UNIDAD IV

4.1.- Transporte de iones a través de membranas celulares de las plantas

PROTEINAS PARA EL TRANSPORTE DE NUTRIENTES MINERALES Y

AGUA CRUZANDO LAS MEMBRANAS BIOLOGICAS

La absorción y transporte de agua e iones minerales a través de los sistemas radiculares,

supone el transporte celular cruzando la membrana plasmática. Muchos estudios han
intentado describir estos procesos al nivel de planta entera y al nivel de órganos (ejemplos
raíces seccionadas). Las investigaciones estuvieron basadas en estudios realizados en
vesículas de membranas aisladas y a través de la electrofisiología, se ha podido
caracterizar la naturaleza de los procesos de transporte al nivel de membranas celulares.

La membrana plasmática de la célula vegetal, es una barrera selectivamente permeable

que asegura la entrada de iones y metabolitos hacia el interior de la célula. Junto con la
membrana vacuolar (tonoplasto), la membrana plasmática permite al citoplasma a
mantener la homeostasis intracelular.
- Las capas bicapas fosfolípidos son permeables a gases, tales como O2 y el CO2
- Estas capas son apenas permeables al agua y casi impermeables a los iones inorgánicos
y otros solutos hidrofílicos tales como sacarosa y los aminoácidos
- Para el trasporte se requiere proteínas que permitan mantener las necesidades
nutricionales e hídricas de la planta como sistema.

Las membranas celulares contienen diferentes tipos de proteínas, las mismas que se
constituyen en:
- ATPasas ó bombas de ATP
- Canales iónicos
- Transportadores iónicos
- Aquaporinas

1) Las ATPasas: son proteínas integrales que utilizan la energía liberada de la hidrolisis
del ATP para transportar los iones a través de la membrana plasmática en contra de
gradientes electroquímicos. En las células de plantas, las H+ - ATPasas bombean
protones a través de la membrana plasmática o el tonoplasto para "acidificar" la matriz
extracelular o la vacuola, respectivamente.
2) Los Canales iónicos: que también son proteínas integrales, facilitan la difusión de
iones hacia abajo de las gradientes energéticamente favorables. Estas proteínas forman
canales a través del cual los iones pasan en fila singular a tasas muy rápidas (mayores de
106 a 107 iones por segundo por canal). La actividad de los canales iónicos (abertura y
cierre) pueden ser finamente reguladas.
3) Los trasportadores Iónicos. Una tercera clase de proteínas que trasportan iones a
través de las membranas celulares, pueden mover solutos unos arriba o debajo de los
gradientes de concentración a tasas de 102 a 104 moléculas por segundo por transportador.

Entre los tipos de trasportador, se distinguen:

- Uniportes, semejantes a los canales iónicos, mueven sustancias hacia debajo de su

gradiente de concentraciones quizá mucho más lentamente
-Antiporters, también llamados cambiadores
-Simporters, pueden mover una sustancia dada contra su propia gradiente de
concentración
Ejm.

La elevada concentración de H+en el apoplasto impulsa el movimiento de NO3- hacia el

citoplasma de la célula mediante un simporte. Los gradientes protónicos pueden impulsar
de igual modo, el movimiento de iones hacia dentro de la vacuola a través del antiporter
H+ - Na+ o el antiporter H+-Ca2+.

PRINCIPIOS BASICOS DEL TRASPORTE DE IONES A TRAVES DE

MEMBRANAS BIOLOGICAS

Una bomba de hidrogeniones (H+ -ATPasa), transporta H+ a través de una membrana

biológica, desde la superficie interna hacia la externa
Ejm. en la membrana plasmática los H+-ATPasa trasporta H+ desde el citoplasma hacia
el apoplasto, con ello crea una gradiente de pH y electropotencial. El trasporte de cationes
y aniones a lo largo de este gradiente, es llevado a cabo por trasportadores iónicos
selectivos o canales iónicos.

Las bombas H+-ATPasa, localizadas en la membrana plasmática y el tonoplasto, tiene la

función principal de regular el pH citoplasmático.

Estas bombas trasportan H+ desde el citoplasma a través de la membrana plasmática hacia

el apoplasto o a través del tonoplasto hacia el interior de la vacuola, conduciendo a una
diferencia típica de pH entre estos compartimientos, el apoplasto y la vacuola. Como regla
general,
El pH del citoplasma es de 7.3 - 7.6.
La vacuola 4.5 - 5.9
Apoplasto: cerca de 5.5

La actividad de la H+-ATPasa, es particularmente muy elevada en las células de los pelos

radiculares de las plantas, lugar donde esta enzima consume entre 25% y 50% del ATP
celular producido. Por tanto, la presencia de bajos niveles de tasa fotosintética, la escasa
cantidad de carbohidratos translocados a las raíces, no solamente disminuirá la expulsión
neta de H+ hacia el medio externo, sino también disminuirá el pH citosólico. La actividad
de la H+-ATPasa se ve estimulada por cationes monovalentes en el orden: K+, Na+ y es
relativamente insensible a los aniones.

Trasporte de Nutrientes:
Trasporte pasivo Canales de K, Cl y Na y agua (depende de la polarización de la
membrana de ATPasa,
Trasporte activo primario:
Exclusión de los iones H+ ATPasa de membrana y utilización de energía metabólica
(ATP)
Trasporte activo secundario :
Los principales nutrientes se incorporan por cotransporte con proteínas trasportadoras :
NO3-, NH4+, H2PO4-, SO4=, K+, glucosa
Antiporte; proceso de exclusión del Na+

En conclusión: la absorción de solutos se rige por una gradiente electroquímico a través

de las membranas
Absorción de solutos:
Tipo de soluto Membrana Movimiento
Moleculas pequeñas Fosfolipidos Pasivo
Cationes Canales Pasivo
Moleculas grandes Carriers Pasivo/activo
Aniones Carries/bombas Activo

Las células radiculares de las plantas, se hallan separadas del medio externo por la
pared celular y adyacente hacia el lado interno, se encuentra la membrana
citoplasmática.
Esta delgada membrana citoplasmática separa un espacio interno casi constante de un
medio ambiente externo altamente variable, esta variabilidad se da en términos de:
 la concentración de iones,
 pH,
 concentración de cargas eléctricas y otras características.

Esta membrana biológica debe modular y promover un flujo continuo de moléculas e

iones hacia dentro y hacia afuera de la célula.

Transporte pasivo y activo

Las moléculas presentes en una solución (como el de la solución suelo) no están
estáticas, ellas están en continuo movimiento colisionando unas con otras y cambiando
su energía cinética.
La difusión es el proceso por el cual las moléculas se intermezclan como resultado de
su agitación termal aleatorio, ésta agitación da incrementos al azar, pero en movimiento
progresivo de sustancias desde regiones de alta energía libre hacia regiones de baja
energía libre.
Por lo tanto, la difusión permite el movimiento de las moléculas desde regiones de una
elevada concentración a regiones de una baja concentración.

Una vez que se haya alcanzado el equilibrio químico o de concentración, no podrá

ocurrir movimiento neto del soluto, a menos que se aplique una fuerza adicional. El
movimiento de las sustancias en contra de un gradiente de concentración o gradiente
químico, se denomina “transporte activo”. Este movimiento no es espontáneo y requiere
de trabajo aplicado al sistema mediante la aplicación de energía celular.

A pesar que la fuerza de la gravedad no contribuye sustancialmente en el transporte,

las demás fuentes de energía potencial definen el potencial químico de cualquier soluto,
de acuerdo a la siguiente relación:

El término final (componente presión hidrostática) contribuye en magnitudes muy

pequeñas en los valores de üj, comparado a los componentes concentración y eléctrico,
excepto en caso de los movimientos osmóticos.

Relación entre el potencial químico (û) y el transporte de moléculas cruzando una

membrana semipermeable. El movimiento neto de especies moleculares j entre los
compartimentos A y B depende de la magnitud relativa del potencial químico de j en
cada compartimento, representado por la altura de las barras. El movimiento hacia abajo
del gradiente químico ocurre espontáneamente (transporte pasivo), el movimiento
contra un gradiente químico requiere de energía adicional (transporte activo).

El término üj significa la energía libre molal parcial para el soluto j, esto representa el
incremento en la energía libre por cada mol de j adicionado, para una adición
infinitesimal bajo condiciones constantes. ∆üj es la contribución del soluto j al cambio de
la energía libre total (∆G) del sistema.

El potencial químico: Es la suma de todas las fuerzas que pueden actuar sobre
moléculas para estimular el trasporte neto. De manera general, en la difusión (trasporte
pasivo) siempre las moléculas se mueven desde regiones de potencial químico más alto
hacia regiones de potencial químico más bajo. El movimiento contra un gradiente de
potencial químico es una manifestación del transporte activo.

Origen de los potenciales de difusión

Cuando las sales difunden a través de una membrana biológica, se puede desarrollar
un potencial eléctrico de membrana (voltaje).

En la figura 4,3, considere dos soluciones de KCL separadas por una membrana
biológica, los iones de K y Cl pasaran de manera independiente por la membrana,
difundiendo hacia abajo o a favor de su gradiente difundirán a través de la membrana
plasmática hacia el comportamiento B, a diferentes tasas. El resultado será una ligera
separación de carga eléctrica, el mimo que rápidamente creara un potencial eléctrico
que cruza la membrana. Las membranas biológicas, usualmente son más permeables
al K que al Cl fuera de la célula (similitud en compartimiento A de la figura 4.3), haciendo
que el interior de la célula desarrolle carga eléctrica negativa con respecto al medio
extremo. Este potencial de membrana que se desarrolla como resultado de la difusión
se llama ‘’potencial de difusión ‘’.

Es necesario tener en cuenta el ‘’principio de la neutralidad ‘’ cuando se da el movimiento

de los iones a través de la membrana. Las soluciones, siempre contienen igual número
de aniones y cationes. La existencia de un potencial de membrana biológica es desigual.
Sin embargo, el número actual de iones no balanceados es despreciable.
Por ejemplos, un potencial de membrana equivalente a – 100 milivoltios (mV), se genera
con la sola presencia de un anión extra externo por cada 100 000 dentro de la célula
(esta cifra es semejante al encontrado en el cruce de la membrana plasmita de muchas
células de plantas).

FIGURA 4.3 Desarrollo de un potencial de difusión y la separación de cargas entre dos

compartimientos separados por una membrana biológica, ésta es preferencialmente
permeable a los cationes. Si se da la primera condición, los iones K+ y Cl- difundirán
desde el compartimiento A hacia el B a una tasa más elevada, estableciéndose así un
potencial de difusión. Cuando las membranas son más permeables al K+ que el Cl-; el
K+ difundirá más rápidamente que los aniones Cl- y se desarrollará la separación de
cargas (+ y -).
4.2.- Ecuaciones de Goldman, Donnan, Nerst, Ussing- Teorell

ECUACION DE GOLDMAN

El potencial de difusión desarrollado por el movimiento de difusión de diferentes iones a

través de una membrana biológicas, puede ser estimado mediante la ecuación de
Goldam (EG ):

𝑅𝑇 (𝑃𝑗. 𝐶𝐶𝑒 ) (𝑃𝑗. 𝐶𝐴𝑖 )

𝐸𝐺 = Ln + (𝑃
𝐹 (𝑃𝑗. 𝐶𝐶𝑖 𝑗. 𝐶𝐴𝑒 )

R constante universal de gases

T temperatura absoluta.
F Constante de Faraday
Pj Coeficientes de permeabilidad para el in J (cm.𝑠 −1 )
𝐶𝐺𝑒 Concentración externa de cationes.
𝐶𝐺𝑖 Concentración interna de cationes.
𝐶𝐴𝑖 Concentración interna de aniones.
𝐶𝐴𝑒 Concentración externa de aniones.
Para definir el movimiento de iones a través de una membrana plasmática es de
naturaleza activa o pasiva, necesitamos comparar el potencial de difusión calculado
mediante la ecuación de Goldman (𝐸𝐺 ) y el potencial de difusión determinando
experimentalmente (𝐸𝑀 ).

A continuación, tenemos las siguientes alternativas:

 Si el potencial de difusión calculado (𝐸𝐺 ) es semejante al potencial de difusión
experimental (𝐸𝑀 ), entonces los iones serán transportados pasivamente.
 Si el potencial de difusión calculado por 𝐸𝐺 es diferente al potencial de difusión
experimental, entonces por lo menos uno d los iones transportado activamente.

El citoplasma de las células vegetales, tiene macromoléculas que generalmente están

cargadas negativamente (-) cuando los iones atraviesan la membrana, alteran el flujo y
la distribución de los iones. Por lo tanto, se alcanza el equilibrio químico con una
diferente distribución de los iones.

⌈𝑁𝑎+ ⌉ [𝐶𝑙 − ]𝑖 = [𝑁𝑎+ ]𝑒 [𝐶𝑙 − ]𝑒

ECUACION DE DONNAN
En la condición de equilibrio, se puede estimar la diferencia de potencial eléctrico
formado por los dos comportamientos. Por lo que la ecuación de Donnan (Ed) es la
siguiente:

Ed = 58.2 Log (C+)e = 58.2 Log (A)-i

(C+)i (A)-e
Donde:
(C+)e Concentración externa de catión
(C+)i Concentración interna de catión
(A+)e Concentración externa de anión
(A+)i Concentración interna de anión

ECUACION DE NERNST
El potencial de Nernst (EN), es una relación que prevalece en la condición de equilibrio

En = 0.19844 T (log Ce)

Z Ci

Donde:
T: Temperatura absoluta
Z: Carga del ión
Ce: Concentración externa
Ci: Concentración interna

Si el Potencial de Nernt calculado (EN) es igual al potencial de membrana experimental

(EM), entonces el transporte es pasivo. Así sucesivamente para el caso de cationes y
aniones como muestra el siguiente cuadro
 Potencial de Nernst Potencial de membrana
Calculado (EN) Experimental (EM)
= Transporte pasivo
Cationes > Transporte activo para afuera
< Transporte activo para adentro
Aniones > Transporte activo para dentro
< Transporte activo para afuera

La ecuación de Nernst, se usa para diferenciar el transporte activo del trasporte pasivo.
Se presenta en la siguiente tabla valores de los gradientes de concentración de iones
EXPERIMENTALMENTE medidos en la condición de steadystate (es la condición en
la cual el influjo y el eflujo de un soluto dado son iguales y por ello las concentraciones
iónicas son constantes con respecto al tiempo; el steady no es lo mismo que equilibrio),
comparado con valores calculados con la ecuación de Nernts, esto para células radiculares
de arveja.

Concentración de iones calculados por la ecuación de Nernst y experimentalmente

determinados (mM) en tejidos de arveja. El potencial de membrana fue medido a -
110 mV

Ión Concentración en el Concentración interna

medio externo (mMol L-1)
(mMol L-1 ) Calculado Experimental
(EN) (EM)
K+ 1 74 75
Na+ 1 74 8
Mg2+ 0.25 1.340 3
Ca2+ 1 5.360 2
NO3- 2 0.0272 28
Cl- 1 0.0136 7
H2PO4- 1 0.0136 21
SO42- 0.25 0.00005 19
(Tomado de Higinbothan et al 1967)

En la tabla anterior se observa que, del total de iones, solamente el K+ está en, o cerca al
equilibrio. Los aniones NO3-, Cl-, H2PO4- y SO42- tiene concentraciones internas (EM)
muy elevadas que las calculadas (EN), esto nos indica que la absorción de estos iones es
activa. Los cationes Na+, Ca2+ y Mg2+ tienen concentraciones internas más bajas que las
calculadas; esto nos indica que estos iones a la célula por difusión debajo de sus gradientes
de potencial electroquímico, por lo tanto, son activamente expulsados (transporte activo
para afuera).
El K+se acumula pasivamente en el citosol y la vacuola, excepto cuando las
concentraciones extracelulares de K+son muy bajas, en este caso este ión será absorbido
activamente.
El Na+ es activamente transportado fuera del citosol hacia los espacios extracelulares y la
propia vacuola. El exceso de H+ generados por metabolismo intermediario, también son
activamente expulsados desde el citosol. Este proceso ayuda a mantener el pH citosólico
cerca de la neutralidad, mientras la vacuola y el medio extracelular son generalmente más
ácido en 1 ó 2 unidades de pH. Todos los aniones son absorbidos activamente hacia
adentro del citosol. El Ca2+ es activamente transportado fuera del citosol cruzando la
membrana plasmática y el tonoplasto.
Muchos iones atraviesan las membranas de las células vivientes de manera "simultánea",
por ello, los potenciales calculados mediante la ecuación de Nernst para algunas especies
iónicas especificas rara vez describen el potencial de difusión de la membrana. En lugar
de ello, la contribución de todos los iones al potencial de difusión que cruzan la membrana
queda descrita mediante la ecuación de Goldman.

ECUACION DE USSING-TEORELL

Esta ecuación determina si el movimiento de una especie iónica es activo o pasivo. Esta
ecuación es una relación de flujos:

Jin = Ce
Jef CiexpZEE/RT

Jin Influjo (flujo para dentro)

Jef Eflujo (flujo para fuera)
Ci Concentración del ión para dentro de la célula
Ce Concentración del ión para fuera de la célula.

Si en el cálculo de la ecuación de Ussing-Terell resultara que:

Jin/Jef Calculado = Jin/JefExperimental ....Transporte pasivo

Jin/Jef Calculado <Jin/JefExperimental ....Transporte pasivo
Jin/Jef Calculado >Jin/JefExperimental ....Transporte pasivo
Ejercicio:
1. dada la siguiente célula, las concentraciones internas y externas es como se indican:

EM = -118 mV (experimental) a 25 C⁰

KCl = 1 mM
K =100 mM NaCl = 0.1 mM
Ca = 1 mM MgCl2 = 0.1 mM
Mg = 10 mM

a) ¿El K+ y el Mg2+ están en equilibrio a través de la membrana?

Para el K+

T= 25 + 273 = 298

Según la ecuación de Nernst:

EN = 0.19844 T (Log Ce)

Z Ci

EN = 0.19844 (298) (Log 1)

1100
= -118.2702 mV
EM experimental = ENK calculado
- 118 mV -118.2702 mV Por tanto: El K+ está en equilibrio

Para Mg2+

ENMg = 0.19844 (298) (log 0.1)

1 10

= -59.1351

EM experimental < ENMG calculado

- 118 mV -59.1351 mV Por tanto: Para el Mg+ hay transporte activo para
afuera

b) Admitiendo que los iones Na+ y Ca+2 se encuentran en equilibrio, ¿Cuáles serían sus
concentraciones iónicas en el citoplasma?

En el equilibrio: EM experimental = EN calculado

EN = 0.19844 T (Log Ce)

Z Ci

Para el Na+ :
-118 = 0.19844 (298) (Log 0.1)
1 CiNa
-0.9954 = Log CiNa

CiNa = 9.895 mM

Para el Ca+2 concentración iónica externa:

-118 = 0.19844 (298) (Log CeCa)

2 1
e
-3.9908 = Log C Ca

CeCa = 1.021 x 10-4 mM

C) ¿Cuál es el valor de la relación Jin/Jef para un flujo pasivo del ión Cl?

Para aplicar la fórmula de flujos (Ussing-Teorell), es necesario conocer Ci del cloro:

ENCl = 0.19844 T (Log Ce)

Z Ci

Calculando Ce del cloro:

Ce = 1 mM + 0.1 mM + 0.2 mM
Ce = 1.3 mM
Calculando Ci del cloro

-118 = 0.19844 (298) (Log 1.3)

1 CiCl

Log CiCl = Log 1.3-1.9954 = -1.8815

CiCl- = 0.013 mM

Entonces:
Jin = Ce
Jef CiexpZFE/RT

Jin = 1.3
Jef 0.013exp {(-1) (23.06) (-118)} / {(1.978) (298)}

Jin = 1.010
Jef