
    denominado hidrolasas, teniendo por función la hidrólisis de nm., cronómetro, pipetas, y baño termorregulado.
    algunos polisacáridos como el almidón y el glucógeno.
    TECNICA
    La medición de la actividad de amilasa en suero y orina tiene
    utilidad principalmente para el diagnóstico de enfermedades Llevar el reactivo a la temperatura de reacción (37° C.) y poner
    pancreáticas como la pancreatitis crónica o aguda. La el espectrofotómetro en cero contra blanco de agua destilada.
    hiperamilasemia también puede ser debida a insuficiencia renal,
    dolor abdominal agudo, tumor en pulmones y ovario, lesiones en Reactivo de trabajo (ml) 1.0
    las glándulas salivales y otros.
    Volumen de muestra (ml) 0.025
    Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotómetro . Incubar
    FUNDAMENTOS DEL METODO 60 segundos a la temperatura de reacción. Leer la absorbancia
    inicial (A1) a 405 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60
    Inicialmente, la amilasa se determinaba cuantitativamente según segundos, hasta por dos minutos.
    el método iodométrico de Wohlgemuth. Posteriormente, Somogyi
    estandarizó las cantidades de almidón y iodo, siendo estas
    modificaciones las bases de los métodos amiloclásticos y Adaptaciones para la aplicación de este reactivo en auto-
    iodométricos introducidos posteriormente por Caraway. analizadores están disponibles a solicitud. Es responsabilidad
    Wallenfels et al., introdujo el p-nitrofenilglicosido como sustrato del laboratorio validar ésta aplicación.
    para la determinación de α−amilasa, en un procedimiento que
    CALCULOS
    eliminaba la interferencia endógena de glucosa y piruvato.
    El método utilizado por VALTEK® se basa en el uso de 2-cloro-
    p-nitrofenol unido con maltotriósido (CNPG3) como sustrato. La Determine el cambio de Absorbancia por minuto (ΔA/min)
    α-amilasa cataliza la hidrólisis del 2-cloro-p-nitrofenil-
    maltotriósido a 2-cloro-4-nitrofenol. La concentración catalítica se Actividad α-amilasa (UI/L) = ΔA/min x 3178
    determina a partir de la velocidad de formación de 2-cloro-4-
    nitrofenol medido a 405 nm y es proporcional a la actividad de - Factor = Vt x 1000 = 3178
    amilasa en la muestra. ΣCNP 405 x P x Vm
    α-amilasa Vt = Volumen total de reacción
    CNP-G3 CNP + maltotriosa
    ΣCNP405= Coef. de extinción milimolar del CNP a 405 nm.=12,9
    P = Espesor del paso de luz en la cubeta (1 cm.)
    REACTIVO Vm = Volumen de muestra utilizado
    Conservado entre 2° y 8°C, bien cerrado y evitando la Amilasuria (U/24 h) = Amilasa (U/lt) X Vol. 24 h. (ml)
    contaminación durante su uso, estable hasta la fecha de 100
    caducidad indicada en la etiqueta. Descartar el reactivo si su
    absorbancia es mayor de 0.6 a 405 nm. contra blanco de agua y
    paso de luz de 1 cm o presenta turbidez. ADVERTENCIA:

    Preparación: El reactivo se provee listo para su uso. • Es conveniente analizar junto con las muestras sueros
    controles valorados. VALTROL-N (código 210-100) y
    Componentes del reactivo: VALTROL-P (código 210-110).
    • El factor podría variar en autoanalizadores por diferencia en
    Buffer MES pH 6,0 +/- 0,1 el espesor de paso de luz. En este caso utilizar un
    CNP-G3 1,8 mM calibrador sérico VALTROL-C (código 210-130) para
    Cloruro de Sodio 350 mM obtener el factor.
    Acetato Calcio 6 mM
    • La saliva y la piel contienen -amilasa. No pipetear el
    Tiocianato de Potasio 900 mM
    reactivo con la boca y evitar contacto con la piel.
    Azida de Sodio 0,01%
    • Utilizar material muy limpio para evitar la contaminación de
    MUESTRAS los reactivos.
    • Macroamilasa en la muestra puede causar un falso
    Suero o plasma heparinizado libre de hemólisis, y orina. La diagnóstico de pancreatitis aguda.
    amilasa es estable por 7 días a temperatura ambiente y 1 mes a • Este reactivo contiene Azida de Sodio como preservante.
    4°C. Para conservar en orina se debe ajustar a pH 7. No ingerir. Puede reaccionar con tuberías de cobre o
    plomo, elimine los residuos con gran cantidad de agua.

    E-mail: info@valtek.cl – WEB site: http://www.valtekdiagnostics.com REV Nº1


    ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO: RANGOS DE REFERENCIA

    -Linealidad: 0 - 2000 U/L. Suero (U/lt) Orina (U/24 h)


    Normal 25 - 125 <6.000
    Para valores superiores 2000 U/L, diluir la muestra con suero
    fisiológico y el resultado obtenido se multiplica por el factor de Pancreatitis aguda 250-10.000 >20.000
    dilución. Pancreatitis crónica < 250 >7000

    -Límite de detección: 1 U/L. BIBLIOGRAFIA

    -Interferencias: Medicamentos opiáceos podrían interferir (5). 1. Wohlgemuth, J., Bio Chem 29 (1), 1908.
    2. Somogyi, M., Biol Chem 125 (399), 1938.
    -Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias 3. Street, H.V., Close, J.R., Clin Chem Acta 1 (256), 1956.
    sistemáticas significativas cuando se comparan con otro 4. Wallenfeis, K. et al, Carbohydrate Research 61:359 (1978)
    reactivo comercial. 5. Young D.S., effects of drugs on clinical laboratory tests,
    th
    4 ed. AACC Press, 1995.
    -Coef. Correlación = 0,999 (n = 125, rango 32 – 2112 U/lt)
    r = 0,98x + 5,4

    -Repetibilidad intraserie: n = 20

    Nivel Media (U/L) C.V.


    Normal 106 0,7 %
    Patológico 418 0,3 %

    -Reproducibilidad interserie: n = 20

    Nivel Media (U/L) C.V.


    Normal 109 2,1 %
    Patológico 421 1,3 %

    Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador. Los


    resultados pueden variar al cambiar de instrumento o al realizar
    el procedimiento manualmente.

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