MONOGRAFÍA Pseudomonas aeruginosa

1-El microorganismo y su interrelación con el ser humano

Pseudomonas aeruginosa es una bacteria Gram negativa, oxidasa positiva (no fermentador) y
móvil (con un flagelo o penacho polar), capaz de generar pigmentos como la fluoresceína
(verde-amarillento y fluorescente), mejor detectada con el medio King B, piocianina (verde-
azulado) y piorrubina (pardo), mejor detectadas con el medio King A. Generan tambien
fluorescencia y pigmentos en el Agar Cetrimida, confiriéndole tras su crecimiento un olor
característico a jabón o a licor. Los
Pseudomonadales (incluido
también Acinetobacter) se
consideran los microorganismos
que, a causa de la acumulación
atmosférica de los compuestos
que generan, provocaron las
primeras condensaciones del
vapor de agua en lluvia, lo que
permitió el paso de la vida del
mar primigenio a tierra. Su hábitat
incluye el suelo, los vegetales, las
aguas naturales y también tiene
especial preferencia por las
duchas, las piscinas y las aguas
purificadas de la industria Pseudomonas aeruginosa, aspecto típico en Agar Cetrimida
farmacosmética (junto a
Burkholderia cepacia, ver monografía 8), formando biofilms resistentes a antibióticos y
desinfectantes. Lo que normalmente detectamos en el agua son sus formas planctónicas, que
escapan del biofilm para colonizar nuevas zonas. Tambien es frecuente, sin provocar
enfermedad, en zonas húmedas del ser humano: axilas, ingles, boca…, siendo capaz de
colonizar hasta los filtros de la cabina de flujo laminar a través de los aerosoles generados por
el simple hecho de hablar o toser. Es capaz de alimentarse de los compyuestos más diversos
(explosivos, petróleo, desinfectantes…), por lo que a veces en vez de desinfectar, en realidad
estamos infectando la zona de trabajo. Se trata de un patógeno humano del grupo 2 de riesgo
biológico, aunque tambien ataca animales y vegetales. En el hombre lo mismo ataca heridas,
que el tracto respiratorio, las vias urinarias, los ojos… y puede provocar otitis, dermatitis y
hasta sepsis (respuesta extrema del cuerpo a una infección, que puede dañar los propios
tejidos y provocar la muerte).
2-Los tipos de productos donde la legislación exige su búsqueda o recuento, así como
otros tipos de productos donde a nuestro criterio, sería recomendable analizarlos
-La legislación UE (Directiva Europea 2015/1787 de 6/X) y por ende la española (Real Decreto
1799/2010, modificado por RD 902/2018 de 20/7) exigen la búsqueda de P.aeruginosa en
aguas envasadas (incluida agua de mar envasada). El Real Decreto 742/2013 11/11 y algunas
Comunidades Autónomas exigen también su búsqueda en piscinas (ausencia en 100 mL, en
otras recuento 0 en 100 mL, que al parecer no debe ser lo mismo que la ausencia).
Curiosamente no se habla de buscar P.aeruginosa en aguas de consumo humano, cuando ya se
han informado varios casos, incluso de retrocontaminación de la red desde los grifos privados
o públicos.

-P.aeruginosa debe buscarse (según legislación española y europea, actualizada en 2021) en

los siguientes ingredientes alimentarios: concentrado refinado de péptidos de camarones,
extracto de cresta de gallo, Clostridium butyricum. Tradicionalmnete se ha buscado en
refrigerados, congelados y neveras como algo más genérico: “bacterias psicrófilas”.
-En medicamentos no estériles, la farmacopea exige la búsqueda activa de P.aeruginosa.
Tambien las GMPs exigen su búsqueda activa en las aguas de uso farmacéutico.

-En cosméticos, emulando la farmacopea, surgió la Norma ISO 22717 que habla de los mismos
medios. Para seguir GMPs, aunque sean menos explícitas que en medicamentos, se debe
buscar P.aeruginosa en aguas de uso cosmético, donde es bastante frecuente cuando se busca
por primera vez.

3-Los métodos oficiales para su detección/recuento

-En aguas la legislación exige el seguimiento de la Norma ISO 16266, que habla del Agar
Cetrimida CN (un Cetrimida especial con menos cetrimida que el pharmacopea y con Ácido
Nalidíxico), por Filtración de Membrana. Las colonias sospechosas (verde-azuladas o amarillas,
fluorescentes; o pardo-rojizas) se confirman con la oxidasa (+), Acetamida-Nessler (+) y King B
(Fluoresceína, agar F).

Derecha, Acetamida-Nessler +, P.aeruginosa

Fluorescencia en la placa izda de Agar King B

-En alimentos se emplea el Agar Cetrimida clásico (pharmacopea).

-En medicamentos se sigue pharmacopea con enriquecimiento en TSB (Medio A) y aislamiento

en Cetrimida Agar (medio N), confirmando con la prueba de la citocromo-oxidasa +.
-En cosméticos no existe
legislación específica, pero
se sigue la Norma ISO
22717 que también habla
del Agar Cetrimida
(fórmula farmacopea) y de
la confirmación de colonias
sospechosas con Oxidasa y
con King A (Piocianina,
agar P) en vez del King B.

Piocianina en 48 h (izda) y 7 días (dcha) de Agar King A

4-Los métodos alternativos que mejoran la rapidez de los resultados y la robustez del
análisis

El problema de buscar Pseudomonas aeruginosa en aguas, por Filtración de membrana,

es que se destruyen numerosas células
durante la filtración y se obtiene nada menos
que un 33% de muestras con resultado
falsamente negativo (datos de 18 años de
intercomparación Seilagua). Microkit creó
hace ya casi 3 décadas el Pseudocult P/A, un
caldo cromogénico selectivo que, añadido a
100-250 ml de muestra de agua, genera color
rosado-rojo en 24-72h y fluorescencia en
presencia de Pseudomonas aeruginosa. La
validación que demostró el 33% de falsos
negativos por filtración fué precisamente
Pseudocult P/A, izquierda: negativo, derecha: positivo.
frente al Pseudocult, que detecta el 100% de Abajo: varios tonos según carga y vitalidad de la cepa
positivos.

Fluorescencia de Pseudocult en presencia de P.aeruginosa (bote del centro)

 Lógicamente todo presunto positivo en Pseudocult se debe confirmar estriando en Agar
cetrimida y siguiendo las confirmaciones antes mencionadas. Mientras que los presuntos
negativos son confirmativamente negativos.
Dada la
ortodoxia
que obliga a
“contar
ceros” en
algunas
legislaciones
(0 ufc/250 ml
en vez de
decir
ausencia/250
mL), se
puede usar el
medio
Pseudocult
con tubos o con cubetas NMP.
Otro problema del método clásico es que el Agar Cetrimida suele tardar 48 h en permitir
ver las colonias de P.aeruginosa. MICROKIT resolvió este problema en 2013 durante el diseño
de las Dryplates-PS, mediante la adición al Agar Cetrimida, del mismo cromógeno del
Pseudocult, lo que permite visualizar las colonias desde las primeras 18 h de incubación.
Después diseñó este mismo medio en formato deshidratado, con el nombre Cromokit Rapid
Pseudomonas Agar.
La confirmación de P.aeruginosa en Agar Cetrimida

es muy sencilla:
basta con hacerles a
las colonias la prueba de la oxidasa, que debe ser positiva, ya que son aerobios estrictos. Las
tiras de MICROKIT están estabilizadas y no se ponen azules con el oxígeno del aire.
 Otra prueba más definitiva es la Acetamida-
Nessler, positiva para P.aeruginosa (ver foto en la
página 2 de esta monografía).
Ambas pruebas y la del King B se pueden
conseguir juntas en el kit M-Ident-P.aeruginosa.

La colonias oxidasa positivas provocan viraje de

la tira a azul oscuro
A veces en Agar
Cetrimida pueden crecer
curiosamente algunos Gram
positivos (ej: Bacillus spp),
generando confusión; el
primer paso para descartar
falsos positivos en Agar
Cetrimida debe ser la
inmediata prueba del
Neogram directa en las
colonias, descartando las
que no filamentan.

Neogram: colonia de Gram -: filamenta.en unos segundos

Si fuese Gram +, la colonia no filamentaría

5-Cómo vemos el futuro en la detección de este grupo

La búsqueda de Pseudomonas aeruginosa en aguas de consumo humano, en duchas y

en aguas de uso cosmético debería ser obligada por Ley. La mayoría de problemas
microbiológicos que encontramos en numerosas fábricas de cosméticos son aguas
infestadas de P.aeruginosa (y/o de Burkholderia cepacia) porque nadie las controla.
6-Una promoción durante los próximos días, de varios productos MICROKIT
relacionados con el tema (en negrita las ofertas MUY económicas)
Producto Pvp € habitual Pvp € promoción
Cetrimide Agar (Farmacopea) en ecogránulos 86,30/500 g 65,80/500 g
Cetrimide CN Agar (ISO 16266) en polvo 148,60/500 g 99,00/500 g
Glicerina para Cetrimida 32,80/100 mL Gratis si se pide con
Cetr/CN
Ac.Nalidíxico, suplemento para CN 61,20/1 g 59,00/1 g
Cromokit Rapid Pseudomonas Agar 101,50/500 g 63,50/500 g
King A Agar 228,50/500 g 133,50/500 g
King B Agar 228,50/500 g 133,50/500 g
Acetamida Broth 228,20/500 g 115,90/500 g
Reactivo Nessler 61,20/100 mL 59,00/100 mL
Plaquis herméticas CN Agar 156,60/40 u 132,40/80 u
Plaquis herméticas Cetrimida Agar 156,60/40 u 132,40/80 u
Plaquis herméticas Rapid Pseudomonas Agar 156,60/40 u 132,40/80 u
Tubos Acetamida Broth 112,00/20 u 74,43/20 u
(pida tambien reactivo Nessler)
Tubos King A inclinado pico largo 58,40/20 u 52,37/20 u
 Tubos King B inclinado pico largo 58,40/20 u 52,37/20 u
Pseudocult P/A frascos para 100 mL de agua 149,30/10 u 92,55/10 u
Pseudocult P/A viales para 100 mL de agua 178,30/40 u 1.337,10/400 u
Pseudocult P/A viales para 250 mL de agua * 200,60/40 u 1.448,50/400 u
Pseudocult P/A botes polvo estéril con cucharilla 52,00/100 g 25-50 test 39,20/100 g
DryPlates-PS 95,50/60 u 199,99/180 u
Neogram 100,30/100 test 52,00/100 test
Citocromo-oxidasa en tiras estabilizadas 150,40/50 u 44,10/9 u
M-Ident Ps.aeruginosa (Oxidasa, Acetamida, 147,40/9 test 250,00/2x9 test
Nessler y King B)
7 159,00/12 u 99,00/12 u
Cepa P.aeruginosa WDCM 00025 [10 ]
3 159,00/12 u 99,00/12 u
Cepa P.aeruginosa WDCM 00026 (es más lábil) [10 ]
Cepa P.putida WDCM 00117 [107] 159,00/12 u 99,00/12 u
Inóculos ciegos Pseudomonas aeruginosa (3 tubos 85,10/3 u 69,00/3 u
ciegos, cada uno con o sin alguna cepa diana, a distintas
concentraciones), para su aseguramiento del control de
calidad.

Todos los productos se sirven por encima de la caducidad mínima indicada en nuestro catálogo
Los productos con * se fabrican bajo pedido para entregar con máxima caducidad y, dado su
control de calidad, suelen demorarse cerca de 4 semanas.
Agradecemos sus pedidos, única fuente de nuestros ingresos, como pago voluntario que
garantiza la continuidad de estos monográficos de formación.
Si pide durante los próximos días algún producto de esta promoción, le mantendremos estos
precios durante todo el año, salvo erratas.
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habitual fuera de la promoción, sin derecho a reembolso.
Promoción válida para cualquier pedido directo (sin intervención de intermediarios) recibido
antes del 12 de Noviembre en la que indique estos precios especiales.
Portes pagados para envíos superiores a 120 € en Península y Baleares.
Enviado el 25/10/2021
¡Nuestra fabricación de cepas en lentículas cuantitativas ha cumplido 10 años! Aparte de los
innumerables clientes que las eligen año tras año en 2 continentes, ya hay 3 servicios
intercomparativos (aparte de nuestros SEILAs) que las han elegido como las cepas más
adecuadas para sus inóculos, trabajando uno de dichos servicios bajo ISO 17025.
** Desde Septiembre de 2021, además, distribuimos en toda España (excepto Cataluña y
Andalucía, donde ya había distribuidor previo) cepas de referencia (controladas por un
laboratorio ISO 17025), cepas de referencia certificadas (controladas por una red de
laboratorios ISO 17025) y cepas de referencia acreditadas por ENAC, fabricadas todas ellas en
España bajo Norma ISO 17043. Consúltenos si necesita este tipo de cepas para evaluar el
sesgo, la exactitud y la precisión de sus validaciones, así como para emplear cepas que
nosotros no fabricamos (Legionella, Campylobacter, Cronobacter, Rhodococcus, Yersinia…) y
para la línea Pharmacopea; consulte su catálogo completo aquí:
https://www.medioscultivo.com/wp-content/uploads/2021/09/Catalogo-Materiales-de-
Referencia-ielab-2021.pdf
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para el control de calidad cuantitativo de los medios de cultivo, control de proceso, gráficos de
control, Challenge Test…