Cromatografía Clorofila

CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA: PIGMENTOS VEGETALES
Autores: Daniel Alejandro Gutierrez Fase fija o fase estacionaria: la fase fija es
Moreno y Diego Fernando Cruz Prieto el medio que permanece como soporte y
sobre ella se realiza la acción de
Resumen: En esta práctica de laboratorio, desplazamiento tanto de la fase móvil o
fue llevada a cabo la cromatografía de fase de solvente y la fase de soluto. Esta
capa delgada de algunos pigmentos consiste en partículas,generalmente
naturales presentes en las hojas de dos sólidas, pequeñas y con una superficie
vegetales seleccionados. Para este efecto, micro porosa, de forma que presenta un
escogimos la extracción de dicho amplio desarrollo superficial. Puede estar
pigmentos en hojas de espinaca y perejil. empaquetada en forma de columna o
extendida en forma de capa.
Palabras clave: Cromatografía, Clorofila,
métodos de separación. Fase móvil (fase de solvente): solvente
implicado en permitir el desplazamiento de
Introducción: La técnica de la la fase de solvente sobre la fase
cromatografía de separación de mezcla estacionaria.Su función es transportar a los
cualitativa se basa en el principio de componentes de la mezcla a través del
retención selectiva, por esto se utiliza en sistema cromatográfico.
mezclas homogéneas, entre esas líquido
líquido; a su vez la cromatografía también Fase de soluto: mezcla de sustancias
posee diversas técnicas, una de las sólidas que se pretende separar. (Valcárcel
primeras y más efectiva es la Cases-Gómez Hens, 1998)
cromatografía en papel, esta técnica es
efectiva debido a que la separación se Los pigmentos vegetales se caracterizan
produce al momento en el que una de las por absorber luz y presentar color por el
sustancias líquidas asciende por un papel reflejo de ciertos espectros de luz; en los
poroso, a distintas velocidades por vegetales las hojas, los tallos y las raíces
diferencia de solubilidad y velocidad de contienen diversos pigmentos entre ellos
difusión, conteniendo dos fases las quinonas o flavinas (colorante de las
representativas, la fase móvil y la fase flores), pero a pesar de esto son los
estacionaria. La fase móvil se caracteriza pigmentos fotosintéticos que absorben la
por tener carácter polar, como el metanol luz solar, estos pigmentos son la clorofila y
y/o etanol. La fase estacionaria se los carotenoides.(Girón et al., 2016).
caracteriza por tener carácter no polar,
como la remolacha, la espinaca, la La espinaca y el perejil cuentan con los
zanahoria, el repollo morado y la tinta, siguientes pigmentos:
entre otros.
● Clorofila: es el pigmento que lleva a
cabo la fotosíntesis, esta absorbe toda
la luz exceptuando la de color verde, Posteriormente, se cuela y se filtra la

pues se refleja en el color verde mezcla para garantizar la presencia de la
característico de la espinaca. Cuenta fase líquida únicamente. Finalmente, se
con la “clorofila a” y la “clorofila b”, pone en contacto un trozo de papel filtro
la primera es de color verde azulado y con el filtrado y se espera por alrededor de
se encarga de la fotosíntesis, mientras 5 horas a que los pigmentos suban por el
la segunda es un pigmento de apoyo. papel gracias a la propiedad de capilaridad.
● Carotenoides: estos se descomponen
en el cuerpo humano, al ser Archivo video: Procedimiento y
consumidos, y se convierten en resultados de pigmentos presentes en la
vitamina A. Se considera esencial para espinaca y el perejil
la salud; en las espinacas el pigmento https://drive.google.com/file/d/18vaFna1C
beta carotenoide es el más abundante. 66GhqvFq6EVL7jaUaJHjfiSL/view?usp=s
● Feofitinas: este pigmento se considera haring
un producto de la descomposición,
pues pierde un ion de magnesio que Resultados:
permanece en la hoja y esto permite
una continua coloración verde en las Los resultados de la cromatografía de capa
espinacas. delgada fueron los siguientes:
● Xantofilas: estos pigmentos son
carotenoides oxidados, por tanto se
produce un cambio en su estructura, se
caracterizan por ser de color amarillo.
(Plantas medicinales, 2014)
Materiales:
● Mortero.
● Colador.
● Papel de filtro.
● Caja de petri.
● Beaker de 100 mL. D
● Espinaca. Imagen 1: Cromatografía de capa delgada para
espinaca (izq.) y perejil (der.)
● Perejil.
● Alcohol.
Metodología: En primer lugar, se

seleccionaron cuidadosamente las hojas de
las plantas seleccionadas (espinaca y
perejil) y posteriormente fueron maceradas
en un mortero (es posible usar un poco del
eluyente para que la maceración sea más
efectiva). Tras la maceración, se añade un
poco del eluyente seleccionado (alcohol) y
se revuelve para procurar que los Imagen 2: Desglose Cromatografía de capa
pigmentos se disuelvan en este. delgada para espinaca.
Daniel Alejandro Gutierrez Moreno y Diego Fernando Cruz Prieto 2

Carotenos 0,979 0,871
Análisis de Resultados:
Se utilizó un disolvente apolar como el

alcohol en ambos experimentos, ya que los
pigmentos a analizar están conformados
por compuestos con una baja polaridad, los
cuales se retienen poco en la fase
estacionaria. El eluyente no sólo actúa
Imagen 3 Desglose Cromatografía de capa como fuerza propulsora sino que, además,
delgada para perejil.
su propia estructura química contribuye a
que los pigmentos puedan separarse
Cálculos de la relación de frentes de la
mediante sucesivos equilibrios de
espinaca:
adsorción-desorción. Si el mismo sólo
estuviese constituido por un disolvente no
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
𝑅𝑓 = 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 polar, las clorofilas no se podrían separar
1,8 ya que ambas cuentan con una estructura
𝑅𝑓 = 4,7
= 0, 382
𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐵 química similar, siendo su única diferencia
2,6
𝑅𝑓 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐴
= 4,7
= 0, 553 la presencia de un radical metilo (clorofila
3,9 a) y un grupo aldehído (clorofila b) que
𝑅𝑓 = = 0. 829
𝑋𝑎𝑛𝑡𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎𝑠 4,7 provoca una mayor polaridad de la
4,6
𝑅𝑓 = 4,7
= 0, 979 clorofila b con respecto a la clorofila a.
𝐶𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜𝑠
Cálculos de la relación de frentes del Estas pequeñas diferencias entre las

perejil: clorofilas permiten que ambas absorban
2,8 luz en longitudes de onda ligeramente
𝑅𝑓 = = 0, 301
𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐵 9,3 diferentes, y por ende sus colores también
4,4 se pueden diferenciar ligeramente.
𝑅𝑓 𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝐴
= 9,3
= 0, 473
5,7
𝑅𝑓 𝑋𝑎𝑛𝑡𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎𝑠
= 9,3
= 0, 613 Por otro lado, los carotenos son
𝑅𝑓 =
8,1
= 0, 871 hidrocarburos y aunque la deslocalización
𝐶𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜𝑠 9,3
de los electrones π de sus estructuras
generan fuerzas Van der Waals, no son lo
Tabla 1: Relación de frentes de la espinaca
(izq.) y el perejil (der.) suficientemente fuertes como para
interactuar con la fase estacionaria, por lo
Rf Espinaca Rf Perejil
tanto la separación de los componentes de
Clorofila B 0,382 0,301 la mezcla se determina por las
interacciones polares de los componentes
Clorofila A 0,553 0,473
de la misma con las fases estacionaria y
Xantofilas 0,829 0,613 móvil. Es por ello que en la Cromatografía

del perejil no se hace evidente en la capa cuando se utilizan eluyentes

delgada. polares como el alcohol debido a
su polaridad más alta. Debido a
Al calcular el factor de retención de los ello, el eluyente no arrastra
dos diferentes analitos (espinaca y perejil) efectivamente los pigmentos
se pudo observar que los valores del Rf van carotenoides.
aumentando. La retención del soluto en la ● La escogencia del eluyente debe
fase móvil es producto de una relación que depender de las características
se establece entre las polaridades de los químicas de los pigmentos que se
mismos. De esta manera se puede desean analizar. Es este caso, unos
evidenciar que los pigmentos con una pigmentos polares (Clorofila A y B
mayor polaridad serán los más verdes y los y Xantofilas) requieren eluyentes
de menor polaridad los naranjas. En el igualmente polares, tales como el
Anexo 1 se puede evidenciar la diferencia alcohol, vinagre o cloroformo.
entre las polaridades de los mismos.
Conclusiones: Bibliografía:
● La separación de los pigmentos en ● Cases, M. V., & Hens, A. G.
el proceso de cromatografía se (1994). Técnicas analíticas de
realiza mediante mecanismos de separación. Reverté.
equilibrios de adsorción-desorción ● Gibaja Oviedo, S. (1998).
que precisa de la polaridad de cada Pigmentos naturales quinónicos.
pigmento y del tipo de fuerzas Lima, Editorial Fondo.
intermoleculares que pueden ● Girón, J. M., Martínez, J. A.,
establecer con los componentes de Hurtado, L. G., Cuaran, J. D., &
la fase estacionaria y con la Ocampo, Y. A. (2016). Pigmentos
estructura del disolvente de la fase vegetales y compuestos naturales.
móvil. Inventum, 11(21), 51-62.
● Es difícil evidenciar los carotenos
en la cromatografía de estas plantas

Anexo 1.
Pigmento Estructura Química Polaridad
Clorofila B
Polar
Clorofila A
Polar
Xantofilas
Polar
Carotenos
No Polar

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la luz exceptuando la de color verde, Posteriormente, se cuela y se filtra la

Metodología: En primer lugar, se

Daniel Alejandro Gutierrez Moreno y Diego Fernando Cruz Prieto 2

Carotenos 0,979 0,871

Se utilizó un disolvente apolar como el

Cálculos de la relación de frentes del Estas pequeñas diferencias entre las

Daniel Alejandro Gutierrez Moreno y Diego Fernando Cruz Prieto 3

del perejil no se hace evidente en la capa cuando se utilizan eluyentes

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Pigmento Estructura Química Polaridad

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