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    Clonación en Levaduras

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    CARLOS FELIPE JAIMES LÓPEZ
    1) Una de las ventajas de usar levadura para la producción de proteínas heterólogas es que las levaduras tienen la capacidad de llevar a cabo modificaciones postraduccionales como la glicosilación, aunque estas modificaciones no son iguales a las de proteínas de mamíferos. 2) El tipo de levadura que se utiliza con mayor frecuencia en la producción de proteínas heterólogas es Saccharomyces cerevisiae. 3) El propósito de la adición de ADN monocatenario portador en

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    Clonación en Levaduras

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    CARLOS FELIPE JAIMES LÓPEZ
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    1) Una de las ventajas de usar levadura para la producción de proteínas heterólogas es que las levaduras tienen la capacidad de llevar a cabo modificaciones postraduccionales como la glicosilación, aunque estas modificaciones no son iguales a las de proteínas de mamíferos. 2) El tipo de levadura que se utiliza con mayor frecuencia en la producción de proteínas heterólogas es Saccharomyces cerevisiae. 3) El propósito de la adición de ADN monocatenario portador en

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    Clonación en levaduras

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    1) Una de las ventajas de usar levadura para la producción de proteínas heterólogas es que las levaduras tienen la capacidad de llevar a cabo modificaciones postraduccionales como la glicosilación, aunque estas modificaciones no son iguales a las de proteínas de mamíferos. 2) El tipo de levadura que se utiliza con mayor frecuencia en la producción de proteínas heterólogas es Saccharomyces cerevisiae. 3) El propósito de la adición de ADN monocatenario portador en

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    1) Una de las ventajas de usar levadura para la producción de proteínas heterólogas es que las levaduras tienen la capacidad de llevar a cabo modificaciones postraduccionales como la glicosilación, aunque estas modificaciones no son iguales a las de proteínas de mamíferos. 2) El tipo de levadura que se utiliza con mayor frecuencia en la producción de proteínas heterólogas es Saccharomyces cerevisiae. 3) El propósito de la adición de ADN monocatenario portador en

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    1.

    ¿Cuál es una de las ventajas de usar levadura para la producción de


    proteínas heterólogas?

    a) Los niveles de expresión de proteínas heterólogas son a menudo bajas,


    la producción de 5-30% del total de proteína celular, mayor producción en
    sistemas procarióticos (>30%).
    b) No todas las proteínas recombinantes son secretadas con éxito, la
    retención de proteínas expresado en: retículo endoplasmático (ER)
    (altamente expresadas), espacio periplásmico (de gran tamaño),
    dificultades en procesamiento “down streem”.
    c) Presentan características como rápido crecimiento, altas densidades de
    células, crecimiento en medios de bajo costo, no requerir factores de
    crecimiento.
    d) Los sistemas de levaduras tienen la capacidad de llevar acabo
    modificaciones postraduccionales, tales como glicosilación, pero: no son
    iguales a las modificaciones observadas en las proteínas nativo de
    mamíferos, los sistemas tradicionales de levadura no se utilizan para
    producir proteínas terapéuticas glicosiladas.

    2. Existen distintos tipos de levaduras, ¿Cuál es uno de los tipos de


    levadura que se utiliza de mayor manera en la producción de proteínas
    heterólogas?

    a) Saccharomyces cerevisiae.
    b) Kluyveromyces lactis.
    c) Hansenula polymorpha.
    d) Schizosaccharomyces pombe

    3. Complete la información según corresponda utilizando los siguientes


    tipos de levadura.

     Kluyveromyces lactis.
     Saccharomyces cerevisiae.
     Pichia pastoris.
     Hansenula polymorpha.

    a. La __ Saccharomyces cerevisiae__ se puede cultivar rápidamente a


    altas densidades de células en medios relativamente simples y es capaz
    de llevar a cabo muchas modificaciones post traduccionales.
    b. El mayor atributo de la __ Pichia pastoris__ es el de ser capaz de
    utilizar metanol como única fuente de carbono.
    c. La __ Kluyveromyces lactis__ es una levadura que tiene la capacidad
    de asimilar la lactosa y convertirla en ácido láctico.
    d. La __ Hansenula polymorpha__ es capaz de asimilar nitrato y puede
    crecer en una variedad de fuentes de carbono. Además, es un
    microorganismo termo tolerante con algunas cepas que crecen a
    temperaturas de hasta 50 ° C y más.

    4. Los vectores de expresión pueden ser YEps, Yips y YACs, ¿Cuál es


    una característica de los vectores de expresión YEps?

    a) Se integran en una sola copia y la inserción se da por recombinación


    homologa y gracias a secuencias especificas presentes tanto en la
    levadura como en los plásmidos.
    b) Están diseñados para clonar fragmentos grandes de ADN (100 kb), se
    mantiene como un cromosoma separado.
    c) Son vectores que no se replican de forma autónoma se integran en el
    genoma a bajas frecuencias de recombinación homóloga.
    d) Los factores de selección por lo general se basan en cepas mutantes
    deficientes en aminoácidos (histidina, triptófano, o leucina) o nucleótidos
    (uracilo) y requieren suplemento de estos para el crecimiento.
    5. Si utilizamos el método del acetato de litio /ADNss/ PEG, las células de
    levadura se incuban con una mezcla de transformación de acetato de litio,
    PEG 3500, un ADN monocatenario portador (ADNss) y el plásmido. El
    propósito de la adición de ADNss portador es:

    a) Facilitar la absorción y la introducción del plásmido a la célula.


    b) Bloquear los sitios no específicos en la pared celular y dejar el plásmido
    disponible para absorción.
    c) Transformar las células tratadas con sales de litio.
    d) Introducir plásmidos de autoreplicación.

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