Guía Práctica #2 Preparación de Medios de Cultivo

GUÍA DE PRÁCTICAS Y / O TALLERES
ASIGNATURA MICOLOGÍA NIVEL : VII
N O DE PRÁCTICA DE 2. P REPARACIÓN DE M EDIOS DE C ULTIVO

COMERCIALES Y CASEROS (L ACTRIMEL )
LABORATORIO
DOCENTE MSC B EATRIZ MALDONADO L IRA
FECHA DE LA
PRÁCTICA
1.OBJETIVO:
 Conocer los medios de cultivo usados en el laboratorio clínico para la
identificación de los agentes causantes de micosis.
 Clasificar los medios de cultivo y conocer los componentes de los medios mas
usados en el Laboratorio de Micología.
 Preparar medios de cultivo casero: Lactrimel.
 Preparar medios de cultivo comerciales.
Medios de cultivo para el área de Micología
Los medios de cultivo son preparaciones constituidas por un conjunto de

sustratos que le brindan a los hongos los nutrientes necesarios para su desarrollo
y crecimiento, permitiendo así el estudio de estos microorganismos, siendo
fundamental aislar el hongo en forma pura para facilitar la identificación que es
el objetivo final. Estos medios son muy parecidos a los de bacteriología, aunque
tienen sus propias características, un ejemplo claro se evidencia en el pH ácido,
que oscila entre 2-3, esta acidez inhibe el crecimiento de algunas bacterias para
trataren lo posible de obtener solo crecimiento fúngico.
Componentes generales de los medios de cultivo

Los hongos crecen, variando su morfología y comportamiento fisiológico según
los elementos nutritivos que le proporcionamos. En general los medios de cultivo
poseen Agar para medios sólidos (siendo un elemento de soporte), algún
hidratos de carbono como fuente de energía (glucosa, lactosa, otros),
extractos (carne, cerebro, corazón, hígado, otros), peptona como fuente de
nitrógeno, agua de chorro (que proporciona minerales) o agua destilada,
indicador de pH, agentes selectivos (antibióticos, antifúngicos, otros) y un
sistema amortiguador. Cada medio de cultivo posee una receta única donde se
le añaden una cantidad establecida de ciertos componentes antes mencionados
y se le restringe de otros, dependiendo del fin que necesitamos.
Clasificación de los Medios de cultivo usados en Micología
Los medios de cultivo pueden ser clasificados de muchas maneras pero en esta
oportunidad serán abordados según su consistencia, composición y función, en
los cuales se destacan:
Según su consistencia ( Fig. 1)
 Líquidos: Se les conoce comúnmente como caldos, poseen todos los

componentes en una solución acuosa.
 Sólidos: Se prepara añadiendo agar al caldo, este agar es una sustancia
extraída de las algas y es totalmente inerte cuya consistencia es
gelatinosa sólida y no es digerida por los microorganismos.
 Semisólidos: Tiene una proporción caldo/agar establecida para obtener
esta consistencia
Medio de cultivo sólido Medios líquidos, semisólidos y solidos

Según su composición y función:
Generales: son medios diseñados para el crecimiento de la mayoría de los

microorganismos fúngicos. En Micología el más conocido es el Agar Sabouraud
Dextrosa (SDA) por su fácil preparación, se utiliza cotidianamente y es un medio
base para el aislamiento y crecimiento de agentes fúngicos provenientes de
muestras clínicas para una futura identificación.
Agar Sabouraud dextrosa (SDA) Agar Mycosel
Selectivos: Son medios que permiten el crecimiento de los hongos patógenos

que afectan al ser humano y que son de importancia para el estudio en los casos
clínicos, estos se deben a que permiten el crecimiento de los agentes fúngicos
patógenos e impiden el crecimiento de la mayoría de hongos ambientales y
bacterias que no tienen importancia clínica. Esto se logra porque en su
composición poseen sustancias inhibidoras como lo son los antibióticos, en el
caso de antifúngicos tenemos la Actidiona y en los casos de antibacterianos
tenemos Cloranfenicol y Gentamicina que son los más usados. En este caso
el medio conocido por excelencia y que proporciona buenos resultados es el
Agar Mycosel.
Enriquecidos: Son medios utilizados para ciertos microorganismos que exigen

ciertos sustratos adicionales para poder desarrollarse y crecer (estos medios no
necesariamente inhiben el crecimiento de los demás hongos). Aquí tenemos
como ejemplo el Agar Infusión Cerebro Corazón (BHI) que permite un buen
aislamiento en el caso de los hongos causantes de micosis profunda como es el
caso de la histoplasmosis.
Diferenciales: son medios que permiten diferenciar y clasificar diversos hongos
en género o especie debido a la presencia de sustancias cromógenas o
indicadores de pH, evidenciando las características que presenta cada uno de
estos microorganismos fúngico. Por ejemplo el Agar Cromogénico para Candida
que permite su crecimiento y a su vez diferenciar diversas especies de este
patógeno, según el desarrollo o producción de un pigmento (color) específico
cuando crece en este agar.
Agar CHROM que muestra diferentes especies de Candida: (a) C. albicans

(b) C. tropicalis (c) C. krusei ( Pichia kudriavzevii (d) C. glabrata (e) C. parapsilosis
Color y aspecto de las colonias de levaduras en

medio Brilliance Candida Agar (Oxoid) :
A) Candida albicans. B) Candida parapsilosis.

C) Saccharomyces cerevisiae. D) Candida
tropicalis.
Especiales: Son medios diseñados específicamente para el crecimiento de un

género o especie de hongos. Un ejemplo claro es el medio Converse para
obtener la fase levaduriforme de Coccidioides spp. debido a que tiene
especificaciones únicas para poder obtener el crecimiento de este hongo.
Medios caseros de Borelli: Son medios cuya forma de preparación se basan
en utilizar nutrientes de “casa” como zanahoria, papa, maíz, cambur, miel, leche,
harina de trigo, avena y otros que sean de uso cotidiano. Estos medios son útiles
porque brindan al microorganismo los sustratos necesarios para favorecer la
esporulación y producción de conidias que son parte de su morfología, siendo
importantes e indispensables para la identificación de los hongos. Como ejemplo
tenemos el medios Lactrimel que posee principalmente Leche, harina de trigo y
miel de abeja.
Medio de lactrimel
En todos se deben proporcionar las condiciones ideales que requiere cada

microorganismo: Temperatura, pH, O 2, CO2, otros.
Nota: hay medios que pueden presentar varias de las formas antes expuestas al
mismo tiempo, es decir, pueden ser, enriquecidos y diferenciales o enriquecidos
y selectivos, entre otros.
Presentación de los medios de cultivo
Cultivo en tubo:
Es un método utilizado en los laboratorios de micología, donde se utilizan tubos

cuyo diámetro y tamaño dependen de la necesidad del Bioanalista o
Investigador. En estos tubos se verte el agar preparado que esta fase líquida, se
lleva al autoclave por un tiempo determinado para esterilizar, luego se coloca a
temperatura ambiente de manera inclinada para que se forme una especie de
bisel, una vez que esté solidificado y que haya cumplido con el protocolo de
esterilidad, se utiliza para sembrar muestras clínica o trozos de material fúngico
para luego evidenciar el crecimiento del microorganismo.
Cultivo en Placa de Petri:
Es un método utilizado en los laboratorios de micología, donde se utilizan placas

de Petri, en este caso a diferencia del método en tubo, se debe esterilizar el agar
en la autoclave antes de servirlo en las placas, al momento de verter el material
en cada recipiente se trabaja en la campana de extracción para mantener la
esterilidad, se espera que este solidificado y que haya cumplido con el protocolo
de esterilidad para luego proceder a sembrar las muestras clínicas o un trozo de
material fúngico y esperar para evidenciar el crecimiento.
Nota: El medio de cultivo en tubo es mucho más seguro que en placas de Petri
debido a la forma reducida de la boca de los tubos y su fácil manipulación al ser
comparado con las placas de Petri que son más fáciles para abrirse y mucho
más difíciles de manejar, esto hace que aumente las posibilidades de accidentes
laborales al diseminarse material fúngico en el ambiente del laboratorio.
Utilidad e importancia clínica de los medios de cultivo
Los medios de cultivo permiten aislar de muestras clínicas un agente fúngico al

proporcionar los elementos necesarios para su desarrollo y buen crecimiento,
permitiendo así la correcta identificación tanto de género como de especie del
agente patógeno y posteriormente poder aplicar el tratamiento necesario de
manera oportuna para eliminar ese agente infeccioso del paciente lo más pronto
posible.
Medios de Cultivo para el área de Micología
Agar Cerebro De Corazón: Medio altamente nutritivo para el cultivo de una gran
variedad de microorganismos exigentes. Al añadirle antibióticos, puede
utilizarse para el aislamiento y cultivo de hongos.
Agar Dextrosa-Sabouraud: Medio para el cultivo de hongos filamentosos y

levaduras.
Agar Czapek-Dox (Modificado): Medio para el cultivo de hongos y bacterias

capaces de utilizar el nitrato de sodio como única fuente de nitrógeno.
Agar Extracto de Malta: Medio para la detección, aislamiento de levaduras

y mohos.
Agar Malta: Medio para la detección, aislamiento y enumeración de levaduras y

mohos.
Agar Maltosa de Sabouraud: Medio para el cultivo de hongos filamentosos y

levaduras
Agar de Littman con Bilis de Buey: Medio selectivo, que, suplementado con
estreptomicina, se emplea para el aislamiento primario y cultivo de hongos,
especialmente dermatofitos.
Agar Papa y Dextrosa: Medio para el cultivo y enumeración de levaduras y
mohos.
Caldo Corazón: Medio de propósito general para el cultivo de una gran
variedad de microorganismos.
Caldo Extracto de Malta: Medio para el cultivo de mohos y levaduras y

utilizado en los ensayos de esterilidad.
Caldo Nutritivo: Medio general para el cultivo de microorganismos poco
exigentes.
Medio Líquido de Sabouraud: Medio empleado para el aislamiento y cultivo de

levaduras y mohos
Peptona Micológica: Base nutritiva especialmente diseñada para el cultivo de
hongos patógenos y saprófitos. Garantiza un crecimiento característico de

hongos patógenos y no patógenos en medios sólidos.
Preparación de medios de cultivo
En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran

comercializados; normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso
rehidratar. En estos casos la preparación del medio de cultivo se reduce
sencillamente en pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles,
se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes después de
que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave y enfriados a
temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se trata de medios con agar.
2.INSTRUCCIONES:
Ingresar al Laboratorio con Mandil, cabello recogido, sin prendas, zapatos cerrados y
la guía de trabajos prácticos impresa.
Dejar el laboratorio en orden
Apagar los teléfonos celulares.
Al concluir cada sesión de trabajo, el estudiante deberá asegurarse de que los
materiales de desecho y objetos contaminados sean colocados en recipientes
específicos.
Traer un cuaderno doble línea, un marcador permanente y un esfero, todo será de uso
personal.
Desinfectar su área de trabajo.
3.ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
Preparar los medios de cultivo casero de Borelli de acuerdo con las instrucciones.
Preparar medios de cultivos liofilizados de acuerdo con las instrucciones del fabricante,
una vez preparados y autoclavados los medios deben ser dispensados en placas o en
tubos y realizar el control de esterilidad .
Medio de Lactrimel (Borelli)
Composición:
Harina de trigo ……………. 14 gr.
Leche entera ……………. 14 ml
Miel de abeja ……………. 7 gr
Agar ……………. 14 gr
Agua ……………. 1000 ml
Cloranfenicol ……………. 250 mgr
Preparación:
1. Mezclar la harina, miel y agar con el agua.

2. Llevar a Baño de María hasta su completa disolución, mezclando
fuertemente.
3. Agregar a la mezcla anterior la leche y por último el cloranfenicol.
4. Repartir en tubos de ensayo, placas estériles.
Utilidad: Es un medio muy rico en sustancias nutritivas, permitiendo una buena

esporulación y aislamiento de hongos especialmente Dermatofitos.
4.RESULTADOS OBTENIDOS:
Responder el cuestionario colocado en el aula virtual.
Cumplir con las medidas de Bioseguridad en el Laboratorio de Micología
5.CONCLUSIONES
6.RECOMENDACIONES
Cumplir con las medidas de Bioseguridad en el Laboratorio de Micología.
Mgt. Nelfa España Francis Mgt. Beatriz Maldonado Lira

Coordinadora Escuela Lab. Clínico Docente

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Los medios de cultivo son preparaciones constituidas por un conjunto de

Componentes generales de los medios de cultivo

Clasificación de los Medios de cultivo usados en Micología

Según su consistencia ( Fig. 1)

 Líquidos: Se les conoce comúnmente como caldos, poseen todos los

Medio de cultivo sólido Medios líquidos, semisólidos y solidos

Generales: son medios diseñados para el crecimiento de la mayoría de los

Agar Sabouraud dextrosa (SDA) Agar Mycosel

Selectivos: Son medios que permiten el crecimiento de los hongos patógenos

Enriquecidos: Son medios utilizados para ciertos microorganismos que exigen

Agar CHROM que muestra diferentes especies de Candida: (a) C. albicans

Color y aspecto de las colonias de levaduras en

A) Candida albicans. B) Candida parapsilosis.

Especiales: Son medios diseñados específicamente para el crecimiento de un

En todos se deben proporcionar las condiciones ideales que requiere cada

Presentación de los medios de cultivo

Es un método utilizado en los laboratorios de micología, donde se utilizan tubos

Es un método utilizado en los laboratorios de micología, donde se utilizan placas

Utilidad e importancia clínica de los medios de cultivo

Los medios de cultivo permiten aislar de muestras clínicas un agente fúngico al

Medios de Cultivo para el área de Micología

Agar Dextrosa-Sabouraud: Medio para el cultivo de hongos filamentosos y

Agar Czapek-Dox (Modificado): Medio para el cultivo de hongos y bacterias

Agar Extracto de Malta: Medio para la detección, aislamiento de levaduras

Agar Malta: Medio para la detección, aislamiento y enumeración de levaduras y

Agar Maltosa de Sabouraud: Medio para el cultivo de hongos filamentosos y

Agar Papa y Dextrosa: Medio para el cultivo y enumeración de levaduras y

Caldo Corazón: Medio de propósito general para el cultivo de una gran

Caldo Extracto de Malta: Medio para el cultivo de mohos y levaduras y

Medio Líquido de Sabouraud: Medio empleado para el aislamiento y cultivo de

Peptona Micológica: Base nutritiva especialmente diseñada para el cultivo de

hongos patógenos y saprófitos. Garantiza un crecimiento característico de

Preparación de medios de cultivo

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran

Medio de Lactrimel (Borelli)

Leche entera ……………. 14 ml

Miel de abeja ……………. 7 gr

Agua ……………. 1000 ml

Cloranfenicol ……………. 250 mgr

1. Mezclar la harina, miel y agar con el agua.

Utilidad: Es un medio muy rico en sustancias nutritivas, permitiendo una buena

Mgt. Nelfa España Francis Mgt. Beatriz Maldonado Lira

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